AML1a在小鼠造血细胞增殖分化异常中的作用

本研究旨在探讨AML1a在小鼠造血细胞增殖分化异常中的作用及其作用机制。将构建的pMSCV-FLAG-AML1a-IRES-YFP和pMSCV-IRES-YFP分别与辅助质粒pV Pack-Eco(含Env)、pV Pack-GP(含gal-pol)组合,通过磷酸钙沉淀法转染293T细胞,制备逆转录病毒。通过逆转录病毒将AML1a及YFP转导至C57 BL/6J雄性小鼠的骨髓单个核细胞(BMMNC),接种于M3434甲基纤维素完全培养液进行集落形成实验,并置于含mSCF、mIL-3、mIL-6的M5300液体培养液中进行长期培养,观察BMMNC形态变化。结果显示,转导了AML1a的BMMNC集落形成能力增强,集落数量和体积均明显大于对照组,集落以CFU-E和CFU-GEMM为主。长期培养实验中,转导AML1a组细胞形态显示分化阻滞,而对照组细胞则处于更成熟的阶段。结论:AML1a增加了造血干/祖细胞的增殖能力,并将小鼠造血干/祖细胞阻滞于较早的发育阶段。

衰老模型骨髓基质细胞抑制造血细胞增殖分化

目的研究衰老骨髓基质细胞对骨髓造血细胞增殖分化能力的影响,为阐述机体造血微环境衰老对造血干/祖细胞增殖的影响提供实验依据。方法全骨髓贴壁法体外培养大鼠骨髓基质细胞,分为对照组和衰老组。衰老组:常规培养基内加入30 mg/m L D-半乳糖作用48 h。CCK-8法测定BMSCs增殖;流式细胞术分析细胞周期;β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色观察衰老BMSCs百分率;Western blot检测P16、P21和P53蛋白表达。骨髓造血细胞与BMSCs共培养,集落计数检测髓系多向性造血祖细胞(CFU-Mix)增殖分化。ELISA检测BMSCs培养上清液中IL-1β、GM-CSF和SCF含量;DCFH-DA流式荧光检测BMSC活性氧簇(ROS)水平;酶学法检测BMSCs内过氧化物丙二醛(MDA)含量和总超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果与对照组相比,D-半乳糖诱导BMSCs衰老,细胞阻滞于G0/G1期(P<0.01),增殖能力显著下降,SA-β-Gal染色阳性率升高(P<0.01);衰老相关蛋白P16、P21和P53表达明显上调(P<0.01)。与衰老BMSCs共培养的骨髓造血细胞增殖分化能力减弱。衰老BMSCs内ROS、MDA氧化损伤指标上升,SOD抗氧化指标下降(P<0.01);BMSCs培养上清液IL-1β、GM-CSF和SCF含量明显下降(P<0.01)。结论衰老骨髓基质细胞抑制造血细胞增殖、分化能力,其机制可能与骨髓基质细胞氧化损伤,分泌活性因子改变有关。

白血病患者多向造血祖细胞培养后的透射电镜观察

本文运用透射电镜证明,所运用的极限稀释多向造血祖细胞(CFu—Mix)微量培养体系是体外研究造血细胞分化的重要方法。在加入一系列生长因子后,正常人骨髓细胞可向红、粒、巨核细胞系方向分化,而白血病细胞却不能,其集落细胞仍带有明显的白血病性质,提示白血病可能为多向造血祖细胞阶段的恶性变。

应用简并引物RT-PCR扩增锌指结构域筛选新基因

目的 应用简并引物RT-PCR扩增并克隆TF-ⅢA型锌指蛋白基因表达序列标签（EST），以最终获得新的锌指蛋白基因。方法分别用TPA和Hemin诱导人红白血病（HEL）细胞，提取总RNA。根据TF-ⅢA型锌指蛋白保守序列设计简并引物，并以之进行RT-PCR扩增，然后将其克隆到pGEM-T easy载体中测序，应用DNAsis软件分析序列并通过GenBank blast进行序列比较。结果克隆并测序了30个扩增片段，22个是锌指蛋白基因的EST,其中17个是新的锌指蛋白基因EST。结论应用简并引物RT-PCR克隆一些具有保守氨基酸顺序结构域的蛋白基因EST是可行的，并具有简便、高效等优点。此外，还可有目的地克隆一些具有重要功能结构域的蛋白质基因。

微小RNAs与造血调控及血液系统肿瘤的关系

微小RNAs(microRNAs,miRNAs)是一类长约22个核甘酸的非编码RNAs,在动、植物中广泛存在,主要在基因转录后水平对动、植物发育起重要的调节作用。近年陆续发现miR-181、miR-223、miR-142、miR-290～miR-295和miR-342等miRNAs可影响造血细胞的定向分化,并发现miRNA15、miRNA16、miRNA142和miRNA155与白血病、淋巴瘤的发病有关。本文就此作一综述。