水稻不育系谷丰A的遗传提纯与原种繁殖技术

谷丰A是福建省农业科学院水稻研究所用"龙特浦B/宙伊B"杂交选育的保持系,再与地谷A测交、回交育成的籼型三系不育系,于2001年通过福建省科技成果鉴定。阐述了三系不育系谷丰A的主要特征特性,对谷丰A进行遗传提纯的关键技术及原种繁殖技术。

Flt3配体基因原核表达载体的构建、表达、纯化及生物学活性鉴定

目的:获得人Flt3配体(FL)cDNA胞外段序列,构建表达人FL蛋白的原核重组表达载体并诱导其表达、纯化及鉴定目的蛋白。方法:提取K562细胞总RNA,利用巢式PCR技术扩增出目的cDNA序列,构建重组质粒pGEM-FL,经酶切、PCR和测序鉴定后,将rhFL基因亚克隆到原核表达质粒PQE30,构建重组表达质粒PQE30-rhFL,在大肠杆菌M15中诱导表达。用镍凝胶亲和层析方法纯化目的蛋白,Westren blotting杂交鉴定纯化蛋白,并用造血集落形成实验检测生物学活性。结果:经测序证实,获得的目的基因与GenBank公布的FL基因序列100%一致。构建的原核表达载体PQE30-rhFL在大肠杆菌M15中经1 mmol.L-1IPTG诱导后表达出相对分子质量为25000的蛋白,镍柱纯化后经抗组氨酸单克隆抗体进行Westren blotting,在相对分子质量为25000处可见特异性着色带。结论:构建了原核表达载体PQE30-rhFL,并成功诱导了rhFL蛋白的表达,通过镍凝胶亲和层析法获得纯度较高的rhFL蛋白。

男性非淋患者不同样本中UU DNA和CT DNA检测

目的为了解男性非淋患者不同标本类型中UUDNA和CTDNA检测的差异,以选择更合适标本。方法 FQ-PCR用于定量检测男性非淋患者前列腺液、尿道分泌物和精液标本中的UUDNA和CTDNA,其中1932例UUDNA和1910例CTDNA。结果前列腺液、分泌物和精液标本中的UUDNA阳性率分别为28.57%、27.19%和17.65%,载量(拷贝数的对数值计算出均值和标准差)分别为4.38±1.23、4.53±1.35和3.24±0.92(①②2χ=0.039,P=0.84;t=0.37,P=0.71;①③χ2=2.27,P=0.13;t=2.81,P=0.005;②③χ2=5.20,P=0.023;t=4.27,P=1.98E-5)。三种标本中CTDNA阳性率分别为3.92%、9.27%和11.25%,载量分别为5.01±1.83、3.47±0.98和4.72±1.85(①②χ2=1.72,P=0.19;①③2χ=2.17,P=0.14;②③χ2=0.35,P=0.56;t=2.47,P=0.013)。结论三类标本中UUDNA检测灵敏度前列腺液大于尿道分泌物、尿道分泌物大于精液,CTDNA检测灵敏度差异无统计学意义。建议检测男性泌尿生殖道CTDNA和UUDNA时应首选前列腺液,兼于尿道分泌物采样的方便和创伤性更小,尿道分泌物也适宜用作男性泌尿生殖道CTDNA和UUDNA检测样本。