基于非靶向代谢组学研究邻苯二甲酸二丁酯对菜心代谢产物组成的影响

为研究邻苯二甲酸二丁酯(di-n-butyl phthalate,DBP)胁迫对菜心代谢产物组成的影响,本文基于非靶向代谢组学,通过主成分分析、偏最小二乘判别分析等多元统计分析方法,对DBP胁迫下菜心不同组织代谢产物的差异及其关键通路进行研究。结果发现:不同DBP浓度胁迫下菜心不同组织存在明显差异的代谢产物有105种,主要分布在36条代谢途径中。P<0.05的代谢途径有3条,即色氨酸代谢(Tryptophan metabolism)、苯丙氨酸代谢(Phenylalanine metabolism)和丁酸代谢(Butanoate metabolism)。研究表明,基于非靶向代谢组学可直观反映DBP对菜心代谢产物组成的影响,为后续开发农作物关键通路上的靶向化学调控剂提供科学依据。

尿液中5种邻苯二甲酸酯代谢产物的高效液相色谱-串联质谱测定法

目的建立尿液中5种邻苯二甲酸酯代谢产物的固相萃取-高分辨质谱测定法。方法尿样经β-葡萄糖苷酸酶水解后,以甲酸+水和甲酸+乙腈为流动相进行梯度洗脱,采用Oasis MAX固相萃取柱净化,Hypersil GOLD C18柱分离,再使用超高压液相色谱-高分辨率质谱仪进行定性和定量分析。结果在1~500μg/L的线性范围内,5种邻苯二甲酸酯代谢产物的回归方程的线性关系良好,r≥0.999 6。该方法对5种邻苯二甲酸酯代谢产物的检出限分别为0.03~0.39μg/L,定量下限分别为0.10~1.17μg/L;平均回收率为71.1%~104.3%,RSD为3.78%~9.64%。结论该方法的准确度和精密度均较好,回收率高,检出限较低,可用于人体尿液中5种邻苯二甲酸酯代谢产物的同时检测。

孕妇尿中五种邻苯二甲酸酯代谢产物的液-液萃取反相高效液相色谱测定法

目的建立孕妇尿液中的邻苯二甲酸酯(PAEs)代谢产物的反相高效液相色谱(HPLC)测定方法。方法萃取剂正己烷用量为10 ml,萃取3次。采用GP-Phenyl 120A型色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈(0.2%乙酸)-水(0.2%乙酸)=45∶55(V/V),检测波长为228 nm,流量为1.0 ml/min。采用液-液萃取反相高效液相色谱法对孕妇尿液中五种PAEs代谢产物[邻苯二甲酸单甲酯(MMP)、邻苯二甲酸单乙酯(MEP)、邻苯二甲酸单丁酯(MBP)、邻苯二甲酸单丁苄酯(MBzP)、邻苯二甲酸-单-乙基己基酯(MEHP)]进行测定。结果在50～10 000μg/L的线性范围内,所得MMP、MEP、MBP、MBzP、MEHP的回归方程均呈较好的线性关系,相关系数≥0.99,检出限分别为4.17、4.31、12.74、10.66、13.12μg/L,平均回收率在80.99%～90.74%之间,RSD在1.580%～4.999%之间。结论该方法操作简便、回收率高、重现性好、检出限低,适用于尿液中5种邻苯二甲酸单酯的同时测定。

HPLC/MS^n法鉴定环境激素邻苯二甲酸丁基苄酯在小鼠尿中的代谢产物

应用HPLC-MSn方法,研究了邻苯二甲酸丁基苄酯在小鼠尿液中的代谢产物,并对尿中推测的代谢物和标准品分别进行HPLC-UV和二级全扫描质谱(MS2)分析,结果在尿中发现了6个代谢产物,分别为邻苯二甲酸、马脲酸、邻苯二甲酸单丁酯、邻苯二甲酸苄酯、邻苯二甲酸单丁酯葡萄糖醛酸结合物及邻苯二甲酸苄酯葡萄糖醛酸结合物.推断环境激素邻苯二甲酸丁基苄酯在小鼠体内的代谢途径为原形首先水解生成邻苯二甲酸单丁酯、邻苯二甲酸苄酯、邻苯二甲酸,部分邻苯二甲酸发生脱羧反应生成苯甲酸,苯甲酸再与内源性物质甘氨酸结合成马脲酸,邻苯二甲酸单丁酯、邻苯二甲酸苄酯和内源性β-D-葡萄糖醛酸结合,生成水溶性较大的邻苯二甲酸单丁酯葡萄糖醛酸结合物和邻苯二甲酸苄酯葡萄糖醛酸结合物.

人体尿液中邻苯二甲酸酯代谢产物的HPLC—MS／MS检测技术研究

本文建立了同时测定人体尿液中，邻苯二甲酸单甲酯（MMP）、邻苯二甲酸单（2-乙基己基）酯（MEHP）、邻苯二甲酸单（2乙基-5-羧基戊基）酯（MECPP）和邻笨二甲酸单（2-羧基甲基己基）酯（MOMHP）等9种常见邻苯二甲酸酯代谢产物的高效液相色谱一质谱／质谱（HPLC-MS／MS）检测方法。样品加入β-葡萄苷酸酶，经37℃ 2h水浴酶解后，加入2％乙酸酸化后，固相萃取柱净化，收集1mL甲醇洗脱液，过0．45μm滤膜，HPLC--MS／MS检测。方法采用内标法定量，9种邻苯二甲酸酯代谢物的定量限为0.5～4．5μg／L，在10μg／L、50μg／L和1OOpg／L三个添加水平下平均回收率达77％～122％，相对标准偏差（RSD，n=6）均小于10．1％。该方法操作简单，准确可靠，灵敏度高，实用性强。

哈尔滨市小学生尿液中3种邻苯二甲酸酯代谢产物含量分析

[目的]探讨哈尔滨市小学生邻苯二甲酸酯类(PAEs)的暴露水平及其影响因素。[方法]选取哈尔滨市某小学一年级和五年级学生,按照随机抽样原则,各抽取100名小学生,收集每名小学生的尿液样品并进行问卷调查,问卷内容包括一般情况、生活习惯及生长发育情况等信息。采用正己烷萃取气相色谱-质谱法测定小学生尿液中的3种PAEs代谢物[邻苯二甲酸单乙酯(MEP)、邻苯二甲酸单丁酯(MBP)、邻苯二甲酸单(2-乙基己基)酯(MEHP)]的暴露水平。[结果]回收并匹配尿液样本和有效调查问卷共168份。尿液样本中MEP、MBP、MEHP的检出率分别为20.83%、13.69%和95.24%。五年级学生MBP检出率(7.79%)低于一年级(18.68%),差异具有统计学意义(P=0.045)。使用塑料材质杯子的小学生MBP检出率为23.81%,高于使用其他材质杯子的小学生(11.11%,P=0.003)。家庭每天打扫房间的小学生尿液中MEP检出率(12.96%)低于家庭两天或以上打扫1次房间的小学生(38.33%)(P=0.000)。此外,每周在外吃饭≥3次的小学生尿液中MEP检出率(31.48%)高于每周在外吃饭<3次的小学生(P=0.026)。多因素logistic回归分析发现,每周在外吃饭次数多是MEP暴露的危险因素(OR=2.663,95%CI:1.587~4.469),打扫频率高是MEP暴露的保护因素(OR=0.314,95%CI:0.133~0.741);使用塑料材质杯子是MBP和MEHP暴露的危险因素(OR=15.873,95%CI:4.902~52.632;OR=5.682,95%CI:1.277~25.641)。[结论]儿童可通过多种途径暴露于PAEs,家庭的不同生活方式和习惯对儿童暴露PAEs有一定影响。

成人尿邻苯二甲酸酯代谢物与高血压的相关性分析

目的分析成人尿邻苯二甲酸盐代谢物与高血压的相关性。方法从2003-2012年美国国家健康和营养检查调查(NHANES)中提取包括八种尿液邻苯二甲酸酯代谢物的水平,以及邻苯二甲酸2-乙基已酯代谢产物(ΣDEHP)的汇总。根据2017年美国心脏病学会/美国心脏协会指南,高血压被定义为收缩压≥130mmHg或舒张压≥80mmHg。在控制年龄、性别、种族/民族、教育水平、尿肌酐、体质量指数和糖尿病后,通过二元逻辑回归模型估计邻苯二甲酸酯代谢物与高血压的比值比(OR)。进行受试者操作特征(ROC)曲线分析,以检验ΣDEHP对高血压的预测。结果ΣDEHP高的参与者有更高的高血压患病率。二元Logistic逻辑回归显示,ΣDEHP水平与高血压存在相关性(P<0.05)。ROC分析显示,ΣDEHP可以预测整个人群以及男性和女性人群的高血压。结论ΣDEHP与成人高血压患病率密切相关。

孕妇尿液中五种邻苯二甲酸酯代谢产物的固相萃取-高效液相串联质谱测定法

目的建立人体尿液中5种邻苯二甲酸酯代谢产物的固相萃取-高效液相串联质谱测定法。方法尿液中5种邻苯二甲酸酯代谢产物经β-葡萄糖苷酸酶水解后，采用NEXUS固相萃取柱富集，乙腈-乙酸乙酯（体积比1：2）洗脱，苯基柱分离，在正电离模式下利用质谱的多反应监测模式进行定性和定量分析。结果该方法在0．3-800μg／L范围内线性关系良好，标准曲线回归方程相关系数均〉0．99；孕妇尿中邻苯二甲酸单甲酯（MMP）、邻苯二甲酸单乙酯（MEP）、邻苯二甲酸单丁酯（MBP）、邻苯二甲酸单丁苄酯（MBzP）、邻苯二甲酸单（2-乙基己基）酯（MEHP）的最低检出限分别为1．16、1．00、0．53、0．14、0．22μg／L，加标回收率为95．36％-98．13％，相对标准偏差（RSO）为0．36％～3．75％。结论该方法精密度和重现性良好，回收率高，检出限较低，可用于人体尿液中多种邻苯二甲酸酯代谢产物的同时检测。

固相萃取-高效液相色谱法测定人体尿液中邻苯二甲酸酯及其代谢物

建立了同时测定人体尿液中邻苯二甲酸酯及其代谢物的分析方法。对洗脱剂种类、洗脱体积、洗脱流速等影响因素进行考察,确定了最佳洗脱剂及洗脱体积为2 mL乙腈、2 mL乙酸乙酯和1 mL乙醚-正己烷(1∶19,V/V),洗脱流速1 mL/min。在最优化的固相萃取-液相色谱条件下测定5种邻苯二甲酸酯及其5种相应的单酯代谢物,线性范围为20～10000μg/L,相关系数均大于0.99;检出限为3.8～7.0μg/L;加标回收率为72.2%～102.3%;相对标准偏差均小于8%。利用本方法对5名育龄女性的尿液进行分析,除了邻苯二甲酸二甲酯和邻苯二甲酸二乙酯外,其余8种物质均在尿液中检出。

超高效液相色谱-三重四极杆质谱法测定人尿中9种邻苯二甲酸酯代谢物

建立了人尿中9种邻苯二甲酸酯(PAE)代谢物的超高效液相色谱-三重四极杆质谱(UPLC-MS/MS)测定方法。2 mL尿液样本酶解2 h后,经强阴离子固相萃取净化处理;选用Waters ACQUITY UPLC BEH Phenyl色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm),以0.1%(体积分数)乙酸乙腈和0.1%(体积分数)乙酸水溶液为流动相进行梯度洗脱;在负离子电喷雾多反应监测模式(MRM)下测定9种PAE代谢物含量。8种PAE代谢物在0.39~200μg/L范围内、1种PAE代谢物在1.17~600μg/L范围内线性关系良好,相关系数均大于0.995。方法检出限为0.06~0.85μg/L,定量限为0.20~2.80μg/L。3个加标水平的加标回收率为84.1%~122%,精密度为4.5%~14.3%;日内精密度不高于9.3%,日间精密度不高于10.1%;基质效应和稳定性符合分析要求。应用该方法测定50份人尿液样本,邻苯二甲酸单环已酯(MCHP)和邻苯二甲酸单苄酯(MBZP)的检出率分别为0和44.0%,其余7种PAE代谢物的检出率为100%。该方法操作简单、定量准确、稳定性好,适用于人尿中9种PAE代谢物的定量分析。

邻苯二甲酸丁基苄酯对小鼠睾丸能量代谢相关酶的影响

为了从生殖细胞能量代谢角度探讨邻苯二甲酸丁基苄酯(BBP)对雄性小鼠生殖损伤的机制,以昆明系雄性小白鼠为实验对象,研究了BBP对小鼠睾丸组织能量代谢相关酶的影响.实验设0、125、250、500、1000mg·kg-1(质量分数)5组浓度梯度,连续灌胃染毒30d后,采用分光光度法检测小鼠睾丸组织匀浆中乳酸脱氢酶(LDH)、琥珀酸脱氢酶(SDH)、Ca-Mg-ATPase酶的活性以及睾丸脏器系数.结果发现,1)与对照组相比,高浓度染毒组(500、1000mg·kg-1)LDH、SDH和Ca-Mg-ATPase活性均极显著降低(p<0.01);而低浓度染毒组(125mg·kg-1)3种酶活性均无显著变化(p>0.05);中浓度染毒组(250mg·kg-1)LDH没有显著变化(p>0.05),而SDH、Ca-Mg-ATPase均显著降低(p<0.05,p<0.01).2)染毒30d后,各染毒组睾丸脏器系数略有下降,但与对照组相比,差异均未达到显著水平(p>0.05).以上结果表明,较高水平的BBP不仅可以干扰睾丸组织有氧代谢及无氧代谢的产能过程,还可以干扰生殖细胞对能量的利用,提示能量代谢的障碍可能是BBP对雄性生殖细胞产生损伤的原因之一.

高效液相色谱-串联质谱法同时测定人尿液中7种邻苯二甲酸酯代谢物

建立了同时检测人尿液中7种邻苯二甲酸酯代谢物的高效液相色谱-串联三重四极杆质谱法。尿液经酶水解后,采用萃取柱净化,以2%（v/v）甲酸甲醇溶液为洗脱剂,经苯基柱分离,以0.1%（v/v）乙酸水溶液和0.1%（v/v）乙酸乙腈溶液为流动相进行梯度洗脱,采用电喷雾离子源负离子模式和多反应监测模式采集信号,用同位素内标法进行定量分析。尿液中7种邻苯二甲酸酯代谢物在0.2-200.0μg/L范围内定量离子的相对峰面积比值与质量浓度均呈良好线性关系（r≥0.999 76）;检出限（LOD）为13.43-80.21 ng/L,定量限为44.77-267.37 ng/L;3个水平的加标回收率为88.8%-108.9%,日内和日间精密度均不大于17.05%。该方法可同时准确、灵敏、简便地测定人尿液中7种邻苯二甲酸酯代谢物的暴露水平。

环境激素邻苯二甲酸丁基苄酯在动物脏器中的代谢

应用HPLC及HPLC-MSn方法,进行了环境激素邻苯二甲酸丁基苄酯在动物脏器中的代谢实验.实验结果表明:邻苯二甲酸丁基苄酯在模拟体内酸碱溶液、人工胃液、人工肠液的条件下不代谢;在动物胃和肺匀浆内虽然降解,但无代谢产物产生;在动物血清、肠道被代谢成2个产物,分别为邻苯二甲酸单丁酯及邻苯二甲酸甲丁酯,与在肝脏中的代谢产物完全相同;血清、小肠亦是邻苯二甲酸丁基苄酯主要代谢器官,并且小肠是邻苯二甲酸丁基苄酯经口染毒途径的第一代谢转化场所.

长期暴露的邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯在雌性大鼠体内的代谢及对肝脏的影响

目的:研究邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP)长期暴露后,雌性大鼠体内的代谢情况及对肝脏的影响。方法:将Wistar雌性大鼠64只按体质量随机分为4组,分别为对照(玉米油)组和150、300、600 mg/mL DEHP染毒组,每组16只。采用灌胃方式进行染毒,每天灌胃1次,每次按2.5μL/g给予,连续灌胃6个月。期间观察大鼠一般生长状况,分别在染毒后3个月和6个月两个时间点采集大鼠尿液。6个月后处死各组大鼠,摘取大鼠的肝、脾和肾称取质量,计算脏体比值;并制备肝组织切片,采用HE染色法观察肝组织形态变化。对采集的2个时间点大鼠尿液,采用高效液相色谱的方法检测尿中DEHP及其代谢物邻苯二甲酸单(乙基己基)酯(MEHP)的含量。结果:与对照组相比,各剂量染毒组大鼠一般生长情况无明显差异,但肝脏的脏体比值增加,HE染色显示300和600 mg/mL DEHP染毒组大鼠肝脏组织轻微病理改变。与对照组相比,3个月时,300和600 mg/mL DEHP组随着染毒剂量的增加,大鼠尿液中DEHP和MEHP含量均明显增加,差异均有统计学意义(P均<0.05)。6个月时,600 mg/mL DEHP染毒组大鼠尿液中DEHP和MEHP含量高于其他3组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:雌性大鼠长期暴露DEHP,体内DEHP和MEHP的残留和蓄积会增加,超过正常的代谢能力,可能会对肝脏造成一定程度的损伤。

邻苯二甲酸二乙基己酯体内代谢和毒性机制研究进展

塑化剂被广泛用于各种塑料制品当中,其中以邻苯二甲酸二乙基己酯(DEHP)最为典型。随着食品中添加塑化剂的新闻不断被曝光,塑化剂对人体健康的危害逐渐引起大众关注。塑化剂及其体内代谢物在体内的蓄积可导致多个器官的损伤。塑化剂生殖器官蓄积可造成生殖系统明显的损伤,在肝脏累积可导致氧化应激而引发肝细胞凋亡,同时塑化剂又能作为佐剂影响免疫系统。该文将就DEHP的生殖毒性、肝脏毒性和免疫毒性及其有关机制进行了系统阐述。

东北地区青年人群尿液中邻苯二甲酸酯代谢物的残留和健康风险评价

为了了解东北地区青年人群体内邻苯二甲酸酯(PAEs)的暴露水平,在黑龙江、吉林和辽宁省共采集了25个青年人群尿液样品,采用高效液相色谱—质谱联用仪(HPLC-MS/MS)分析了尿液样品中10种PAEs代谢物的浓度水平。结果表明,东北地区青年人群尿液中PAEs代谢物的残留非常普遍,黑龙江、吉林和辽宁省青年人群尿液中PAEs代谢物的总浓度分别为114、495和422ng·m L-1。不同省份青年人群尿液中PAEs代谢物的组成特征不同,mi BP、m BP和DEHP分别为黑龙江、吉林和辽宁省青年人群尿液中浓度比例最大的代谢物。东北地区青年人群体内单个PAE的暴露量均小于容许参考暴露剂量,但是,吉林和辽宁省部分青年人群体内PAEs的总暴露危险指数超过了人体PAEs的累积风险阈值,可能存在健康风险。

邻苯二甲酸丁苄酯在肺匀浆中的体外代谢研究

了解邻苯二甲酸丁基苄酯 ( BBP)在肺匀浆中是否被代谢以及被代谢的情况 ,为更深入的肺脏毒性研究提供参考。于肺匀浆液中加入一定量 BBP后 ,在 0 min、10 min、2 0 min、40 min、60 min、80 min不同的温孵时间用乙酸乙酯灭活萃取剩余 BBP,处理后用高效液相色谱测定 BBP含量 ,再通过标准曲线计算出测定的 BBP含量 ,得出BBP在肺中被降解的量 ,计算得到不同时间 BBP在肺匀浆液中的降解百分率。研究结果表明 ,BBP在肺匀浆液中的线性范围为 7.2～ 179μmol/ m L,平均萃取回收率为 ( 97.11± 0 .98) %。 BBP在肺匀浆液中被降解 ,与时间呈一定线性关系 ;代谢上有雌雄差异 ,雌性在 40 min以前降解比雄性快 ,在雌性肺匀浆中的降解半衰期为 93 .65 min,在雄性肺匀浆中的降解半衰期为 70 min,但是雄性在整个过程中降解较快 ;采用乙酸乙酯进行灭活萃取 ,在本实验条件下没有检测到代谢产物 ,说明代谢产物极性较大 ,没有被乙酸乙酯萃取出来。

邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯在青春期小鼠体内的代谢动力学研究

研究邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(di-(2-ethylhexyl)phthalate,DEHP)在青春期小鼠体内的代谢动力学,以300 mg/kg DEHP灌胃青春期小鼠,血清样品经固相萃取(solid phase extraction,SPE)提取和净化,气相色谱-质谱联用(gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS)法测定不同时间点的血药质量浓度,以3p97软件拟合其动力学参数。DEHP在青春期小鼠体内的主要药物代谢动力学参数:药峰质量浓度ρmax为(0.47 6±0.028)μg/m L,达峰时间Tpeak为(2.539±0.424)h,药-时曲线下面积AUC(0-t)为(32.209±11.220)h·μg/m L,分布半衰期t1/2α为(1.886±0.480)h,消除半衰期t1/2β为(36.473±8.324)h。本方法简便快捷,其灵敏度和准确度均可满足青春期小鼠体内DEHP代谢动力学研究。DEHP在青春期小鼠体内药物代谢动力学过程符合一级吸收二室开放模型,其分布较快,代谢较慢。

固相萃取-超高效液相色谱/串联质谱法检测人体血清中邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯代谢物

建立了固相萃取-超高效液相色谱/串联质谱法检测人体血清中邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP)代谢物。血清样品中加入乙酸钠溶液及内标13C4邻苯二甲酸单乙基己基酯(13C4MEHP)后,在37℃条件下用β-葡萄糖醛苷酶酶解提取12h,提取液经MAX固相萃取小柱净化并浓缩到纯水中。以甲醇-5mmol/L乙酸铵溶液为流动相,经Waters UPLC?HSS T3色谱柱分离后,在电喷雾离子源负离子模式下,以多反应监测(MRM)方式进行扫描,内标法定量。DEHP代谢物在1.0~100.0μg/L范围内线性关系良好,检出限均为0.1μg/kg,回收率89.6%~103.2%。该方法灵敏度高,准确度好,可作为监测人群内暴露的重要技术支撑。

青菜对邻苯二甲酸酯类物质的积累和代谢初探

通过盆栽试验研究了邻苯二甲酸二异辛酯(DEHP)和邻苯二甲酸二正丁酯(DBP)在青菜(Brassica campestris ssp.chinensis Makino)生长过程中的积累变化规律。结果表明:青菜对土壤中的DBP和DEHP的生物富集系数(BCF)分别为0.017和0.136,无生物富集效应。在青菜的生长周期内,DEHP的检出量在生长的前10 d增长较快,其后检出量快速下降并一直保持在较低水平;DBP的检出量则是在整个生长周期内一直保持在很低的水平。生长成熟时,青菜中DEHP和DBP的检出量分别为621.41μg/kg和37.29μg/kg,青菜对DEHP的吸收积累能力远强于DBP。