长链非编码RNA父系表达遗传印记基因10靶向微小RNA-34a对口腔鳞状细胞癌生物学功能的影响

目的探讨长链非编码RNA父系表达遗传印记基因10(lncRNA PEG10)在口腔鳞状细胞癌(OSCC)中的表达,以及通过调节微小RNA(miR)-34a对OSCC细胞增殖和迁移的影响。方法收集53例口腔鳞癌组织和癌旁组织作为研究对象,采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)分析组织中lncRNA PEG10和miR-34a的表达水平。口腔鳞癌SCC-25细胞采用随机数表法分为si-NC组、si-lncRNA EG10组、miR-34a mimics组、miRNA-NC组。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、细胞划痕实验和Transwell实验检测各组细胞增殖和迁移能力;双荧光素酶实验报告基因实验验证lncRNA PEG10与miR-34a的靶向关系。计量数据组间比较采用独立样本t检验,计数数据采用皮尔森卡方检验。结果lncRNA PEG10在OSCC肿瘤组织中的平均表达量(2.452±0.750)高于癌旁组织(1.293±0.326),差异有统计学意义(t=8.365,P<0.05)。lncRNA PEG10组细胞lncRNA PEG10表达水平(2.868±0.115)高于lncRNA对照组(0.973±0.003),差异有统计学意义(t=11.99,P<0.01)。miR-34a mimics组细胞miR-34a表达水平(1.310±0.010)高于miRNA对照组(0.251±0.020),差异有统计学意义(t=34.16,P<0.01)。lncRNA PEG10的高表达与淋巴结转移(χ^(2)=5.577,P<0.05)和临床分期(χ^(2)=6.606,P<0.05)相关。lncRNA PEG10沉默后,SCC-25细胞的增殖能力在48 h(0.416±0.009)和72 h(0.555±0.048)的检测点A值明显低于对照组(0.561±0.037和0.894±0.025,F_(48 h)=590.1,F_(72 h)=105.8,P<0.05)。lncRNA PEG10敲减组细胞划痕愈合率[(157.000±18.457)%]明显低于lncRNA对照组[(74.000±14.256)%],差异有统计学意义(t=19.452,P<0.05)。结论lncRNA PEG10在口腔鳞癌中表达上调,而miR-34a表达水平下调,lncRNA PEG10通过靶向结合miR-34a调节口腔鳞癌细胞增殖和迁移。

子宫内膜癌组织中IGF2BP1mRNA,PEG10mRNA表达及与增殖基因表达的相关性和预后研究

目的研究子宫内膜癌(endometrial carcinoma,EC)组织中胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白1(insulinlike growth factor 2 mRNA binding protein 1,IGF2BP1)mRNA,父系表达遗传印记基因10(patrilineal expression of genetic imprinting gene 10,PEG10)mRNA表达及与增殖基因表达的相关性及预后。方法选取2017年1月~2019年1月湖北理工学院附属妇幼保健院诊治的100例EC患者。实时荧光定量PCR检测EC癌组织和癌旁组织中IGF2BP1 mRNA,PEG10 mRNA及增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)mRNA,细胞周期素D1(cyclin D1)mRNA,细胞周期蛋白依赖激酶4(cyclin dependent kinase 4,CDK4)mRNA表达。免疫组织化学检测IGF2BP1,PEG10蛋白表达。相关性采用Pearson相关分析。Kaplan-Meier曲线分析不同IGF2BP1,PEG10表达组EC患者的预后差异。COX回归分析EC患者的预后影响因素。结果EC癌组织中IGF2BP1 mRNA(1.84±0.33),PEG10 mRNA(2.12±0.40),PCNA mRNA(3.14±0.42),cyclinD1 mRNA(2.81±0.36),CDK4 mRNA(2.37±0.34)高于癌旁组织(0.78±0.21,0.91±0.25,0.74±0.13,0.67±0.21,0.59±0.18),差异具有统计学意义(t=25.652~54.588,均P<0.05)。癌组织中IGF2BP1(70.00%),PEG10(72.00%)蛋白阳性率高于癌旁组织(100%,9.00%),差异具有统计学意义(χ^(2)=75.000,82.363,均P<0.05)。EC中IGF2BP1 mRNA,PEG10 mRNA表达与PCNA mRNA,cyclinD1 mRNA,CDK4 mRNA表达呈正相关(r=0.562~0.625,均P<0.05)。EC中IGF2BP1 mRNA与PEG10 mRNA表达呈显著正相关(r=0.663,P<0.05)。FIGO分期Ⅲ期、并发淋巴结转移EC癌组织中IGF2BP1(86.49%,87.50%),PEG10(89.19%,90.63%)阳性率高于FIGO分期Ⅰ~Ⅱ期(60.32%,61.90%)、无淋巴结转移(61.77%,63.24%),差异具有统计学意义(χ^(2)=6.863~8.608,均P<0.05)。IGF2BP1阳性组患者三年总体生存率70.00%(49/70)低于阴性组的90.00%(27/30);PEG10阳性组患者三年总体生存率为69.44%(50/72),低于阴性组的92.86%(26/28),差异具有统计学意义(Log-rankχ^(2)=4.133,5.491,P=0.042,0.019)。FIGO分期Ⅲ期(OR=1.449,95%CI:1.148~1.830)、并发淋巴结转移(OR=1.442,95%CI:1.124~1.850),IGF2BP1阳性(OR=1.637,95%CI:1.239~2.163)及PEG10阳性(OR=1.576,95%CI:1.136~1.187)是影响EC患者生存预后的独立危险因素(均P<0.05)。结论EC中IGF2BP1,PEG10表达升高,两者与增殖基因表达呈正相关,是EC预后评估的肿瘤标志物。

PEG10基因与Wnt/β-catenin信号通路在肝癌发病机制中的相互关系

遗传印记基因10(PEG10)在绝大多数肝癌中特异性高表达,PEG10和SIAH1基因在肝癌细胞中相互作用,过表达的PEG10可抑制SIAH1介导的细胞凋亡,同时SIAH1可显著抑制PEG10的表达,失平衡的二者可能通过抑制细胞凋亡参与肝癌形成。Wnt/β-catenin信号通路的异常激活在肝癌形成中起重要作用;而SIAH1降解该通路的关键因子β-连环素(β-catenin),诱导肝癌的细胞凋亡和生长停滞,在抑制肝癌形成中起重要作用。PEG10和β-catenin均与SIAH1密切联系,PEG10的致癌作用很可能部分归因于Wnt/β-catenin信号通路。

长链非编码RNA PEG10在结直肠癌中表达的临床意义和生物学功能

目的探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)父系表达遗传印记基因10(paternally expressed 10,PEG10)在人结直肠癌(colorectal cancer,CRC)中的表达、临床意义及生物学作用。方法利用实时定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)的方法检测66例CRC肿瘤组织及正常癌旁对照组织中lncRNA PEG10 mRNA的表达水平,分析lncRNA PEG10的表达与CRC患者临床病理资料及预后之间的相关性。在体外,利用CCK-8实验、Transwell迁移和侵袭实验检测lncRNA PEG10的表达对CRC细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。结果与癌旁正常对照组织相比,lncRNA PEG10在CRC肿瘤组织中的表达显著升高(P<0.01),并且与CRC患者的肿瘤浸润深度(P=0.017)、淋巴结转移情况(P=0.009)及TNM分期(P<0.001)显著相关。此外,lncRNA PEG10高表达是CRC患者预后的独立危险因素,与CRC患者总生存期(P=0.0037)和无进展生存期(P=0.0019)的减少密切相关。CCK-8细胞活性实验表明,lncRNA PEG10表达干扰能够抑制CRC细胞系HCT-116和DLD-1的增殖能力(均P<0.01);Transwell细胞侵袭实验表明,lncRNA PEG10表达干扰能够抑制CRC细胞系HCT-116和DLD-1的浸润能力(P<0.05或P<0.01);Transwell细胞迁移实验表明,lncRNA PEG10表达干扰能够抑制CRC细胞系HCT-116和DLD-1的转移能力(P<0.05或P<0.01)。结论lncRNA PEG10与CRC患者预后不良密切相关,并且促进CRC细胞的增殖、浸润和转移。lncRNA PEG10靶向治疗或许能够为CRC患者预后的改善带来巨大的益处。

MiR-122调控肝癌遗传印记基因PEG10的实验研究

目的探讨遗传印记基因PEG10功能的异常与miRNA失调控的相关性。方法通过生物信息学网站TargetScan预测可能参与PEG10调控的miRNA分子，筛选到miR～122。通过基于taqman探针的实时定量逆转录聚合酶链反应，比较miR-122在原代正常肝细胞和3株肝癌细胞株（Huh7，Hep3B，HepG2）中的表达差异。将miR-122的分子前体转染HepG2细胞，观察转染前后PEG10在mRNA和蛋白水平的表达变化。多组均数间比较采用秩和检验，配对样本组间差异比较采用t检验。结果生物信息学预测结果显示，miR-122可能参与了PEG10的调控。实时定量逆转录聚合酶链反应结果显示，PHHC，Huh7、HepG2、Hep3B细胞miR-122的表达量（2^△ △ Ct值）分别为1．0578±0．0975、0．5600±0．0632、0．0068±0．0012、0．0058±0．0008，H=9．667，P〈0．05。与原代正常肝细胞相比，miR-122在肝癌细胞株中表现为完全（Hep3B、HepG2细胞）或部分缺失（Huh7细胞），其表达水平与PEG10呈负相关。将miR-122分子前体转入HepG2细胞后，PEG10在mRNA水平并未显示出明显的下调，但Western blot结果提示miR-122分子前体明显抑制了PEG10蛋白的表达。结论miR-122参与了遗传印记基因PEG10的调控，其调控主要发生在翻译阶段，即蛋白质水平。miRNA的失调控与肝癌的发生密切相关，其功能的异常可能早于受其调控的癌基因或抑癌基因的改变，是肝癌发生的早期事件，这为肝癌的早期预警和基因治疗提供了新思路。