邻苯二甲酸单丁酯致小鼠肝脏和肾脏组织的氧化损伤

为了探究邻苯二甲酸单丁酯(MBP)对小鼠肝脏和肾脏的氧化损伤,将42只BALB/c小鼠随机分为7组,每组6只,分别为25mg·kg-1、50mg·kg-1、100mg·kg-1、200mg·kg-1的4个MBP染毒组、1个100mg·kg-1的邻苯二甲酸二丁酯(DBP)染毒组、1个空白对照组、1个溶剂对照组。染毒期间对小鼠的体征进行观察;14d后取其肝脏和肾脏组织,制作小鼠肝脏和肾脏组织的切片,对肝脏和肾脏的组织学形态进行观察;制作组织匀浆液用于检测肝脏和肾脏组织细胞的ROS、GSH、MDA的含量,以了解MBP对肝脏和肾脏组织的氧化损伤作用。结果显示:各剂量组小鼠肝细胞和肾小管上皮细胞均出现不同程度的细胞核固缩、细胞水肿、空泡样变、脂肪滴增大融合等症状;ROS和MDA的含量与MBP的染毒剂量呈正相关,GSH的含量与MBP的染毒剂量呈负相关;相同剂量的DBP与MBP染毒组相比,MBP染毒组的ROS和MDA含量较高、GSH含量较低。表明,MBP的暴露与小鼠肝脏和肾脏组织的氧化损伤存在直接联系。

邻苯二甲酸单丁酯暴露对小鼠植入后胚胎发育的影响

目的研究植入前暴露邻苯二甲酸单丁酯(DBP)对孕早期胚胎植人和发育的影响。方法在孕1.5 d、2.5d、3.5d给孕鼠灌胃300 mg·kg^(-1)·d^(-1)的DBP,然后于7.5 d、8.5 d、9.5 d统计子宫植入点数、活胎数量、吸收胎数量和胚胎长度,并使用全胚免疫荧光染色的方法检测nestin蛋白的表达。结果 DBP暴露显著降低了胚胎长度(P<0.05);降低了妊娠率(P<0.05);也降低了植入点数和胚胎数,但差异不显著;但显著提高胚胎吸收率(P<0.05)。利用神经干细胞特征性标志物nestin检测DBP对神经系统发育的影响发现,DBP处理组胚胎头部荧光强度明显低于对照组。结论孕早期DBP暴露降低了胚胎妊娠率,延缓了胚胎的发育,并降低了头部神经细胞的分化能力。

邻苯二甲酸单己酯和邻苯二甲酸单丁酯联合染毒对小鼠睾丸间质细胞氧化应激的影响

目的探讨邻苯二甲酸单(2-乙基)己酯(mono 2-ethylhexyl phthalate,MEHP)和邻苯二甲酸单丁酯(monobutyl phthalate,MBP)联合染毒致体外培养的小鼠睾丸间质细胞(TM3)的氧化应激损伤。方法用浓度为0(对照组)、1、10、100、500、1000μmol·L^(-1)不同浓度梯度的MEHP和MBP作用于小鼠睾丸间质细胞48h后,以MTT法测定细胞活力,比色法测定细胞内超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量。结果 MEHP和MBP联合染毒对TM3细胞抑制率升高,增殖抑制存在交互作用,表现为协同作用;对细胞内的SOD水平和MDA水平的影响存在交互作用,使细胞内的SOD活性降低,呈现协同作用,使细胞内的MDA水平升高,呈现协同作用。荧光倒置电镜结果显示,高剂量染毒可见大部分细胞死亡,剩余细胞肿胀堆积、变暗,间隙更大。结论 MEHP和MBP联合染毒对小鼠睾丸间质细胞的增殖有抑制作用,并诱导小鼠睾丸间质细胞发生氧化应激反应,表现为脂质过氧化水平的增高,同时伴有抗氧化水平的降低。

邻苯二甲酸二丁酯与邻苯二甲酸单丁酯对睾丸间质细胞睾酮水平和胰岛素样因子3表达的影响

目的观察邻苯二甲酸二丁酯（dibutyl phthalate，DBP）、邻苯二甲酸单丁酯（monobutyl phthalate，MBP）对小鼠睾丸间质瘤细胞（MA-10）中胰岛素样因子3（insulin．1ikefactor3，INSL3）mRNA及蛋白的表达量和细胞睾酮分泌水平的影响。方法以小鼠睾丸间质瘤细胞（MA-10）为模型，经过DBP、MBP直接染毒后，采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定细胞培养基上清中睾酮的含量，采用荧光定量PCR测定细胞中INSL3mRNA的表达，采用蛋白免疫印迹法（western blot）测定INSL3蛋白的表达水平。结果与对照组比较，MA-10细胞睾酮合成量在低染毒剂量（10^-9～10^-6mol／L）时均表现出刺激效应，睾酮含量增加；在高染毒剂量（10^-3mol／L）时表现抑制效应，随着染毒时间的延长，睾酮水平逐渐降低。荧光定量PCR以及Western blot测定结果显示，DBP在10^-6、10^4mol／L染毒时，INSL3mRNA及蛋白表达水平较对照组降低，差异有统计学意义（P〈0．05）；随着MBP染毒剂量的增加，INSL3mRNA及蛋白表达水平呈现下降趋势，但MBP在10^-7mol／L时，与对照组相比，对MA-10细胞中INSL3蛋白表达表现出刺激作用。结论DBP、MBP染毒对MA-10细胞睾酮分泌表现出高剂量抑制、低剂量刺激的双向效应；DBP、MBP染毒可抑制MA-10细胞中INSL3mRNA和蛋白的表达。

邻苯二甲酸单丁酯对雄性小鼠睾丸的氧化损伤

目的探讨邻苯二甲酸单丁酯(mono-n-butyl phthalate,MBP)对小鼠睾丸氧化损伤的影响。方法 36只性成熟的雄性Balb/c小鼠随机分为4个MBP染毒组(25、50、100、200 mg/kg)和1个空白对照组、1个溶剂对照组(食用油),每组6只,灌胃14 d后观察睾丸的组织形态学损伤;检测睾丸组织的活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)的含量。结果 100和200 mg/kg组小鼠睾丸组织不同发育时期生殖细胞的数量减少;随着MBP染毒剂量的升高,睾丸组织ROS含量与MDA含量逐渐上升,GSH含量逐渐降低;100和200 mg/kg组上述指标与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论较高剂量的MBP会引起小鼠睾丸细胞的氧化损伤。

邻苯二甲酸单丁酯对小鼠睾丸间质瘤细胞迁移和侵袭能力的影响

目的探讨邻苯二甲酸单丁酯（MBP）对小鼠睾丸间质瘤细胞（MLTC-1）上皮间质转化（EMT）相关蛋白表达及细胞迁移、侵袭能力的影响。方法选择0、10-7、10-6、10-5、10-4、10-3 mol/L浓度的MBP分别处理MLTC-1细胞24 h和48 h后，收集处理后细胞。采用噻唑蓝（MTT）实验检测细胞活性，Western blot检测EMT相关蛋白波形蛋白、E-钙黏着蛋白、N-钙黏着蛋白和Snail的表达，划痕实验及Transwell细胞侵袭实验探讨MBP对MLTC-1细胞迁移和侵袭能力的影响。结果使用10-7、10-6 mol/L的MBP对MLTC-1细胞染毒时，波形蛋白、转录因子Snail、N-钙黏着蛋白表达上调[相对表达量分别为（1.56±0.07）比（1.78±0.08）、（1.22±0.06）比（1.44±0.07）、（1.33±0.11）比（2.19±0.06），P值均〈0.001]；E-钙黏着蛋白的相对表达量分别为（0.66±0.09）比（0.47±0.06），表达下调（P〈0.001）。划痕实验显示，分别以0、10-7、10-6 mol/L MBP染毒24 h后，细胞划痕愈合能力明显提高，愈合率分别为（6.64±2.07）%、（15.61±2.83）%、（39.91±0.33）%，P值均〈0.001。Transwell实验显示，使用0、10-7、10-6 mol/L浓度的MBP染毒后，各组穿过Matrigel胶的细胞数与对照组相比明显增加，24 h侵袭细胞数（32.67±3.51）、（57.67±2.52）、（82.67±6.51）个/每3个视野，P值均〈0.001。结论MBP影响了MLTC-1细胞EMT相关蛋白的表达，促进了MLTC-1细胞的迁移和侵袭。

邻苯二甲酸单丁酯和邻苯二甲酸单乙基己酯联合染毒对小鼠睾丸间质细胞自噬水平的交互作用

目的探讨邻苯二甲酸单丁酯(MBP)和邻苯二甲酸单乙基己酯(MEHP)染毒对小鼠睾丸间质细胞的自噬的影响以及MBP+MEHP联合染毒的交互作用分析。方法将处于对数生长期的TM-3细胞分别暴露于0(对照)和400μmol/L的MBP、MEHP及400μmol/L MBP+400μmol/L MEHP溶液中;染毒24、36、48 h后,采取CCK-8法检测细胞的存活率;染毒24 h后,采用单丹黄酰尸胺(MDC)免疫荧光法检测细胞自噬囊泡的荧光信号强度;染毒24 h后,采用Western blot法检测自噬标志蛋白LC3和p62的表达水平。结果与对照组相比,MBP和(或)MEHP染毒TM-3细胞的存活率均下降,自噬囊泡的荧光信号强度均增高,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达水平升高,p62蛋白表达水平均降低,差异均有统计学意义(P<0.01)。MBP和MEHP联合染毒对TM-3细胞的存活率、自噬囊泡的荧光信号强度、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和p62蛋白表达水平具有交互作用,具体均表现为拮抗作用(P<0.01)。结论MBP和(或)MEHP体外染毒均可诱导TM-3细胞自噬水平升高,MBP和MEHP联合染毒交互作用表现为拮抗作用。

邻苯二甲酸丁基苄酯在鼠肝匀浆中的生物降解及代谢产物鉴定

应用HPLC及HPLC MS方法,研究了邻苯二甲酸丁基苄酯在小鼠肝匀浆中的代谢动力学、酶动力学特征并进行了代谢产物鉴定.测得邻苯二甲酸丁基苄酯在雄性小鼠肝匀浆中的t1 2为73 72min,Km为(73 52±24 11)μmol·L-1,Vmax为(2 85±0 62)μmol·g-1·min-1);在小鼠雌性肝匀浆中t1 2为144 37min,Km为(275 02±64 97)μmol·L-1,Vmax为(6 18±2 30)μmol·g-1·min-1).实验鉴定出邻苯二甲酸丁基苄酯在肝脏中的代谢产物为邻苯二甲酸单丁酯及邻苯二甲酸甲丁酯.实验结果表明,邻苯二甲酸丁基苄酯在肝脏中代谢有明显的性别差异.

邻苯二甲酸二丁酯暴露对不孕女性助孕结局及小鼠早期胚胎发育影响的研究

目的探讨体内邻苯二甲酸二丁酯(di-n-butyl phthalate,DBP)暴露水平对不孕患者早期助孕结局的影响及其对小鼠早期胚胎发育的影响。方法本研究选取2019年2月至10月期间在河南省人民医院生殖中心就诊的因输卵管因素行体外受精-胚胎移植(in vitro fertilization-embryo transfer,IVF-ET)治疗的患者,根据病历号尾号抽取单号的112例不孕患者为研究对象,应用高效液相色谱串联质谱检测尿液中DBP代谢产物邻苯二甲酸单丁酯(mono-n-butyl phthalate,MBP)的浓度,采用多元回归模型分析尿液中MBP水平与不孕患者受精率、优质胚胎率及囊胚形成率等早期助孕结局的关系。同时将40只3周龄清洁级ICR雌性小鼠简单随机抽样分为对照(玉米油)组和低、中、高剂量DBP染毒组(300 mg/kg、600 mg/kg、1200 mg/kg)四组,每组10只。将各组雌鼠促排卵与非染毒雄鼠合笼后,取受精卵,比较各组间胚胎卵裂率、囊胚形成率和着床位点的差异。结果在控制了混杂因素后,患者尿液中MBP浓度与受精率、优质胚胎数、囊胚形成数及囊胚形成率呈负相关(P=0.01、P=0.04、P=0.03、P=0.05)。DBP低剂量组、中剂量组、高剂量组的小鼠受精后胚胎卵裂率[58.38%(115/197)、43.42%(99/228)、36.60%(71/194)]、囊胚形成率[54.78%(63/115)、44.44%(44/99)、39.44%(28/71)]及胚胎着床位点数(12.20±3.03、11.80±2.68、11.60±2.41)明显低于对照组小鼠[87.12%(142/163),P<0.001;86.62%(123/142),P<0.001;16.80±0.84,P<0.001)。DBP低剂量组卵裂率高于中剂量组、高剂量组,差异有统计学意义(P=0.002,P<0.001)。DBP低剂量组囊胚形成率高于DBP高剂量组,差异有统计学意义(P=0.042)。DBP染毒的三组小鼠之间胚胎着床位点数差异无统计学意义(P>0.05)。结论DBP暴露与不孕女性临床结局存在相关性,且DBP暴露对小鼠早期胚胎发育产生毒性损伤。

四种蔬菜对DBP和DEHP及其代谢物的吸收累积研究

以不同浓度DBP和DEHP处理的土壤对青菜、菠菜、莴苣和萝卜进行盆栽实验,采用加速溶剂萃取,Qu ECh ERS方法和硅烷衍生化对土壤和蔬菜样品进行前处理,结合气相色谱-串联质谱(GC-MS/MS)检测技术,分析了4种蔬菜中DBP、DEHP及其单酯代谢物MBP、MEHP从土壤中吸收的残留量分布规律和富集系数。结果表明,生长在高、低两个不同浓度DBP和DEHP土壤中的4种蔬菜都有DBP、DEHP及其代谢物MBP和MEHP的检出。萝卜中DBP和DEHP残留总量(Σ2PAEs)及其代谢物残留总量均明显高于其他3种蔬菜。4种蔬菜对土壤中的DEHP的生物富集因子BCF值都大于1,有明显的富集效应;而对于土壤中DBP有富集效应的则只有萝卜,其他3种蔬菜对DBP的BCF值都远小于1。相关研究结果表明,土壤中的DBP、DEHP能被蔬菜产品吸收富集,并且在体内代谢出毒性比母体更高的单酯产物。

MBP、MEHP诱导小鼠睾丸间质细胞自噬过程中PTEN的相关研究

[目的]目前对于邻苯二甲酸酯的研究多集中于其原型,但有学者认为,邻苯二甲酸二丁酯和邻苯二甲酸二乙基己基酯的毒性作用可能是其在体内的代谢产物邻苯二甲酸单丁酯(MBP)和邻苯二甲酸单乙基己酯(MEHP)所致。本研究拟探讨MBP和MEHP对小鼠睾丸间质细胞(TM-3)自噬的影响以及与第10号染色体缺失的同源性磷酸酶-张力蛋白(PTEN)的相关研究。[方法]体外培养TM-3并取其对数生长期,预实验设置毒物浓度梯度为0(对照组)、50、100、200、400、800μmol/L,染毒24 h后,利用改良寇氏法计算MBP、MEHP的半数致死浓度(IC50)后,确定实验染毒浓度为0(对照组)、200、400、800μmol/L。分别采取CCK-8法检测不同毒物剂量和不同染毒时间对细胞存活率的影响;透射电镜观察400μmol/L的MBP、MEHP诱导24 h后具有双层膜状结构的自噬小体;单丹黄酰尸胺(MDC)免疫荧光法检测细胞自噬囊泡的荧光信号强度;采用Western blot技术检测自噬标志蛋白LC3、p62和自噬调节相关蛋白PTEN的表达水平。[结果] CCK-8结果显示:与对照组相比,随着MBP、MEHP染毒剂量增高,细胞存活率降低(P<0.05)。透射电镜结果显示:400μmol/L MBP、MEHP染毒24 h后细胞内可见具有双层膜状结构的自噬小体。MDC法检测结果显示:与对照组相比,200μmol/L MBP、MEHP染毒组荧光信号强度差异无统计学意义(P>0.05);400、800μmol/L MBP染毒组荧光信号强度分别增加了9.0、16.8倍;400、800μmol/L MEHP染毒组荧光信号强度增加了16.3、26.4倍,差异均有统计学意义(P<0.01)。Western blot结果显示:200μmol MBP、MEHP染毒组LC3II/LC3I、PTEN表达水平与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05);400、800μmol/L MBP染毒组LC3II/LC3I蛋白表达水平分别增加了7.5、13.6倍,PTEN表达水平增加了4.8、15.4倍;400、800μmol/L MEHP染毒组LC3II/LC3I蛋白表达水平增加了4.5、9.8倍,PTEN表达水平增加了5.7、14.4倍(P<0.05);200μmol/L MBP染毒组p62表达水平与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05),400、800μmol/LMBP染毒组p62蛋白表达水平分别降低了43%、72%;200、400、800μmol/L MEHP染毒组p62蛋白表达水平也分别降低了55%、80%、88%(P<0.01)。[结论]一定剂量的MBP、MEHP可提高TM-3细胞自噬水平,并且PTEN表达水平与细胞自噬水平呈正相关趋势。