BMP4过表达转基因C57BL/6品系小鼠子代造血干细胞归巢能力观察

目的 目的观察骨形态发生蛋白4(BMP4)过表达转基因C57BL/6品系小鼠造血干细胞(HSC)的归巢能力.方法 ①构建BMP4过表达的C57BL/6品系小鼠转基因模型,设计特异引物对转基因新生小鼠进行筛选,筛选子代BMP4阳性鼠.取筛选后的子代阳性鼠5只,另取野生型C57BL/6品系小鼠5只,流式细胞仪分选出两种小鼠骨髓HSC.另取野生型C57BL/6品系小鼠20只,以10 Gy/20 g的钴60进行致死性辐照,后随机分为4组各5只,转基因1组小鼠经尾静注子代阳性鼠骨髓HSC和CFSE,野生型1组静注野生型小鼠骨髓HSC和CFSE,阳性对照组静注HSC体外CFSE追踪染色,阴性对照组只注射等量PBS.体内追踪16 h后提取骨髓有核细胞数(BMNC),流式细胞仪上机,检测CFSE所在阳性区域为HSC的归巢效率.②随机取转基因BMP4子代阳性鼠和野生型C57BL/6品系小鼠各3只(分别计为转基因2组和野生型2组),采用RT-PCR法检测造血归巢趋化因子(CX-CL12),Western blotting法检测整合素α4(ITGA4)和血管内皮细胞黏附分子1(VCAM-1)蛋白.结果 转基因1组、野生型1组、阳性对照组、阴性对照组归巢效率分别为(0.3520±0.02230)%、(0.7210±0.0320)%、(37.2000±0.5560)%、(0.1013±0.0180)%,转基因组与野生组、阴性组比较,野生组与阴性组比较,P均<0.05.转基因2组、野生型2组CXCL12 mRNA分别为(2.547.±0.126)%、(100.110±3.811)%,ITGA4蛋白分别为(231.0±2.49)%、(163.9±0.38)%,VCAM-1蛋白分别为(88.47±8.33)%、(92.33±1.98)%,两组CXCL12 mRNA、IT-GA4蛋白比较,P均<0.05.结论 BMP4过表达转基因C57BL/6品系转基因子代小鼠HSC归巢效率与野生型相比是降低的,机制可能是通过CXCL12和ITGA4进行调控的,升高的ITGA4无法补偿CXCL12的下调,从而导致了归巢效率的降低.