截短型髓性造血细胞抑制因子在大肠杆菌中的高效表达

目的 :构建截短型的髓性造血细胞抑制因子 (myeloid progenitor inhibitory factor 1 ,MPIF-1 )表达载体 ,并在大肠杆菌中进行高效表达。方法 :利用 PCR方法从 p Kp L3 a-MPIF-1的表达载体上扩增 MPIF-1(2 5 -99)基因片段 ,重组到 p MTY4载体 ,并在大肠杆菌 pop2 1 3 6中高效表达。所得包涵体经过变性、透析复性后 ,用阴离子交换层析柱纯化。结果 :获得了 MPIF-1 (2 5 -99)的高效表达 ,表达量约占菌体总蛋白的 3 0 %。结论 :在大肠杆菌高效表达 MPIF-1 (2 5 -99)融合蛋白。

造血细胞生长抑制因子抑制大鼠肾间质成纤维细胞的生长

目的 观察一种新发现的生理性造血细胞生长抑制因子N 乙酰基 丝氨酰 天门冬酰 赖氨酰 脯氨酸N acetyl scryl aspartyl lysyl proline (AcSDKP)是否对大鼠肾间质成纤维细胞也具有一定程度的生长抑制作用。方法 应用成纤维细胞培养技术 ,将大鼠肾间质成纤维细胞在不同浓度的AcSDKP中共同孵育 2 4,48h后 ,测定其alamarblue的OD吸收值 ,观察不同浓度的AcSDKP对大鼠肾间质成纤维细胞的生长抑制作用。结果 大鼠肾间质成纤维细胞在AcSDKP中培养 48h后 ,测定其alamarblue的OD吸收值 ,发现其吸收率与对照组相比差异有显著性意义 (P <0 .0 1)。说明AcSDKP确实对大鼠肾间质成纤维细胞具有一定程度的生长抑制作用 ,并且其抑制作用在一定浓度范围内呈现剂量依赖性 ,当AcSDKP的浓度高于 10 -5mol/L或低于 10 -8mol/L时 ,其抑制作用消失 ,最大抑制浓度为 10 -6mol/L ,最大抑制率约 33 % (10 -6mol/L)。结论 生理性造血细胞生长抑制因子AcSDKP的抑制生长作用并不仅仅局限于造血细胞 ,它对大鼠肾间质成纤维细胞也具有生长抑制作用。

重组人肿瘤坏死因子α衍生物A对小鼠离体造血细胞的抑制作用

研究重组人肿瘤坏死因子α衍生物Ａ（ｒｈＴＮＦαＤａ）对离体造血细胞的抑制作用。方法骨髓细胞半固体培养和悬浮培养，ＤＮＡ凝胶电泳，ＤＮＡ缺口末端标记（ＴｄＴ），电镜观察。结果在２０ｎｇ／ｍｌＧ－ＣＳＦ存在下，ｒｈＴＮＦαＤａ能抑制小鼠造血祖细胞的集落形成，且ｒｈＴＮＦαＤａ对数剂量与形成的集落数呈负相关（ｒ＝－０．９８４５）。ｒｈＴＮＦαＤａ处理骨髓细胞４８ｈ，ＤＮＡ凝胶电泳可见典型的阶梯状条带，ＴｄＴ法可见大量的细胞核被染成棕色的骨髓细胞，电镜观察可见骨髓细胞核染色质变性、浓缩，细胞膜与核膜完整且明显皱缩。结论ｒｈＴＮＦαＤａ对造血细胞的抑制可能与其促进骨髓细胞凋亡有关。

人重组MPIF-1(25-99)蛋白的纯化

目的 :探索截短型髓样造血细胞抑制因子 1 (MPIF 1 )蛋白纯化的技术路线。方法 :构建MPIF 1(2 5 99) pMTY4原核表达载体 ,转化大肠杆菌后 ,用摇瓶培养 ,收获诱导菌 ,经破碎菌体—洗涤包涵体—溶解包涵体—复性初步纯化后 ,再经二步柱层析纯化。结果 :获得了MPIF 1 (2 5 99)的高效表达 ,表达量约占菌体总蛋白的 30 %。经纯化后 ,MPIF 1 (2 5 99)蛋白的纯度达 80 %以上。结论 :获得纯化的MPIF— 1(2 5— 99)