抗癌药物的电化学研究(Ⅱ)道诺霉素在DNA修饰石墨粉末微电极上的电化学行为及分析应用

研究了道诺霉素 ( DNM)在石墨粉末微电极和 DNA修饰石墨粉末微电极上的电化学行为 ,并分析了产生差别的原因。在此基础上 ,提出了测定微量 DNM的方法 ,DNM浓度在 1 .0× 1 0 - 7～ 1 .0× 1 0 - 5mol/L之间其微分脉冲伏安 ( DPV)峰电流与浓度有良好的线性关系 ,检出限为 5 .0× 1 0 - 8mol/L。采用标准加入法测定了模拟样品中的 DNM,回收率在 94%～ 1 0 8%之间 。

Ru(phen)_2 dppx^(2+)光谱探针法研究道诺霉素与脱氧核糖核酸的相互作用

以核酸分子“光开关”Ru(phen)2dppx2+为探针,分别采用紫外-可见吸收光谱法和荧光光谱法研究了抗癌药物道诺霉素(daunomycin,DNM)与小牛胸腺DNA之间的作用方式,结果表明:DNM是以插入的方式与DNA相互作用。Scatchard方程的研究表明,Ru(phen)2dppx2+与小牛胸腺DNA的结合比为1∶4~1∶5;表观结合常数为2.58×107L/mol。DNM加入后,表观结合常数大大降低,这也表明道诺霉素主要是以插入方式与DNA结合。作为研究核酸分子的荧光探针,与溴化乙锭相比,Ru(phen)2dppx2+具有灵敏度高、毒性低、稳定性好、选择性好、使用方便等优点。

道诺霉素脂质体玻璃体内代谢及视网膜毒性

采用逆相蒸发法制备了道诺霉素脂质体,测得脂质体包裹率为31.6%,终浓度为100μg/ml,直径为60～125nm。用荧光分光光度法在24只兔进行了道诺霉索及其脂质体玻璃体内药物清除率测定。18只兔用于ERG、光镜和透射电镜检查以评价药物的视网膜毒性。结果道诺霉素在玻璃体内的半衰期为145.5min;道诺霉素脂质体在眼内的头两天清除较快,但在14d仍可测出平均浓度为0.64μg/ml。电镜观察表明道诺霉素剂量超过5μg,或其脂质体超过20μg出现光感受器毒性。提示道诺霉素脂质体能明显延长有效浓度时间并减低眼内毒性反应。

去炎松与道诺霉素脂质体联合应用对玻璃体切除兔眼视网膜的影响

目的研究去炎松与道诺霉素脂质体联合应用对玻璃体切除兔眼视网膜的影响。方法对１６只兔双眼行玻璃体切除术并分为４组，分别在各组兔的１眼玻璃体内注入空白脂质体、１ｍｇ去炎松、１０μｇ道诺霉素脂质体，另１眼作对照。观察术后２８天内眼底和ＥＲＧｂ波的变化以及２８天时视网膜结构的变化。结果联合用药组ＥＲＧｂ波较空白脂质体组、去炎松组有升高（Ｐ＜０．０５），而与道诺霉素脂质体组无差异（Ｐ＞０．０５），光镜和电镜下视网膜结构无损害。

巨噬细胞刺激人成纤维细胞增生及去炎松和道诺霉素对其的抑制

采用离体培养的人皮肤成纤维细胞并加入巨噬细胞调理培养液（MCM），及3H-胸腺嘧啶掺入液体闪烁检测，观察了成纤维细胞受MCM刺激后的增殖及药物对其的抑制作用。结果，加入MCM组细胞增殖率较对照组明显增加（P＜0．01），150ng／ml道诺霉素及联合用药组的细胞抑制率最高达95％以上（P＜0．01），250μg／ml去炎松的抑制率在不加MCM组约为20％～40％，而在加MCM组约为40％～60％（P＜0．01）。证实去炎松除有直接抑制作用外，更能明显抑制巨噬细胞活性因子对成纤维细胞增生的刺激作用。

道诺霉素作用机制研究进展

道诺霉素 (DNR)用于治疗急性白血病 ,目前已用于AIDS相关肿瘤治疗。DNR的作用对象包括DNA、膜磷脂及蛋白质。DNR嵌入DNA分子 ,干扰复制与转录过程 ,并通过TopⅡ媒介或氧自由基诱导DNA链断裂。DNR与膜磷脂作用影响胞内信息通路 ,与多种蛋白质间也存在相互作用 ,并诱导细胞凋亡。

DNA与抗癌药物道诺霉素相互作用的研究

该文采用荧光光谱法并用溴化乙锭（ＥＢ）作为荧光探针研究了道诺霉素（ＤＲＮ） 与ＤＮＡ相互作用的方式。结果表明：ＤＲＮ 的生色团能够嵌入ｄｓ ＤＮＡ 双螺旋结构的碱基对之间，ＤＲＮ 与ＤＮＡ 的主要作用位点是碱基Ｇ、Ｃ；ＤＲＮ 插入ｄｓ ＤＮＡ 碱其对中，不会破坏碱基对中氢键，不会影响ＤＮＡ 的复性；ＤＮＡ 与ｓｓ ＤＮＡ

DNA电化学传感器在DNA损伤研究中的应用

利用单链ＤＮＡ分子共价固定在石墨电极表面，采用核酸分子杂交技术，以道诺霉素作为杂交指示剂形成ＤＮＡ电化学传感器．研究了在不同致突变剂的作用下，特定碱基序列的ＤＮＡ在电极表面能否杂交及杂交程度的差异，探讨了ＤＮＡ突变情况及可能的突变机理．

基于金纳米粒子/1,6-己基二硫醇组装的脱氧核糖核酸电化学传感器检测凝血因子Ⅻ片段

将含有17个碱基对的凝血因子Ⅻ单链脱氧核糖核酸(DNA)片段固定在十六烷基三甲基溴化胺(CTMAB)保护的金纳米粒子/1,6-己基二硫醇/金电极上,以道诺霉素(DNR)为电活性指示剂,用于检测其互补序列。电化学阻抗谱(EIS)监测了整个组装过程,电极界面性质随组装层的改变而变化。循环伏安(CV)研究发现,DNR与单、双链DNA以不同的方式结合。通过微分脉冲伏安法(DPV)检测DNR的还原峰电流,获得DNA杂交的最佳条件为:杂交时间1h,道诺霉素的浓度为1.0×10-4mol/L,巯基修饰的单链DNA(SH-ssDNA)组装时间为24h。在最佳杂交条件下,当互补DNA(cDNA)的浓度从1.0×10-13mol/L增加到1.0×10-8mol/L,DNR的还原峰电流与cDNA浓度的对数值呈线性关系,其线性回归方程为:y=0.288+0.022lgx,线性相关系数为0.9987,cDNA的检出限达8.1×10-14mol/L。

巨噬细胞调理液对视网膜色素上皮细胞合成单核细胞趋化蛋白-1的作用

目的 评价巨噬细胞调理液 ( MCM)对视网膜色素上皮 ( RPE)细胞合成单核细胞趋化蛋白 - 1( MCP- 1)的作用 .方法 在培养的人 RPE细胞的培养液中加入 2 0 0 m L· L- 1培养人巨噬细胞调理液 ( MCM) ,培养 2 ,4 ,8,16,2 4和 4 8h后 ,对培养的细胞进行免疫组化和原位杂交 ,用 Western blot检测培养的上清液中 MCP- 1的含量 .同时在培养液中加入地塞米松 ( 10 - 8,10 - 7和 10 - 6 mol· L- 1 )和道诺霉素 ( 2 ,2 0和2 0 0 mg· L- 1 )重复上述实验 ,观察在此条件下 MCM对MCP- 1合成的作用 .结果 2 0 0 m L· L- 1 MCM培养条件下RPE细胞 2 h时已检测出分泌的 MCP- 1并在 16h达到较高水平 .同时原位杂交和免疫组化在细胞中检测到 MCP- 1的表达 .加入地塞米松 ( P<0 .0 1)和道诺霉素 ( P<0 .0 5 )后 ,MCP- 1的分泌水平明显降低 ,其中地塞米松对 MCP- 1合成的抑制作用大于道诺霉素 .结论 MCM刺激 RPE细胞产生MCP- 1,而 MCP- 1对巨噬细胞和淋巴细胞有较强的趋化作用 ,这种循环相互作用的过程对增生性玻璃体视网膜病变的发生可能有重要的作用 .在视网膜脱离后尽早使用地塞米松可能对抑制增殖性玻璃体视网膜病变有作用 .

DNR-OC125结合物杀伤人卵巢癌细胞

目前人们设计了一种体外试验来测试道诺霉素(DNR)结合一种单抗隆抗体OC125对人卵巢癌细胞的功效。这种OC125抗体特异地与人卵巢癌的抗原蛋白CA125结合。将含不同连接基的新DNR类似物与小鼠抗CA125单克隆抗体(DNR-OC125)、非特异小鼠IgG1(DNR-IgG1)或牛血清白蛋白(DNR-BSA)结合。此DNR蛋白结合物在室温下中性溶液中可保持完全稳定数天。

基于适体竞争机理的溶菌酶电化学传感器

制备了基于溶菌酶适体竞争机理的信号减弱型电化学传感器,在玻碳电极上修饰羧基化的多壁碳纳米管,将带有氨基的互补适体DNA连接到多壁碳纳米管上。由于道诺霉素崁入电极上的互补DNA,而产生电化学信号,当有目标物时,适体与结合力更高的溶菌酶结合,原本的互补链解链,导致插入双链的道诺霉素脱落,电化学信号减弱。以微分脉冲伏安法测定溶菌酶,响应的范围为1～500 nmol/L,相关系数0.999,检测下限为0.5 nmol/L(S/N=3)。