鸡传染性支气管炎病毒反向遗传技术研究进展

鸡传染性支气管炎是由鸡传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)感染引起的鸡的一种急性、高度接触性传染性病。IBV基因组非常容易发生突变和重组,给该病防控带来巨大困难,因此高效疫苗和有效药物的研发非常重要。反向遗传技术是研究RNA病毒的重要技术。通过反向遗传技术可以在DNA分子水平定向改造病毒序列,对病毒的基因功能、致病机制以及新型疫苗进行研究。论文对构建IBV操作系统的策略、利用反向遗传技术研究IBV基因结构和功能、研发新型疫苗以及开发病毒载体的最新进展进行综述,为IBV及其他冠状病毒相关研究提供参考。

利用反向遗传技术产生8基因全禽源流感病毒疫苗候选株

利用反向遗传技术将含有A／Chicken／Shanghai／F／98（H9N2）株禽流感病毒（avian influenza virus，AIV）的6个内部基因与H5N1亚型AIV的2个表面基因HA和NA共转染COS-1细胞，产生了6＋2全禽源的重配AIV。将H5N1亚型AIV的HA基因经基因突变致弱，然后将A／Chicken／Shanghai／F／98（H9N2）AIV的6个内部基因的cDNA和以上致弱的禽源HA基因及NA基因的cDNA分别克隆到转录／表达载体pHW2000中，构建成8个转录／表达质粒。将8个质粒共转染COS-1细胞，24h后收获细胞及上清接种SPF鸡胚，72～90h后鸡胚死亡，收取鸡胚尿囊液进行血凝、血凝抑制试验、序列分析、病毒致病性试验和动物免疫保护试验，最终证实产生了致弱的全禽源AIV瘩苗候诜株．

多种分子遗传技术应用于2例小额外标记染色体胎儿的产前筛查与诊断

目的运用多种分子遗传技术对小额外标记染色体(small supernumerary marker chromosome,sSMC)胎儿进行产前筛查和诊断,探讨各分子遗传技术的优缺点。方法对2例无创产前基因检测(non-invasive prenatal tests, NIPT)高风险胎儿的孕妇进行羊膜腔穿刺术,采集羊水标本,运用多重连接依赖探针扩增技术(multiplex ligation-dependent probe amplification,MLPA)对2例胎儿进行染色体非整倍体快速诊断,同时进行细胞培养和G显带核型分析;采用染色体微阵列技术(chromosome microarray, CMA)对胎儿1(18三体高风险)进行验证,采用MLPA技术对胎儿2(性染色体异常高风险)进行Y染色体微缺失检测。2例胎儿双亲均进行外周血G显带核型分析。结果 MLPA技术快速诊断结果为:胎儿1的18号染色体短臂部分三倍体,胎儿2携带2条正常X染色体和1条短臂缺失的Y染色体;胎儿1羊水G显带核型结果为47,XY,+Mar(胎儿1),胎儿2为47,XX,+Mar;胎儿1的CMA检测结果为arr[hg19]18p11.32p11.21 (136,227-15,099)×4;胎儿2的Y染色体微缺失结果为SRY基因和生精区AZFc区缺失。2例胎儿父母双亲的外周血染色体核型均正常。结论 NIPT检测适用于sSMC胎儿的产前筛查,不同的分子遗传产前诊断技术检测sSMC胎儿各有优缺点,相互补充验证的结果可为sSMC胎儿临床遗传咨询提供更详细的信息。

利用反向遗传技术研究H9N2亚型AIV传播途径的分子机制

利用反向遗传技术,通过基因重排方法,产生两个表面基因来自A/Chicken/Guangdong/SS/94(H9N2)禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)株和其余基因来自A/Chicken/Shanghai/F/98(H9N2)AIV株的3株H9N2亚型重排AIV,动物传播性试验发现A/Chicken/Shanghai/F/98(H9N2)株、A/Chicken/Guangdong/SS/94(H9N2)AIV株和3株H9N2亚型重排AIV都可以经直接接触途径传播;在粪便接触途径下,3株重排AIV都不经粪便接触传播;只有A/Chicken/Shanghai/F/98(H9N2)株和重排AIV RF7/SSHA能经过气溶胶途径传播。HI试验结果进一步证明了以上的结果。实验结果表明H9N2亚型AIV的NA基因与H9N2亚型AIV气溶胶传播途径有重要的关系,即1998年中国大陆H9N2亚型AIV大流行可能是因为病毒获得气溶胶传播途径的特性,推测病毒的NA基因发挥了重要作用。

基于遗传技术辅助设计的神经网络期货市场预测

本文在对期货市场的历史数据进行预分析的基础上，建立了神经网络期货市场预测模型．文中不仅对神经网络进行了改进研究，还利用遗传技术优化网络的结构和参数．运运实例对模型进行学习与测试的实验结果表明，利用遗传技术辅助设计的神经网络预测模型能较准确地预报期货价格的波动趋势。

用反向遗传技术产生冷适应致弱的重组A型人流感病毒的研究

目的以鸡胚高度适应株A/PR/8/34株为重组流感病毒骨架,利用反向遗传技术拯救冷适应致弱的重组A型人流感病毒。方法对冷适应、温度敏感、减毒的A/Ann Arbor/6/60(H2N2)流感病毒株的PB2基因片段,进行了全基因序列合成,同时人工引入PB2265(N265S)氨基酸的突变。PB2基因片段通过与改造后的转录/表达载体pAD3000连接,构建PB2基因的拯救载体。该重组质粒与PR8进行“7+1”组合的病毒拯救,共转染COS-1细胞。结果经测序获得序列准确的拯救质粒pMDV-A-PB2,利用反向遗传技术成功拯救出了具有血凝性(1×25)的冷适应的重组A型流感病毒。结论利用反向遗传技术成功拯救冷适应致弱的重组A型人流感病毒,该系统为深入研究甲型人流感病毒的基因功能和新型疫苗研发奠定了基础。

新城疫病毒反向遗传技术研究进展

新城疫（newcastle disease，ND）是由新城疫病毒（newcastle disease virus，NDV）引起禽类的一种急性、高度接触性传染病，也是目前严重危害我国养禽业的主要疫病之一。虽然NDV只有一个血清型，但不同毒株之间的毒力存在明显差异。有关NDV毒力及其相关决定因素的研究一直是世界范围内的研究热点，其中反向遗传学操作技术是进行NDV毒力相关基因研究的一种主要技术手段。

流感病毒反向遗传技术合成rH_5/PR8融合病毒的生物学活性

目的探讨用流感病毒反向遗传技术合成的人工融合病毒株的生物学活性,对人工合成的融合流感病毒株进行全面、系统地研究,对其作为疫苗株的可行性、有效性提供科学依据。方法用流感病毒反向遗传技术合成rH5/PR8减毒病毒株,测定5代病毒与原代病毒HA基因序列,确认外来基因的遗传稳定性;用细胞实验确认其增殖性,用动物实验确认其致病性的强弱。结果人工合成的rH5/PR8融合病毒株除HA外,均来自A/PR/8/34(PR8),HA来自H5N1型强致病性禽流感病毒,第1050碱基从G定点突变成C,导致344号氨基酸从精氨酸变为苏氨酸,并剪除第1054～1065碱基,致使第346～349的碱性氨基酸(RKKR)部位被去除。该病毒的增殖能力可以达到109PFU/ml,外来基因HA5基因遗传稳定、不易变异,达到疫苗株的要求;鸡脑内即静脉接种活病毒实验证实病毒呈现弱毒性。结论用流感病毒反向遗传技术合成的人工融合病毒株有良好的增殖性及基因遗传稳定性,用基因剪切技术对HA的碱性氨基酸连续序列的敲除可以减低病毒的致病性,对鸡呈现弱毒性。

流感病毒反向遗传技术合成rH5/PR8融合病毒的免疫学相关研究

目的研究用流感病毒反向遗传技术合成的rH5/PR8融合病毒株的免疫学特性,为人工合成的融合流感病毒株,作为疫苗株的免疫性、有效性、稳定性及可持续性提供科学数据。方法用流感病毒反向遗传技术合成减毒rH5/PR8融合病毒株,用动物实验确认此病毒株的免疫原性、免疫稳定性及免疫防御实验确认防御效果。结果人工合成的rH5/PR8融合病毒株除HA外,均来自A/PR/8/34(PR8),HA来自H5N1强致病性鸡流感病毒,剪除第346-349的碱性氨基酸(RKKR)部位。用灭活rH5/PR8病毒免疫鸡后,平均抗体水平HI Titer达到29以上,持续达1个月之久;免疫原在一定条件下保存2个月及4个月后重复上述实验,抗体水平上升与立即免疫组相似,有效抗体水平可持续到免疫后7个月以上,表明rH5/PR8病毒HA5抗原稳定,不易被降解;免疫防御实验表明:非免疫组鸡的死亡率达到60%左右,而免疫组无死亡,防御率达到100%,表明免疫防御有效。结论用流感病毒反向遗传技术合成的人工融合减毒病毒rH5/PR8株,外来基因HA5抗原性安定、免疫原性可靠,有效抗体持续时间长,免疫防御有效。

反向遗传技术在牛轮状病毒研究中的应用

本文综述了牛轮状病毒的生物学特性、反向遗传学系统的建立及其研究进展,并对反向遗传技术应用于牛轮状病毒进行展望。

鸡传染性支气管炎病毒反向遗传技术研究进展

鸡传染性支气管炎(IB)是由传染性支气管炎病毒(IBV)引起的严重危害世界养禽业的重要疫病。在规模化饲养条件下,IBV变异株的广泛流行给我国养禽业造成了巨大的经济损失。IBV反向遗传操作系统的建立和应用,给该病的预防和控制带来了新曙光。近几年,国内外在IBV的反向遗传技术上取得了较大发展,本文就IBV反向遗传操作系统的构建策略及利用该技术在IBV研究中所取得的最新成果进行综述。

光遗传技术在精神疾病研究中的应用

光遗传学技术是将光学和分子遗传学有机结合后产生的一门新兴技术，这种方法是利用光刺激光敏感通道蛋白来控制神经元的活动及功能。应用这项技术，将光敏感蛋白表达在特定神经元中，通过不同波长或频率的光刺激激活或沉默特定的神经元，

反向遗传技术在猪繁殖与呼吸综合征研究中的应用

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起,严重危害全世界养猪业。PRRSV与宿主细胞的相互作用、致病机理,其基因组及蛋白质对致病性的影响等仍是未解之谜。反向遗传技术为研究PRRSV提供了技术支撑。现基于病毒拯救、疫苗研制、分子病原学诊断等方面的内容,对反向遗传技术在PRRS研究中的应用作一综述。

分子遗传技术在家畜遗传评定中的应用

基于表型信息和谱系信息估计基因加性效应值的种畜遗传评定方法在家畜遗传改良中发挥了很大作用,但因其无法真正了解控制经济性状的遗传本质,影响了家畜遗传改良的进一步进展。分子标记辅助选择可在一定程度上提高种畜遗传评定准确性,但在目前不能精确定位QTL或基因时,其效率受到很大影响。提高种畜遗传评定准确性的最有效途径应是直接利用控制经济性状的基因,后基因组时代的功能基因组研究的快速发展为实现这一目标提供了契机。同时,多个家畜品种基因组测序完成和大量SNP多态性的发现,使得利用覆盖全基因组多态性标记信息的基因组选择方法为家畜遗传评定开拓了又一条途径。

反向遗传技术在禽流感发病机制研究中的应用

禽流感是禽流行性感冒的简称，它是一种由甲型流感病毒的一种亚型（也称禽流感病毒）引起的传染性疾病，被国际兽疫局定为甲类传染病，又称真性鸡瘟或欧洲鸡瘟。按病原体类型的不同．禽流感可分为高致病性、低致病性和非致病性禽流感三大类。非致病性禽流感不会引起明显症状，仅使染病的禽鸟体内产生病毒抗体。低致病性禽流感可使禽类出现轻度呼吸道症状，

应用反向遗传技术研究流感病毒

反向遗传技术(reverse genetics,RG)是一种通过cDNA克隆来拯救RNA病毒基因组片段,进而复制出设计表型的病毒的现代生物基因工程手段,目前被广泛应用于流感病毒重配株的构建。回顾流感病毒反向遗传技术发展的历史,并介绍目前该技术在禽流感疫苗研发方面的实际应用,为禽流感的防治、流感病毒以及其他RNA病毒的研究提供新的思路。

光遗传技术及其在基底神经节运动调控中的应用研究进展

基底神经节是运动系统的皮层下中枢之一,通过直接和间接通路参与动作的选择、优化、整合与精确调节。基底神经节两条通路调节功能紊乱与帕金森等疾病导致的行为功能障碍有关。光遗传技术具有可对特定神经元在时间、空间上进行精确调控的优点,被广泛应用于神经环路、神经递质以及各类退行性疾病和精神疾病的研究中。本文仅就国内外光遗传技术及其在基底神经节运动调控中的应用研究进展做一综述。

基于微生物遗传技术与兽医学科结合的人才培养改革探索

加快农业科技创新,是实现现代农业的重大要素,是建设社会主义新农村的重大举措,是推进农村改革发展的重要任务,其中人才是关键.培养农业创新型人才有着重要的现实意义.本文从课程内容设计、授课形式等方面对微生物技术与兽医学科交叉结合教育进行探索,并提出微生物遗传技术与兽医学科结合课程建立需考虑的问题,以期为兽医创新人才培养提供参考.

光遗传技术在神经系统疾病动物模型中的应用

光遗传技术是Boyden等科学家在2005发明的利用激光照射实现精准控制神经元活动的神经调控技术,该技术是基因工程,生物医学工程等的完美结合。自发明以来被广泛应用于帕金森氏病、情感神经环路等研究中。2011年,该技术入选Nature Methods杂志2010年度方法。本文对光遗传技术的新进展以及在疾病模型研究中的应用做简要综述。