大鼠肺间质巨噬细胞CCK受体的结合特性

目的:观察大鼠肺间质巨噬细胞(PIMs)胆囊收缩素(CCK)受体的表达亚型和结合特性。方法:用酶消化法结合肺泡耗竭灌洗和肺循环灌洗技术分离纯化大鼠PIMs,超速离心法提取细胞膜,与[~3H]标记的硫酸化CCK-8([~3H]-CCK-8S)进行放射配基结合实验,用非标记的CCK-8S、CCK-A受体(CCK-AR)特异性拮抗剂CR1409及CCK-B受体(CCK-BR)特异性拮抗剂CR2945进行竞争抑制实验,观察配体受体结合的特异性及CCK受体表达亚型,观察孵育时间和温度对特异性结合的影响。结果:正常大鼠PIMs未能检出特异性结合,静脉注射脂多糖(LPS)48h出现特异性结合,且对孵育时间与温度有依赖性。经Scatchard分析,平衡解离常数(Kd)值为:(0.68±0.28)nmol·L^(-1),最大结合容量(Bmax)值为(32.50±2.70)pmol·g^(-1)蛋白。通过竞争抑制实验,[~3H]-CCK-8S与膜的结合可被CCK-8S、CR1409、CR2945所抑制,其IC_(50)值分别为:(3.20±1.13)nmol·L^(-1),(0.19±0.06)μmol·L^(-1)和(2.30±0.80)nmol·L^(-1)。结论:大鼠PIMs存在CCK-A和CCK-B两种受体亚型,为CCK对生理及病理条件下巨噬细胞发挥效应提供了直接的结构依据。

一氧化氮和M受体在艾灸治疗实验性豚鼠哮喘病中的作用及其相互关系的研究

目的 :观察艾灸治疗实验性豚鼠哮喘病中NO(一氧化氮 )与M受体的相互关系。方法 :采用 50只 2 50～ 3 0 0 g的雄性豚鼠 ,随机分成 :A 健康对照组 ,B 实验哮喘组 ,C 哮喘 +艾灸组 ,D 哮喘 +L NAME组 ,E 哮喘 +L NAME(L 精氨酸甲酯 ) +艾灸组共五组 ,用放射性配基结合实验的方法测定肺组织细胞膜M受体Bmax和平衡离解常数 ,用NO检测试剂盒测各组豚鼠BALF(支气管肺泡灌洗液 )、肺组织、血中NO的含量。结果 :与健康组相比 ,哮喘组豚鼠BALF中NO含量升高 ,肺细胞膜制剂对3H QNB结合的Bmax上升 ;与哮喘组相比 ,哮喘 +艾灸组及哮喘 +L NAME +艾灸组豚鼠BALF中NO含量下降 ,肺细胞膜制剂对3H QNB结合的Bmax降低 ,哮喘 +L NAME组豚鼠BALF中NO含量降低 ,而肺细胞膜制剂对3H QNB结合的Bmax无明显变化。结论 :艾灸“肺俞”等穴可降低哮喘引起的肺组织和肺泡灌洗液中NO水平及细胞膜Bmax的增加 。

一氧化氮和β受体在艾灸治疗实验性豚鼠哮喘病中的作用及其相互关系的研究

为观察艾灸在治疗实验性豚鼠哮喘病中NO(一氧化氮 )与β受体的相互关系 ,采用 5 0只 2 5 0～ 30 0 g雄性豚鼠 ,随机分成 :健康对照组、实验哮喘组、哮喘 +艾灸组、哮喘 +L NAME(L 精氨酸甲酯 )组、哮喘 +L NAME +艾灸组共五组 ,用放射性配基结合实验的方法测定肺组织细胞膜β受体Bmax和平衡离解常数 ,用NO检测试剂盒测各组豚鼠BALF(支气管肺泡灌洗液 )、肺组织、血中NO的含量。结果 :与健康组相比 ,哮喘组豚鼠BALF中NO含量升高 ,而肺细胞膜制剂对3H DHA结合的Bmax下降 ;与哮喘组相比 ,哮喘 +艾灸组豚鼠BALF中NO含量下降 ,而肺细胞膜制剂对3H DHA结合的Bmax上升 ;与哮喘组相比 ,哮喘 +L NAME组豚鼠BALF中NO含量降低 ,而肺细胞膜制剂对3H DHA结合的Bmax无明显变化 ;与哮喘组相比 ,哮喘 +L NAME +艾灸组豚鼠BALF中NO含量下降 ,而肺细胞膜制剂对3H DHA结合的Bmax增加。表明哮喘豚鼠及对其艾灸治疗过程中 ,NO与β受体Bmax呈负相关 ,而L NAME对β受体Bmax无明显影响。

红花黄色素及羟基红花黄色素A对Pindolol-β受体结合力的影响

目的:观察红花黄色素(SY)和羟基红花黄色素A(HSYA)对β受体结合力的影响。方法:以放射配基受体结合实验观察SY及HSYA拮抗125Ⅰ-s-(-)-Pindolol与大鼠心室肌细胞膜β受体特异性结合的作用。结果:SY及HSYA抑制125Ⅰ-s-(-)-Pindolol与大鼠心室肌细胞膜β受体的特异性结合具量效关系,SY的IC50为(17.5±1.3)g/L,KiSY值为12.9g/L;HSYA的IC50为(35.6±1.4)mmol/L,KiHSYA值为26.4mmol/L。结论:SY及HSYA对Pindolol-β受体结合力有一定的影响。

补脾方药对脾虚大鼠壁细胞胃泌素受体及细胞内[Ca^(2+)]i作用的观察

目的:观察脾虚模型大鼠壁细胞胃泌素受体及受体后信号细胞内钙离子的变化,并观察补脾方药党参、白术、补中益气汤对其的影响。方法:大鼠壁细胞采用EDTA-Pronase酶法消化而来。胃泌素受体检测采用放射配基结合实验,壁细胞内[Ca2+]i变化测定采用双波长荧光法。结果:大黄脾虚模型大鼠壁细胞胃泌素受体结合位点数有显著降低,经补脾方药治疗后有所恢复;同时脾虚模型壁细胞内静息钙离子浓度明显低于正常组,经胃泌素刺激后壁细胞内[Ca2+]i有所升高,且脾虚模型升高幅度明显高于正常组,经治疗后此状态有所恢复,但无统计学意义。结论:脾虚证可能与胃泌素受体低表达相关,且壁细胞内钙离子处于低代谢状态,但对于胃泌素刺激的反应性增强,进而可能导致酸分泌敏感性相对增高,胃黏膜易损性增强。补脾方药对其有一定的调节作用。

脾虚大鼠壁细胞胃泌素受体研究及黄芪作用观察

目的 :观察脾虚大鼠胃壁细胞胃泌素受体结合位点数的变化以及中药黄芪注射液对其的调控作用。方法 :脾虚模型采用利血平方法 ,治疗组给予黄芪注射液 ;大鼠胃黏膜壁细胞分离与纯化采用Lewin胃袋法及Percoll密度梯度纯化 ;壁细胞胃泌素受体结合位点数 (sites cell)的检测采用放射配基结合方法。结果 :利血平脾虚大鼠壁细胞胃泌素受体结合位点数为 2 71 2± 91 8,明显低于正常组 (6 19 1± 30 4 5 ,P <0 0 5 )。中药黄芪注射液对其有显著上调作用 (5 45 2± 2 0 5 3,P<0 0 1)。结论 :利血平脾虚大鼠胃壁细胞胃泌素受体结合位点数下降 ,中药黄芪注射液对其有明显上调作用 ,胃泌素受体与脾虚证关系密切。

4种临床常见选择性5-羟色胺再摄取抑制剂对5-羟色胺转运体的抑制作用比较

目的选择性5-羟色胺(5-HT)再摄取抑制剂(selective serotonin reuptake inhibitors,SSRIs)是目前临床应用最广泛的新型抗抑郁药物。通过考察氟西汀、帕罗西汀、西酞普兰和舍曲林对5-HT转运体(serotonin transporter,SERT)的抑制作用的强弱,为临床选择药物提供实验依据。方法利用大鼠脑突触体和大鼠血小板SERT,通过放射配基实验,观察在SSRIs存在下SERT对[3H]5-HT的摄取变化,获得IC50值,比较氟西汀、帕罗西汀、西酞普兰和舍曲林对SERT抑制作用的强弱。结果大鼠脑组织突触体和血小板SERT体外放射配基结合实验显示,帕罗西汀、氟西汀、西酞普兰和舍曲林对SERT抑制作用的IC50(nmol.L-1)分别为(血小板vs突触体):(1.26vs1.39)、(44.7vs35.5)、(10.5vs16.2)和(6.64vs7.09)。结论4种SSRIs对SERT的抑制作用都很强,IC50在nmol.L-1数量级。抑制作用的强弱依次为帕罗西汀>舍曲林>西酞普兰>氟西汀。

补阳还五汤大鼠含药血清对家兔血小板PAF受体活性的影响

目的探讨补阳还五汤大鼠含药血清对家兔血小板PAF受体活性的影响。方法应用中药复方血清药理学研究方法,制备大鼠补阳还五汤含药血清,应用放射配基受体结合法观察大鼠含药血清对家兔血小板PAF受体活性的影响。结果补阳还五汤高、低剂量组,金纳多组和蒸馏水组对3H-PAF与家兔洗涤血小板PAF受体特异结合抑制率分别为51.4±15.7、44.3±11.3、52.2±12.2、34.3±20.3,各组间比较差异虽无统计学意义(P﹥0.05),但各用药组比蒸馏水组抑制作用分别提高了33.26%、22.57%、34.29%,其补阳还五汤高剂量组和金纳多组的抑制作用与蒸馏水组比较,统计量接近显著性水平(t=2.3082,t=2.6181,t24,0.05=2.8780)。结论补阳还五汤大鼠含药血清对家兔血小板PAF受体活性影响差异虽无统计学意义,但具有一定的抑制作用趋势,可能与其样本量较小或实验动物种属有关。

听源性惊厥大鼠惊厥后NMDA受体NR1亚基蛋白表达和功能研究

目的 :探讨惊厥后大脑皮质N 甲基 D 门冬氨酸 (NMDA)受体亚基NR1蛋白表达及其功能改变与癫痫发病机制的关系。方法 :P77PMC大鼠按惊厥后不同时间随机分为 6组 ,免疫组化每组 6个样本 ,配基结合实验每组 5个样本 ,制备大脑冰冻切片和大脑皮质突触膜。利用免疫组化技术 ,观察听源性癫痫易感大鼠P77PMC惊厥后不同时间NR1亚基蛋白的表达 ,应用配基结合实验观察听源性惊厥大鼠P77PMC惊厥后大脑皮质突触膜对3H MK80 1的结合改变 ,以及NMDA受体激动剂对其结合的影响。结果 :大脑皮质在惊厥后 4hNR1蛋白表达即开始增加 ,2 4～48h达高峰。反应体系中无任何NMDA受体激动剂时 ,惊厥后大脑皮质突触膜对 3H MK80 1的结合有增加趋势 ,但差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ;当反应液中加入NMDA受体激动剂时 ,惊厥后大脑皮质突触膜对 3H MK80 1的结合明显增加 ,除惊厥后 4h与正常对照组比较差异无显著性外 ,其他惊厥后各时间点与正常对照组比较差异均有显著性(P <0 0 1)。结论 :听源性惊厥大鼠P77PMC惊厥后 ,大脑皮质NMDA受体NR1亚基蛋白表达增加 ,NMDA受体对其激动剂的敏感性增加 ,提示NR1亚基参与了P77PMC大鼠惊厥的发生与发展 ;

姜黄素对人过氧化物酶体增殖物激活受体γ_1激活作用的研究

目的测定姜黄素(CUR)与人过氧化物酶体增殖物激活受体γ_1(h PPARγ_1)的亲和力和内在活性,确定CUR是否为h PPARγ_1的天然配体。方法通过放射性标记配基竞争结合实验和反式激活报告基因分别检测CUR与h PPARγ_1的结合活性和功能活性。结果 CUR与h PPARγ_1结合的半数抑制浓度(IC_(50))为(8.82±0.74)μmol/L,抑制常数(Ki)为0.72μmol/L;CUR对h PPARγ_1的半数有效浓度(EC_(50))为7.3μmol/L,最大活性倍数(E_(max))为43.3。结论 CUR不仅能与h PPARγ_1受体结合,而且能激活h PPARγ_1,可能是h PPARγ_1的天然配体。