速灭威对花翅摇蚊幼虫的毒性效应

以花翅摇蚊为受试生物,在室内研究了氨基甲酸酯类杀虫剂速灭威对淡水底栖生物的急慢性毒性效应。急性毒性试验结果表明,在加标水中速灭威对摇蚊一龄幼虫24 h-EC_(50)、48 h-EC_(50)分别为4.52 mg/L、3.14 mg/L,对四龄幼虫24 h-EC_(50)、48 h-EC_(50)分别为12.24 mg/L、8.18 mg/L,一龄摇蚊幼虫对速灭威的敏感性高于四龄摇蚊幼虫。在慢性毒性试验中,加标上覆水法速灭威对摇蚊幼虫的羽化率半数效应浓度(EC_(50))及化蛹率半数效应浓度(EC_(50))分别为3.63 mg/L和3.72 mg/L,加标沉积物法速灭威对摇蚊幼虫的羽化率半数效应浓度(EC_(50))及化蛹率半数效应浓度(EC_(50))分别为20.60 mg/kg和23.71 mg/kg;随着速灭威处理浓度的升高,摇蚊幼虫的羽化率及化蛹率降低,羽化用时延长,沉积物表面筑巢行为明显加强;速灭威处理浓度与羽化摇蚊的性别比无显著相关性。

氨基甲酸酯类杀虫剂速灭威酶联免疫吸附分析方法研究

利用间-甲酚和β-丙氨酸合成了速灭威半抗原β-（间-甲基苯氧基羰基）氨基丙酸（HOM）。通过活泼酯法将HOM交联于牛血清白蛋白（BSA）和卵清蛋白（OVA）上；HOM—BSA为免疫原制备了速灭威的兔抗血清，ELISA法测得其效价高达1．28×10^6，交叉反应测定表明抗体方法特异性识别速灭威。对离子强度等影响因素进行了研究，确定了速灭威酶联免疫吸附分析方法（ELISA）的最佳工作条件，建立了定量测定速灭威的间接竞争ELISA方法，结果表明，该方法检测线性范围为1—10000μg／L；IC50为40．74μg／L；检出限为0．08—0．10μg／L；批内相对标准偏差为2．9％；批间相对标准偏差4．6％。土壤、稻谷和水中的平均添加回收率分别为80％、93．4％和107％。本研究建立了一种快速检测环境和农产品中速灭威残留的有效方法。

中药中速灭威残留量的酶联免疫检测方法

建立了直接竞争酶联免疫法(ELISA)测定金银花、枸杞、人参、板蓝根、大青叶和圆弧止痛片为代表的中药中速灭威的残留量.金银花等经过粉碎,加入甲醇提取、旋蒸、PBS复溶等简单前处理之后,再经过适度的稀释可以达到消除基质影响,用ELISA进行测定.中药样品添加回收率为64.00%～91.30%,变异系数均小于30.12%.结果表明,该方法可以简单、快速、灵敏、准确地检测出金银花、枸杞、人参、板蓝根、大青叶和圆弧止痛片等中药中速灭威的残留量.

超高效液相色谱-串联质谱法检测水稻及稻田环境中速灭威的残留

建立了超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)检测稻田土壤、田水、水稻植株、谷壳和糙米样品中速灭威残留的分析方法。样品经乙腈提取及盐析处理后,用乙二胺-N-丙基(PSA)和白炭黑(SiO2.nH2O)净化,UPLC-MS/MS多离子反应监测模式下测定。结果表明,在0.005～1 mg/L范围内,速灭威的仪器响应值与进样质量浓度间呈良好线性关系,相关系数(r)大于0.98。当添加水平为0.01～5 mg/kg(田水样品中为0.005～1 mg/L)时,速灭威在不同样品基质中的平均回收率为76.7%～107.8%,相对标准偏差(RSD)为1.7%～8.5%,最小检出量(LOD)均为2.0×10-13g,最低检测浓度(LOQ)除在田水样品中为0.005 mg/L外,其余均为0.01 mg/kg。当按推荐剂量的1.5倍(有效成分45 g/hm2)分别施药2次和3次后,采用所建方法测得距最后一次施药10、14和21 d采收的糙米样品中速灭威的最终残留量均为未检出(低于0.01 mg/kg)。

速灭威在宁夏枸杞和土壤中的残留及消解动态研究

速灭威是枸杞中常用的一种氨基甲酸酯类农药,在防治枸杞蚜虫的同时,残留在枸杞和土壤中的农药又会对生态环境造成危害。通过田间试验,研究了速灭威在枸杞和土壤中的残留与消解动态。结果表明,速灭威在枸杞和土壤中的半衰期分别为3.38 d和5.29 d。将25%速灭威可湿性粉剂以750 g·hm^-2和1500 g·hm^-2剂量在枸杞上施药,喷施药2~3次,施药间隔期7 d,距最后一次施药21 d,速灭威在枸杞和土壤中的最大残留量分别为0.0485 mg·kg^-1和0.1596 mg·kg^-1。建议速灭威在枸杞上的最大允许残留限量为0.05 mg·kg^-1,施药安全间隔期为21 d。

食品中速灭威农药残留检测方法研究进展

速灭威是目前使用较为广泛的氨基甲酸酯类农药,主要用于水稻、棉花和果树的虫害防治。如果长期或不正当用药,极易在食品中残留损害人体健康,速灭威农药残留问题引起人们的极度关注。本文综述了毛细管电泳、高效液相色谱、气相色谱、色谱-质谱联用、免疫分析方法等速灭威农药残留检测方法的研究进展,并对检测方法进行了展望,以期为保证食品安全和提高我国速灭威农药残留的检测能力提供技术支持。

速灭威对N2a成神经元细胞、C6胶质细胞及小鼠胚胎神经干细胞增殖的影响

目的研究速灭威对N2a成神经元细胞、C6胶质细胞和小鼠胚胎神经干细胞增殖的影响。方法用四噻氮唑盐比色法观察速灭威在不同时点(12、24、36h)对C6、N2a及小鼠胚胎神经干细胞增殖的影响。结果速灭威对C6胶质细胞、N2a成神经细胞和小鼠胚胎神经干细胞增殖均有明显抑制作用,且呈现剂量和时间依赖性;5mg/L的速灭威作用24h就可明显抑制小鼠胚胎神经干细胞增殖。3种细胞对速灭威的增殖抑制作用敏感性依次为mNSCs>C6>N2a。结论速灭威可以抑制C6胶质细胞、N2a成神经细胞和小鼠胚胎神经干细胞增殖,且小鼠胚胎神经干细胞对速灭威敏感性最强。

协同增敏荧光光谱法测定速灭威

速灭威（间甲苯-N-甲基氨基甲酸酯）是一种广泛使用的杀虫剂农药，速灭威在植物中存留时间虽短，但由于其触杀、熏蒸和内吸作用，在发生皮肤接触、吸入或食入时对人体有害。因此，如果在蔬菜、水果生产过程中施药后，在禁采期内采购上市，其残留的毒害作用仍然值得防备。

抗速灭威单链抗体基因在巴斯德毕赤酵母中的表达及性质研究

选用巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)系统表达特异性抗速灭威单链抗体(scFv)基因,以为速灭威特异性抗体的大量制备奠定基础。设计引物扩增阳性克隆scFv基因,亚克隆至表达载体pPICZαC,获得重组酵母表达质粒pPICZαC-scFv,线性化pPICZαC-scFv并高效电转P.pastoris(X-33),对转化子进行抗性梯度筛选得到一株高效表达的X-33-Pp-SMW-12-6菌株。对获得的菌株先后进行表达条件的优化、优化条件下的诱导表达及单链抗体性质研究。结果表明:P.pastoris-scFv的质量接近其亲本E.coli-scFv的质量,X-33-Pp-SMW12-6在优化条件下的表达产量达28mg/L,比未优化前的产量提高了约8mg/L,经纯化后抗体纯度可达85%以上。因此,利用P.pastoris表达系统制备抗速灭威单链抗体比细菌表达系统更有效、更经济。

高效液相色谱串联质谱法测定甘蔗中速灭威结果不确定度评定

本文以测定甘蔗中速灭威残留量为例,评定了利用高效液相色谱串联质谱法(HPLC-MS/MS)测定结果的不确定度。分析影响测定结果不确定度的因素,通过建立数学模型对各个不确定度分量进行计算,最终给出该方法测定结果的合成标准不确定度和扩展不确定度。

速灭威与牛血清白蛋白作用的研究

在pH=7.4的生理条件下,应用荧光光谱法研究了速灭威与牛血清白蛋白间相互作用。结果表明:速灭威对牛血清白蛋白的荧光有较强的猝灭作用,测定不同温度下的猝灭常数,证实了速灭威对牛血清白蛋白的荧光猝灭过程机理为静态猝灭。根据猝灭结果计算了不同温度下的结合位点数、结合常数。应用同步荧光光谱法探讨了速灭威对牛血清白蛋白构象的影响。依据f ster非辐射能量转移理论确定受体间的结合距离和能量转移效率。

固相萃取-超高效液相色谱法测定水中速灭威、异丙威、乙霉威及仲丁威

提出了水中速灭威、异丙威、乙霉威及仲丁威的固相萃取-超高效液相色谱测定方法。水样（pH调至4～5）经OasisHLB固相萃取小柱净化，甲醇洗脱，所得净化液以30rC的EclipseXDBC18色谱柱为分离柱，以甲醇-水（70＋30）混合液为流动相，用紫外检测器在波长284nm处进行测定。速灭威、异丙威、乙霉威及仲丁威在-定的质量浓度范围内与峰面积呈线性关系，方法检出限（3S／N）在0．049～1．6μg·L-1之间。在3个浓度水平上对方法做回收试验，测得回收率在92．0％～106％之间，相对标准偏差（n=7）在1．29／6～4．9％之间。

抗速灭威噬菌体单链抗体库的构建、筛选及鉴定

以速灭威抗原免疫的小鼠为实验对象,取其脾细胞,RT-PCR扩增抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因,重叠延伸PCR拼接单链抗体(ScFv)基因,克隆入噬菌粒表达载体pCANTAB5E并转化大肠杆菌TG1,成功构建了库容约7.6×105的抗速灭威噬菌体ScFv库。对该文库进行了5轮"吸附-洗脱-扩增"的富集筛选,获得了6个特异性较强的抗速灭威噬菌体ScFv阳性克隆。其研究结果为速灭威特异性抗体的大量制备奠定了一定的基础。

速灭威在枸杞土壤中的迁移及淋溶行为模拟研究

应用薄层层析法和柱淋洗法研究了速灭威在3种枸杞产区土壤——灌淤土、灰钙土和潮土中的迁移及淋溶特性,并探讨了土壤类型、pH值、淋溶量等因素对其淋溶的影响。结果表明:速灭威在三种枸杞产区土壤中的移动性由大到小依次为:灰钙土>潮土>灌淤土,比移值Rf分别为0.47、0.37和0.35,移动速率m/(cm·h^–1/2)分别为3.52、2.58和2.35。速灭威在三种土壤中的比移值Rf在0.35—0.64之间,属于中等移动农药。速灭威在三种土壤中的淋出率由大到小依次为:潮土>灰钙土>灌淤土,淋出率分别为63.1%、50.0%和28.3%。随着水量的增加,速灭威在三种土壤中的淋溶率也越来越大。当淋溶水量大于350 mL时,除潮土外,灌淤土和灰钙土中几乎无速灭威流出,进一步证明了速灭威可能在潮土中的吸附力较低,而在灌淤土和灰钙土中的吸附力较高。淋溶液pH值不同,淋溶率也有较大差异,在灌淤土和灰钙土中弱酸性条件利于速灭威淋出,在潮土中性条件易于淋出,这可能与土壤的pH及全盐量含量不同有关,在弱酸性条件下,潮土的全盐量含量高,增大了对速灭威的吸附力,导致速灭威的淋溶率降低。速灭威在土壤中属于中等移动农药,对地下水存在一定的危险。

O3/H2O2降解水中速灭威的试验研究

速灭威是枸杞中常用的一种氨基甲酸酯类农药,在防治枸杞蚜虫的同时,残留在土壤中的速灭威又会经淋溶作用渗透到地下水中,对地下水造成严重的威胁。文章采用臭氧发生器对臭氧/双氧水(O3/H2O2)降解水中速灭威进行了试验研究,考察了O3流量、pH、氧化时间等因素对速灭威降解率的影响,并采用气相色谱与质谱联用仪(GC-MS)对降解后的产物进行分析,探讨O3/H2O2降解速灭威可能的反应机理。结果表明:(1)pH为6时,降解率最大,为44%,而在中性条件下降解率最低;(2)随着臭氧流速的增加,速灭威的降解率也逐步增加,当臭氧流速为0.6 L/min时速灭威全部降解;(3)随着时间的延长,速灭威的降解率逐渐增加,其中,在1 h内降解迅速,2 h时速灭威已经100%降解;(4)降解得到的中间产物主要有间甲基苯酚等,据此推断降解机理可能是·OH自由基断裂醚键,推导了O3/H2O2氧化速灭威可能的降解途径。

速灭威的纯化以及质量研究

为了获得用于质量控制的速灭威纯品,先用硅胶层析法进行分离和提纯得到白色晶体,再用红外吸收光谱解析其结构,最后用GC-2014型岛津气相色谱仪和UV-2450型岛津紫外分光光度计测定提纯前后含量变化.经过精制后,速灭威纯度从96.0%提高到98.9%,且两种定量方法得到的结果一致.由此可知硅胶层析可以很好完成速灭威的精制,而气相色谱和紫外光谱的联合使用,可以互相印证所测含量准确性,方便简洁,可以推广使用于其他农药的纯度检测.

气相色谱法测定速灭威、异丙威时分解规律的研究

本文采用硅酮ＯＶ－１７为固定液，正十六烷为内标物，就速灭威和异丙威在气相色谱测定中的分解规律进行了研究，着重考察了汽化室温度、柱温、载气流速等方面的变化对分解的影响规律，找出了最佳色谱条件。

氨基甲酸酯类农药速灭威人工抗原的合成与鉴定

通过化学方法合成了两种完全突出氨基甲酸酯类农药速灭威特征结构的半抗原,并采用活化酯法与载体蛋白偶联制备成完全抗原。经动物试验鉴定合成的人工抗原可制备出高效价的抗速灭威抗体,结果表明速灭威人工抗原已成功合成,为建立速灭威残留免疫分析方法奠定了基础。

速灭威荧光分子印迹聚合物研究

以速灭威为模板分子,自制的2-氨基吡啶丙烯酰胺为荧光功能单体,甲基丙烯酸为辅助功能单体,乙二醇二甲基丙烯酸酯为交联剂,偶氮二异丁腈为引发剂,采用本体聚合的方法合成了对速灭威具有选择识别性能的荧光分子印迹聚合物。结果表明,使用0.50 mL乙腈和0.50 mL甲苯为溶剂,模板分子、荧光功能单体、辅助功能单体和交联剂的摩尔比为1∶1∶2∶20,所制备的荧光聚合物具有最佳的吸附能力。对合成的聚合物进行平衡结合实验、吸附动力学实验和选择性实验,其荧光光谱分析结果表明该聚合物可用于分子印迹荧光传感器。

高效液相色谱法测定牛奶中速灭威、克百威、异丙威农药残留

建立了牛奶中速灭威、克百威(呋喃丹)、异丙威的高效液相色谱测定与确证方法。3种氨基甲酸酯类农药标准曲线线性关系良好;相关系数R^2为0.990~0.996;检出限为6.13~7.87μg/kg;回收率为70.4%~102.5%。该方法准确、灵敏、快速,可满足检测需要。