部分背根切断及针刺促进备用背根节c-jun的表达

目的 探讨部分背根切断术及针刺对背根节 (DRG) c- jun表达的影响。方法 将成年雄猫 15只 ,分假手术组 ,手术组和术后针刺组 ,每组 5只。手术组动物行单侧备用根术 ,术后针刺组动物经单侧备用根术后 ,针刺后肢手术侧 L6 脊神经分布区中的两组穴位 :足三里和悬中 ;伏兔和三阴交 ,每天一次 ,每次 30 min,连续针刺 7d。通过免疫组化 ABC法 ,用 c- jun特异抗体 (1∶ 10 0 0 ,Santa Cruz)对切片进行染色 ,DAB呈色。观察并测量 DRG中c- jun阳性神经元的分布、数量及反应强度。结果 在假手术组 DRG中 ,只有部分神经元染色。手术组 c- jun阳性神经元的数量较假手术组显著增多 (P<0 .0 5 ) ,其免疫反应水平较假手术组 ,显著上升 (P<0 .0 5 )。术后针刺组较手术组的 c- jun免疫反应强度增强 ,而阳性神经元的数量没有显著差异。结论 部分背根切断后备用 DRG神经元中c- jun的表达增加 ,针刺促使 c-

部分背根切断对备用背根节和脊髓IGF-Ⅰ表达的影响

目的 探讨 IGF- 在正常猫和部分去背根猫的 L6 双侧背根节和脊髓 板层 (L3、L5、L6 )与背核 (L3)表达及变化 ,以了解 IGF- 与脊髓可塑性的关系。方法 成年健康雄猫 15只分为正常组、备用根术后 7d组与 14d组 ,每组 5只。用兔抗 IGF- (1∶ 2 0 0 )抗体行免疫组化 ABC法染色。观察、计数并比较各组背根节、脊髓实验侧 板层 (L3、L5、L6 )和背核 (L3)中 IGF- 的分布、含量。结果 1IGF- 在去部分背根后 7d,术侧背根节阳性细胞数比正常组显著减少 (P<0 .0 5 ) ,与非术侧比无差异 (P>0 .0 5 ) ;术后 14 d,术侧背根节 IGF- 阳性神经元数比正常组亦显著减少 (P<0 .0 5 ) ,与术后 7d组比无差异 (P>0 .0 5 ) ,较非术侧者明显减少 (P<0 .0 1)。 2各组 L3、L5、L6术侧脊髓 板层内 IGF- 阳性神经元数均无明显差异 (P>0 .0 5 )。 L3背核 IGF- 阳性神经元数在术后两时相则先减少后增加 (P<0 .0 5 ) ,且在术后 14 d时恢复至正常水平 (P>0 .0 5 )。结论 部分背根切断导致双侧背根节IGF- 表达改变和脊髓背核 IGF- 表达改变 ,提示 IGF-

切断部分背根对脊髓Ⅱ板层c-jun,c-fos表达的影响——免疫组织化学研究

目的 探讨 c- fos、c- jun与脊髓可塑性的关系。方法 将成年雄猫 2 5只分为正常组、假手术后 3天组 ,假手术后 10天组、单侧备用根术 (切除一侧 L1 - L5,L7- S2 背根节 ,保留 L6为备用根 )后 3天组和单侧备用根术后 10天组 (每组 5只 )。取各组动物的 L5脊髓用 4%多聚甲醛固定后制作 2 0μm厚冰冻切片。每例动物间隔取 5张切片 ,分别用 c- fos (稀释度 1∶ 30 0 0 ,Sigm a) ,c- jun (稀释度 1∶ 10 0 0 ,Santa Cruz)抗体行 ABC免疫组化染色。 DAB棕色反应显色。结果 正常组及假手术组猫脊髓灰质各层内 ,c- jun的免疫阳性反应物主要出现在神经元胞核 ,但胞浆亦有弱阳性反应。部份去背根后 3天及 10天 ,单侧备用根手术组 板层 c- jun阳性神经元的数量及反应强度均较正常组及假手术者明显增多 (P<0 .0 5 )。但术后 3天与 10天组间无显著差异 (P>0 .0 5 )。与 c- jun比较 ,各组脊髓内均未见 c- fos的阳性细胞。结论 切断部分背根导致脊髓 板层 c- jun表达上调 ,提示 c- jun可能与脊髓 板层可塑性有关。

部分背根切断猫脊髓Ⅱ板层和背核c-jun的表达与脊髓可塑性的关系

目的:探讨即早基因c-jun蛋白在部分背根切断猫脊髓Ⅱ板层、背核(L3)表达的时空变化,以了解c-jun与脊髓可塑性的关系。方法:取成年健康雄性猫10只。随机分为2组:假手术组、单侧部分切断背根手术7d组(手术组),每组5只动物。取各组脊髓L3,L5,L6节段连续切片,片厚20μm,分别用兔抗c-jun(1∶200)抗体行免疫组化ABC法染色。观察并测量各组术侧脊髓Ⅱ板层(L3,L5,L6)和背核(L3)中c-jun蛋白的分布、含量及时空变化。结果:c-jun在假手术猫脊髓Ⅱ板层和背核的神经元和胶质细胞中均有表达。部分背根切断术后,c-jun阳性神经元数均较假手术组相应节段显著增加:L3,L5,L6II板层犤(17±3),(6±1)个;(13±2),(8±2)个;(11±2),(7±3)个犦,两组比较,差异有显著性意义(t=-7.778,-3.953,P<0.01;t=-2.481,P<0.05);L3背核,两组比较,差异有显著性意义(t=-5.000,P<0.01)。结论:部分背根切断术后c-jun在脊髓Ⅱ板层和背核表达增加,提示c-jun与脊髓Ⅱ板层和背核可塑性有关。

部分背根切断对备用背根节NT-3表达的影响

目的 探讨部分去背根后备用背根节 (L6 )各类细胞NT 3及其mRNA的含量变化。 方法 对成年雄性猫行单侧部分背根切断术 (切除一侧L1 ～L5,L7～S2 DRG ,保留L6 为备用根 )。取正常组一侧和术后 3d及 7d组手术侧的L6 DRG制作 2 0 μm厚冰冻切片 ,分别用NT 3抗体及NT 3cRNA探针行免疫组织化学及原位杂交染色。观察NT 3及其mRNA在DRG各类细胞的分布 ,测定NT 3及其mRNA在神经元和卫星细胞的光密度值 ,所得数据用q检验进行统计分析。 结果 部分去背根后 ,各时相备用背根节大神经元内NT 3的光密度值较正常者进行性减少 ,(P <0 0 5 ) ,而NT 3mRNA的光密度值术后 3d减少 ,7d回升至近正常者水平。比较之 ,小神经元和卫星细胞NT 3及其mRNA的光密度值进行性增多 (P <0 0 5 )。 结论 部分背根切断对备用背根节各类细胞NT 3表达的影响不同 ,其功能意义可能与NT

部分背根切断对备用背根节和脊髓NT-4表达的影响

目的 探讨 NT- 4在正常猫和部分去背根猫的 L6 背根节 (手术侧和非手术侧 )和脊髓 板层与背核表达的变化。方法 成年健康雄猫 15只分为正常组、备用根术后 7d组和 14 d组 (动物行单侧部分去背根手术 ,即切除一侧 L1 - L5、L7- S2 背根节 ,保留 L6 为备用根 ) ,采用免疫组化 ABC法 ,观察、计数各组背根节、脊髓实验侧 板层 (L3、L5、L6 )和背核 (L3)中 NT- 4的分布及含量。结果 1去部分背根后 7d,备用背根节 (术侧 )中 NT- 4阳性神经元数比正常组显著减少 (P<0 .0 5 ) ,但较非术侧明显增多 (P<0 .0 5 ) ;至术后 14 d,术侧备用背根节 NT- 4阳性神经元比正常组、7d组和非术侧均减少 (P<0 .0 5 )。 2正常组、术后两时相 L3、L5、L6 术侧脊髓 板层和 L3背核内NT- 4阳性神经元数均无明显变化。结论 去部分背根主要导致备用背根节 NT-

部分背根切断改变备用背根节神经元和卫星细胞脑源性神经营养因子的基因表达

目的 探讨部分去背根后备用背根节 (L6 )各类细胞脑源性神经营养因子 (BDNF)及其mRNA的量变情况。 方法 对成年雄性猫行单侧部分背根切断术 (切除一侧L1 ～L5、L7～S2 DRG ,保留L6 为备用根 )。取正常组一侧和术后 3d及 7d组手术侧的L6 DRG并分别行免疫组织化学及原位杂交染色。观察BDNF及其mRNA在DRG各类细胞的分布 ,测定BDNF及其mRNA在神经元和卫星细胞的光密度值。 结果 部分去背根后 3d ,中小神经元内BDNF及其mRNA的光密度值较正常者明显减少 (P <0 0 5 ) ,而 7d时又恢复近正常水平 (P >0 0 5 )。BDNF及其mRNA在大神经元的光密度值术后 3d无明显变化 ,而 7d时较正常者明显减少 (P <0 0 5 )。比较之 ,卫星细胞BDNF及其mRNA的光密度值术后 7d时明显升高 (P <0 0 5 ) ,术后 3d与正常者比未见明显变化。 结论 部分背根切断导致备用DRG各类细胞BDNF的表达水平发生不同程度的改变。提示备用DRG内BDNF的变化与脊髓Ⅱ板层可塑性有关。

去部分背根后猫脊髓Ⅱ板trKC表达的变化

目的 探讨部分去背根猫脊髓 板 (L3 、 L5) trk C的表达变化。方法 将 15只成年猫分正常组、单侧备用根术 (切除一侧 L1 - L5,L7- S2 背根节 ,保留 L6备用根 )后 3天和 10天组 (n=5 )。取各组脊髓 L3 、L5节段制作 2 0 μm冰冻切片 ,用 trk C兔抗血清以免疫组织化学 ABC法染片 ,观察 tr KC在脊髓 板层的分布 ,测量各组 板层 tr KC的平均灰度。结果 在正常组 tr KC阳性物主要分布于脊髓腹角中间带及背角深部的神经元。而 板层仅见 tr KC匀质状阳性染色。去部分背根后 3天 ,手术侧 L3 、 L5脊髓 板层 tr KC的平均灰度均较非手术侧及正常组者增加 (P<0 .0 5 )。 10天时 ,手术侧 L5平面 tr KC的平均灰度已恢复到近对侧和正常对照组水平 (P>0 .0 5 ) ,而 L3 平面仍较对侧及正常组者高 (P<0 .0 5 ) ,但已较3天者减少 (P<0 .0 5 )。去部分背根后 3天 ,手术侧 L3 、 L5脊髓 板层 tr KC的含量均较非手术侧及正常组者减少。 10天时 ,手术侧 L5平面 tr KC的含量已恢复近对侧及正常水平 ,而 L3 平面虽有恢复 ,但仍未达正常者水平。结论 tr KC的表达变化可能与脊髓可塑性有关。

部分背根切断激发脊髓II板层细胞凋亡

目的 :为了解部分背根切断后脊髓可塑性中是否涉及脊髓内胶质细胞和神经元细胞凋亡 .方法 :采用DNA原位末端标记—TUNEL法染色 ,检测部分背根切断后脊髓细胞凋亡 .结果 :在部分背根切断后脊髓的手术侧和非手术侧均见部分TUNEL阳性反应的胶质细胞和神经元 ,且手术侧的II板层凋亡细胞数较非手术侧多 (P <0 0 5 ) .结论 :背根切断不仅导致手术侧胶质细胞和神经元凋亡细胞数量明显增加 。

部分背根切断对备用背根节GDNF、FGF-2表达的影响

目的探讨部分背根切断后不同时相备用背根节(DRG)中胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)、成纤维细胞神经生长因子(FGF-2)的表达变化。方法15只猫分正常组、单侧部分背根切断7d及14d组,每组5只。分别于术后7d、14d处死动物,取正常组一侧、模型组手术侧L6DRG,用兔抗GDNF、FGF-2抗体行免疫组化ABC法染色,计数DRG内两因子阳性总细胞及阳性大、中小细胞的数量。结果GDNF在正常猫DRG大、中小细胞均有分布;去部分背根后,两时相备用DRGGDNF阳性神经元总数均有下降且呈进行性递减。DRG阳性中小细胞数亦为术后两时相进行性下降,DRG阳性大神经元术后两时相均较正常组显著减少,但术后14d与术后7d组无显著性差异。FGF-2在脊髓DRG大、中小细胞亦有分布;去部分背根后7d,FGF-2阳性神经元总数下降,14d时又恢复至正常,中小细胞亦表现为先减少后上升的趋势,而大细胞则术后两时相与正常组间无显著差异。结论去部分背根手术可致备用DRG中GDNF阳性神经元总数进行性下降,FGF-2表现为术后7d下降,14d时恢复。

部分背根切断对脊髓中央管上皮细胞凋亡的影响

目的 :探讨部分背根切断与脊髓中央管上皮细胞凋亡的关系 .方法 :采用DNA原位末端标记 -TUNEL法染色 .结果 :部分背根切断后 3d ,中央管上皮出现大量细胞凋亡 ,10d时凋亡细胞又明显减少 ,但总细胞数术后两组无明显差异 .结论 :部分背根切断可致脊髓中央管上皮细胞凋亡 ,且随损伤时间延长凋亡细胞数有明显减少 ,提示细胞凋亡可能在损伤的间接影响下发生 。

部分背根切断大鼠脊髓蛋白质组学研究

目的比较部分背根节切除14d后大鼠脊髓蛋白质与正常组间的表达差异,探讨痛觉传入有关的内在机制。方法取成年SD雄性大鼠16只,随机分为两组。实验组切除双侧L1-L4和L6背根节,保留L5背根节;正常组8只SD大鼠切开暴露背根神经节,但不作切除处理。运用双向电泳和质谱分析技术,比较部分背根节切除14d后大鼠脊髓蛋白质与正常组间蛋白质的肽指纹图和氨基酸序列组成差异。结果部分背根切断14d大鼠脊髓内免疫球蛋白重链V区(Ig heavy chain V region(clone X41-2))表达上调,果糖二磷酸醛缩酶A(Fructose-bisphosphate aldolase A)表达下调。结论发现部分去背根大鼠脊髓存在两个明显差异表达的蛋白质,结果提示,两个差异表达的蛋白质可能与痛觉传入机制有关。

部分去背根猫备用背根节和脊髓Ⅱ板层NT-3及其mRNA的表达变化

采用免疫组化和原位杂交技术探讨了部分去背根猫备用背根节 (L6 )和 L3、L5脊髓 II板层 NT-3及其 m RNA的表达变化。结果发现 ,正常组 NT-3及其 m RNA阳性产物主要分布于背根节的大型神经元和少数中、小型神经元。部分去背根后 ,3 d和10 d两时相 NT-3 m RNA大型神经元阳性数明显减少 ,而 NT-3阳性大型神经元数术后 10 d时方明显减少 (P<0 .0 1) ;NT-3及其 m RNA阳性小型细胞数在术后两时相均较正常组者增多 (P<0 .0 1) ;而在中型神经元只有 NT-3阳性神经元数有增加。相对地 ,在脊髓 板层 ,两时相 NT-3阳性神经元及胶质细胞百分数均较正常者明显增加 (P<0 .0 1) ,且以 3 d组者为最明显 ,但均未见 NT-3 m RNA阳性信号。结果表明 ,部分去背根不仅导致背根节各类神经元中 NT-3的表达发生了变化 ,且对 板层 NT-3阳性神经元及胶质细胞数量也有明显影响。提示 NT-3可能在脊髓

部分去背根猫Sema3A及其受体NP-1在脊髓和背根节的表达

目的研究部分去背根对神经生长抑制因子Sema3A在脊髓及其受体NP-1在备用背根节内表达的影响。方法建立猫的单侧备用背根模型,分别在术后7d、14d取L3、L5、L6脊髓节段及手术侧L6背根节进行免疫组织化学ABC法染色,同时设置正常对照组。脊髓背角内检测Sema3A免疫阳性产物的平均光密度值(OD值),背根节内计数NP-1阳性中小神经元数。结果在L3脊髓节段,Sema3A的表达术后7d(0.25±0.14)、14d(0.27±0.09)较正常对照组(0.37±0.87)减弱(P<0.05);在L5脊髓节段,Sema3A的表达术后7d(0.26±0.11)较正常组减弱(P<0.05),术后14d(0.33±0.09)时有所恢复;L6脊髓节段各组Sema3A的表达无明显变化。背根节内,术后7dNP-1阳性中小神经元数(30.85±10.26)较正常组(45.06±12.47)减少(P<0.05),14d时阳性中小神经元数(40.73±12.25)较7d时有所增加(P<0.05)。结论脊髓部分去背根后,Sema3A及其受体NP-1表达的时空变化可能与脊髓损伤后可塑性有关。

部分去背根促进神经营养因子在初级感觉神经元顺行转运的研究

目的 探讨部分去背根是否促进BDNF、NT- 3和GDNF在初级感觉神经元顺行转运。方法 将5只成年猫行单侧部分背根切断术,切除一侧的L1 ～L5,L7～S2 背根神经节(DRG) ,保留同侧L6 DRG为备用根,在L6 背根距DRG 1cm处捆绑双侧背根。术后3d取两侧L6 背根制作2 0μm厚冰冻切片,分别用BDNF、NT- 3、GDNF抗血清按免疫组织化学ABC法染色。观察实验侧和对照侧捆绑背根部位的近DRG端和近脊髓端各因子的免疫反应强度。结果 对照侧捆绑处两端NT- 3、GDNF的免疫反应强度均为弱阳性反应,BDNF捆绑处近DRG端的免疫反应(++)较近脊髓端者强(+)。实验侧捆绑处近DRG端BDNF、NT- 3和GDNF的免疫反应(+++)较捆绑处近脊髓端强,且较对照组近DRG强。结论 部分去背根动物背根近DRG端BDNF、NT- 3和GDNF的免疫反应强度增加可能提示部分去背根可促进BDNF、NT- 3、GDNF从备用背根节神经元顺行转运进入脊髓。

针刺及内源性c-Fos、c-Jun对体外培养备用背根节的影响

目的探讨部分背根切除和针刺及内源性c-Fos和c-Jun对体外培养备用背根节(DRG)的作用。方法制备备用根猫模型;采用针刺备用根猫模型、细胞培养以及在部分培养液中加入抗c-Fos/c-Jun抗体的方法,将实验分为针刺组、抗c-Fos抗体组、抗c-Jun抗体组及备用DRG组;并用抗神经元特异性烯醇化酶(NSE)抗体行免疫细胞化学ABC法染色进行神经元鉴定。结果免疫组化染色可见95%以上的细胞为N SE阳性反应的细胞,且为典型的体外培养的DRG神经元。体外培养备用根组、抗c-Fos抗体组、抗c-Jun抗体组神经元突起的平均长度均比针刺组短(P<0.05);抗c-Fos/c-Jun抗体组均比备用根组长(P<0.05)。结论针刺可促进体外培养DRG神经元的突起生长作用;内源性c-Fos、c-Jun可能对体外培养DRG神经元突起生长有促进作用。

针刺对备用背根节神经元TrkC表达的影响

目的 探讨针刺对备用背根节 (DRG) Trk C表达的影响。方法 将成年雄猫分为三组 ,即假手术组、单侧部分背根切除术组、单侧部分背根切除术并针刺组。通过免疫组化 ABC法 ,观察各组 L6 DRG中 Trk C免疫反应 (Trk C- IR)神经元数量。结果 在假手术组 Trk C- IR主要定位于 L6 DRG的大神经元及少数中小神经元胞浆内 ;部分背根切断后 ,Trk C- IR大神经元数量明显减少 ,而中小神经元数量则明显增多 (P<0 .0 5 ) ;针刺后 ,Trk C- IR大神经元数量较手术组又明显增多 ,且反应强度明显增加 (P<0 .0 5 ) ,而对中小神经元 Trk C阳性细胞数无明显影响。结论 针刺促进 Trk C在大神经元的表达上调 ,提示 Trk

针刺对备用背根节神经元表皮生长因子表达的影响

成年哺乳动物的脊髓具有可塑性,且针刺可促进脊髓可塑性,但其机制尚不清楚.有实验表明针刺可促进NGF、NT-3在部分去背根动物背根节的表达,表明了针刺可能通过改变背根节部分神经营养因子的表达进而在脊髓可塑性中发挥作用.表皮生长因子（EGF）与神经系统发育及损伤修复有关,但EGF与成体动物脊髓可塑性及针刺促进脊髓可塑性的关系报道不多.本实验拟通过成体猫备用背根模型来初步探讨EGF与脊髓可塑性及针刺促进脊髓可塑性的关系.

针刺对备用背根节和脊髓NT-4表达的影响

目的观察NT-4在针刺部分去背根猫的L6背根节(手术侧和非手术侧)和脊髓表达的时空变化,以了解NT-4与针刺促进脊髓可塑性的关系。方法25只成年健康雄猫随机分为5组即正常组,备用根术(动物行单侧部分去背根手术,即切除一侧L1-L5、L7-S2背根节,保留L6为备用根)后7d组与14d组、针刺备用根术(动物行单侧部分去背根术后针刺)后7d组与14d组。动物处死后,取L6背根节及L3、L5、L6节段脊髓,用兔抗NT-4(1∶200)抗体行免疫组化ABC法染色。观察、计数并比较各组背根节、脊髓实验侧板层(L3、L5、L6)和背核(L3)中NT-4的分布及含量。结果针刺备用根7d组,针刺侧DRG内NT-4阳性神经元数较正常组和术后7d组减少(P<0.05),较相应非针刺侧多(P<0.05);针刺14d组,针刺侧DRG阳性神经元数比针刺7d组术后14d和同组非针刺侧增高(P<0.05),且恢复至正常水平。针刺7d,针刺侧脊髓L6板层NT-4阳性神经元数较术后7d组及正常组增加(P<0.01)。针刺14d时,L5、L6板层阳性神经元数较正常组及术后14d组相应节段均增加(P<0.01)。针刺后L3背核NT-4阳性神经元数无明显变化(P>0.05)。L5板层NT-4阳性神经元在针刺后14d时比针刺后7d时增多(P<0.05)。结论以上结果提示NT-4与针刺促进脊髓可塑性有关;针刺备用背根对非针刺侧DRGNT-4的表达亦有影响,提示非针刺侧背根节NT-4亦可能参与了脊髓可塑性和针刺促进脊髓可塑性。

内源性GDNF、NT-4对针刺猫脊髓备用根背根节神经元的作用

为了解部分背根切除和针刺及内源性GDNF和NT-4对体外培养备用背根节（DRG）的作用，本研究对5只成年猫进行双侧备用根手术（切除双侧L1～L3和L7～S2 DRG，其中L6DRG作为备用背根）。术后当日开始针刺一侧L6脊神经后肢分布区的两组穴位，即足三里和悬钟、伏兔和三阴交，每天一次，每次30min，连续针刺7d后无菌条件下取出双侧L6 DRG进行体外培养，24h后全量换液，并将针刺侧的一部分培养孔的培养液分别用含有200ng／ml抗GDNF和NT4抗体培养液替换，分别作为抗GDNF和NT4抗体封闭组。7d后终止培养，于显微镜下用显微测微尺测量神经突起的长度；并用抗NSE抗体行免疫细胞化学ABC法染色进行神经元鉴定。结果显示：（1）免疫细胞化学染色可见体外培养的细胞95％以上为NSE阳性细胞，且为典型的体外培养的DRG神经元；（2）体外培养备用根组和抗GDNF抗体组神经突起的平均长度比针刺组的短（P〈0．05）；（3）而针刺组神经突起的平均长度与抗NT-4抗体组间无差异（P〉0．05）；两抗体组平均突起长度比备用根组的突起长（P（0．05）。本研究结果提示，针刺可促进体外培养DRG神经元突起的生长，进而可能与脊髓可塑性密切相关；内源性GDNF有促进DRG神经元突起生长的作用；而内源性NT4在DRG神经元突起生长中发挥的作用却不明显。