颗粒细胞凋亡中凋亡配体和受体系统的研究进展

颗粒细胞(Granulosa Cells,Gc)的主要功能是为卵母细胞提供必要的生长因子、营养素和代谢中间产物,并分泌正常生殖功能所必需的雌激素。Gc凋亡影响卵母细胞质量,进而降低家畜受精率和妊娠成功率。细胞凋亡配体和受体系统是诱导Gc凋亡的主要因子,而Gc凋亡是卵泡闭锁的主要原因。卵泡闭锁是导致卵母细胞丢失的主要原因,也是对雌性动物遗传资源的巨大浪费。一种配体可以结合多种受体,从而进入细胞增殖、细胞凋亡等途径。本文介绍了细胞凋亡配体和受体系统及其在Gc凋亡中的作用,旨在为家畜繁殖提供借鉴与参考。

哺乳动物颗粒细胞凋亡研究进展

细胞凋亡是雌性生殖系发育过程中的一个重要组成部分,在哺乳动物中,超过99%的雌性生殖细胞都会在卵子发生的不同阶段发生凋亡。目前,在颗粒细胞凋亡过程中至少发现5个配体受体系统:TNFa和TNF受体系统,Fas配体受体系统,TRAIL和TRAIL受体系统,APO-3配体受体系统,PFG-5配体受体系统,而且发现颗粒细胞凋亡属于依赖于线粒体凋亡信号传导凋亡途径。

Flt3和c-kit在脐血CD34^+干/祖细胞中功能性表达及意义

为了解作用于早期造血的细胞因子受体Flt3和c-kit在脐血CD34^+造血干/祖细胞中的表达及功能,从蛋白和基因水平对其进行了研究。采用常规双色直接免疫荧光标记法,使用流式细胞术测定新鲜分离的和体外不同培养时间的脐血CD34^+造血干/祖细胞中Flt3和c-kit蛋白水平的表达,用RT-PCR法测定Flt3和c-kit的mRNA水平表达,并在体外对受体功能进行了探讨。研究结果显示,新鲜脐血CD34^+细胞中(68.8±15.4)％为Flt3^+,(50.6±12.7)％为c-kit^+,随着体外培养时间的延长,二者表达逐渐下降。结论:脐血CD34^+造血干/祖细胞在体外液体培养条件下Flt3和c-kit阳性表达可维持2-3周,其配体FL和SCF在培养的第1周内对细胞扩增效果最显著。

中药预防髋关节假体无菌性松动的生物学研究进展

人工髋关节置换术应用于关节功能可重建和改善患者的生活质量,但产生的并发症严重影响手术后的功能恢复,假体的无菌性松动是人工髋关节术后失败的主要原因之一。核因子κB受体活化因子(RANK)-PANK配体(RANKL)-骨保护素(OPG)系统,白细胞介素1、肿瘤坏死因子等炎性因子,破骨细胞与成骨细胞等都是影响人工髋关节置换术后假体无菌性松动的重要生物学因素。中药对RANK-RANKL-OPG系统、炎性因子、破骨细胞与成骨细胞增殖具有一定的影响,但目前对中药中提取物的研究不够深入,需要进一步通过分子生物学研究来验证。

肝细胞生长因子受体在高糖诱导肾间质成纤维细胞中的表达及其意义

目的 体外观察高糖刺激成纤维细胞时,肝细胞生长因子(HGF)受体c-met的表达及HGF/c-met系统的活性。方法 高糖刺激细胞后,采用RT-PCR方法分析HGF、c-met mRNA水平。Western印迹分析c-met蛋白质。同时检测外源加入HGF对TGF-β、c-met表达影响,以及采用抗c-met抗体处理后的表达。结果 高糖刺激早期HGF、c-met mRNA快速上升。另外,c-met mRNA、蛋白水平明显上调。HGF可以诱导c-met表达,同时降低TGF-β表达。结论 c-met局部上调在糖尿病肾脏损伤过程中起重要作用。

淫羊藿苷对骨质疏松症模型大鼠OPG/RANKL/RANK轴系统影响的实验研究

目的通过观察不同剂量淫羊藿苷对去势骨质疏松症模型大鼠骨保护素(OPG)、核因子κB受体活化因子(RANK)和核因子κB受体活化因子配体(RANKL)表达的影响,探讨其对骨改建影响的可能机制。方法将健康雌性SD大鼠切除双侧卵巢,造成骨质疏松症大鼠模型,以低、中、高剂量(200,400,800 mg/kg)淫羊藿苷灌胃3月后,取大鼠右后肢胫骨近端干骺端,利用荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测OPG mRNA、RANK mRNA和RANKL mRNA的表达。结果淫羊藿苷上调OPG mRNA的同时下调RANKL mRNA和RANKL mRNA,这种调节作用在高剂量时最为显著。结论淫羊藿苷可影响大鼠OPG mRNA,RANKL mRNA,RANKL mRNA的表达,此作用与骨改建密切相关。

湿热痹清丸治疗类风湿关节炎湿热痹阻证的临床观察及对OPG/RANKL/RANK通路和TNF-α的影响

目的:通过研究湿热痹清丸治疗类风湿关节炎湿热痹阻证的临床疗效及对患者血清骨保护素(OPG)、核转录因子-κB受体活化因子配体(RANKL)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响,从骨破坏的角度探讨其作用机制。方法:采用随机数字表法将纳入的类风湿关节炎湿热痹阻证患者分为两组,每组各36例患者。对照组给予口服甲氨蝶呤片、塞来昔布胶囊治疗;治疗组在对照组的基础上配合口服中成药湿热痹清丸治疗,其治疗周期为3个月。分别记录治疗前和治疗后疼痛视觉模拟(VAS)评分、关节压痛数、关节肿胀数、疾病活动度评分(DAS28-ESR)、中医症状量化积分及相关不良反应并检测外周血清OPG、RANKL、TNF-α、红细胞沉降率(ESR)、C反应蛋白(CRP)水平。结果:治疗后,治疗组总有效率为88.57%(31/35),对照组总有效率为79.41%(27/34),治疗组总有效率高于对照组(Z=-2.089,P<0.05)。与本组治疗前比较,两组疼痛VAS评分、关节压痛数、关节肿胀数及DAS28-ESR均明显降低(P<0.05);治疗后与对照组比较,治疗组疼痛VAS评分、关节压痛数、关节肿胀数及DAS28-ESR改善更明显(P<0.05)。与本组治疗前比较,两组中医症状量化积分明显降低(P<0.05);治疗后与对照组比较,治疗组中医症状量化积分降低更明显(P<0.05)。与本组治疗前比较,两组RANKL、TNF-α、ESR、CRP水平均明显降低,OPG水平明显升高(P<0.05);治疗后与对照组比较,治疗组RANKL、TNF-α、ESR、CRP水平降低更明显,OPG水平升高更明显(P<0.05)。在本次临床试验期间未出现任何严重不良事件及严重不良反应。结论:湿热痹清丸可以有效改善湿热痹阻型类风湿关节炎患者的临床症状,有较好的安全性;湿热痹清丸可以有效调控OPG/RANKL/RANK系统,同时降低促炎因子TNF-α,这有可能是其干预RA骨破坏的作用机制。

附子白术汤通过调节OPG/RANKL保护乳腺癌骨转移裸鼠骨损伤的研究

目的:从调节护骨素(OPG)/细胞核因子κB受体活化因子配体(RANKL)系统探讨附子白术汤抑制乳腺癌骨转移骨损伤的机制。方法:采用左心室注射人乳腺癌骨转移细胞株(MDA-MB-231BO)细胞法建立乳腺癌骨转移裸鼠模型;随机分为模型组、唑来膦酸组、附子白术汤组、附子-白术药对组,另备正常裸鼠正常组(n=6)。造模后第4天开始药物干预:唑来膦酸组sc唑来膦酸0.2 mg.kg-1;模型组、附子白术汤组、附子-白术药对组、正常组,分别ig给予生理盐水20 mL.kg-1、附子白术汤5.6 g.kg-1、附子-白术药对煎液2.4 g.kg-1、生理盐水20 mL.kg-1;每周3次,持续6周。观察各组裸鼠体重、骨转移灶病理和OPG,RANKLmRNA表达变化。结果:①与模型组比较,附子-白术药对组与附子白术汤组骨转移个数、骨转移率及体重下降率均明显下降(P<0.05),骨转移灶中TRAP(+)细胞数量均减少(P<0.01),OPG mRNA表达含量上调(P<0.01),RANKLmRNA表达含量及二者比值降低(P<0.01);②与附子白术汤组比较,附子-白术药对组骨转移个数、骨转移率、体重下降率、骨转移灶中TRAP细胞数量,OPG mRNA,RANKL mRNA表达含量及其比值均无统计学差异。结论:附子白术汤和附子-白术药对均可通过调节OPG/RANKL系统,减少破骨细胞的数量并抑制其活性,从而减轻乳腺癌骨转移裸鼠溶骨性损伤;附子-白术药对与附子白术汤功效相近,可能是附子白术汤的核心药物。

论中医“肝”藏象的宏观和微观实质

通过对解剖学、细胞生物学和现代中医藏象实质的最新研究进展进行横向比较后认为,解剖学意义上的肝脏是宏观上的中医之"脾",而不是中医"肝"藏象的一个组成部分。中医"肝"实质在宏观层面是神经系统和内分泌系统,在细胞的微观层面就是配体-受体-细胞信号转导系统。

严重烧伤大鼠骨形成与骨吸收相关指标的变化

目的研究严重烧伤大鼠骨形成及骨吸收相关指标的变化。方法采用实验研究方法。将30只6~8周龄SD雌性大鼠按随机数字表法分为假伤组、12%体表总面积(TBSA)Ⅲ度烧伤组、24%TBSAⅢ度烧伤组,每组10只。于各组大鼠背部进行相应处理,之后仅烧伤大鼠按Parkland公式经腹腔注射补液,创面外涂20 g/L碘伏,直至创面愈合。伤后28 d,取各组大鼠胫骨组织,分别行Masson、抗酒石酸酸性磷酸酶染色,观察新生骨组织、破骨细胞数量;取各组大鼠腹主动脉血制备血清,分别采用甲基百里酚蓝比色法、磷钼酸法测定骨代谢指标血清钙离子、磷离子浓度,采用酶联免疫吸附测定法检测血清中骨形成标志物Ⅰ型前胶原氨基端前肽(P1NP)和骨吸收标志物β-Ⅰ型胶原羧基端肽(β-CTX)水平;取各组大鼠第1腰椎组织,采用实时荧光定量反转录PCR法检测护骨因子、核因子κB受体激活蛋白配体(RANKL)、肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF-6)、活化T细胞核因子1(NFATC1)、c-Fos、c-Src的mRNA表达水平。数据处理采用单因素方差分析、Bonferroni法、Welch检验、Games-Howell检验、Kruskal-Wallis检验、Mann-Whitney U检验及Bonferroni校正。结果伤后28 d,与假伤组比较,2个烧伤组大鼠胫骨组织中新生骨组织生成均减少,烧伤面积越大减少越明显;2个烧伤组大鼠胫骨组织中破骨细胞数量相近,均较假伤组明显增多。伤后28 d,3组大鼠血清钙离子浓度、血清中β-CTX水平相近(P>0.05);24%TBSAⅢ度烧伤组大鼠血清磷离子浓度明显高于12%TBSAⅢ度烧伤组(P<0.05),且2个烧伤组大鼠血清磷离子浓度均显著高于假伤组(P<0.01);24%TBSAⅢ度烧伤组大鼠血清中P1NP水平明显低于假伤组(P<0.01)。伤后28 d,假伤组、12%TBSAⅢ度烧伤组、24%TBSAⅢ度烧伤组大鼠第1腰椎组织中护骨因子mRNA表达水平分别为1.01±0.20、1.71±0.83、2.24±0.51,其中24%TBSAⅢ度烧伤组明显高于假伤组(P<0.01);24%TBSAⅢ度烧伤组大鼠第1腰椎组织中RANKL mRNA表达水平为1.31±0.17,明显高于假伤组的1.00±0.14与12%TBSAⅢ度烧伤组的0.97±0.10(P<0.01);12%TBSAⅢ度烧伤组、24%TBSAⅢ度烧伤组大鼠第1腰椎组织中TRAF-6、NFATC1(Z=3.141、3.782)、c-Src mRNA表达水平及12%TBSAⅢ度烧伤组大鼠第1腰椎组织中c-Fos mRNA表达水平均明显高于假伤组(P<0.05或P<0.01);12%TBSAⅢ度烧伤组大鼠第1腰椎组织中c-Fos、c-Src mRNA表达水平均明显高于24%TBSAⅢ度烧伤组(P<0.01)。结论严重烧伤可引起大鼠新生骨组织生成减少及破骨细胞数量增多,血清磷离子浓度升高与血清中P1NP水平下降,骨组织中护骨因子、RANKL、TRAF-6、NFATC1、c-Fos、c-Src呈升高趋势,且NFATC1、c-Fos、c-Src随烧伤总面积增加呈下降趋势。