亲和色谱仿生配基的筛选和设计

利用选择性好、稳定性高、价格低廉的仿生配基作为亲和色谱的功能基团,实现对目的蛋白质的亲和分离,可以弥补常规的单克隆抗体和其他天然蛋白质配基在价格、稳定性方面的不足,从而拓展亲和色谱技术的应用范围。本文综述了亲和色谱仿生配基在筛选和设计方面的研究进展,重点介绍了组合方法和基于结构的仿生配基的设计及其应用。

高效液相色谱-质谱联用法测定喉症丸中华蟾酥毒基和脂蟾毒配基

建立高效液相色谱-质谱联用法(HPLC-MS)测定喉症丸中华蟾酥毒基和脂蟾毒配基含量的方法。采用HPLC-MS正离子多反应监测模式进行测定,色谱柱为Thermo Hypersil BDS C18(250.0 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-1%乙酸溶液(38∶62),流速为0.5 mL/min,检测波长为296 nm,柱温为20℃。质谱条件:鞘气流速40 arb,辅气流速5 arb,喷雾电压4.5 kV,毛细管温度300℃。结果显示,华蟾酥毒基和脂蟾毒配基的检测质量浓度线性范围均为50~300μg/mL(r=0.9992),重复性试验、精密度试验、稳定性(12 h)试验的RSD均小于1.00%(n=5或n=6),加样回收率分别为101.8%(RSD为2.61%,n=6)和100.9%(RSD为3.20%,n=6)。该方法灵敏度高、重复性好,能准确测定喉症丸中华蟾酥毒基和脂蟾毒配基的含量,可用于喉症丸的质量控制。

新型双配基AChEI美普色胺改善东莨菪碱致小鼠学习记忆功能障碍的研究

目的探究左旋美普他酚与5-羟色胺的杂合物美普色胺[(-)-Mep-S]对东莨菪碱诱发小鼠学习记忆功能障碍的改善作用。方法应用分子对接技术分析(-)-Mep-S与hAChE之间的结合;利用体内外实验观察(-)-Mep-S对AChE活性的影响;通过Morris水迷宫行为学实验分析小鼠学习记忆能力;应用旷场试验检测(-)-Mep-S对小鼠运动能力影响。结果分子对接分析显示,(-)-Mep-S与hAChE的催化位点和外周阴离子位点存在较强结合。(-)-Mep-S明显抑制小鼠前脑来源和人SH-SY5Y细胞来源的AChE活性,其IC50值均低于阳性对照药利斯的明。在水迷宫实验中,(-)-Mep-S(2.5 mg/kg)治疗的小鼠在第4天的上台潜伏期显著缩短(P<0.05),且在第5天的空间探索试验中,小鼠在靶象限的游泳距离百分比和时间百分比显著升高(P<0.05);而0.5 mg/kg剂量下(-)-Mep-S未能表现出明显作用;(-)-Mep-S能显著抑制东莨菪碱所致的小鼠前脑AChE活性增强(P<0.05)。另外,旷场试验提示(-)-Mep-S改善东莨菪碱所致小鼠学习记忆功能障碍的作用并不是由于运动能力的差异所造成的。结论(-)-Mep-S能有效抑制AChE活性,从而改善东莨菪碱诱发小鼠学习记忆功能障碍。

蟾皮中蟾毒配基类成分的分离与鉴定

目的研究中华大蟾蜍(Bufo bufo gargarizansCantor)皮中的蟾毒配基类成分。方法利用反复硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱、半制备高效液相色谱、重结晶等手段分离纯化蟾皮中的蟾毒配基类成分,根据化合物的理化性质和各种波谱学数据鉴定其化学结构。结果分离得到11个蟾毒配基类化合物,分别鉴定为脂蟾毒配基(resibufogenin,1)、华蟾毒精(cinobufagin,2)、蟾毒灵(bufalin,3)、远华蟾毒精(telocinobufagin,4)、蟾毒它灵(bufotalin,5)、去乙酰华蟾毒它灵(desace-tylcinobufotalin,6)、嚏根草苷元(hellebrigenin,7)、沙蟾毒精(arenobufagin,8)、日蟾毒它灵(gam-abufotalin,9)、11β-羟基脂蟾毒配基(11β-hydroxylresibufogenin,10)、华蟾毒它灵(cinobufotalin,11)。结论化合物10和11为首次从中华大蟾蜍皮中分离得到。

蟾酥中3种蟾毒配基组合物的表观溶解度和表观油水分配系数的测定

目的:测定蟾酥中3种蟾毒配基组合物的表观溶解度和表观油水分配系数。方法:采用高效液相色谱法测定了蟾酥中3种蟾毒配基组合物中RBG,CBG,BL的表观溶解度,采用摇瓶法测定了RBG,CBG,BL的表观油水分配系数。结果:37℃,pH 7.0时,蟾酥中3种蟾毒配基组合物中RBG,CBG,BL的表观溶解度均为最大值,分别是76.29,51.85,32.76μg.mL-1,总溶解度为160.9μg.mL-1。在偏酸和偏碱性条件下,三者均有不同程度的降解。RBG,CBG,BL在不同pH条件下各自logP值差别不大,pH对RBG,CBG,BL的油水分配系数影响不显著,三者的油水分配系数均较大,为典型的疏水性产物,三者的疏水性大小顺序为RBG>BL>CBG。结论:蟾酥中3种蟾毒配基组合物中RBG,CBG,BL的水溶性差,疏水性极强,应考虑加入表面活性剂增溶,以利于注射制剂的成型。

RP-HPLC法测定梅花点舌丸中脂蟾毒配基、华蟾毒配基的含量

目的 建立梅花点舌丸中脂蟾毒配基、华蟾毒配基的含量测定方法。方法 采用反相高效液相色谱法 ,使用 C1 8柱 ,乙腈 - 0 .5 % KH2 PO4 溶液 ( 5 0∶ 5 0 )为流动相 ,检测波长 :2 96nm。结果 此方法线性关系良好 ,脂蟾毒配基的平均加样回收率为 97.4 0 % ,RSD为 2 .2 2 %。华蟾毒配基的平均加样回收率为 97.78% ,RSD为 2 .63 %。结论方法简便、可靠 ,分离度较好 ,结果稳定 。

反相高效液相色谱法测定梅花点舌丸中酯蟾毒配基、华蟾毒配基的含量

目的 :建立测定梅花点舌丸中酯蟾毒配基、华蟾毒配基的反相高效液相色谱法。方法 :采用KromasilC18 柱 ,流动相为乙腈∶0 5 %KH2PO4 溶液 (50∶50) ,检测波长为296nm。结果 :该方法线形关系良好 ,酯蟾毒配基的平均加样回收率为97 40 % ,RSD为2 2 % ;华蟾毒配基的平均加样回收率为97 78 % ,RSD为2 6 %。结论 :方法简便可靠 ,分离度较好 ,可用于梅花点舌丸的质量控制。

化学修饰寡核苷酸在核酸配基扩增技术中的应用

核酸配基扩增技术（SELEX）可从极大容量的随机寡核苷酸文库中筛选得到与靶分子高特异性和高亲和力结合的核酸配基。对寡核苷酸进行化学修饰,可以提高核酸配基的稳定性,增加其功能多样性及生物利用度。SELEX在基础研究、诊断和治疗试剂的研制及药物筛选等领域有广泛用途。

薯蓣皂苷配基含量的酶法分析

提供了一种分析薯蓣皂苷配基含量的新方法——酶分析法,其测定结果与一般重量法进行了比较,并对酶法结晶物的结构进行了分析鉴定。

胰腺组织生长抑素受体放射配基测定的影响因素及处理对策

研究背景:胰腺组织生长抑素受体（SS）的测定常因丰富的胰酶降解等影响因素难以成功。作者以125I-Tyr11-SS-14为放射标记配基、Tyr11-SS-14为非标记配基,测定SD大鼠胰腺组织生长抑素受体,观察生长抑素受体测定过程的影响因素,并探讨处理解决的对策。方法:参照夏宗勤等报道的受体放射配基竟争饱和结合试验方法。

RP-HPLC法测定梅花点舌丸中酯蟾毒配基和华蟾毒配基的含量

目的:建立梅花点舌丸中酯蟾毒配基、华蟾毒配基的含量测定方法。方法:采用反相高效液相色谱法,使用C_(18)柱,乙腈-0.5％KH_2PO_4溶液(50:50)为流动相,检测波长:296nm。结果:线性关系良好,酯蟾毒配基的平均加样回收率为97.4％,RSD为2.3％。华蟾毒配基的平均加样回收率为97.8％,RSD为2.7％。结论:方法简便可靠,分离度较好,结果稳定,可用于梅花点舌丸的质量控制。

抗体新时代——核酸多功能配基

抗体在人类疾病诊断和治疗等方面做出了巨大的贡献,但筛选周期长,成本高,分子量较大,在应用中受到一定的局限.tRNA为研制一种多功能核酸配基分子提供了重要的启发和佐证.SELEX技术筛选的核酸配基具有筛选周期短、特异性强、分子量小等优点;利用核酸配基研制的核酸多功能配基,与传统的抗体相比,具有不同功能配基组装方便、搭配灵活、功能多样、实用性强等优势,预计在生物医学领域具有广泛的应用前景.

中华蜜蜂化学感受蛋白AcerCSP3的配基结合功能分析

为研究中华蜜蜂Apis cerana cerana化学感受蛋白AcerCSP3在化学感受系统中的生理功能,本实验通过对AcerCSP3进行原核表达、分离纯化后,利用荧光法研究了体外重组AcerCSP3与1-NPN以及候选化学配基的结合特征。Scatchard方程显示AcerCSP3与1-NPN的解离常数KD为8.29μmol/L,结合位点数约等于1。在候选配基竞争1-NPN与AcerCSP3结合的实验中,5种配基均能在200μmol/L浓度下使1-NPN的相对荧光强度下降至50%以下,其中β-紫罗兰酮甚至能使1-NPN的相对荧光强度下降至10%左右,表明候选配基均与AcerCSP3有较强的结合能力,而3,4-二甲基苯甲醛与中蜂AcerCSP3的结合能力最强,KD达到18.77μmol/L。本研究所用化学配基均为植物花与叶片的挥发性的次生代谢产物,表明AcerCSP3可能作为中蜂化学感受系统的一部分,在其搜寻某些植物花粉蜜源时作为气味分子运载体发挥一定的作用。

雷公藤内酯及蟾毒配基类化合物的生物转化研究进展

The latest results from our research group in the biotransformation of triptolides and bufadienolides were reviewed. The trends in the development of biotransformation in the future were also briefly discussed.

亲和膜配基的结构和密度对胆红素吸附的影响

体内存在过量的胆红素会引起神经系统疾病,严重时危及生命,常用循环吸附法去除,但是多数胆红素与白蛋白形成复合物,难于拆分,导致血清胆红素的吸附去除率降低。以醋酸纤维素/聚乙烯基亚胺共混亲和膜(CA/PEI膜)为基质,通过戊二醛活化,引入间隔臂,固载具有一定特异性吸附的5种有机胺和8种氨基酸配基,强化血清胆红素的去除效果。研究结果表明,虽然改性膜的伯胺基含量仅为CA/PEI膜的1/3,但是因间隔臂的引入和配基特异性的增强,4种改性膜的胆红素吸附量提高了100%以上,并且提高了胆红素相对于蛋白的吸附选择性。增加胺基和疏水结构有利于胆红素的吸附;羧基不利于胆红素吸附;胆红素吸附还受到配基密度和空间位阻等诸多因素的影响。苯环等空间位阻较大的配基,不利于实际胆红素的吸附,且无法通过提高配基密度而提高其改性膜的胆红素吸附量,而含直链胺配基的己二胺(3-HMD)改性膜的胆红素吸附量随配基密度的提高而提高。

联合使用干细胞因子、FLT3配基与白介素2,7,15体外扩增人脐血来源CIK/NK细胞

通过干细胞因子 (SCF)、FLT3配基 (FL)联合白介素 (IL) 2 ,7,15等的不同组合体系体外扩增人脐血来源的CIK NK细胞 (CB CIK NK) ,探讨不同培养方式对CB CIK NK细胞诱导、扩增产率的影响。按诱导扩增体系的不同分 3组 :A组 (SCF +IL2 +IL7+IL15 ) ,B组 (SCF +FL +IL2 +IL7+IL15 )和C组 (IL2 +IL7+IL15 ,对照组 ) ,培养 2 1天 ,检测CD3+ CD5 6 + CIK细胞、CD3- CD5 6 + NK细胞比例和扩增倍数。结果表明 :经 2 1天培养 ,A ,B及C组CIK细胞比例分别为 (19.84± 2 .93) %、(2 6 .2 0± 4 .0 5 ) %及 (2 4 .0 3± 4 .99) % ;而NK细胞的比例A、B及C组比例分别为 (4 9.6 0± 1.4 0 ) %、(5 1.16± 6 .4 5 ) %及 (30 .85± 8.12 ) %。含SCF +FL的B组扩增效率最高 ,其中CIK细胞的扩增倍数由对照组 (C组 )的 (5 75 81± 2 2 1.72 )倍增加至 (796 .0 9± 2 78.4 7)倍 (最高为 1313倍 ) ;NK细胞由对照组 (C组 )的 (30 .39± 14 .4 7)倍增加至 (6 5 .85± 30 .83)倍 (最高为 12 1.0 6倍 )。结论 :通过合适的细胞因子组合可以同时扩增CB来源的CIK NK细胞 ;联合诱导、扩增CB CIK NK细胞以采用含SCF +FL +IL2 +IL7+IL15的培养体系为佳。

脂蟾毒配基通过线粒体途径诱导人肝癌Bel-7402细胞凋亡的研究

目的:探讨中药蟾酥主要成份之一脂蟾毒配基(Resibufogenin,RG)诱导人肝癌Bel-7402细胞凋亡的作用机制。方法:体外培养Bel-7402细胞,采用酸性磷酸酶法检测RG对细胞增殖抑制作用;吖啶橙荧光染色观察细胞形态变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率及线粒体膜电位(△ψm)变化;WesternBlot检测与细胞凋亡相关蛋白表达的变化。结果:RG显著抑制细胞增殖,其作用24、48、72h的IC50分别为3.8、1.8、1.2"mol/L;经10"mol/LRG处理24h后,癌细胞出现凋亡的形态变化,其凋亡率明显高于对照组细胞;RG引起△ψm下降,释放入胞质中的细胞色素c(cytochromec,CytC)增多,促进Caspase-3蛋白活化,抑制Bcl-2蛋白表达,诱导细胞凋亡。结论:RG诱导人肝癌Bel-7402细胞凋亡,其诱导凋亡作用可能通过线粒体通路实现。

含RGD的配基与其受体相互作用研究进展

RGD配基与其受体相互作用目前已成为一个研究热点 ,许多粘附蛋白是通过RGD序列与其整合素结合的 ,它参与许多生物学过程 .文章主要就RGD序列肽与糖蛋白Ⅱb/Ⅲa的相互作用及其在抑制血小板聚集上进行了较为全面的综述 。

抗体Fc片段特异寡核苷酸配基介导的实时定量免疫PCR

目的:利用小鼠IgG抗体Fc片段高特异、高亲和寡核苷酸配基,构建实时定量免疫PCR检测方法,提高抗体检测的灵敏度。方法:用SELEX技术从随机寡核苷酸文库中筛选抗体Fc片段特异寡核苷酸配基,设计合成信标序列,通过不对称PCR法,制备IgG Fc片段的核酸信标配基分子;32P标记核酸信标配基,采用琼脂糖凝胶阻滞双显色法鉴定核酸信标配基与IgG Fc片段结合的亲和力和特异性;制备IgG Fc特异性寡核苷酸信标配基-抗体复合检测分子,构建小鼠IgG Fc片段特异核酸信标配基介导的实时定量免疫PCR检测方法。结果:制备了IgG Fc片段的核酸信标配基分子;凝胶阻滞放射自显影和考马斯亮蓝二次染色结果显示该核酸信标配基分子与IgG Fc片段具有高度亲和力和活性,而且只与非变性IgG结合,与变性IgG不结合;IgG Fc片段的特异核酸信标配基与IgG结合形成复合检测分子,有效完成了信号传递和实时定量PCR信号放大过程。结论:初步建立了一种全新的核酸信标配基介导的免疫PCR检测方法,可有效提高现有IgG类抗体免疫检测的灵敏度和特异性。

生物胺受体配基结合区域及其位点的预测

生物胺受体被认为是一类重要的药物靶标,用生物信息学手段寻找它的配基结合位点并分析其功能,对于药物设计具有重要的指导意义。从整体上结合可变性、疏水性和保守性构建了受体的2D螺旋横切面模型,预测出其可能的配基结合区Ⅰ、Ⅱ,其中TM3、TM4以及TM7在配基结合中起关键作用,E-Ⅱ环也参与了配基结合这一过程,这是对以往普遍认为只有TM参与配基结合的延伸。从局部上寻找了生物胺受体及其子受体的motif,提出了父家族可变子家族保守motif概念,即父家族可变区中出现的子家族保守的motif。最后结合整体与局部分析结果分析了各motif的功能,预测了行使配基结合功能的motif及其相应位点,结果证明与突变实验结果有很好的吻合度。