野油菜黄单胞菌S—152遗传转移系统的建立及外源性内切葡聚糖酶基因在其体内的表达

通过细胞接合的方式将广宿主质粒pRK404、pKT230和RP4分别转入野油菜黄单胞菌S-152中，其转移频率均在10-4数量级上，从而建立起了S—152的转移系统．用同法将由载体质粒pRK404和白纹黄单胞菌XAI-1的CMC酶基因构成的重组质粒pND82转入到S－152中共得到了表达，使S—152（pND82）的胞内CMC酶酶活比出发菌株S-152提高了1倍．

无类囊体蓝藻Gloeobacter violaceus基于广宿主质粒的遗传转移系统

无类囊体蓝藻Gloeobacter violaceus的细胞有厚胶质鞘包裹并形成群体,难以进行遗传操作.用注射器反复吸打的方法将胶质鞘剥落,得到大量单个细胞,通过接合转移将外源广宿主质粒pKT210转入G.violaceus.用斑点杂交方法以及对质粒进行酶切图谱分析,均证实外源质粒pKT210确已导入G.violaceus并稳定复制,未发生结构上的变化.从G.violaceus提取的pKT210可转化mcr和mrr基因缺陷的大肠杆菌DH10B却不能转化mcr+mrr+菌株DH5α,表明G.vio-laceus中可能存在甲基化酶系统.