一株Nsp2蛋白部分氨基酸自然缺失的猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离和鉴定

将RT-PCR检测为猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)阳性的肺组织碾磨、过滤后接种MARC-145细胞,在细胞上连续传代,上清传至第二代后能产生细胞病变。通过RT-PCR方法可以检测到释放在细胞上清中PRRSV RNA。间接免疫荧光试验也能检测细胞内PRRSV N蛋白的表达,表明该PRRSV毒株成功地在MARC-145细胞中分离,命名为PRRSV NN1396株。对NN1396分离株GP5基因进行克隆测序分析,结果表明该毒株与NCBI登录的PRRSV GP5核苷酸同源性为62.9%~98.2%,与PRRSV原型毒株VR-2332的同源性为87.9%,与高致病性毒株PRRSV JXA1同源性为98.0%,通过GP5的遗传进化分析发现所分离的PRRSV为北美型PRRSV,且与高致病性PRRSV分布在同一个小分支上;对部分nsp2基因的测序、比对结果表明,该部分基因与NCBI登录的参考序列VR-2332氨基酸同源性为73.0%,与JXA1的同源性为94.8%。NN1396分离株Nsp2蛋白含有高致病性PRRSV特异的1+29个氨基酸的缺失,此外,在缺失29个氨基酸区域的上游,含有连续19个氨基酸缺失。该PRRSV毒株的分离和Nsp2蛋白部分序列的缺失鉴定,为下一步研究Nsp2部分氨基酸缺失对病毒生物学特性影响奠定基础。

拟南芥热激因子HsfA1a部分氨基酸的表达与纯化

以构建的表达拟南芥热激因子HsfA1 a C端氨基酸331到氨基酸486(简称ΔHsfA1 a)的大肠杆菌E coliM15为材料,用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达ΔHsfA1 a,再通过N i-NTA-Agarose亲和层析纯化表达的ΔHsfA1 a,通过SDS-PAGE电泳分析表达蛋白和纯化蛋白,获得了表达纯化的ΔHsfA1 a.

Cd^(2+)对番茄幼苗生长和蛋白质组的影响

以3 d龄番茄幼苗为试验材料,从生理、生化和蛋白质组角度,分析0.01~1.00 mmol L–1 Cd2+处理72 h后对幼苗的影响。结果表明,Cd2+处理导致幼苗生长严重受抑,幼苗高度从对照组的4.76±0.50 cm分别降至3.79±0.05 cm(0.01 mmol L–1 Cd2+处理,P<0.01)和1.77±0.15 cm(0.03 mmol L–1 Cd2+处理,P<0.01)。根长度从对照组的6.07±0.04 cm降至4.77±0.58 cm(0.01 mmol L–1 Cd2+处理,P<0.01)和3.65±0.66 cm(0.03 mmol L–1 Cd2+处理,P<0.01)。叶绿素含量在0.1 mmol L–1 Cd2+处理后开始下降。当幼苗用0.05 mmol L–1 Cd2+处理时,根系中有10个蛋白质斑点,叶片中有21个蛋白质斑点产生变化。利用MS/MS技术,根系中有4个蛋白质斑点得以鉴别,它们是ribosomal protein L 20(斑点1)、F-box/LRR repeat protein(斑点2)、ribosomal protein small submit 4(斑点4)和CBL-interacting protein kinase(斑点5)。在叶片中,有2个蛋白质斑点消失,4个蛋白质斑点合成,它们是ABC transporter(斑点16)、maturase-like protein(斑点17)、chalcone synthase(斑点1)、a hypothetical protein(斑点3)、an unknown protein(斑点4)和a predicated protein(斑点6)。这些被鉴别的Cd2+反应蛋白参与生物合成、mRNA转录调控和蛋白质转运。

不同基因型生长肥育猪可消化赖、蛋+胱、苏、色氨酸平衡模式研究

试验比较研究了平均体重(33.64±1.2)kg 的大白×长白生长猪与平均体重(32.5±0.8)kg 的雅南猪可消化赖、蛋 +胱、苏、色氨酸平衡模式。按照氨基酸(AA)部分扣除氮沉积比较法 ,分别用18头大长猪和18头雅南猪进行N平衡试验。每个N平衡试验均设6个处理组 ,即高蛋白基础饲粮组(BD)、低蛋白加合成氨基酸对照组(PC)、在PC基础上轮流将所研究的4种AA扣除25 %的其它4个试验组。每个处理设3个重复 ,每个重复1头猪。饲粮为玉米—豆粕—玉米蛋白粉型。所有饲粮等能(3.40McalDE/kg) ,基础饲粮CP与可消化Lys水平相应为161g/kg、5.28g/kg。试验期大长猪日喂料120g/kgW 0.75,雅南猪日喂料100g/kgW 0.75。试验结果表明 ,按单位代谢体重的N沉积与可消化AA摄入量计算 ,大长猪AA平衡比例为 :Lys100、Met +Cys49、Thr72、Trp19 ;雅南猪为 :Lys100、Met+Cys78、Thr76、Trp21。结果显示 ,饲粮可消化氨基酸平衡模式因猪的基因型不同而异。与外种猪比较 ,雅南猪需要比较高比例的蛋 +胱、苏氨酸和色氨酸。