HPLC-MS/MS检测含蛋白质辐照食品中的邻酪氨酸

应用液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)技术建立了含蛋白质辐照食品中邻酪氨酸的检测方法。样品经胰蛋白酶于37℃水解过夜,正己烷去脂,乙酸锌沉淀蛋白净化后,HPLC-MS/MS检测。方法的定量下限为0.1 mg/kg,邻酪氨酸在0.1、0.5、1.0 mg/kg加标水平的回收率为80%～97%,相对标准偏差(RSD,n=6)为6.3%～12.9%。在2.0、5.0、10 kGy 3个辐照剂量水平下,鸡肉、猪肉、牛肉、鱼肉和虾肉中的邻酪氨酸含量为0.095～0.677 mg/kg,邻酪氨酸含量与辐照剂量呈线性相关,相关系数(r)大于0.98。该方法灵敏、实用性强。

高效液相色谱法检测γ-射线辐照食品中的邻酪氨酸

目的:建立含蛋白质辐照食品中邻酪氨酸的柱前衍生-高效液相色谱检测方法。方法:样品经丙酮-三氯甲烷溶液净化除去脂肪和糖分,在110℃经盐酸水解过夜去蛋白后,水解液与衍生剂衍生,高效液相色谱检测,外标法定量。结果:方法最低检出限为5mg/kg,样品在5、10、50mg/kg添加水平的平均回收率为62.1%～88.3%,变异系数为3.91%～9.38%(n=6)。结论:辐照剂量在5kGy及以上的鸡肉和猪肉可以被检测出邻酪氨酸,含量明显高于空白,且邻酪氨酸含量与辐照剂量呈线性关系。辐照剂量在5kGy及以上的鸡肉和猪肉在-20℃中保存3个月后仍可以检测出邻酪氨酸。

高效液相色谱法检测电子束辐照水产品中的游离邻酪氨酸

目的建立辐照水产品中邻酪氨酸的高效液相色谱检测方法。方法样品经0.1%甲酸均质,超声促溶后,离心去除不溶物质,加丙酮沉淀多余蛋白后,挥发有机试剂,冻干后复溶,高效液相色谱检测,外标法定量。采用Aglient ZORBAX Eclipse-C18色谱柱,甲醇-0.1%甲酸为流动相,激发波长为275 nm,发射波长为305nm,流速为0.8 m L/min。结果样品在50、200、500μg/kg添加水平的平均回收率72.20%~85.68%,相对标准偏差(RSD)为1.716%~9.926%。结论该方法可用于电子束辐照水产品中邻酪氨酸含量的检测,不同种类水产品中游离酪氨酸含量由高到低依次为基围虾】鲈鱼】扇贝。

电子束辐照与邻酪氨酸产率的剂量关系

阐明了辐照剂量与邻酪氨酸转化率的关系。以邻酪氨酸的前体苯丙氨酸为研究对象,给予不同电子束辐照剂量,使用液相色谱-串联质谱联用法同时测定3种酪氨酸同分异构体和苯丙氨酸,探讨了在无基质干扰条件下辐照剂量与邻酪氨酸转化率的关系,以及苯丙氨酸在不同辐射剂量下转化为邻酪氨酸的效率。结果表明:在辐照剂量为1~10kGy时,邻酪氨酸的转化率为0.019%~0.105%,远高于样品基质中邻酪氨酸的转化率。

基于间酪氨酸和邻酪氨酸鉴定辐照海产品

利用超高效液相色谱-三重四极杆/线性离子阱质谱(ultra performance liquid chromatography-quadrupole linear ion trap tadem mass spectrometry,QTRAP-UPLC-MS/MS)技术测定海产品中与辐照相关的多种氨基酸及同分异构体,研究辐照剂量(0.5~20 kGy)与不同海产品中辐照标识性产物间酪氨酸和邻酪氨酸的产生和含量的关系。不同贮藏条件和加工方式对间酪氨酸和邻酪氨酸特异性和稳定性,以及对辐照海产品测定的影响。结果表明:辐照可诱导苯丙氨酸产生对酪氨酸、间酪氨酸和邻酪氨酸,无需其他酶和微生物的作用,且含量与辐照剂量呈线性关系;辐照剂量和样品含水量与辐照标识物的产生量密切相关;在-20℃,间酪氨酸和邻酪氨酸具有良好的稳定性;不同贮藏条件和加工方式对辐照海产品中间酪氨酸和邻酪氨酸含量具有一定影响,但是仍能提取到足够量的间酪氨酸和邻酪氨酸用于辐照海产品的鉴定;利用QTRAP-UPLC-MS/MS对海产品中邻酪氨酸和间酪氨酸作为辐照标识物的测定,最低可检测到经0.5 kGy辐照的样品,可准确地对辐照海产品是否经过辐照进行判定,为辐照海产品的检测提供依据。

辐照鸡肉邻位酪氨酸含量检测方法的研究

建立辐照鸡肉中邻位酪氨酸含量的高效液相色谱检测方法。辐照鸡肉中的邻位酪氨酸经105℃,6mmol/L盐酸溶液水解4h以上,C18固相萃取柱净化,5%乙腈溶液分3次洗脱目标物,在激发波长275nm,发射波长305nm,98%0.2mol/LNaH2PO4水溶液和2%乙腈作为流动相的条件下,用荧光检测器进行检测。研究表明,检出限为0.1mg/kg,加标水平在1.0mg/kg时,回收率为97.3%。辐照剂量在10～100kGy的范围内,辐照鸡肉中邻位酪氨酸含量与辐照剂量呈线性关系。

高效液相色谱测定邻位酪氨酸样品前处理研究

对高效液相色谱法检测禽肉类辐照食品中邻位酪氨酸的前处理方法进行了研究,考察脂肪、水分及充氮条件对测定结果的影响;在单因素实验的基础上,以盐酸浓度、水解温度、时间及苯酚为因素,进行正交实验。结果表明,测定邻位酪氨酸的最佳样品前处理条件为:去脂肪、去水分,在充氮条件下,以2mol/L盐酸在(110±1)℃的恒温干燥箱内水解24h。

高效液相色谱测定邻位酪氨酸样品前处理

研究前处理条件对高效液相色谱法检测禽肉类辐照食品中邻位酪氨酸的测定结果的影响。考察脂肪、水分及充氮条件对测定的影响;在单因素试验的基础上以盐酸浓度、水解温度、时间及苯酚为因素对测定影响做了正交试验。结果表明测定邻位酪氨酸的最佳样品前处理条件:去脂肪、去水分,在充氮条件下,以2mol/L盐酸,在110±1℃的恒温干燥箱内,水解24h。

液相色谱-串联质谱法检测辐照蛋白类功能食品中酪氨酸同分异构体

建立了液相色谱-串联质谱联用法（LC-MS/MS）同时检测辐照蛋白类功能食品中邻酪氨酸（o-Tyrosine）和间酪氨酸（m-Tyrosine）的分析方法.样品在氮气环境下经6 mol/L盐酸酸解过夜,酸解液再经氮气吹干,1 mL水复溶后,用Phenomenex Kinetex PFP色谱柱分离,以5 mmol/L乙酸铵溶液和甲醇为流动相进行梯度洗脱.质谱采用电喷雾负离子（ESI-）模式电离,多反应监测（MRM）模式检测,基质匹配标准溶液外标法定量.酪氨酸同分异构体与基质干扰峰得到良好的分离,在0.005 ～ 1.0 mg/L浓度范围内,其峰面积与浓度呈良好的线性关系,线性系数（r2）不低于0.999.在乳清粉和乳清蛋白粉中添加3种浓度水平的酪氨酸同分异构体,平均加标回收率为81.8％ ～98.2％,相对标准偏差（n=6）低于8.0％,方法定量下限（LOQ）和检出限（LOD）分别为5.0,8.0μg/kg和1.5,2.4μg/kg.将该方法应用于实际样品分析,表明辐照剂量与辐照蛋白类功能食品中o-Tyrosine和m-Tyrosine含量存在相关性,符合拟合多项式（r2 ＞0.98）.该方法可对蛋白类功能食品是否经过辐照给予定性鉴定,从而为辐照蛋白类功能食品中辐照标志物的检测方法研究提供理论依据.

禽肉中测定邻位酪氨酸不确定度的评定

通过参照CNAS-GL06《化学分析中不确定度的评估指南》及计量技术规范JJF1059-1999《测量不确定度的评定与表示》等相关资料,我们对用高效液相色谱法测定禽肉中邻位酪氨酸的不确定度进行了评定,从而计算出该方法测定邻位酪氨酸的扩展不确定度为7.9%,同时证明该方法能满足实验室认证认可对测量不确定度的要求,为产品品质监控提供了科学的依据。

鱼片干辐照加工处理的鉴别

以鱼片干为研究对象,采用高效液相色谱-荧光检测法研究酪氨酸含量与辐照杀菌处理的关系。建立了样品提取、分离和浓缩的前处理方法和液相检测方法,并提出以邻酪氨酸和对酪氨酸含量的比值作为判定样品是否辐照的标准。方法检出限为16.6～21.0 ng/mL。对酪氨酸和邻酪氨酸在16～3 800 ng/mL内均具有良好的线性关系(R2=0.999 7～0.999 9),样品加标回收率(n=3)分别为82.7%～98.3%和83.3%～93.8%,相对标准偏差(RSD)<7.8%。

DNA稳定的银纳米簇诱导的双酶催化转化检测研究

为了实现对碱性磷酸酶和邻-磷酸-L-酪氨酸的同时检测,本研究利用DNA稳定的银纳米簇(AgNCs/DNA)诱导的生物催化转化,基于醌类物质对DNA稳定的银纳米簇的荧光的猝灭效应,通过酪氨酸酶能与酪胺、多巴胺以及酪氨酸反应生成醌类物质,间接地达到了对酪胺、多巴胺以及酪氨酸的定量检测。AgNCs/DNA还被进一步用于双酶催化级联反应,通过碱性磷酸氧化酶(ALP)和酪氨酸酶(TYR)组成的双酶系统,实现了对碱性磷酸酶和邻-磷酸-L-酪氨酸的高灵敏度检测,检测限分别达到2.5×10-5μmol·L-1和0.01μmol·L-1。