骨髓间充质干细胞对致敏小鼠造血干/祖细胞移植植入的影响

目的:前期的研究已经证实致敏小鼠造血干/祖细胞移植植入失败率高。本研究拟通过骨髓间充质干细胞(MSCs)进行干预,观察能否提高造血干、祖细胞移植的植入率。方法:应用贴壁培养法体外培养正常小鼠骨髓MSCs,并分为6个实验组,包括实验组1:d11 MSCs干预的致敏组;实验组2:d0 MSCs干预的致敏组;实验组3:d11和d0 2次MSCs干预的致敏组;实验组4:无MSCs干预的致敏小鼠对照组;实验组5:无MSCs干预的正常小鼠(非致敏小鼠)移植对照组;实验组6:无MSCs干预的正常小鼠不移植对照组。观察指标包括生存分析、移植效果分析(血象改变、骨髓细胞恢复及嵌合分析等)和移植物抗宿主病(GVHD)检测,最终评估MSCs干预对各实验组异基因造血干/祖细胞移植植入率的影响效果。结果:与对照组(实验组4、5、6)比较,MSCs干预(实验组1、2、3)在2次异基因脾细胞注射法致敏的动物模型进行异基因造血干/祖细胞移植时,未能促进骨髓造血干/祖细胞移植的植入,也未能延长致敏动物移植后的生存时间。结论:体内应用1×106MSCs干预,未能促进2次异基因1×106C57BL/6小鼠脾细胞输注法建立的重度致敏模型异基因造血干/祖细胞移植的植入。

脐血单个核细胞的分离及冻存

研究脐血采集后的放置、单个核细胞的分离、冻存等的影响因素。方法为血液采集后,离心分离单个核细胞,进行冷冻保存及复苏后洗涤。结果优选为采集后4℃或室温放置24小时内,羟乙基淀粉2次离心法分离单个核细胞,50％二甲亚砜加自身血浆为保护剂冻存、复苏后洗涤等程序。结论:本研究的优化方法可有效地保存脐血单个核细胞。

脐血移植后SCID鼠的免疫功能重建及抗人肝癌作用的初步研究

目的证实脐血造血干/祖细胞移植重建SCID鼠的免疫功能对人肝癌有抑制及杀伤作用。方法首先进行人肝癌高转移细胞株HCCLM6细胞培养,然后将HCCLM6细胞株分别在脐血移植免疫功能重建组(A组)及未移植脐血造血干/祖细胞组(B组)建立SCID鼠皮下荷瘤模型。接种肿瘤后5周处死,分别进行以下检测:(1)比较A、B两组间肿瘤生长情况的差异;(2)常规病理学检查:比较A、B两组移植瘤状况,并观察有无肿瘤转移;(3)免疫组化检查:观察肿瘤组织中人源CD3+、CD8+细胞对肿瘤组织的杀伤力;(4)细胞毒试验:A、B两组动物脾脏细胞与HCCLM6细胞体外混合培养,采用MTT法观察对肿瘤细胞的杀伤作用。结果 (1)HCCLM6细胞株接种于A组、B组SCID小鼠皮下均可成瘤,成瘤率为100%,成瘤潜伏期分别为(9.83±1.47)d、(5.16±1.17)d,二组比较差异有统计学意义(P<0.01);接种后5周移植瘤体积分别为(539.22±94.08)mm3、(1 126.17±154.75)mm3,二组比较差异有统计学意义(P<0.01)。(2)病理学检查可见:A组肿瘤坏死明显,未见远处转移;B组坏死程度明显较轻,可见肺转移。(3)免疫组织化学检查:A组肿瘤组织中可见大量人源CD3+、CD8+细胞浸润,坏死组织周围更加明显;B组移植瘤内亦有肿瘤坏死,但未见人源淋巴细胞。(4)细胞毒试验表明:A组脾脏细胞对HCCLM6细胞的杀伤作用明显,在效靶比例为120∶1时,特异性杀伤率为(7.41±1.07)%;B组脾脏细胞对肝癌细胞的杀伤率为(3.97±0.27)%,二组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论HCCLM6是一个活力强、代谢活跃的肿瘤细胞亚群。人源脐血干细胞在SCID鼠体内重建免疫后可发挥对HCCLM6细胞的杀伤作用,对肝癌的生长有抑制作用。脐血干细胞移植有可能成为肝癌治疗的一种新方法,其应用前景值得进一步研究探讨。

造血干/祖细胞及其在神经免疫领域移植的研究进展

造血干/组细胞是具有高度自我更新能力和多向分化潜能的造血前体细胞,CD34^+细胞群被公认是最佳的移植物。近20年来广泛应用于临床移植治疗恶性血液病、实体肿瘤和自身免疫性疾病。本文主要从造血干/祖细胞生物学特性、移植后重建机体的免疫功能以及在神经系统移植治疗方面进行综述。

脐血采集和分离过程中病原微生物污染概率的研究

为探讨脐血采集、分离过程中病原微生物污染的概率及不同检测方法的有效性,采用BACTEC 9050细菌培养系统和改良马丁/硫乙醇酸盐(22℃)及硫乙醇酸盐(35℃)培养法对60份脐血同时进行采集后及分离后细菌和真菌的培养;对206份脐血血清标本采用ELISA法检测HBsAg,Anti-HBC,Anti-HCV,Anti-HCMV-IgM,HTLV-1,HTLV-2,HIV-1及HIV-2;用分子生物学方法检测HBV DNA和HCV RNA;用红细胞凝集法检测TPHA。研究结果显示:采用BACTEC 9050细菌培养系统,采集后脐血中细菌污染率为3.33％,真菌污染率为0％;细胞分离后细菌和真菌污染率分别增高到6.67％和1.67％;在该系统中,厌氧菌的阳性检出率远高于改马丁/硫乙醇酸盐(22℃和35℃)。脐血血清病原菌检测结果表明:采用ELISA方法,HBsAg阳性率2.4％,Anti-HBC单项阳性率29.4％,Anti-HCMV-IgM阳性率1.89％ ;采用分子生物学方法,HBV DNA阳性率5.8％,HBsAg阴性而HBCAb单项阳性标本中HBV DNA阳性率6.7％,HCV RNA阳性率2.4％。结论:采集及分离后脉血细胞中病原微生物阳性率甚高;目前沿用的改良马丁/硫乙醇酸盐(22℃和35℃)培养系统,会导致脐血中厌氧菌漏检,有必要更新该培养方法,如采用先进的BACTEC 9050培养体系。分子生物学方法可弥补ELISA等常规脐血传染病检测方法的缺陷。

美国国家骨髓库20周年

造血干／祖细胞移植可以重建患者的血液和骨髓的功能，更重要的是，可重建患者免疫系统、抵抗感染、发挥移植物的抗肿瘤效应。虽然40年前就首次进行了亲属间的移植，但美国国家骨髓库（NMDP）组织多家机构，为非亲缘的同种异体造血干细胞移植寻找、鉴定供者的历史仅仅只有20年。这一公益举措振奋人心，帮助了成千上万的患者，