高效液相色谱法测定饲料中那西肽A

为建立高效液相色谱测定饲料中那西肽A的方法 ,根据饲料样品多样性的特点,采用乙二胺四乙酸二钠溶液和N,N-二甲基甲酰胺超声提取饲料中的那西肽A。采用C18色谱柱,0.02%磷酸溶液+乙腈(60∶40,V/V)为流动相,流速为1.0 mL/min,荧光检测器激发波长为327 nm,发射波长为521 nm。那西肽A在浓度0.02~10μg/mL时线性良好,线性相关系数为0.9999。当添加浓度为0.5~500 mg/kg时,平均回收率为81.6%~95.6%,相对标准偏差(RSD)为1.6%~9.2%。方法的检测限为0.2 mg/kg,定量限为0.5 mg/kg。该方法操作简便、结果准确、稳定性好,应用于实际样品检测,结果满意,表明该方法适用于饲料中那西肽A的测定。

那西肽对肉仔鸡生长性能及胴体品质的影响

本试验选用120羽1日龄健康Avian肉仔鸡,随机分成3个处理,每个处理4个重复,每个重复10羽,分别饲喂基础日粮(对照组),基础日粮+5mg/kg黄霉素(黄霉素组),基础日粮+2.5mg/kg那西肽(那西肽组),以探讨那西肽对肉仔鸡生长性能和胴体品质的影响。结果表明:(1)黄霉素组、那西肽组日增重比对照组分别提高了2.04%(P<0.05)、6.18%(P<0.05),料重比分别降低了7.73%(P<0.05)、10.82%(P<0.05)。(2)那西肽组比对照组的屠宰率提高了3.22%(P<0.05),全净膛率提高了4.19%(P<0.05),半净膛率提高了3.67%(P<0.05),胸肌率提高了5.68%(P>0.05),腿肌率提高了3.71%(P>0.05),腹脂率降低了18.40%(P<0.05)。黄霉素组与对照组胴体各项指标之间差异不显著(P>0.05)。试验结果表明,饲料中添加那西肽可以明显促进肉仔鸡的生长,改善肉仔鸡的胴体品质,而且那西肽的效果显著优于黄霉素。

那西肽脂质体的制备及其体外抗乙肝病毒的研究

目的 制备那西肽脂质体并了解其体外抗乙肝病毒作用。方法 以超声法和脱氧胆酸钠法制备那西肽脂质体,同时考察其包封率和粒径大小的影响因素。以HPLC测定那西肽含量,以透射电镜观察其形态,以激光散射法测定其粒径大小,以HepG2 2. 2. 15细胞模型检测那西肽脂质体对乙肝病毒HBsAg和HBeAg的抑制率。结果 采用氯仿甲醇混合液(2∶1,v/v)作溶剂的那西肽脂质体包封率高于二氧六环作溶剂的。随着那西肽与卵磷脂的重量比增大,脂质体包封率呈下降趋势。脱氧胆酸钠法中的脱氧胆酸钠可以调节脂质体粒径的大小,它与卵磷脂的重量比越大脂质体的粒径越小。添加保护剂的脂质体在-20℃放置2年后基本稳定。脂质体中那西肽质量浓度为1 25, 2 5和5 0μg·mL-1时,对HBsAg和HBeAg的抑制率分别达到(46 .9±2. 6)%, (55. 4±1 .2)%, (65±3)%和(15. 1±2 .3)%, (36 .2±1.7)%, (36 .8±2. 5)%。结论 超声法或脱氧胆酸钠法可以制备那西肽脂质体;那西肽脂质体对乙肝病毒HBsAg和HBeAg抑制效果优于游离那西肽。

那西肽对肉仔鸡维生素营养和生产性能的影响

选用１日龄艾维茵健雏４６８只，公母混饲，测定那西欣添加剂对肉仔鸡生长、饲料转化率及维生素营养的作用效果。试验结果表明：①那西肽对０～６周龄肉仔鸡的生长有显著影响，平均日增重与对照组相比提高１１．４３％（Ｐ＜０．０５）。②那西肽可缓解因维生素缺乏而造成的体增重下降（Ｐ＜０．０５）。

紫外诱变和氨基酸抗性筛选选育那西肽高产菌株

目的筛选出那西肽高产菌株。方法以活跃链霉菌CB040517作为出发菌株,通过紫外-氯化锂诱变处理,并结合前体复合氨基酸抗性筛选,选育那西肽高产菌。结果通过致死率和正突变率的考察,确定紫外最佳诱变剂量为100s。在分离培养基上层加入氯化锂和底层加入复合氨基酸进行正突变株的定向筛选,选育得到那西肽高产菌株UV-19-A12,其摇瓶效价达904.00μg/mL,比出发菌株提高72.5%,经过五代斜面传代试验考察,该菌株遗传性状稳定。结论紫外诱变和氨基酸抗性筛选可以获得那西肽高产菌株。

响应面法优化那西肽发酵条件

目的优化活跃链霉菌NXT-NA10摇瓶发酵生产那西肽的发酵条件。方法首先用Plackett-Burman设计法筛选出影响发酵的显著因素,再用响应面法分析优化显著影响因素参数。结果 Plackett-Burman设计法筛选出4个显著影响因素为酵母粉、黄豆粉、NaCl和接种量,响应面法优化出它们的最佳数值分别为酵母粉0.31%、黄豆粉6.42%、NaCl 0.41%、接种量5.5%。结论在此优化条件下,摇瓶效价达到(1121.28±26)μg/mL,比优化前提高了10.95%。

那西肽预混剂质量分析

通过对那西肽预混剂检验与研究，对其质量进行分析，并对现有标准进行修订。依据现有标准，对那西肽预混剂进行常规检验，对标准进行了修订并确定质量控制关键点；根据文献检索和调研等情况，开展了含量均匀度、那西肽组分A、含量测定等3个方面的探索研究。建议取消标准中关于性状的规定；调整TpH值的规定限度范围为6．0～8．0；补充建立了那西肽组分A的测定方法，拟规定限度为不小于88．0％；以N,N-二甲基甲酰胺为溶剂，修订了那西肽预混剂含量测定方法。

常压室温等离子体(ARTP)诱变及高通量筛选那西肽高产菌株

采用新型常压室温等离子体(ARTP)诱变活跃链霉菌(Streptomyces actuosu),并应用抑菌圈和48孔板培养方法高通量筛选高产那西肽菌株。研究表明抑菌圈径的大小与48孔板效价之间以及48孔板效价与摇瓶效价之间均有较好的相关性,系数R分别达到0.534和0.896。通过多轮ARTP诱变及高通量筛选最终获得了3株相对效价提高50%以上的遗传性能稳定的突变株。ARTP诱变技术作为获得那西肽高产菌株的有效途径,与传统摇瓶发酵筛选相比,48孔板及抑菌圈法能显著提高那西肽高产菌株的筛选效率。

那西肽及其应用研究

那西肽是一种含硫多肽类抗生素,现对那西肽的理化性质、生物学功能、作用机制、应用的安全性及在禽畜和水产养殖上的应用研究等进行了综述。以期对那西肽的进一步研究与推广应用起一定的指导作用。

激光复合诱变选育那西肽高产菌及其代谢特性的研究

出发菌株经紫外照射诱变后,再采用激光复合诱变方式进行的筛选,并对其传代稳定性进行研究,以期进一步获得稳产高产那西肽产生菌突变株。结果表明紫外照射100 s得到的NXT-U19放瓶效价比出发菌株(546.17μg/mL)提高了44.22%,达到了787.71μg/mL。激光-紫外复合诱变后筛选出6株产量较高的菌株,其中以NXT-U19-J2效价最高,比原始菌株提高了65.74%,达到了905.22μg/mL。经传代培养分析,NXT-U19-J2诱变株的遗传稳定性较好,该结果表明,激光复合诱变是获得高产那西肽产生菌的有效途径。

那西肽对肉仔鸡生长性能、胴体组成及相关血清生化指标的影响

本试验选用 30 0羽 1日龄Avian肉仔鸡 ,随机分成 5组 ,每组 4个重复 ,每个重复 15羽。A0 为空白对照组 ,喂基础日粮 ,A1～A4组分别在基础日粮中添加 5mg/kg黄霉素 ,1.2 5mg/kg,2 .5mg/kg ,5mg/kg那西肽 ,试验期 4 0d。结果表明 ,A1,A2 ,A3 和A4组平均日增重比A0 组分别提高了 2 .0 4 % (P <0 .0 1) ,4 .0 1% (P <0 .0 1) ,6 .0 5 % (P <0 .0 1)和 5 .0 5 % (P <0 .0 1) ,A2 ,A3 和A4组比A1组日增重分别提高了 2 .0 8% (P <0 .0 1) ,4 .0 6 % (P <0 .0 1)和 3.0 6 % ;料重比A1,A2 ,A3 和A4组比A0 组分别降低了 7.73% ((P <0 .0 1) ,7.2 2 % (P <0 .0 1) ,10 .82 % (P <0 .0 1)和 9.2 8% (P <0 .0 1) ,A3 和A4组比A1组分别降低了 3.35 % (P <0 .0 1)和 1.6 8% (P <0 .0 1)。结果还表明 ,那西肽对肝脏具有保护作用。

那西肽(Nosiheptide)对肉仔鸡免疫功能的影响

1日龄艾维茵肉仔鸡240只,随机分为4组,每组4个重复,每个重复15只。A0为空白对照组,喂基础日粮;A1喂基础日粮+1.25 m g/kg那西肽(N os iheptide);A2喂基础日粮+2.5 m g/kg那西肽;A3喂基础日粮+5 m g/kg那西肽。试验期42 d。试验结束后,测定各组胸腺、脾脏和腔上囊系数及外周血和脾脏淋巴细胞的转化率。试验结果表明,那西肽对肉仔鸡的免疫器官发育及T、B淋巴细胞转化有抑制作用,且抑制作用随剂量的增加而增加。

表面活性剂对活跃链霉菌产那西肽发酵的影响

目的研究Triton X-100、Ca Cl2、DMSO、山梨醇、SDS、Tween-80、CTAB等表面活性剂对活跃链霉菌发酵产那西肽的影响。方法采用单因素实验研究活跃链霉菌的基础代谢以及表面活性剂加入时间对那西肽效价的影响;采用响应面法对表面活性剂添加浓度进行优化。结果基础代谢研究表明,活跃链霉菌产那西肽合成相对滞后于菌体生长。多种表面活性剂均显著影响那西肽的生物合成,整体表现为低浓度促进、高浓度抑制。表面活性剂依其类型及加入时机的不同,对那西肽产量的影响表现出组间类型差异性及组内时间依赖性。结论 DMSO、Ca Cl2、Triton X-100在低浓度范围内对那西肽产量的促进效果最为显著;分别在24、24和48h以DMSO 0.808mg/m L、Ca Cl2 0.799mg/m L和Triton X-100 0.574mg/m L的浓度为最佳添加浓度,该条件下那西肽效价达到931.493μg/m L,比优化前提高了7.73%。

猪小肠组织中那西肽残留高效液相色谱检测方法的建立

那西肽（nosiheptide）是1961年由法国洛普克公司首次发现,是从阿根廷土壤中分离的一种放线菌株培养产生的含硫多肽类抗生素,能抑制革兰阳性菌的生长和小肠病毒抗原的分泌,

那西肽对仔猪肠道微生物及肠壁组织结构的影响

采用单因子试验设计,36头二元杂交(大白×长白)断奶仔猪随机分为4组,每组9头,每个重复3头,以研究饲料中添加5,10,20mg/kg的那西肽(低、中、高剂量)对仔猪肠道中大肠杆菌、双歧杆菌和产气荚膜梭菌的增殖及其肠壁组织结构的影响。结果表明:高剂量组能明显降低仔猪腹泻发生率,对仔猪具有促生长作用。饲粮中添加那西肽后,在仔猪空肠部分均有降低肠壁厚度、肠隐窝深度和增加肠绒毛高度的作用趋势,与对照组相比,差异均不显著。在仔猪回肠部分,高剂量那西肽组的肠壁厚度与对照组相比显著降低了24.31%(P<0.05);高剂量组的肠绒毛高度与对照组相比,差异显著(P<0.05);但对肠隐窝深度没有显著影响(P>0.05)。饲粮中添加那西肽后,在仔猪的空肠、回肠和结肠中均出现增加大肠杆菌数量、降低双歧杆菌和产气荚膜梭菌数量的趋势。随着那西肽添加剂量的增加,作用效果越显著。

活跃链霉菌合成那西肽的固体斜面培养条件优化

目的探索活跃链霉菌36#摇瓶发酵合成那西肽的固体斜面培养条件的最佳工艺。方法利用单因素与正交试验对固体斜面培养条件进行优化。结果得到合成那西肽的活跃链霉菌36#的固体斜面最优培养条件为：初始phi7．8，培养温度为37℃，培养时间为3d，冷藏时间为O一3周，那西肽产量可达936mg／L。与原工艺相比较，那西肽的产量增加了13．8％。结论通过活跃链霉菌固体斜面培养条件的优化，可以提高活跃链霉菌摇瓶发酵合成那西肽的产量。

24孔板培养活跃链霉菌合成那西肽条件的优化

目的优化24孔板培养活跃链霉菌XW产那西肽的发酵条件。方法采用单因素实验和响应面法对24孔板的发酵条件进行优化。结果得到活跃链霉菌XW 24孔板发酵产那西肽的最优发酵条件为:种子培养基装液量2.55 m L,发酵培养基装液量0.93m L,发酵时间121h。结论通过对发酵条件的优化,可以明显提高24孔板发酵产那西肽的效价达到882.25μg/m L,实验值与模型预测值较接近,吻合度较高,较初始效价675.63μg/m L提高了30.58%。研究结果表明24孔板发酵与摇瓶发酵之间有良好的相关性,相关系数R为0.883。

那西肽对生长肥育猪作用效果的研究

选择32头30 kg左右健康的二元杂交生长猪,随机分为4组,每组8头,个体饲喂,对照组只喂基础饲粮,3个试验组分别在基础饲粮中添加10,50 mg/kg那西肽和30 mg/kg盐霉素。试验中每天记录个体采食量和健康状况,每周称量个体体重。在猪体重达90 kg时屠宰,测定屠宰率、背膘厚、眼肌面积、肉色、pH值、滴水损失、嫩度及肌内脂肪。结果表明:那西肽显著地提高了生长肥育猪的采食量和日增重(P<0.05),但是,对饲料转化率的改善作用不明显;饲粮中分别添加10,50 mg/kg的那西肽对猪的胴体品质和猪肉品质没有不良影响。

紫外-微波复合诱变原生质体选育那西肽高产菌株

以UV-19为出发菌种,研究了紫外、微波以及紫外-微波复合对活跃链霉菌原生质体的诱变效应。结果表明复合诱变对该菌原生质体有明显的致死作用。通过紫外-微波复合诱变,筛选到一株优良菌株PUM-13,其摇瓶含量达到883.450μg/mL,较出发菌株提高了17.14%,5代后生产性能稳定。

那西肽对生长肥育猪的作用效果及其在产品中的残留

选择32头30kg左右健康的二元杂交生长猪, 随机分为4组, 每组8头, 个体饲喂, 4组均喂相同的基础饲粮, 但添加不同饲用抗生素,分别是低、高剂量那西肽(10mg/kg、50mg/kg)、盐霉素(30mg/kg) 和对照。猪体重达90kg时, 分别按0、3和7d停药后屠宰, 检测那西肽在样品各器官中的残留量。结果表明: 那西肽可显著提高生长肥育猪的采食量和日增重(P<0 05), 但是对料重比的改善作用不明显; 当检测灵敏度为0 01mg/kg时, 在低、高剂量那西肽组猪的心脏、肝脏、肾脏和背最长肌中, 均未检出那西肽。