获能培养液等因素对遗传工程小鼠冻融精子体外受精率的影响

目的探讨遗传工程小鼠精子冷冻、复苏及体外受精率的效果,建立简便、经济的遗传工程小鼠保种体系。方法采用精子冷冻、体外受精和胚胎移植技术,比较了精子获能培养液、雄鼠周龄及精子冻存液等因素对于遗传工程小鼠精子冷冻保存的影响。结果用CPA精子冻存液冷冻保存精子,精子复苏后用PM精子培养液获能培养,体外受精率在82.49%-91.43%,而HTF精子培养液的体外受精率为14.46%-27.38%,同品系间差异极显著（P〈0.01）;10-35周龄的雄鼠精子均能成功冷冻、受精,移植后产仔;使用R18S3,CPM,CPA三种不同精子冻存液冷冻遗传工程小鼠精子,复苏后采用PM精子培养液体外受精,受精率分别是75.85%、88.89%和94.27%,移植后得到阳性小鼠;体外受精后的胚胎成功冷冻保存,移植后产仔。结论采用CPA精子冻存液冷冻保存精子,精子复苏后用PM精子培养液体外受精,能够更有效地保存遗传工程小鼠。

遗传工程小鼠冻存卵巢异体原位移植比较研究

目的对C57BL/6 J为背景的遗传工程小鼠卵巢冷冻及复苏后原位移植进行研究,建立遗传工程小鼠卵巢冷冻方法,弥补小鼠资源保种体系。方法采用DAP213方法冷冻保存了C57BL/6 J及SCARB2、PSGL1、IGB3S三个遗传工程小鼠10日龄幼鼠的卵巢,将四个品系10日龄幼鼠的新鲜卵巢及冻存复苏卵巢原位移植到4周龄C57BL/6 J及C57BL/6 J(Cg)—Tyr^c-2 J/J(B6 albino)受体雌鼠,术后饲养5周与10周龄性成熟C57BL/6 J雄鼠交配,观察移植出生幼仔。结果C57BL/6 J新鲜卵巢和冻存卵巢,三个品系遗传工程小鼠的冻存卵巢原位移植到C57BL/6 J和B6 albino受体中,均可以恢复正常功能,交配后得到仔鼠。结论采用DAP213方法冻存C57BL/6 J及以C57BL/6 J为背景的遗传工程小鼠卵巢,复苏后原位移植到C57BL/6 J和B6 albino,交配后产仔,卵巢冻存方式是小鼠资源库保存的一个重要补充。

制备遗传工程小鼠的技术改进

遗传工程小鼠是当今生命科学领域集成度最高的研究体系之一。特别在“人类基因组计划和小鼠基因组计划”完成后,遗传工程小鼠在制备人类疾病模型、药物开发和评价、基因功能分析以及比较基因组学中发挥着越来越重要的作用。由此,也推动了遗传工程小鼠相关技术的快速发展。就遗传工程小鼠制备的现况、存在的问题以及新策略等相关问题进行了总结。

逆向遗传分析与遗传工程小鼠

遗传学的实验研究往往是从生物体的突变分析入手,通过观察自发的或诱发的突变型个体表型改变来识别突变基因,进而识别与突变基因等位的正常基因的结构与功能.但是,随着研究的深入,这种传统思路的局限性慢慢显现出来.譬如,许多能造成致死表型的突变,很可能因阻断重要的发育或代谢途径而导致携有突变基因的个体死亡.而分离和研究这类突变基因对于阐明生长、发育、疾病、衰老乃至进化等基本生物学问题至关重要.

遗传工程小鼠的监测体系初探

目的欲建立一套完整的质量检测技术对遗传工程小鼠质量进行控制,以保证作为后续医药或其他生命科学动物实验研究的科学性和严谨性。方法在遗传、微生物、体内外寄生虫、病理、研发及繁育设施环境、饲料营养等常规质量检测的基础上,开展用PCR、Southern-blot检测目的基因;用RT-PCR、ELISA、SDS-PAGE、Western-blot等检测基因表达;用血液常规、血液生化及各器官形态、功能等检测来描述机体表征这三个层次综合描述遗传工程小鼠的特征。结果与结论将建立的技术方法应用于转基因小鼠、基因突变鼠、基因缺失鼠的检测,验证所建立的方法用于遗传工程小鼠质量控制的可行性。