同型半胱氨酸致胰岛β细胞凋亡中肝配蛋白A型受体2 DNA甲基化升高

背景:同型半胱氨酸水平增加会导致胰岛β细胞发生凋亡,但其具体机制尚不明确。目的:探讨胰岛β细胞中肝配蛋白A型受体2及其启动子区DNA高甲基化的具体机制。方法:体外培养小鼠胰岛β细胞株Min6,将其分为对照组(0μmol/L同型半胱氨酸)和同型半胱氨酸组(120μmol/L同型半胱氨酸)。干预细胞48 h后,采用免疫荧光和Western blot法检测2组细胞中凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶3表达情况;Western blot法检测DNA甲基化相关蛋白DNMT1、DNMT3a的表达水平;实时荧光定量PCR检测两组细胞中肝配蛋白A型受体2 mRNA水平;Western blot检测肝配蛋白A型受体2的蛋白表达情况;巢式甲基化特异性PCR检测EphA2启动子区DNA甲基化水平。结果与结论:①与对照组相比,同型半胱氨酸组胰岛β细胞中凋亡相关蛋白Bax和半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶3表达明显升高,Bcl-2表达明显下降;肝配蛋白A型受体2的mRNA和蛋白表达水平明显下降(P<0.05);②与对照组相比,同型半胱氨酸组肝配蛋白A型受体2 DNA甲基化水平明显升高(P<0.05),同型半胱氨酸组胰岛β细胞中DNMT1蛋白表达明显增高(P<0.05);③提示肝配蛋白A型受体2 DNA高甲基化在同型半胱氨酸致胰岛β细胞凋亡中的作用明显,而DNMT1可能参与其高甲基化过程。

精子表面甘露糖配基受体表达与受精能力

人类生殖障碍中男性方面的因素占40％,其中关键因素在于精子和卵子表面互补分子的识别与相互作用。实验证实人类精子表面甘露糖配基受体(MLR)是精子受精能力的分子标记物。本文就MLR的表达、检测、影响因素及其在男性不育诊治中的应用等方面作一简要概述。

探讨β-受体阻滞剂配伍治疗心衰患者的临床效果及对生存质量的改善情况

目的:探讨心衰患者采取β‐受体阻滞剂配伍治疗的临床效果及对生存质量的改善情况。方法:本次研究收治78例心衰患者作为研究对象,采取随机抽样法将其分为两组,比较两组研究对象的生存质量评分。结果:对照组社会功能、情绪功能、认知功能以及躯体功能评分均低于观察组,组间数据比较,差异明显,有统计学意义(P<0.05);观察组比对照组治疗有效率更高(P<0.05)。结论:相比常规西医治疗,给予心衰患者β‐受体阻滞剂配伍治疗,临床效果更为显著,有利于保证患者生存质量,提升治疗有效率,具有临床应用价值。

血小板与中性粒细胞的配-受体结合及信号传导

血小板在凝、止血过程中发挥重要作用,并参与炎症性疾病发生发展。中性粒细胞在免疫防御过程中起关键作用。血小板与中性粒细胞可通过配-受体如P-选择素与PSGL-1、CD40L与CD40及Mac-1、PAC-1与Mac-1、HMGB1与TLR2/4或RAGE直接结合相互作用,经过细胞内信号传导,引起中性粒细胞活化、黏附及迁移,刺激中性粒细胞胞外捕网形成与释放,有助于中性粒细胞捕获、消灭病原体,促血栓形成。

浸润性乳腺癌组织肝配蛋白A型受体2(EphA2)高表达且与细胞焦亡负相关

目的探讨肝配蛋白A型受体2(EphA2)参与浸润性乳腺癌中细胞焦亡(pyroptosis)的机制。方法采用Western blot法检验乳腺癌患者癌组织、癌旁组织和正常乳腺组织EphA2、含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白3(NLRP3)、胱天蛋白酶1(caspase-1)、白细胞介素1β(IL-1β)和细胞间黏附分子1(ICAM-1)的蛋白表达水平;采用免疫荧光技术检测45例乳腺癌患者癌组织和癌旁组织中EphA2表达情况;用Pearson相关系数对患者癌组织EphA2的蛋白表达与细胞焦亡相关蛋白NLRP3、caspase-1和IL-1β进行相关性分析。结果与正常乳腺组织及癌旁组织相比,乳腺癌组中NLRP3、caspase-1、IL-1β和ICAM-1的蛋白表达水平明显降低,EphA2蛋白表达明显升高;EphA2水平与细胞焦亡相关蛋白NLRP3、caspase-1和IL-1β均呈负相关性。结论乳腺癌组织EphA2高表达,且与细胞焦亡呈负相关。

氧化苦参碱对脊髓c-fos表达和对阿片受体的作用研究

目的:研究氧化苦参碱在大鼠福尔马林致痛模型中的镇痛作用以及对脊髓c-fos表达的影响,为了进一步阐明其镇痛作用机理,用放射性配受体法研究氧化苦参碱和阿片受体的亲和力。方法:大鼠腹腔给予马钱子碱,测定福尔马林足底注射后疼痛反应指标并用免疫组化方法测定马钱子碱对脊髓c-fos表达的影响。以大鼠大脑为膜蛋白,用3H-二氢吗啡([3H]DHM)为放射性配基,测定氧化苦参碱和阿片受体的亲和力。结果:氧化苦参碱抑制福尔马林引起的I相和Ⅱ相反应(P<0.01),氧化苦参碱组Fos样免疫阳性神经元数明显少于生理盐水组(P<0.01)。放射性配受体实验发现,氧化苦参碱置换放射性标记配基[3H]DHM的IC50大于10-4mol/L。结论:氧化苦参碱能抑制福尔马林引起的急性疼痛和继发性炎症反应以及减少疼痛引起的脊髓水平Fos的表达,有明显的镇痛作用。用放射性配受体法研究发现氧化苦参碱的镇痛作用可能和阿片受体无关。

靶向异常通路的动脉性肺动脉高压新型药物研发

动脉性肺动脉高压(pulmonary arterial hypertension,PAH)是以肺血管阻力和肺动脉压力升高为主要表现的肺血管疾病,肺小血管重塑是其重要病理改变,如不及时治疗可导致右心室衰竭,威胁生命。目前针对PAH的治疗选择有限,已上市药物的主要作用是扩张肺血管,虽能缓解症状,但对预后的改善效果不佳。近年来,对PAH发病机制的研究取得了多项突破,多种信号通路的异常对PAH的作用已被逐渐阐明,以这些通路中的关键成员为靶点,已有多种新型药物正在研发和开展临床试验。本综述将这些疾病相关的信号通路归纳为5类,讨论针对这些异常通路的药物研发最新进展,重点关注已进入Ⅱ期临床试验阶段的新药物,探讨其作用机制及疗效,以期为今后PAH的新药研发提供参考。

地舒单抗在骨质疏松初始、序贯、联合治疗等方面的临床研究进展

地舒单抗(denosumab,DMAb)是最早出现的全人源核因子-κB受体活化因子配体[receptor activator of nuclear factor-κB(NF-κB)ligand,RANKL]的单克隆抗体。2020年在我国上市,应用于骨质疏松治疗领域,是抑制骨吸收类抗骨松药物中的新成员。本综述的目的为归纳总结近年围绕DMAb在骨质疏松初始、序贯以及联合治疗方面的临床研究进展,为其应用提供参考。

四川骨髓库汉族人群KIR及其HLA配体的相互关系研究

目的了解杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)及其HLA配体在四川骨髓库汉族人群中的基因频率分布和配对情况,探讨KIR和HLA的相互关系。方法随机选择四川骨髓库汉族街头无关捐献者标本286(人)份,采用聚合酶链式反应-序列特异性引物扩增(PCR-SSP)做KIR基因检测;采用聚合酶链式反应-直接测序分型法(PCR-SBT)测定HLA-A、B、C等位基因。结果所检测个体均具有结构基因3DL2、3DL3、2DL4和3DP1;共发现29种KIR基因型,ID为1和2的基因型最多见,频率分别为47.55%(136/286)和14.69%(42/286)。HLA-C1和HLA-C2的频率分别为85.15%(487/572)和14.85%(85/572);携带Bw4表位的HLA-A、-B的频率分别是20.78%(119/572)、31.99%(183/572)。所有个体均含有抑制性KIR/HLA-C配受体对,含有1、2和3对配受体对的频率分别是77.27%(211/286)、15.04%(43/286)和7.69%(22/286)。在KIR/HLA-Bw4配受体对中,仅含有3DL1+HLA-Bw4的频率为44.76%(128/286),仅含有3DS1+HLA-Bw4的频率为2.80%(8/286),同时含有3DL1+HLA-Bw4和3DS1+HLA-Bw4的配受体对的频率为25.17%(72/286),另外有27.27%(78/286)的个体无KIR/HLA-Bw4配受体对。结论四川骨髓库汉族人群KIR基因及其KIR/HLA配受体对的分布具有自身特点,抑制性KIR/HLA配受体对占优势。

结直肠癌雌激素受体及孕激素受体的定量研究

背景与目的许多研究表明结直肠癌与雌激素相关,结直肠癌组织中表达雌激素受体(estrogenreceptor,ER)、孕激素受体(progesteronereceptor,PR),但多采用免疫组化方法检测,且结果不一,而ER.PR的定量研究不多。本研究拟定量测定结直肠癌组织及正常组织的ER,PR表达水平,并探讨它们之间的关系及与结直肠癌患者临床病理参数的关系。方法应用受体放射配基结合分析法(radioligandbindingassay,RBA)定量测定45例结直肠癌组织及结直肠正常组织的胞浆及胞核ER、PR的水平。结果45例标本结直肠正常组织及癌组织都表达ER、PR,胞浆ER表达癌组织高于正常组织,分别为7.96±3.69fmol/mgprotein和4.34±2.84fmol/mgprotein,(P<0.01);胞浆PR表达癌组织高于正常组织,分别为3.89±2.64fmol/mgprotein和2.50±1.73fmol/mgprotein,(P<0.01);胞核ER表达癌组织高于正常组织,分别为18.42±8.30fmol/mgprotein和11.24±5.44fmol/mgprotein,(P<0.01);胞核PR表达癌组织高于正常组织,分别为9.36±5.90fmol/mgprotein和7.84±7.41fmol/mgprotein,(P<0.05)。癌组织胞浆及胞核的ER表达与PR表达呈正相关,(P<0.01);正常结直肠组织胞浆ER表达与PR表达呈正相关,(P<0.01),而胞核内两者不相关,(P>0.05)。结直肠癌组织ER表达与患者年龄相关,大于45?

青风藤醇提液对关节炎大鼠关节骨破坏的影响

目的观察青风藤醇提液对胶原诱导关节炎(CIA)大鼠关节破坏的影响,初步研究其作用机制。方法雌性SD大鼠32只,随机分为对照组、模型组和青风藤治疗组,模型组和青风藤治疗组制备CIA模型。青风藤治疗组灌胃青风藤醇提液,模型组与对照组灌胃等量0.9%氯化钠溶液。每3 d行关节评分1次,ELISA法检测血清白细胞介素-17(IL-17)、核因子κB(NF-κB)配位体受体活化剂(RANKL)、可溶性蛋白骨保护素(OPG),观察大鼠后足病理组织切片。结果关节评分模型组显著高于青风藤治疗组(P<0.01);3组大鼠IL-17表达量均差异有统计学意义(P<0.05),IL-17水平青风藤治疗组较模型组低(P<0.05),较对照组高(P<0.01)。3组大鼠血清RANKL、OPG水平及RANKL/OPG值均差异有统计学意义(P<0.01),大鼠血清RANKL水平青风藤治疗组较模型组低(P<0.05),OPG水平青风藤治疗组较模型组高(P<0.05)。RANKL/OPG青风藤治疗组低于模型组,高于对照组;病理结果显示,大鼠关节骨破坏程度青风藤治疗组明显低于模型组。结论青风藤醇提取液能降低CIA大鼠血清IL-17、RANKL水平,升高OPG水平,降低RANKL/OPG,抑制破骨细胞生成,发挥抑制关节骨破坏作用。

青风藤醇洗脱液与青藤碱治疗关节炎大鼠比较研究

观察青风藤大孔树脂95%乙醇洗脱物对大鼠胶原诱导性关节炎(CIA)体内相关炎症因子的表达,比较青风藤醇洗脱物与青藤碱单体对类风湿性关节炎的疗效。建立大鼠CIA模型进行关节评分,持续给药,抽取各组大鼠血样样本,ELISA法测定各组大鼠血清中IL-17、RANKL、OPG水平。青藤碱能够提高OPG水平,而青风藤95%乙醇洗脱物对RANKL、IL-17分泌的抑制作用优于青藤碱,提示青风藤95%乙醇洗脱物中可能存在其他青藤碱类似物,亦能发挥抗炎抗骨破坏的作用,青风藤95%乙醇洗脱物成分分析和具体机制仍有待进一步研究。

屋尘螨提取物激活气道上皮细胞EphA2-STAT3/p38 MAPK信号通路介导气道炎症

目的探讨受体酪氨酸激酶肝配蛋白A型受体2(EphA2)对屋尘螨提取物(HDM)诱导气道上皮细胞表达炎症细胞因子的作用及其机制。方法用EphA2小干扰RNA(siRNA)转染气道上皮细胞株16HBE细胞建立EphA2敲减的细胞模型,HDM刺激16HBE细胞后,采用实时定量PCR检测EphA2、白细胞介素6(IL-6)和IL-8 mRNA水平,细胞因子微球检测技术(CBA)检测IL-6、 IL-8、 IL-17A、 IL-17F和肿瘤坏死因子α(TNF-α)蛋白水平;Western blot法检测EphA2、磷酸化的EphA2(p-EphA2)、信号转导子与转录激活子3(STAT3)、磷酸化的STAT3(p-STAT3)、 p38丝裂原激活蛋白激酶(p38 MAPK)、磷酸化的p38 MAPK(p-p38 MAPK)、核因子κB p65(NF-κB p65)及磷酸化的NF-κB p65(p-NF-κB p65)蛋白水平。STAT3抑制剂Stattic联合HDM或p38 MAPK抑制剂SB203580联合HDM刺激16HBE细胞,实时定量PCR检测IL-6和IL-8 mRNA水平、 CBA检测IL-6和IL-8蛋白水平。结果敲低EphA2显著抑制HDM诱导16HBE细胞表达IL-6和IL-8,降低STAT3及p38 MAPK的总蛋白及磷酸化水平,但对NF-κB p65总蛋白及磷酸化水平均无明显影响。Stattic抑制STAT3表达及活化后,显著抑制HDM诱导16HBE细胞中IL-6和IL-8 mRNA和蛋白表达;而SB203580抑制p38 MAPK信号通路后,抑制HDM诱导16HBE细胞中IL-6和IL-8 mRNA表达水平,而对其蛋白水平无影响。结论 HDM通过激活EphA2-STAT3/p38 MAPK通路诱导16HBE细胞表达IL-6和IL-8参与气道炎症。

肝配蛋白B2在牙龈卟啉单胞菌诱导单核细胞黏附人脐静脉内皮细胞中的作用

目的 检测肝配蛋白B2 （erythropoietin producing hepatomocellular receptor interacting protein B2,Ephrin B2）及其受体在单核细胞THP-1黏附人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cell,HUVEC）中的作用,揭示牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis,Pg）感染增强THP-1黏附HUVEC的分子机制.方法 应用厌氧罐培养Pg,以感染复数1∶100感染人单核细胞株THP-1,感染8和24 h后,收集部分样品分别用于检测THP-1细胞Ephrin B2及其受体表达水平的变化;其余样品与转染空载体或过表达Ephrin B2的HUVEC细胞共培养,用实时荧光定量和蛋白质印迹法检测HUVEC细胞Ephrin B2的表达水平,并观察Ephrin B2对THP-1与HUVEC黏附的影响.结果 Pg感染24 h后,THP-1细胞Ephrin B2受体EphB3、EphB4和EphA4的mRNA表达水平分别提高至5.169±0.152、11.040± 1.195和4.976±0.122,与未感染对照组（结果数据为1）相比差异均有统计学意义（P＜0.01）;与经Pg感染的THP-1共培养后,HUVEC细胞Ephrin B2的表达提高至8.938±0.962,与未感染对照组相比差异均有统计学意义（P=0.008）;不经过感染,HUVEC直接过表达Ephrin B2后,THP-1对HUVEC黏附性显著增加.结论 感染Pg的THP-1黏附HUVEC的数量增多与Ephrin B2及其受体的相互作用有关,提示动脉血管内皮细胞特异性表达的Ephrin B2分子参与动脉粥样硬化的发生.

浸润性乳腺癌中EphA2基因启动子区DNA低甲基化及与细胞焦亡的相关性

目的:探讨浸润性乳腺癌中肝配蛋白A型受体2(ephrin A receptor 2,EphA2)表达及其启动子区DNA低甲基化与细胞焦亡发生的相关性。方法:应用免疫荧光技术和蛋白质印迹法检测42例乳腺癌患者正常乳腺组织、癌旁组织和癌组织中EphA2的表达情况;采用免疫荧光技术和蛋白质印迹法检验细胞焦亡相关蛋白核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白3(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3)的表达水平;采用蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白Caspase 1和炎性细胞因子白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)的表达水平;应用巢氏甲基化特异性PCR(nested methylation-specific PCR,nMS-PCR)检验EphA 2基因启动子区DNA甲基化水平;采用蛋白质印迹法测验DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)和DNA甲基转移酶3a(DNA methyltransferase 3a,DNMT3a)蛋白表达水平;应用Pearson相关系数分别对患者癌组织中EphA2的蛋白表达和甲基化水平与NLRP3、Caspase 1、IL-1β、DNMT1和DNMT3a进行相关性分析。结果:与正常乳腺组织及癌旁组织相比,乳腺癌组中EphA2蛋白表达水平明显升高(P均<0.01),NLRP3、Caspase 1和IL-1β的蛋白表达水平明显降低(P均<0.05);同时与正常乳腺组织及癌旁组织相比,乳腺癌组织中EphA2基因启动子区DNA甲基化水平明显降低(P均<0.05),DNMT3a蛋白表达明显降低(P<0.01,P<0.05),而DNMT1蛋白表达的差异未有统计学意义;Pearson相关性分析结果显示,EphA2蛋白与NLRP3蛋白(r=-0.6512,P<0.05)、Caspase 1蛋白(r=-0.5712,P<0.05)、IL-1蛋白(r=-0.6546,P<0.05)和DNMT3a蛋白(r=-0.5374,P<0.05)的表达水平均呈负相关性;而EphA 2基因的甲基化水平与NLRP3蛋白(r=0.6341,P=0.0268)、Caspase 1蛋白(r=0.6728,P=0.0165)、IL-1β蛋白(r=0.6940,P=0.0123)和DNMT3a蛋白(r=0.6871,P=0.0136)的表达水平呈正相关性。结论:乳腺癌组织中EphA2蛋白的表达水平上调并与细胞焦亡呈负相关性;DNMT3a可能参与了EphA 2基因启动子区发生DNA低甲基化的过程。

单分子尺度下的免疫调控和干预策略

癌症免疫疗法通过提高患者自身免疫力来识别和杀伤肿瘤目标,涉及到免疫T细胞和其他细胞之间(肿瘤或抗原呈递细胞)的直接相互作用。受周围微观环境热涨落的影响,精准探测这种力学信号是免疫疗法面临的重要挑战。单分子技术具备高时空分辨的优势,能够克服环境热涨落的影响,通过实时测量单个生物大分子的时空位置、结构转变、能量交换和信息流动等定量参数来刻画生物大分子的动力学行为。将单分子技术应用到免疫疗法相关的研究中,精准测量免疫疗法涉及的受体—配体的力学相互作用和自身动态结构,将为免疫疗法的发展提供单分子尺度的思考和见解,实现物理学和免疫学的交叉融合发展。