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利用CRISPR/Cas9双元转基因体系探究家蚕配子生成素结合蛋白基因Bmggnbp2的功能 被引量:1
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作者 刘洪锷 汪丽枝 +4 位作者 刘祖莲 衣玫妍 冯启理 黄勇平 相辉 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期309-317,共9页
【目的】配子生成素结合蛋白2(gametogenetin binding protein 2,ggnbp2)在哺乳动物配子发生等生殖相关过程中发挥重要作用。本研究以家蚕Bombyx mori为模型,探究驯化基因ggnbp2的生物学功能,为鳞翅目昆虫中该基因的深入研究提供线索。... 【目的】配子生成素结合蛋白2(gametogenetin binding protein 2,ggnbp2)在哺乳动物配子发生等生殖相关过程中发挥重要作用。本研究以家蚕Bombyx mori为模型,探究驯化基因ggnbp2的生物学功能,为鳞翅目昆虫中该基因的深入研究提供线索。【方法】在NCBI GenBank数据库通过序列比对检索到翅目昆虫ggnbp2基因的序列;通过贝叶斯法构建系统发育树进行ggnbp2基因的系统发育分析。根据我们前期研究建立的家蚕-野桑蚕Bombyx mandarina群体基因组多态性数据,对家蚕中Bmggnbp2进行选择信号分析;利用已发表的基因芯片数据分析Bmggnbp2在家蚕5龄第3天幼虫中的组织表达特征。利用CRISPR/Cas9双元转基因体系构建Bmggnbp2敲除突变体,测定分析突变体与对照品系Nos-Cas9在繁殖性状(单雌产卵量和卵孵化率)以及与对照品系U6-Bmggnbp2 sgRNA和Nos-Cas9经济性状(全茧重、蛹重和茧壳重)的差异。【结果】ggnbp2在鳞翅目昆虫中广泛存在,且高度保守,并且在家蚕中具有强烈的人工选择信号。Bmggnbp2在家蚕5龄第3天幼虫的脑、卵巢、精巢和丝腺中均高度表达。利用CRISPR/Cas9双元转基因体系成功获取家蚕Bmggnbp2基因的嵌合体敲除突变体△Bmggnbp 2。与对照Nos-Cas9精巢的典型肾形不同,突变体△Bmggnbp 2的精巢呈椭圆形,并且表面出现一层较厚的黄色覆盖物,但突变体△Bmggnbp 2单雌产卵量和卵孵化率与对照品系Nos-Cas9以及全茧重、蛹重和茧壳重与对照U6-Bmggnbp2 sgRNA和Nos-Cas9均没有显著差异。【结论】GGNBP2在鳞翅目昆虫中对繁殖的影响可能并没有在哺乳动物中那么至关重要,其具体的作用机制仍需要进一步探讨。 展开更多
关键词 鳞翅目 家蚕 配子生成素结合蛋白2 转基因CRISPR 精巢 卵孵化率
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微小RNA-494-3p靶向配子生成素结合蛋白2促进结直肠癌细胞侵袭、迁移及上皮间质转化的实验研究 被引量:2
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作者 刘敏 吴运 《安徽医药》 CAS 2021年第10期1998-2003,共6页
目的研究微小RNA-494-3p(miR-494-3p)影响结直肠癌细胞迁移、侵袭及上皮间质转化(EMT)的分子机制。方法于2019年1—12月体外培养购自美国ATCC的结直肠上皮细胞NCM460和结直肠癌细胞系T84、LS1034和HCT116,实时定量聚合酶链式反应(RT-qP... 目的研究微小RNA-494-3p(miR-494-3p)影响结直肠癌细胞迁移、侵袭及上皮间质转化(EMT)的分子机制。方法于2019年1—12月体外培养购自美国ATCC的结直肠上皮细胞NCM460和结直肠癌细胞系T84、LS1034和HCT116,实时定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测细胞中miR-494-3p和配子生成素结合蛋白2(GGNBP2)mRNA的表达量,蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞中GGNBP2蛋白表达。将LS1034细胞分为对照(NC)组、miR-494-3p抑制剂(anti-miR-494-3p)组、抑制剂阴性对照(anti-miR-con)组、GGNBP2过表达载体(pcDNA-GGNBP2)组、空载体(pcDNA-con)组、anti-miR-494-3p+GGNBP2小干扰RNA(si-GGNBP2)组和anti-miR-494-3p+小干扰RNA阴性对照(si-con)组,甲基噻唑基四唑(MTT)法测定LS1034细胞存活率,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭,Western blot检测相关蛋白细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)的表达。双荧光素酶报告系统验证miR-494-3p和GGNBP2的调控关系。结果与NCM460细胞相比,结直肠癌细胞T84、LS1034和HCT116中miR-494-3p表达量均显著升高[(1.91±0.11)、(2.23±0.14)、(2.08±0.12)比(1.00±0.04),P<0.001],GGNBP2 m RNA表达量均显著下降[(0.51±0.08)、(0.38±0.06)、(0.45±0.07)比(1.00±0.11),P<0.001],GGNBP2蛋白表达量均显著下降(P<0.001)。与anti-miR-con组相比,anti-miR-494-3p组LS1034细胞存活率、迁移数和侵袭数均显著下降[(41.29±3.89)%比(84.36±7.28)%,(132.56±7.56)个比(246.3±10.64)个,(55.64±5.64)个比(145.62±9.56)个,均P<0.001],细胞中Cyclin D1、MMP-2、Vimentin蛋白表达量均显著下降,均P<0.001,E-cadherin蛋白表达升高、蛋白表达降低(P<0.001)。与pcDNA-con组相比,pcDNA-GGNBP2组LS1034细胞存活率、迁移数和侵袭数均显著下降,P<0.05,细胞中Cyclin D1、MMP-2、Vimentin蛋白表达均下降,均P<0.001,E-cadherin蛋白表达升高,蛋白表达降低,P<0.001。miR-494-3p靶向负调控GGNBP2的表达。与anti-miR-494-3p+si-con组相比,anti-miR-494-3p+si-GGNBP2组LS1034细胞存活率、迁移数和侵袭数均显著上升,细胞中Cyclin D1、MMP-2和Vimentin蛋白表达均升高,E-cadherin蛋白表达下降,均P<0.001。结论miR-494-3p通过靶向抑制GGNBP2促进结直肠癌LS1034细胞迁移、侵袭及EMT。 展开更多
关键词 结直肠肿瘤 微小RNA-494-3p 配子生成素结合蛋白(GGNBP2) 侵袭 迁移 上皮间质转化
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约氏疟原虫配子体形成的形态学特征 被引量:1
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作者 毛映红 徐蓓 刘宝丰 《动物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期72-75,共4页
应用六氰酸铁钾和锇酸双染色法的透射电镜技术 ,对红内期疟原虫配子体形成过程中的形态生物学特征进行识别。结果表明 ,配子体是一渐进发育的单核、惰性 (团块样、虫体不活跃 )虫体 ,其核旁有一个由扁平囊和泡状小体极性排列组成的细胞... 应用六氰酸铁钾和锇酸双染色法的透射电镜技术 ,对红内期疟原虫配子体形成过程中的形态生物学特征进行识别。结果表明 ,配子体是一渐进发育的单核、惰性 (团块样、虫体不活跃 )虫体 ,其核旁有一个由扁平囊和泡状小体极性排列组成的细胞器———高尔基体 (Golgicomplex) ,虫体被膜下有嗜锇小体。其雌性配子体的结构特点是核质较致密、内质网丰富和被膜下嗜锇小体多 ;而雄性配子体却是核质较疏松、线粒体发达、内织网和嗜锇小体少。结论是红内期疟原虫配子体形成与裂体增殖过程中形态结构的明显差别 ,雌雄配子体在结构与发育上明显的差异 。 展开更多
关键词 疟原虫 配子生成 高尔基体 电镜
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GGNBP1抗体制备及小鼠组织表达谱分析
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作者 赵庆国 周煜 +4 位作者 张进 朱恒奇 曹志国 卢柏松 黄培堂 《生物技术通讯》 CAS 2005年第2期117-120,共4页
体外实验研究表明配子生成素结合蛋白1(GGNBP1)可能与GGN1相互作用形成睾丸特异性复合物,在精子生成过程中发挥作用。从小鼠睾丸总RNA中反转录扩增Ggnbp1全长cDNA,构建表达质粒,在大肠杆菌中表达GGNBP1,经聚丙烯酰胺凝胶纯化后免疫新西... 体外实验研究表明配子生成素结合蛋白1(GGNBP1)可能与GGN1相互作用形成睾丸特异性复合物,在精子生成过程中发挥作用。从小鼠睾丸总RNA中反转录扩增Ggnbp1全长cDNA,构建表达质粒,在大肠杆菌中表达GGNBP1,经聚丙烯酰胺凝胶纯化后免疫新西兰白兔,制备兔多抗血清。镍离子金属螯合柱纯化表达的GGNBP1蛋白,与NHS活化基团交联,制备GGNBP1抗体亲和层析柱,纯化GGNBP1多抗。在293FT细胞中瞬时表达Myc-GGNBP1融合蛋白,用于Myc单抗验证GGNBP1抗体特异性,结果证明获得了特异性的GGNBP1抗体。分别制备小鼠脑、心、肺、肝、脾、肾、肌肉、卵巢、睾丸和子宫组织匀浆,用GGNBP1抗体进行Western印迹分析,结果仅在睾丸组织匀浆中检测到GGNBP1特异性条带,证明GGNBP1是睾丸特异性表达蛋白。 展开更多
关键词 配子生成素结合蛋白1 多克隆抗体 制备 表达谱 睾丸 特异性表达蛋白 配子生成素基因 小鼠
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Chalcogen heteroatoms doped nickel-nitrogen-carbon single-atom catalysts with asymmetric coordination for efficient electrochemical CO_(2) reduction
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作者 Jialin Wang Kaini Zhang +5 位作者 Ta Thi Thuy Ng Yiqing Wang Yuchuan Shi Daixing Wei Chung-Li Dong Shaohua Shen 《Chinese Journal of Catalysis》 SCIE CAS CSCD 2024年第9期54-65,共12页
The electronic configuration of central metal atoms in single-atom catalysts(SACs)is pivotal in electrochemical CO_(2) reduction reaction(eCO_(2)RR).Herein,chalcogen heteroatoms(e.g.,S,Se,and Te)were incorporated into... The electronic configuration of central metal atoms in single-atom catalysts(SACs)is pivotal in electrochemical CO_(2) reduction reaction(eCO_(2)RR).Herein,chalcogen heteroatoms(e.g.,S,Se,and Te)were incorporated into the symmetric nickel-nitrogen-carbon(Ni-N_(4)-C)configuration to obtain Ni-X-N_(3)-C(X:S,Se,and Te)SACs with asymmetric coordination presented for central Ni atoms.Among these obtained Ni-X-N_(3)-C(X:S,Se,and Te)SACs,Ni-Se-N_(3)-C exhibited superior eCO_(2)RR activity,with CO selectivity reaching~98% at-0.70 V versus reversible hydrogen electrode(RHE).The Zn-CO_(2) battery integrated with Ni-Se-N_(3)-C as cathode and Zn foil as anode achieved a peak power density of 1.82 mW cm^(-2) and maintained remarkable rechargeable stability over 20 h.In-situ spectral investigations and theoretical calculations demonstrated that the chalcogen heteroatoms doped into the Ni-N_(4)-C configuration would break coordination symmetry and trigger charge redistribution,and then regulate the intermediate behaviors and thermodynamic reaction pathways for eCO_(2)RR.Especially,for Ni-Se-N_(3)-C,the introduced Se atoms could significantly raise the d-band center of central Ni atoms and thus remarkably lower the energy barrier for the rate-determining step of ^(*)COOH formation,contributing to the promising eCO_(2)RR performance for high selectivity CO production by competing with hydrogen evolution reaction. 展开更多
关键词 Electrochemical CO_(2) reduction reaction Chalcogen heteroatoms Single-atom catalysts Asymmetric coordination CO production
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维生素C对环磷酰胺诱导雄大鼠睾丸配子和雄激素生成障碍的保护作用 被引量:1
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《中国男科学杂志》 CAS CSCD 2002年第4期331-331,共1页
目的 :研究环磷酰胺通过对雄大鼠的内分泌抑制和 /或诱导氧化应激作用而产生对睾丸雄激素和配子生成活性的毒性作用 ,同时评价维生素C的保护作用。方法 :以睾丸组织Δ5,3β 羟基甾醇脱氢酶 (HSD) ,17β -HSD ,过氧化物酶和过氧化氢酶活... 目的 :研究环磷酰胺通过对雄大鼠的内分泌抑制和 /或诱导氧化应激作用而产生对睾丸雄激素和配子生成活性的毒性作用 ,同时评价维生素C的保护作用。方法 :以睾丸组织Δ5,3β 羟基甾醇脱氢酶 (HSD) ,17β -HSD ,过氧化物酶和过氧化氢酶活性 ,丙二醛 (MDA)及共轭双烯水平来评价睾丸的氧化应激 ;用免疫法测血浆睾酮 (T)水平 ,并在染色的睾丸切片 ,定量研究第VII生精周期时各种生殖细胞。结果 :环磷酰胺组的睾丸Δ53β HSD和 17β HSD活性显著抑制 ,血浆T水平降低、各种生殖细胞数目减少。同时 ,过氧化氢酶和过氧化物酶活性显著抑制 ,MDA和共轭双烯水平升高。用维生素C的共同使用可以使上述变化反转。结论 :所用剂量的环磷酰胺可引起睾丸配子形成和雄激素障碍 ,并导致睾丸氧化应激 ; 展开更多
关键词 环磷酰胺 雄激素生成 配子生成 氧化应激 自由基 维生素C 过氧化氢酶 过氧化物酶 睾酮
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Advances in Small RNAs and Sexual Reproduction in Plants
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作者 王俊 何桥 +5 位作者 汪卫星 向素琼 孙海艳 李晓林 梁国鲁 郭启高 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2013年第2期211-214,229,共5页
Small RNAs are non-coding RNA molecules with 20-30 nucleotides (nt) in length that mainly play regulatory roles in gene expression at the post-transcription level by directly cutting target mRNA or inhibiting its tr... Small RNAs are non-coding RNA molecules with 20-30 nucleotides (nt) in length that mainly play regulatory roles in gene expression at the post-transcription level by directly cutting target mRNA or inhibiting its translation. Small RNAs play regulatory roles in the growth and development process of plants at the core of gene regulatory networks, which has been widely studied and confirmed in sporophyte generation of plants. However, few researches have been conducted on small RNAs and gametophyte generation. It is reported that small RNAs play important roles in floral organ development, gametogenesis, fertilization, and early zygotic development of plants. In addition, various small RNAs also play roles in controlling genetic integrity, cell differentiation and functions during the sexual reproduction process of plants. However, most of the specific functions of small RNAs in the sexual reproduction process are unknown yet. This study mainly aimed to introduce small RNAs in plants, summarize the latest advances in researches of small RNAs and plant sexual reproduction, and make prospect on its future. 展开更多
关键词 Small RNA Sexual reproduction Floral organ development GAMETOGENESIS FERTILIZATION Early zygotic development
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长链非编码RNA对有性发育调控的研究进展
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作者 张洪浩 余文颖 孙玲玲 《药物生物技术》 CAS 2024年第5期567-572,共6页
有性发育是保证种群延续与物种进化的重要生物学进程。伴随RNA测序技术的突飞猛进,在有性发育的不同阶段观察到大量长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)的表达水平上调。来自多个物种的研究成果共同显示,lncRNA在生殖进程中扮演... 有性发育是保证种群延续与物种进化的重要生物学进程。伴随RNA测序技术的突飞猛进,在有性发育的不同阶段观察到大量长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)的表达水平上调。来自多个物种的研究成果共同显示,lncRNA在生殖进程中扮演着至关重要的角色。它们不仅在生殖细胞的命运决定中起着决定性作用,并且在性别的决定、生殖腺的形成、减数分裂过程以及配子的形成等多个关键环节中都显示出其重要性。文章对近期报道的lncRNA功能和特点进行的综述,并详细探讨它们参与的生殖过程与具体机制,旨在对阐明有性发育的调控机制提供更加丰富的生物学信息,为生殖生物学领域研究提供坚实的理论基础。 展开更多
关键词 长链非编码RNA 有性发育 减数分裂 配子生成 生殖细胞 遗传
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GGNBP2与GGN在小鼠睾丸生精细胞定位及作用 被引量:1
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作者 郭凯敏 梁作文 +1 位作者 田润辉 刘凌云 《中国男科学杂志》 CAS CSCD 2018年第4期3-8,共6页
目的探讨配子生成素结合蛋白2(GGNBP2)和配子生成素(GGN)在小鼠睾丸生殖过程中的细胞定位以及作用,初步阐明GGNBP2缺失引起睾丸生精功能障碍的机制。方法采用免疫沉淀方法检测GGNBP2与GGN相互作用;免疫荧光、免疫组化检测GGNBP2与GGN细... 目的探讨配子生成素结合蛋白2(GGNBP2)和配子生成素(GGN)在小鼠睾丸生殖过程中的细胞定位以及作用,初步阐明GGNBP2缺失引起睾丸生精功能障碍的机制。方法采用免疫沉淀方法检测GGNBP2与GGN相互作用;免疫荧光、免疫组化检测GGNBP2与GGN细胞定位;PCR检测野生型Ggnbp2基因敲除型小鼠睾丸生殖细胞GGN mRNA表达;Western blot检测其GGN蛋白表达。结果 GGNBP2与GGN相互作用,两种蛋白共同定位于精母细胞和精子细胞(Golgi phase,Cap phase)中的细胞核和胞浆,精子细胞(Acrosome phase,Maturation phases)中的顶体和尾部,GGNBP2缺失引起GGNmRNA水平和蛋白水平减低,在精母细胞中GGN定位改变。结论 Ggnbp2基因敲除引起小鼠生精功能缺陷可能通过降低GGN表达,改变GGN细胞定位,DNA双链损伤修复机制受损。 展开更多
关键词 配子生成素结合蛋白2 配子生成 精母细胞 精子发生
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Reviewing guppy color vision: integrating the molecular and physiological variation in visual tuning of a classic system for sensory drive 被引量:1
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作者 Benjamin SANDKAM Brian DALTON +1 位作者 Felix BREDEN Karen CARLETON 《Current Zoology》 SCIE CAS CSCD 2018年第4期535-545,共11页
Sensory drive predicts coevolution of mate choice signals with the sensory systems detecting those sig nals. Guppies are a classic model for sensory drive as mate preferences based on coloration differ across individu... Sensory drive predicts coevolution of mate choice signals with the sensory systems detecting those sig nals. Guppies are a classic model for sensory drive as mate preferences based on coloration differ across individuals and populations. A large body of work has identified variation in color vision, yet we lack a dir ect tie between how such variation in color vision influences variation in color preference. Here we bring together studies that have investigated guppy vision over the past 40years to: (1) highlight our current understanding of where variation occurs in the guppy color vision pathway and (2) suggest future ave nues of research into sources of visual system variation that could influence guppy color preference. This will allow researchers to design careful studies that couple measures of color preference with measures of visual system variation from the same individual or population. Such studies will finally provide im portant answers as to what sets the direction and speed of mate preference evolution via sensory drive. 展开更多
关键词 colour vision mate choice OPSIN Poecilia reticulata sensory bias visual ecology
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Metal complexes of a novel bis-β-diketone-type ligand and its copper(Ⅱ) complexes of two-photon biological imaging 被引量:2
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作者 ZHOU ShuangSheng XUE Xuan +1 位作者 JIANG Bo TIAN YuPeng 《Science China Chemistry》 SCIE EI CAS 2012年第3期334-340,共7页
A curcumin derivative ligand,1,7-bis(3-methoxyl-4-acetoxyl)phenyl-1,6-heptadiene-3,5-diketone (diacetylcurcumin,abbreviated as HL),and its Cu and Ni complexes have been synthesized and fully characterized by elemental... A curcumin derivative ligand,1,7-bis(3-methoxyl-4-acetoxyl)phenyl-1,6-heptadiene-3,5-diketone (diacetylcurcumin,abbreviated as HL),and its Cu and Ni complexes have been synthesized and fully characterized by elemental analyses,IR,1 HNMR and molar conductivity.The resulting complexes exhibit two-photon excited fluorescence (TPEF) in DMF,and have been proven to be potentially useful for two-photon microscopy imaging in living cells.In addition,cytotoxicity tests showed that the low-micromolar concentrations of ML 2 did not cause significant reduction in cell viability over a period of at least 24 h and should be safe for further biological studies. 展开更多
关键词 diacetylcurcumin complexes two-photon fluorescence cell imaging
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