人造血干/祖细胞体外诱导分化为T淋巴细胞的研究进展

本文介绍人造血干/祖细胞在体外微环境中产生并分化发育为成熟T淋巴细胞的相关环节和影响因素,涉及到人体外微环境的建立,包括模仿胸腺微环境的培养体系、无胸腺组织的培养体系;与T细胞分化有关的细胞因子的研究;T细胞在体外的分化过程;T细胞分化研究的应用与展望。

rhG-CSF在动员外周血造血干/祖细胞过程中对T细胞的影响及机制

重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)对人体具有广泛的免疫调节作用。在动员外周血造血干／祖细胞 过程中给予的rhG-CSF可以使外周血T淋巴细胞数量和功能发生改变,并影响移植后GVHD的发生。rhG-CSF主 要通过时单核细胞和树突状细胞的作用而间接影响T细胞,其中单核细胞分泌的大量IL-10对调节T细胞的细胞 因子分泌、增殖和细胞毒效应具有重要作用。IL-10作用于T细胞后引起的SOCS3表达显著增高可能在相关的信 号转导机制中具有重要作用。本综述重点阐述rhG-CSF在动员过程中对T细胞的影响及相关机制。

Rhodamine123介导的光动力学疗法对小鼠淋巴细胞增殖及骨髓干祖细胞集落形成的影响

目的 探讨Rhodamine12 3(Rh12 3)介导的光动力学疗法对小鼠淋巴细胞增殖及骨髓干祖细胞集落形成的影响。方法 以C5 7B/ 6小鼠为供鼠 ,BALB/c小鼠为受鼠 ,脾脏淋巴细胞混合培养 ,比较单纯Rh12 3、单纯激光照射、光动力学疗法对小鼠混合淋巴细胞增殖 (MTT法 )及骨髓粒单核巨噬细胞集落形成 (CFU -GM)的影响 (甲基纤维素培养基法 ) ;流式细胞仪检测混合淋巴细胞中CD3+ CD6 9+ 阳性率。结果 Rh12 3组及单纯激光组对细胞增殖无显著影响 ,光动力学组 2 0mW/cm2 以下剂量激光对细胞增殖无明显影响 ,30mW/cm2 以上明显抑制细胞增殖 ;30mW/cm2 以下剂量对CFU -GM集落无明显影响。光动力学疗法后细胞培养 2 4h ,CD3+ CD6 9+ 表达明显下降。结论 光动力学疗法在 30mW/cm2 激光照射时可抑制淋巴细胞增殖 ,降低早期活化T细胞表达 ,但不影响骨髓CFU

骨髓造血干/祖细胞自身抗体与免疫相关性全血细胞减少

背景:免疫相关性全血细胞减少涉及多个临床学科,近年来受到高度重视。骨髓造血早期细胞自身抗体及免疫调节功能可能是其症结所在。目的:分析骨髓造血早期(干/祖)细胞自身抗体在免疫相关性全血细胞减少症发病机制中的作用及其进展。方法:由作者电子检索1992年3月至2012年3月PubMed、万方医学网以及CHKD数据库中关于骨髓造血细胞相关抗体的文章,中文检索词为"免疫相关性全血细胞减少症、骨髓造血细胞、自身抗体、辅助性T细胞17",英文检索词为"Immunorelated pancytopenia,Bone marrow hematopoietic cells,Autoantibody,Th17cells"。排除重复性研究共保留30篇进行总结分析。结果与结论:骨髓造血细胞自身抗体是由于T淋巴细胞调控失衡,导致B淋巴细胞及其亚群数量和功能异常而产生的一类抗体。它破坏或抑制骨髓早期造血细胞成熟分化,最终引起外周血细胞减少而致病。T辅助细胞17细胞数量增多、功能亢进可能与免疫相关性全血细胞减少症患者自身抗体产生呈一定相关性,是免疫相关性全血细胞减少症发病的重要因素。

体外诱导小鼠胚胎干细胞产生T谱系潜能造血祖细胞的关键步骤

目的:探索体外诱导小鼠胚胎干细胞(mESC)产生具有T淋巴谱系潜能造血祖细胞的关键步骤和操作技巧,进一步明晰及优化诱导策略,提高功能性血液细胞的体外再生效率。方法:将Runx1和Hoxa9串联重组质粒转染mESC产生iR9-mESC,体外依次诱导可先后产生拟胚体(EB)、诱导性生血内皮细胞(iHEC)、诱导性造血祖细胞(iHPC),随后移植免疫缺陷鼠可检测到受体小鼠中枢和周围淋巴器官中供体来源的T淋巴细胞。其中,在体外培养mESC,电转获得同源重组iR9-mESC,诱导分化形成EB、iHEC及其分选、流式检测和移植等步骤设置不同操作方法对照组。结果:体外培养iR9-mESC时,培养在小鼠胚胎成纤维细胞上比在明胶上更能维持mESC的多能性状态;电转时细胞量为1.2×10^6能保证电转后培养过程中单个克隆不融合,便于筛选鉴定目的克隆;用巴氏吸管轻柔吹打收集EB保证球状EB的完整性,可以提高诱导分化过程中形成iHEC的比例;分选前免疫磁珠富集CD31^+细胞,能提高目的细胞纯度,缩短分选时间,增加细胞活性;尾静脉移植可增加移植成功率和移植细胞数目的准确性。结论:mESC体外诱导分化产生T谱系潜能的造血祖细胞过程中,细胞培养浓度、操作方法细节、工具的使用、分选和移植方法的选择都会影响诱导过程中iHEC和造血祖细胞的含量和谱系特异性,需要针对各分化步骤和时间节点精准操作。

25例再生障碍性贫血患者CD34^+细胞及T淋巴细胞亚群分析

目的探讨再生障碍性贫血(AA)的发病机制。方法采用流式细胞术对25例AA患者进行骨髓CD34+细胞及外周血T淋巴细胞亚群进行检测,10例健康者骨髓以及25例健康者外周血T淋巴细胞亚群做为对照。结果 AA患者与健康对照组比较,骨髓CD34+细胞表达减低,差异有统计学意义(P<0.05);CD3+细胞略增高,差异有统计学意义(P<0.05),CD4+细胞减低,差异有统计学意义(P<0.05),CD8+细胞明显增高,差异有统计学意义(P<0.01),CD4+/CD8+比值明显减低,差异有统计学意义(P<0.01);25例AA患者中,13例AA患者存在细胞免疫异常(CD4+/CD8+比值倒置);17例患者骨髓CD34+细胞数量减少;6例患者二者均表达异常;1例早期AA患者二者表达均正常。结论大部分AA患者骨髓造血干祖细胞数量减少;部分AA患者细胞免疫功能异常;也有部分患者二者均异常。

免疫相关全血细胞减少患者骨髓造血祖细胞增殖功能及辅助性T淋巴细胞功能观察

目的 了解与免疫相关全血细胞减少患者骨髓造血祖细胞增殖分化功能以及辅助性T(Th)淋巴细胞在此类患者发病中的作用。方法 采用甲基纤维素法培养 2 5例初诊、15例治疗后血常规恢复的免疫相关全血细胞减少患者和 10名正常人的CFU GM、CFU E、BFU E ;采用RT PCR方法 ,检测 2 5例初诊、15例治疗后血常规恢复的免疫相关全血细胞减少患者、19例其他全血细胞减少症患者和 10名正常人未经体外刺激的骨髓单个核细胞 (BMMNC)中Th1细胞的代表因子IFN γ、IL 2和Th2细胞的代表因子IL 4、IL 10的基因表达。结果 初诊组、治疗后血常规恢复正常的免疫相关全血细胞减少患者组、正常对照组BMMNC培养CFU E、CFU GM、BFU E产率 ,三组差异均无显著性 (P均 >0 .0 5 ) ,Th2型细胞因子IL 4、IL 10mRNA的表达在初诊组明显增高 ,与正常对照组比较 ,P均 <0 .0 1;经治疗血常规恢复正常后趋于正常 ,与正常对照组比较 ,P均 >0 .0 5。Th1型细胞因子IFN γ、IL 2mRNA的表达在所有免疫相关全血细胞减少患者均无增高 ,与正常对照组比较 ,P均 >0 .0 5。结论 引起免疫相关全血细胞减少患者全血细胞减少的原因可能并非骨髓造血祖细胞本身质的异常 ,而是造血祖细胞以外的因素 ;Th细胞亚群功能失衡。

纯化供者CD34^(+)细胞输注治疗单倍体造血干细胞移植后难治性造血重建不良8例临床分析

造血重建不良(poor hematopoietic reconstitution,PHR)是异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)的严重并发症,表现为植入功能不良(poor graft function,PGF)或持续性血小板减少(prolonged isolated thrombocytopenia,PT)[1]。文献报道PGF的发生率为5%~27%[2],原发PT发生率为10.1%[3]。PGF及PT均可导致非复发死亡增加,严重影响移植预后[4-6]。PHR目前尚无标准治疗办法,常用治疗手段包括输血支持、二次移植、供者淋巴细胞输注(DLI)和促造血生长因子等,但输血支持伴随输注相关铁过载等不良反应,二次移植或DLI可致非复发死亡率升高和GVHD发生。目前allo-HSCT后PHR的发生机制尚未阐明,可能与CD34+细胞数量或质量受损有关[1,7-10]。再次输注纯化供者CD34+细胞可促进患者造血干/祖细胞重建,国外文献报道治疗PHR的有效率为58.3%~100%[11-19]。本研究对近年来在本中心接受纯化供者CD34+输注的8例单倍体造血干细胞移植后难治性PHR患者进行回顾性分析。

干/髓系免疫表型对儿童T-急性淋巴细胞白血病预后影响研究

目的探讨干/髓系表面抗原标记对儿童T-急性淋巴细胞白血病的预后影响。方法回顾性分析2002-01-01至2008-12-31上海交通大学医学院附属儿童医学中心收诊的57例T细胞型急性淋巴细胞白血病(ALL)和伴有骨髓转移的T细胞性淋巴母细胞型非霍奇金淋巴瘤(NHL)患儿干/髓系表面抗原表达情况,将其分为T-ALL伴有髓系表达组(T/My+ALL)和无髓系表达组(T/My-ALL),分析其与预后的相关性。结果T/My+ALL组31例(54.6%)和T/My-ALL组26例(45.4%),两组细胞形态学、遗传学及临床特征差异均无统计学意义(P>0.05);近期疗效中,泼尼松诱导实验差异无统计学意义(P>0.05),19d骨髓象及第1疗程完全缓解率T/My+ALL组均较T/My-ALL组低,差异有统计学意义(P值分别为0.002和0.006);T/My+ALL组和T/My-ALL组的初治完全缓解率分别为90.3%和96.2%,5年无事件生存率分别为35.4%和65.7%。虽结果提示T/My+ALL组预后较T/My-ALL组差,但差异无统计学意义(P=0.209)。结论T-ALL/NHL伴有干/髓系表面抗原表达时预后差,但未达到统计学有效意义,目前尚不能将之作为儿童T系淋巴细胞白血病的预后因素。

再生障碍性贫血患儿骨髓造血干／祖细胞缺陷与细胞免疫功能异常的关系

多数获得性再生障碍性贫血（再障）是由T淋巴细胞介导的以造血系统为靶器官的自身免疫性疾病。有关再障患儿造血干／祖细胞（HSC／HPC）质和量的改变及其与骨髓细胞免疫功能状态的关系尚未见报道。我们对26例特发性再障患儿的骨髓进行了HSC／HPC表型、HPC集落培养、淋巴细胞表型及骨髓干扰素1（IFN-1）测定，评价细胞免疫功能异常在特发性再障患儿骨髓衰竭中的作用。

不同来源的造血干/祖细胞表面归巢相关分子表达谱的比较研究

目的 比较不同来源的造血干 /祖细胞表面归巢相关分子 (HRM)表达谱的差异性。方法 采用高度灵敏的四色流式细胞术检测脐血 (UCB)、动员后的外周血 (mPB)及骨髓 (BM)来源的造血干 /祖细胞表面系列HRM表达水平。结果 UCB、mPB及BM来源的CD34bright细胞均高度表达黏附分子CD4 4、CD11a、CD18、CD6 2L、CD31及CD4 9d ;但UCB来源的CD34bright细胞及CD34brightCD38-细胞黏附分子CD4 9e、CD4 9f、CD5 4及趋化因子受体CXCR 4的表达水平显著低于mPB及BM来源者 ;上述不同来源的造血干 /祖细胞均不表达其他趋化因子受体 ,包括CCR 1、CCR 2、CCR 3、CCR 5、CXCR 1、CX CR 2、CXCR 3及CXCR 5 ;更为有意义的是 ,只有mPB来源的CD34bright细胞表达基质金属蛋白酶MMP 2及MMP 9。CD34brightMMP 2 + 及CD34brightMMP 9+ 细胞百分率分别为 (11.4± 4 .9) %及 (2 7.6± 7.8) %。结论 UCB来源的造血干 /祖细胞低表达或不表达某些HRM ,这可能是UCB移植后造血重建延迟的原因之一。

人胎盘间充质干细胞对脐血淋巴细胞转化的影响

目的从人胎盘中分离间充质干细胞(MSC),研究胎盘MSC在脐血移植中的免疫调节作用。方法分离人胎盘组织灌流液中单个核细胞(MNC)贴壁培养、集落筛选,鉴定表面标志及纯度,向脂肪、成骨诱导鉴定多向分化潜能。应用3HTdR掺入法,观察胎盘MSC对成人外周血淋巴细胞及脐血淋巴细胞的免疫抑制作用。将不同数量胎盘MSC分别与成人外周血和脐血淋巴细胞共培养,加入植物血凝素(PHA)刺激淋巴细胞增殖,观察胎盘MSC对淋巴细胞转化的影响。结果从人胎盘组织中分离获得的贴壁细胞,具有同骨髓MSC相同的细胞表型及多向分化能力,可以显著抑制成人外周血和脐血淋巴细胞转化,抑制作用与MSC的数量呈正相关。与无MSC作用相比,当MSC为2×105/孔时对成人外周血和脐血淋巴细胞转化的抑制率分别为79.97%和64.06%,而当MSC为1.25×104/孔时抑制率则分别为46.83%和12.19%。结论从人胎盘中可以成功地分离出MSC,利用其对脐血淋巴细胞的免疫调节作用,除了可以作为与脐血造血干/祖细胞相适应的培养基质,还有望降低脐血移植中困扰已久的移植物抗宿主疾病(GVHD)问题,促进脐血移植的广泛应用。

沙棘蜂王浆的抗肿瘤作用及其对免疫、造血功能的影响

沙棘蜂王浆可提高荷瘤动物的动态生存曲线、提高存活率(20％～42％)和延长生存期。对瘤体增长有明显抑制作用,抑瘤率为27％～48％。在接种瘤细胞后即开始服用,可降低肿瘤发生率(20％～33.3％),并提高巨噬细胞吞噬功能、促进淋巴细胞转化、增强B细胞反应;对骨髓造血祖细胞的功能也有明显促进。可作为癌症治疗的辅助药物。

Notch及其配体在血液系统中的作用

Notch是一组普遍存在于造血干／祖细胞、胚胎肝细胞、外周血淋巴细胞等多种细胞表面的跨膜蛋白。Notch在其配体的作用下可直接作为基因转录调节因子,对造血细胞的增殖、分化与抗凋亡能力起重要调节作用,研究证实Notch及其配体的正常表达是机体维持正常造血功能的重要条件,并在部分血液系统恶性疾病包括白血病及淋巴瘤的发生和发展中起重要作用。

嵌合抗原受体修饰的T细胞抗急性髓系白血病的研究进展

急性髓系白血病（AML）是以髓系造血干祖细胞失控性扩增为特征的异质性肿瘤,是最常见且病死率最高的成人白血病.通过传统的化疗和造血干细胞移植治疗,60岁以下成人患者的治愈率为35％～ 40％,而在年龄大于60岁的患者中治愈率只有5％～15％1.近年来,对抗肿瘤的过继细胞治疗逐步走向临床,主要包括：①肿瘤浸润性淋巴细胞的过继免疫治疗;②体外树突细胞致敏后T细胞输注;③T细胞受体（T-cell receptor,TCR）修饰的T细胞输注;④嵌合抗原受体（chimeric antigen receptor,CAR）修饰的T细胞（CAR-T细胞）输注等[2].其中,CAR-T技术经过26年的发展获得了举世瞩目的成就,

骨髓增生异常综合征患者调节性T细胞和Th17细胞水平

骨髓增生异常综合征（MDS）是一种起源于造血干／祖细胞的恶性克隆性疾病，呈高度异质性，发病机制包括细胞和分子遗传学异常、造血干细胞分化障碍、骨髓细胞过度凋亡、血管新生障碍及免疫介导的骨髓功能抑制等。Nakamura等研究发现部分MDS患者存在免疫功能的异常，

蛋白激酶Cθ在再生障碍性贫血患者外周血单个核细胞中的表达及对Th1、Tc1细胞的作用

再生障碍性贫血（再障）的发病机制目前认为与免疫介导的造血干／祖细胞凋亡增加有关。研究认为，免疫异常所致的CD8＋T细胞异常活化后直接损伤造血干／祖细胞，同时Th1细胞增多并分泌TNF-α、IFN-Ⅰ等类造血负调控因子，通过Fas途径导致造血干／祖细胞凋亡亢进，

急性巨核细胞白血病伴MLL-AF4融合基因1例

白血病是因造血干/祖细胞在分化过程中的不同阶段发生分化阻滞、凋亡障碍和恶性增殖而引起的一组异质性的造血系统恶性疾病；急性白血病（AL）阻滞发生在较早阶段，按照细胞来源分为急性髓系白血病（AML）和急性淋巴细胞白血病（ALL）。急性巨核细胞白血病（AMKL）根据FAB协作组的分型属于AML－M7型，其发生率占儿童AML的4.0%～15.0%，常并Down综合征（DS）。混合谱系白血病（MLL）基因定位于11号染色体长臂2区3带（11q23）,其与4号染色体长臂2区1带（4q21）易位t（4; 11 ）形成的MLL－AF4融合基因多见于小儿B细胞系ALL（B－ALL）。广州市妇女儿童医疗中心收治1例AMKL伴MLL－AF4融合基因患儿，现报告如下，以期为AMKL的诊治提供经验。