利用CRISPR/Cas9双元转基因体系探究家蚕配子生成素结合蛋白基因Bmggnbp2的功能

【目的】配子生成素结合蛋白2(gametogenetin binding protein 2,ggnbp2)在哺乳动物配子发生等生殖相关过程中发挥重要作用。本研究以家蚕Bombyx mori为模型,探究驯化基因ggnbp2的生物学功能,为鳞翅目昆虫中该基因的深入研究提供线索。【方法】在NCBI GenBank数据库通过序列比对检索到翅目昆虫ggnbp2基因的序列;通过贝叶斯法构建系统发育树进行ggnbp2基因的系统发育分析。根据我们前期研究建立的家蚕-野桑蚕Bombyx mandarina群体基因组多态性数据,对家蚕中Bmggnbp2进行选择信号分析;利用已发表的基因芯片数据分析Bmggnbp2在家蚕5龄第3天幼虫中的组织表达特征。利用CRISPR/Cas9双元转基因体系构建Bmggnbp2敲除突变体,测定分析突变体与对照品系Nos-Cas9在繁殖性状(单雌产卵量和卵孵化率)以及与对照品系U6-Bmggnbp2 sgRNA和Nos-Cas9经济性状(全茧重、蛹重和茧壳重)的差异。【结果】ggnbp2在鳞翅目昆虫中广泛存在,且高度保守,并且在家蚕中具有强烈的人工选择信号。Bmggnbp2在家蚕5龄第3天幼虫的脑、卵巢、精巢和丝腺中均高度表达。利用CRISPR/Cas9双元转基因体系成功获取家蚕Bmggnbp2基因的嵌合体敲除突变体△Bmggnbp 2。与对照Nos-Cas9精巢的典型肾形不同,突变体△Bmggnbp 2的精巢呈椭圆形,并且表面出现一层较厚的黄色覆盖物,但突变体△Bmggnbp 2单雌产卵量和卵孵化率与对照品系Nos-Cas9以及全茧重、蛹重和茧壳重与对照U6-Bmggnbp2 sgRNA和Nos-Cas9均没有显著差异。【结论】GGNBP2在鳞翅目昆虫中对繁殖的影响可能并没有在哺乳动物中那么至关重要,其具体的作用机制仍需要进一步探讨。

微小RNA-494-3p靶向配子生成素结合蛋白2促进结直肠癌细胞侵袭、迁移及上皮间质转化的实验研究

目的研究微小RNA-494-3p(miR-494-3p)影响结直肠癌细胞迁移、侵袭及上皮间质转化(EMT)的分子机制。方法于2019年1—12月体外培养购自美国ATCC的结直肠上皮细胞NCM460和结直肠癌细胞系T84、LS1034和HCT116,实时定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测细胞中miR-494-3p和配子生成素结合蛋白2(GGNBP2)mRNA的表达量,蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞中GGNBP2蛋白表达。将LS1034细胞分为对照(NC)组、miR-494-3p抑制剂(anti-miR-494-3p)组、抑制剂阴性对照(anti-miR-con)组、GGNBP2过表达载体(pcDNA-GGNBP2)组、空载体(pcDNA-con)组、anti-miR-494-3p+GGNBP2小干扰RNA(si-GGNBP2)组和anti-miR-494-3p+小干扰RNA阴性对照(si-con)组,甲基噻唑基四唑(MTT)法测定LS1034细胞存活率,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭,Western blot检测相关蛋白细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)的表达。双荧光素酶报告系统验证miR-494-3p和GGNBP2的调控关系。结果与NCM460细胞相比,结直肠癌细胞T84、LS1034和HCT116中miR-494-3p表达量均显著升高[(1.91±0.11)、(2.23±0.14)、(2.08±0.12)比(1.00±0.04),P<0.001],GGNBP2 m RNA表达量均显著下降[(0.51±0.08)、(0.38±0.06)、(0.45±0.07)比(1.00±0.11),P<0.001],GGNBP2蛋白表达量均显著下降(P<0.001)。与anti-miR-con组相比,anti-miR-494-3p组LS1034细胞存活率、迁移数和侵袭数均显著下降[(41.29±3.89)%比(84.36±7.28)%,(132.56±7.56)个比(246.3±10.64)个,(55.64±5.64)个比(145.62±9.56)个,均P<0.001],细胞中Cyclin D1、MMP-2、Vimentin蛋白表达量均显著下降,均P<0.001,E-cadherin蛋白表达升高、蛋白表达降低(P<0.001)。与pcDNA-con组相比,pcDNA-GGNBP2组LS1034细胞存活率、迁移数和侵袭数均显著下降,P<0.05,细胞中Cyclin D1、MMP-2、Vimentin蛋白表达均下降,均P<0.001,E-cadherin蛋白表达升高,蛋白表达降低,P<0.001。miR-494-3p靶向负调控GGNBP2的表达。与anti-miR-494-3p+si-con组相比,anti-miR-494-3p+si-GGNBP2组LS1034细胞存活率、迁移数和侵袭数均显著上升,细胞中Cyclin D1、MMP-2和Vimentin蛋白表达均升高,E-cadherin蛋白表达下降,均P<0.001。结论miR-494-3p通过靶向抑制GGNBP2促进结直肠癌LS1034细胞迁移、侵袭及EMT。

血管生成素样蛋白2、视黄醇结合蛋白4和超敏C反应蛋白与大动脉粥样硬化型急性脑梗死的关系

目的探讨血管生成素样蛋白2(Angptl-2)、视黄醇结合蛋白4(RBP4)和超敏C反应蛋白(hs-CRP)与大动脉粥样硬化(LAA)型急性脑梗死的关系。方法选取2018年1月至2019年12月郑州大学附属郑州中心医院神经内科收治的111例急性脑梗死患者。根据病情进展情况将患者分为进展性脑梗死(PCI)组(45例)和非进展性脑梗死(NPCI)组(66例)。根据高级中枢损伤严重程度评定量表(MESSS)将PCI组患者分为轻度组(20例)、中度组(15例)和重度组(10例)。比较不同患者的Angptl-2、RBP4和hs-CRP水平。分析LAA型急性脑梗死进展的影响因素。结果PCI组Angptl-2、RBP4和hs-CRP水平高于NPCI组(P<0.05)。轻度组、中度组和重度组Angptl-2、RBP4及hs-CRP水平比较,差异有统计学意义(P<0.05);重度组Angptl-2、RBP4及hs-CRP水平高于轻度组和中度组,中度组Angptl-2、RBP4及hs-CRP水平高于轻度组(P<0.05)。Angptl-2、RBP4、hs-CRP是影响LAA型急性脑梗死进展的独立因素(P<0.05)。结论Angptl-2、RBP4和hs-CRP可能为LAA型急性脑梗死进展的重要分子标志物。

血清S100A8、Ang-2水平与儿童重症肺炎病情严重程度和临床结局的关系

目的探讨血清S100钙结合蛋白A8(S100A8)、血管生成素2(Ang-2)水平与儿童重症肺炎病情严重程度和临床结局的关系。方法选择肺炎支原体肺炎儿童200例,其中重症肺炎88例(重症组)、普通肺炎112例(普通组),同期另选非肺炎支原体肺炎儿童80例作为对照组。采集所有研究对象清晨空腹外周静脉血,离心留取血清,采用ELISA法检测血清S100A8、Ang-2、IL-6、TNF-α,采用循环增强荧光免疫法检测血清PCT,采用免疫散射比浊法检测血清CRP。肺炎支原体肺炎儿童入院24 h内通过小儿危重病例评分(PCIS)评估病情严重程度。重症肺炎儿童入院后规范治疗并随访21天,至随访结束,死亡20例、存活68例。分析血清S100A8、Ang-2水平与重症肺炎儿童血清PCT、IL-6、TNF-α、CRP水平及PCIS的关系。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清S100A8、Ang-2水平对重症肺炎儿童临床结局的预测价值。结果与对照组比较,普通组与重症组血清S100A8、Ang-2、PCT、IL-6、TNF-α、CRP水平均显著升高(P均<0.05);与普通组比较,重症组血清S100A8、Ang-2、PCT、IL-6、TNF-α、CRP水平均显著升高,PCIS显著降低(P均<0.05)。重症肺炎儿童血清S100A8水平与血清PCT、IL-6、TNF-α、CRP水平均呈正相关关系(r分别为0.746、0.797、0.718、0.730,P均<0.05),与PCIS呈负相关关系(r=-0.477,P<0.05);血清Ang-2水平与血清PCT、IL-6、TNF-α、CRP水平均呈正相关关系(r分别为0.724、0.825、0.679、0.693,P均<0.05),与PCIS呈负相关关系(r=-0.509,P<0.05)。重症肺炎儿童死亡者血清S100A8、Ang-2、PCT、IL-6、TNF-α、CRP水平均显著高于其存活者,而PCIS显著低于其存活者(P均<0.05)。ROC曲线分析显示,血清S100A8、Ang-2水平预测重症肺炎儿童死亡的曲线下面积分别为0.764、0.837,最佳截断值分别为136.55 pg/mL、5.48 g/L,其预测灵敏度分别为70.0%、85.0%,特异度分别为91.2%、79.4%。结论血清S100A8、Ang-2水平与重症肺炎儿童病情严重程度密切相关,并且还可作为预测其临床结局的生物标志物。

冠心病患者ABCG1、ANGPTL2启动子区甲基化与心力衰竭发生的关系研究

目的分析冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病)患者三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G1(ABCG1)、血管生成素样蛋白2(ANGPTL2)启动子区甲基化与心力衰竭(心衰)发生的关系。方法选取2020年3月至2022年3月于湖南省第二人民医院收治的冠心病患者120例。根据是否发生心衰,将患者分为合并心衰组(n=26)和不合并心衰组(n=94)。采用全自动生化仪检测血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)。采用心脏超声检查患者左室射血分数(LVEF)、左心室舒张末期内径(LVEDD)、左室收缩末期内径(LVESD)水平。特异性PCR检测ABCG1和ANGPTL2基因甲基化。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测ABCG1和ANGPTL2基因mRNA表达水平。Logistic回归分析探讨影响冠心病患者发生心衰的因素。结果两组患者LDL-C、LVEF、LVEDD、LVESD、ABCG1、ANGPTL2基因启动子区甲基化等方面比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。LVESD、LVEF、ABCG1甲基化和ANGPTL2甲基化是冠心病患者发生心衰的危险因素。ABCG1甲基化、ANGPLT2甲基化患者中LVESD水平均高于未甲基化患者(P<0.05)。ABCG1甲基化、ANGPLT2甲基化患者中LVEF水平均低于未甲基化患者(P<0.05)。合并组ABCG1、ANGPTL2基因甲基化的患者mRNA的表达量明显低于非甲基化患者(P<0.05)。结论ABCG1和ANGPTL2基因甲基化是冠心病患者发生心衰的危险因素,检测上述两基因甲基化状态可为诊治冠心病心衰提供理论支持。

血清Ang-2、I-FABP表达与急性心肌梗死合并心源性休克预后的相关性分析

目的 探讨血清血管生成素2(angiopoietin-2,Ang-2)、肠脂肪酸结合蛋白(intestinal fatty acid binding protein,I-FABP)水平与急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)合并心源性休克(cardiac shock,CS)预后的相关性。方法 选取2017年7月至2019年7月湖州市中心医院收治的AMI患者198例为研究对象,根据住院期间是否并发CS,将其分为CS组(n=93)和无CS组(n=105),另选取同期入院体检的正常志愿者65人纳入对照组,根据28d的生存情况将CS组患者分为生存组(n=50)和死亡组(n=43)。检测所有受试者的血清Ang-2、I-FABP水平,采用Cox回归分析影响AMI合并CS患者不良预后的因素;受试者操作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC曲线)分析Ang-2、I-FABP对AMI合并CS患者预后不良的诊断价值。结果 CS组患者的血清Ang-2、I-FABP水平均显著高于无CS组和对照组(P<0.05),无CS组患者的血清Ang-2、I-FABP水平显著高于对照组(P<0.05)。死亡组患者的血清Ang-2、I-FABP水平和糖尿病比例均显著高于生存组(P<0.05)。Cox回归分析结果显示,糖尿病、Ang-2、I-FABP水平均为影响AMI合并CS患者预后的独立因素(P<0.05)。ROC曲线显示,Ang-2和I-FABP联合预测AMI合并CS患者预后的曲线下面积为0.819,敏感度81.4%,特异性80.0%。结论 AMI合并CS患者的血清Ang-2、I-FABP水平升高,且是预测患者预后的潜在生物学指标。

血清NLRP3、ANGPTL2水平与高血压脑出血患者术后发生脑水肿的关系

目的探究血清核苷酸结合寡聚结构域样受体蛋白3(NLRP3)、血管生成素样蛋白2(ANGPTL2)水平与高血压脑出血(HICH)患者术后发生脑水肿的关系。方法选取手术治疗的HICH患者146例,术后14 d水肿吸收率>10%者112例为非脑水肿组,吸收率≤10%者34例为脑水肿组。收集相关资料;术前用酶联免疫吸附试验检测血清NLRP3、ANGPTL2。多因素Logistic回归分析血清NLRP3、ANGPTL2水平对HICH患者术后发生脑水肿的影响;受试者工作特征(ROC)曲线分析血清NLRP3、ANGPTL2水平对HICH患者术后发生脑水肿的预测价值。结果脑水肿组美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6、白细胞介素1β、NLRP3、ANGPTL2水平高于非脑水肿组(P均<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,NLRP3、ANGPTL2、NIHSS评分、TNF-α升高均为HICH患者术后发生脑水肿的危险因素(P均<0.05)。血清NLRP3、ANGPTL2联合预测HICH患者术后发生脑水肿的曲线下面积高于二者单独预测的曲线下面积(P均<0.05)。结论血清NLRP3、ANGPTL2水平升高是HICH患者术后发生脑水肿的危险因素,二者联合检测预测HICH患者术后发生脑水肿的价值较高。

芩连四物汤治疗子宫肌瘤的效果及对血清Ang-2和IGFBP-3的影响

目的:研究芩连四物汤治疗子宫肌瘤的效果及对血清血管生成素-2(Ang-2)和胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)的影响。方法:选取鹰潭市中医院门诊2021年6月—2022年6月收治的76例子宫肌瘤患者,采用随机信封法分对照组(n=38,予米非司酮治疗)与观察组(n=38,予米非司酮联合芩连四物汤治疗),两组患者均连续治疗3个月。比较两组临床疗效、中医症候积分、子宫体积及肌瘤长径、血清激素水平、血清Ang-2及IGFBP-3水平及不良反应发生情况。结果:观察组总有效率(97.37%)与对照组(81.58%)比较,差异无统计学意义(P>0.05);观察组中医症候积分总改善率(78.95%)高于对照组(47.37%),差异有统计学意义(P<0.05);治疗3个月后,观察组子宫体积小于对照组,肌瘤长径短于对照组,血清雌二醇(E2)、卵泡刺激素(FSH)、催乳素(PRL)及孕酮(P)均低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);治疗3个月后,观察组Ang-2低于对照组,IGFBP-3高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);观察组不良反应发生率为13.16%(5/38),较对照组的10.53%(4/38)略高,但两组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:芩连四物汤治疗子宫肌瘤能明显改善患者症状,缩小肌瘤,调节血清激素水平,降低Ang-2及升高IGFBP-3水平,临床应用效果显著且安全性良好。

腹腔镜手术联合亮丙瑞林皮下注射治疗对中重度子宫内膜异位症患者生育指数、血清粘结合蛋白多糖-1的影响

目的腹腔镜手术联合亮丙瑞林皮下注射治疗对中重度子宫内膜异位症(EMT)患者生育指数、血清粘结合蛋白多糖-1(Syndecan-1)的影响。方法选取我院妇产科2014年9月到2017年9月收治的中重度EMT患者120例作为研究对象,随机分为常规组和亮丙瑞林治疗组,每组患者60例。常规组患者仅进行腹腔镜手术;亮丙瑞林治疗组患者行腹腔镜手术后,于月经来潮的第一天开始予以亮丙瑞林治疗,3.75 mg/次,4周注射1次,连续治疗3个月。治疗后,对比两组患者的疗效,性激素水平,血清Syndecan-1、促血管生成素-2(Ang-2)水平、生育指数、受孕率、妊娠结局及不良反应发生情况。结果治疗后,亮丙瑞林治疗组患者的总有效率(86.7%)明显高于常规组(70.0%),两组患者雌二醇、促黄体生成素、卵泡刺激素、Ang-2、Syndecan-1等指标均有所改善,亮丙瑞林治疗组患者雌二醇、促黄体生成素、卵泡刺激素、Ang-2、Syndecan-1等指标明显低于常规组(P<0.05),亮丙瑞林治疗组患者生育指数和受孕率明显高于常规组(P<0.05),妊娠结局优于常规组(P<0.05)。两组患者不良反应发生情况无明显差异(P>0.05)。结论腹腔镜手术联合亮丙瑞林皮下注射治疗可以有效改善中重度EMT患者的生育指数,降低其血清Syndecan-1水平,具有很好的临床治疗效果。

胰腺十二指肠同源盒基因-1/神经生成素3信号通路在胰岛β细胞分化中的作用机制研究进展

胰岛β细胞数量的绝对不足或相对减少可导致糖尿病的发生发展。胰腺十二指肠同源盒基因-1(Pdx-1)是胰腺发育和胰岛素基因转录的重要调控基因,在胰腺发育和胰腺各种细胞的分化中发挥重要作用。神经生成素3(Ngn3)是对胰岛发育有重要影响的转录因子,可始动内分泌祖细胞,促进胰内胚层细胞向内分泌细胞分化,同时维持成熟胰岛细胞的功能。Pdx-1/Ngn3信号通路可促进干细胞向胰岛β细胞的分化和增殖,Pdx-1是Ngn3的上游调控因子,对胰干细胞的作用在于激活Ngn3的表达,Ngn3可通过调控神经细胞分化因子1、胰岛素瘤相关蛋白1(Insm1)、胰岛素基因增强结合蛋白1及Insm2、桩蛋白6、Nkx2同源框2、NK6 Homeobox 1等直接靶基因,影响胰内分泌细胞的分化和形成。

特发性肺纤维化患者血清血管生成素-2、潜在转化生长因子结合蛋白2、趋化因子配体14水平与预后的关系研究

目的:研究特发性肺纤维化(IPF)患者血清血管生成素-2(Ang-2)、潜在转化生长因子结合蛋白2(LTBP2)、趋化因子配体14(CXCL14)水平与预后的关系。方法:选取2019年3月~2020年3月河北医科大学第二医院东院区呼吸内科收治的100例IPF患者作为研究对象。将其按照随访结局分成预后不良组59例及预后良好组41例。比较两组Ang-2、LTBP2、CXCL14水平、肺功能指标、实验室指标以及一般资料,Pearson相关分析血清Ang-2、LTBP2、CXCL14水平与肺功能指标的相关性,多因素Logistic回归分析IPF患者预后的影响因素,受试者工作特征(ROC)曲线分析Ang-2、LTBP2、CXCL14对IPF患者预后的预测价值。结果:预后不良组血清Ang-2、LTBP2、CXCL14水平均高于预后良好组(P<0.05)。预后不良组第1s用力呼气容积(FVC_(1))、一氧化碳弥散量占预计值百分比(DLCO%)、动脉血氧分压(PaO_(2))/氧体积分数(FiO_(2))均低于预后良好组,而吸烟史、肺动脉高压人数占比高于预后不良组(P<0.05)。Pearson相关性分析显示:IPF患者Ang-2、LTBP2、CXCL14水平均和FVC_(1)、DLCO%呈负相关(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示:FVC_(1)、DLCO%、PaO_(2)/FiO_(2)、吸烟史、肺动脉高压以及血清Ang-2、LTBP2、CXCL14水平是IPF患者预后不良的影响因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示:血清Ang-2、LTBP2、CXCL14三项联合检测预测IPF患者预后的曲线下面积高于上述三项指标单独检测。结论:IPF患者血清Ang-2、LTBP2、CXCL14水平与其预后密切相关,可作为评估其预后的辅助性指标。

GGNBP1抗体制备及小鼠组织表达谱分析

体外实验研究表明配子生成素结合蛋白1(GGNBP1)可能与GGN1相互作用形成睾丸特异性复合物,在精子生成过程中发挥作用。从小鼠睾丸总RNA中反转录扩增Ggnbp1全长cDNA,构建表达质粒,在大肠杆菌中表达GGNBP1,经聚丙烯酰胺凝胶纯化后免疫新西兰白兔,制备兔多抗血清。镍离子金属螯合柱纯化表达的GGNBP1蛋白,与NHS活化基团交联,制备GGNBP1抗体亲和层析柱,纯化GGNBP1多抗。在293FT细胞中瞬时表达Myc-GGNBP1融合蛋白,用于Myc单抗验证GGNBP1抗体特异性,结果证明获得了特异性的GGNBP1抗体。分别制备小鼠脑、心、肺、肝、脾、肾、肌肉、卵巢、睾丸和子宫组织匀浆,用GGNBP1抗体进行Western印迹分析,结果仅在睾丸组织匀浆中检测到GGNBP1特异性条带,证明GGNBP1是睾丸特异性表达蛋白。

EphA2通过调控Grb2表达参与肝癌细胞侵袭的机制探讨

目的:检测促红细胞生成素肝细胞受体A2(EphA2)蛋白在肝细胞肝癌中的表达情况,探讨其参与调控肝癌细胞侵袭的可能内在机制。方法:培养人正常肝细胞HL-7702和肝癌细胞株MHCC97H、Hep3B,通过siRNA干扰法下调肝癌细胞中EphA2、生长因子受体结合蛋白2(Grb2)的表达,分为三组:未处理组(未处理肝癌细胞)、对照组(加入对照siRNA)和siRNA干扰组(加入siRNA干扰EphA2或Grb2)。通过Western blot法检测不同处理前后细胞中EphA2、Grb2蛋白的表达情况,Transwell小室检测细胞侵袭性。多组比较、组间比较分别采用单因素方差分析和LSD-t检验。结果:体外侵袭实验结果显示MHCC97H、Hep3B、HL-7702穿透细胞的数量分别为:(401±3)/10 HPF、(111±4)/10 HPF、(31±3)/10 HPF,人正常肝细胞与人肝癌细胞相比差异具有统计学意义(P <0.05)。Eph A2、Grb2蛋白在人正常肝细胞与人肝癌细胞中的相对表达量相比,差异均有统计学意义(P <0.05)。siRNA法抑制细胞Eph A2表达后,Hep3B和MHCC97H细胞系未处理组、对照组、siRNA干扰组穿透的细胞数量分别为:(111±4)/10 HPF、(108±5)/10 HPF、(53±3)/10 HPF和(405±5)/10 HPF、(399±4)/10 HPF、(155±7)/10 HPF,siRNA干扰组与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.001)。检测Eph A2蛋白在Hep3B、MHCC97H细胞系未处理组、对照组、siRNA干扰组中的相对表达量,siRNA干扰组与对照组相比,差异有统计学意义(P <0.05)。siRNA抑制Grb2表达后,Hep3B和MHCC97H细胞系未处理组、对照组、siRNA干扰组穿透的细胞数量分别为:(109±3)/10 HPF、(107±4)/10 HPF、(56±4)/10 HPF和(403±4)/10 HPF、(402±4)/10 HPF、(163±5)/10 HPF,siRNA干扰组与对照组比较,差异有统计学意义(P <0.001)。检测Grb2蛋白在Hep3B和MHCC97H细胞未处理组、对照组、siRNA干扰组组中的相对表达量,siRNA干扰组与对照组比较,差异有统计学意义(P <0.05)。siRNA抑制Eph A2表达后,检测Grb2蛋白在Hep3B、MHCC97H细胞未处理组、对照组、siRNA干扰组中的相对表达量,siRNA干扰组与对照组比较,差异有统计学意义(P <0.05)。结论:Eph A2参与调控肝癌细胞侵袭的内在机制可能是通过调控Grb2蛋白的表达实现的,据此,我们得出Eph A2可作为治疗肝细胞肝癌的新靶点。

多囊卵巢综合征患者血清E-FABP、Angptl 2、Orexin-A水平与肥胖和糖脂代谢关系

目的:探究多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)患者血清表皮型脂肪酸结合蛋白(epidermal fatty acid binding protein,E-FABP)、血管生成素样蛋白2(angiopoietin-like protein,Angptl 2)、阿立新A(Orexin-A)水平与肥胖和糖脂代谢的关系。方法:回顾性分析本院2019年11月-2020年11月收治的89例PCOS患者的临床资料,依据体质量指数(body mass index,BMI)将其分为PCOS肥胖组(49例,BMI≥25 kg/m2)和PCOS非肥胖组(40例,BMI<25 kg/m2),另取同期来本院进行健康体检的38例女性作为健康对照组,对比三组患者E-FABP、Angptl 2、Orexin-A、糖代谢指标[空腹胰岛素(fasting insulin,FINS)、2 h胰岛素(insulin 2 h,INS 2 h)、空腹血糖(fasting plasma glucose,FPG)、2 h血糖(glucose 2 h,GLU 2 h)]、脂代谢指标[甘油三酯(triglycerides,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、游离脂肪酸(free fatty acid,FFA)、低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(high density liptein cholesterol,HDL-C)]水平并分析其相关性。结果:(1)PCOS肥胖组患者E-FABP、Angptl 2水平高于PCOS非肥胖组与健康对照组,Orexin-A水平低于PCOS非肥胖组与健康对照组(P<0.05)。(2)PCOS肥胖组患者FINS、INS 2 h、FPG及GLU 2 h水平均高于PCOS非肥胖组与健康对照组(P<0.05)。(3)PCOS肥胖组患者TG、TC、FFA、LDL-C水平均高于PCOS非肥胖组与健康对照组,HDL-C水平低于PCOS非肥胖组与健康对照组(P<0.05)。(4)E-FABP水平与肥胖(r=0.514)、FINS(r=0.680)、INS 2 h(r=0.643)、FPG(r=0.509)、GLU 2 h(r=0.738)、TG(r=0.764)、TC(r=0.575)、FFA(r=0.630)、LDL-C(0.667)指标均呈显著正相关(P<0.05);Angptl 2水平与肥胖(r=0.468)、FINS(r=0.663)、INS 2 h(0.619)、FPG(r=0.622)、GLU 2 h(r=0.651)、TG(r=0.705)、TC(r=0.638)、FFA(r=0.623)、LDL-C(r=0.751)指标均呈显著正相关(P<0.05);Orexin-A水平与HDL-C(r=0.691)显著正相关,与肥胖(r=-0.720)、FINS(r=-0.419)、INS 2 h(r=-0.432)指标呈显著负相关(P<0.05)。结论:PCOS患者E-FABP、Angptl 2水平升高、Orexin-A水平降低均与肥胖及糖脂代谢水平有关。

急性ST段抬高型心肌梗死并发心源性休克患者血清Ang-2和IFABP水平与入院后28天内生存的关系

目的:探究血清血管生成素-2(angiopoietin-2,Ang-2)、肠型脂肪酸结合蛋白(intestinal fatty acid binding protein,IFABP)水平与急性ST段抬高型心肌梗死(ST segment elevation myocardial infarction,STEMI)并发心源性休克(cardiogenic shock,CS)患者入院后28 d内生存的关系。方法:选取邯郸市中心医院2020年5月—2023年10月收治的162例STEMI患者,有61例患者就诊时并发CS(并发CS组),101例患者就诊时没有并发CS(非CS组);另选取健康者98例作为对照组。根据入院后28 d生存情况将并发CS组分成生存组(患者存活)34例和死亡组(患者死亡)27例。收集所有受试者临床资料,检测实验室指标和血清Ang-2、IFABP水平;分析STEMI并发CS患者血清Ang-2、IFABP与临床资料、实验室指标的相关性,STEMI并发CS患者入院后28 d内生存的影响因素,Ang-2、IFABP预测STEMI并发CS患者入院后28 d内生存的价值。结果:与对照组比较,非CS组和并发CS组空腹血糖(fasting plasma glucose,FPG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein-cholesterol,LDL-C)、肌酸激酶同工酶(creatine kinase isoenzyme,CK-MB)、同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)、心肌肌钙蛋白I(cardiac troponin I,cTnI)、Ang-2、IFABP水平显著升高,高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL-C)、左心室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF)水平显著降低(P<0.05)。与非CS组比较,并发CS组多支心肌罪犯血管数患者比例、TC、TG、CK-MB、Hcy、cTnI、Ang-2、IFABP水平显著升高,HDL-C、LVEF水平显著降低(P<0.05)。与生存组比较,死亡组糖尿病史、高脂血症史、多支心肌罪犯血管数患者比例、FPG、TC、TG、LDL-C、CK-MB、Hcy、cTnI、Ang-2、IFABP水平显著升高,HDL-C、LVEF水平显著降低(P<0.05)。STEMI并发CS患者血清Ang-2与IFABP水平呈正相关(P<0.05);血清Ang-2、IFABP均与糖尿病史、高脂血症史、心肌罪犯血管数量、FPG、TC、TG、LDL-C、CK-MB、Hcy、cTnI呈正相关,与HDL-C、LVEF呈负相关(P<0.05)。有糖尿病史、有高脂血症史、多支心肌罪犯血管数、FPG、TC、TG、LDL-C、CK-MB、Hcy、cTnI、Ang-2、IFABP均是影响STEMI并发CS患者入院后28 d内生存的独立危险因素,HDL-C、LVEF均是影响STEMI并发CS患者入院后28 d内生存的独立保护因素(P<0.05)。相较于血清Ang-2、IFABP单独预测STEMI并发CS患者入院后28 d内生存的曲线下面积(AUC)(0.741、0.759),二者联合预测的AUC(0.836)更高(P<0.05)。结论:STEMI并发CS患者血清Ang-2、IFABP水平较高,其高水平可能导致患者入院后28 d内死亡,Ang-2和IFABP联合检测对STEMI并发CS患者入院后28 d内生存有较高预测价值。

促红细胞生成素辅助乌司他丁治疗坏死性小肠结肠炎患儿的效果及对炎症细胞因子肠道菌群和肠功能相关指标的影响

目的分析促红细胞生成素辅助乌司他丁治疗坏死性小肠结肠炎患儿的效果及对炎症细胞因子、肠道菌群和肠功能相关指标的影响。方法选取2019年1月—2020年1月在丽水市人民医院就诊的坏死性小肠结肠炎患儿126例作为研究对象,按随机数字表分为乌司他丁组和联合组,每组各63例患儿。乌司他丁组使用乌司他丁治疗,联合组使用促红细胞生成素辅助乌司他丁治疗。采用粪便检测法检测肠道菌群变化;采用酶联免疫吸附法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-8(IL-8)、C-反应蛋白(CRP)、肠型脂肪酸结合蛋白(I-FABP)、沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)水平。比较两组的临床疗效以及不良反应。结果治疗前,两组TNF-α、CRP、IL-8水平比较,差异均无统计学意义(均P>0.05);治疗后,乌司他丁组TNF-α、IL-8、CRP水平均显著高于联合组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。治疗前,两组杆菌总数、球菌总数、细菌总数、杆球菌比值比较,差异均无统计学意义(均P>0.05);治疗后,乌司他丁组细菌总数、杆菌总数、球菌总数显著低于联合组,杆球菌比值显著高于联合组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。治疗前,两组SIRT1、I-FABP水平比较,差异均无统计学意义(均P>0.05);治疗后,乌司他丁组SIRT1、I-FABP水平均低于联合组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。乌司他丁组患儿的治疗总有效率(80.95%)低于联合组(95.23%),差异有统计学意义(χ^(2)=6.129,P<0.05)。乌司他丁组患儿不良反应总发生率(3.17%)低于联合组(4.76%),差异无统计学意义(χ^(2)=0.208,P>0.05)。结论促红细胞生成素辅助乌司他丁治疗坏死性小肠结肠炎患儿的效果较好,可显著改善患儿的症状和I-FABP、SIRT1水平,促进患儿身体恢复。

GGNBP2与GGN在小鼠睾丸生精细胞定位及作用

目的探讨配子生成素结合蛋白2(GGNBP2)和配子生成素(GGN)在小鼠睾丸生殖过程中的细胞定位以及作用,初步阐明GGNBP2缺失引起睾丸生精功能障碍的机制。方法采用免疫沉淀方法检测GGNBP2与GGN相互作用;免疫荧光、免疫组化检测GGNBP2与GGN细胞定位;PCR检测野生型Ggnbp2基因敲除型小鼠睾丸生殖细胞GGN mRNA表达;Western blot检测其GGN蛋白表达。结果 GGNBP2与GGN相互作用,两种蛋白共同定位于精母细胞和精子细胞(Golgi phase,Cap phase)中的细胞核和胞浆,精子细胞(Acrosome phase,Maturation phases)中的顶体和尾部,GGNBP2缺失引起GGNmRNA水平和蛋白水平减低,在精母细胞中GGN定位改变。结论 Ggnbp2基因敲除引起小鼠生精功能缺陷可能通过降低GGN表达,改变GGN细胞定位,DNA双链损伤修复机制受损。

促红细胞生成素对血管性痴呆大鼠模型海马神经突触可塑性的影响

目的探讨促红细胞生成素(EPO)对血管性痴呆(VaD)大鼠海马神经突触可塑性的影响。方法将经行为学筛选合格的Wistar大鼠随机分为假手术组、VaD组、EPO治疗组。采用永久性结扎双侧颈总动脉的方法建立VaD模型。采用免疫组化学和RT-PCR方法检测大鼠海马微管结合蛋白2(MAP-2)和突触素(Syn)表达水平的变化。结果术后4周、8周、12周,VaD组和EPO治疗组大鼠出现学习记忆能力降低,并呈逐渐下降趋势,VaD组更加明显。EPO治疗组海马MAP-2,Syn蛋白及mRNA表达水平上调。结论 EPO可能通过调控VaD大鼠海马神经突触的可塑性,上调该区MAP-2,Syn蛋白及其mRNA表达水平,从而改善认知功能障碍。

血清NLRP3、ANGPTL4水平与2型糖尿病下肢动脉病变的关系

目的探讨血清核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、血管生成素样蛋白4(ANGPTL4)与2型糖尿病(T2DM)下肢动脉病变(LEAD)的关系。方法选择2019年1月至2021年1月安徽医科大学附属宿州医院内分泌科收治的89例T2DM合并LEAD患者(LEAD组),55例单纯T2DM患者(T2DM组)和50例健康志愿者(健康对照组)。检测血清NLRP3和ANGPTL4水平,收集临床资料,Pearson相关性分析NLRP3、ANGPTL4与静息ABI指数之间相关性。Logistic逐步回归分析NLRP3、ANGPTL4与T2DM合并LEAD的关系。绘制受试者工作特征曲线(ROC)分析NLRP3、ANGPTL4诊断T2DM合并LEAD的价值。结果LEAD组血清NLRP3水平高于T2DM组和健康对照组(P<0.05),血清ANGPTL4水平低于T2DM组和健康对照组(P<0.05)。Fontaine'sⅣ期患者静息踝肱指数(ABI)、ANGPTL4水平低于Ⅲ期和Ⅱa~Ⅱb期患者(P<0.05),NLRP3高于Ⅲ期和Ⅱa~Ⅱb期患者(P<0.05)。NLRP3与静息ABI指数呈负相关(r=-0.893,P<0.05),ANGPTL4与静息ABI指数呈正相关(r=0.805,P<0.05)。T2DM病程≥5年、高胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)和高NLRP3是T2DM合并LEAD的危险因素(P<0.05),高ANGPTL4是T2DM合并LEAD的保护因素(P<0.05)。联合NLRP3、ANGPTL4检测诊断T2DM合并LEAD的曲线下面积为0.902,高于单独NLRP3、ANGPTL4的0.698、0.705(P<0.05)。结论T2DM合并LEAD患者血清NLRP3水平增高,ANGPTL4降低,且与T2DM合并LEAD的发生以及病情严重程度有关,联合NLRP3和ANGPTL4可为LEAD诊断提供有效信息。