配对盒基因1甲基化检测对宫颈癌诊断价值的Meta分析

目的采用Meta系统分析评价中国人群中配对盒基因1(PAX1)甲基化检测对宫颈癌的诊断价值。方法检索万方、中国知网、维普、PubMed、Embase数据库,筛选相关文献后提取数据,采用QUADAS-2标准对纳入文献进行质量评价,再对提取数据行初步合并,以判定异质性和诊断效能,进一步探讨异质性来源及亚组分析,最后以漏斗图评估是否存在发表偏倚。结果共纳入13篇文献,其中病例组336例,对照组1006例。合并灵敏度为0.89(95%CI:0.85~0.92),合并特异度为0.76(95%CI:0.73~0.79),阳性似然比为4.48(95%CI:3.10~6.49),阴性似然比为0.14(95%CI:0.08~0.25),诊断优势比为31.11(95%CI:18.89~51.22),综合受试者工作特征(SROC)曲线的曲线下面积(AUC)为0.92(95%CI:0.90~0.94)。亚组分析显示,PAX1甲基化在宫颈癌的诊断中,对行焦磷酸定量化检测和未手术及放化疗患者的诊断价值较高(诊断比值比=41.74、40.78)。Meta回归分析表明,高级别宫颈癌前病变患者在对照组中占比是潜在异质性来源。结论PAX1甲基化检测对宫颈癌的诊断价值较高,有较高的灵敏度和特异度,可作为一项提高宫颈癌诊断水平的良好指标。

长链非编码RNA配对盒基因8反义RNA1在恶性肿瘤中的研究进展

长链非编码RNA(lncRNA)是一类长度大于200个核苷酸的RNA转录本。配对盒基因8反义RNA1(PAX8-AS1)是lncRNA的一种,在甲状腺癌、乳腺癌、子宫内膜癌、急性白血病、肾上腺皮质癌等多种恶性肿瘤中异常表达,通过作为竞争性内源RNA和其单核苷酸多态性等机制调节癌细胞的增殖、凋亡、侵袭和耐药性,对癌症的诊断、治疗及预后具有非常重要的价值。本文就lncRNA PAX8-AS1在恶性肿瘤中的作用机制及潜在应用进行综述。

配对盒家族基因1甲基化定量检测法与DNA倍体分析法在宫颈癌前病变诊断中的对比研究

目的比较PAX1基因甲基化定量检测技术和DNA倍体分析技术在宫颈癌前病变诊断中的临床价值。方法以2012年3月至2014年10月在上海市闵行区中心医院宫颈门诊就医的高危亚型HPV病毒mR—HPv）感染者为研究对象，根据病理学诊断结果，分为组I（正常宫颈）、组II（宫颈鳞状上皮低级别病变）和组III（宫颈鳞状上皮高级别病变）。无创采集所有对象的宫颈上皮脱落细胞，进行PAX1基因甲基化定量检测和DNA倍体定量检测，并与病理学结果进行比较。结果研究共纳入122例患者，组I39例，组II40例，组III43例。以可见或可见少量DNA异倍体细胞为阳性诊断标准时，DNA倍体分析法的灵敏度和特异度分别为88．37％和60．76％；以可见DNA异倍体细胞为阳性诊断标准时，其灵敏度和特异度分别为55．81％和88．61％。PAX1基因甲基化定量均值组I为（4．17±1．93）％，组II为（4．05±2．13）％，组III为（10．95±4．93）％，差异有统计学意义（F=15．02，P〈0．001）。受试者工作曲线（ROC曲线）提示PAX1甲基化定量检测阈值为5．71％，灵敏度为91．73％，特异度为81．97％。结论PAX1基因甲基化定量检测法比DNA倍体分析法具有更高的灵敏度和更为适中的特异度，在宫颈鳞状上皮高级别病变的诊断中具有良好的临床潜力。

配对盒家族基因1甲基化与人乳头瘤病毒E6/E7mRNA检测在子宫颈病变患者诊断中的应用

目的:分析配对盒家族基因1(PAX1)甲基化检测与人乳头瘤病毒(HPV)E6/E7mRNA检测在子宫颈癌及癌前病变患者诊断中的临床应用价值。方法:回顾性分析2018年3月至2019年9月在郑州大学第一附属医院就诊的子宫颈病变406例患者。根据病理检查结果分为4组:子宫颈炎组(145例)、低级别鳞状上皮内病变(LSIL)组(76例)、高级别鳞状上皮内病变(HSIL)组(119例)和子宫颈癌组(66例)。所有患者均行PAX1甲基化检测,其中同时行HPV E6/E7mRNA检测的患者有159例,比较两种检测方法在诊断子宫颈癌及癌前病变(高级别子宫颈上皮内瘤变)患者中的诊断效能。结果:子宫颈炎组、LSIL组、HSIL组、子宫颈癌组的PAX1甲基化率分别为10.3%、13.2%、39.5%、83.3%,HPV E6/E7mRNA阳性率分别为50.0%、68.6%、84.0%、87.8%,差异均有统计学意义(P<0.05)。两种方法单独用于诊断子宫颈癌及癌前病变时,HPV E6/E7mRNA的敏感度为86.36%,特异度为43.01%;PAX1甲基化的敏感度为55.14%,特异度为88.69%;两者联合检测时敏感度为80.30%,特异度为88.18%。结论:PAX1甲基化在诊断子宫颈癌及癌前病变患者中具有较高的特异度,且在联合HPV E6/E7mRNA检测时具有更高的临床应用价值。

焦磷酸定量化检测配对盒家族基因1甲基化在宫颈癌诊断中的应用

目的检测配对盒家族基因1(PAX1基因)在不同程度宫颈病变组织中的甲基化表达水平,评估其作为宫颈上皮细胞癌变的分子标志物的诊断价值。方法 2011年1月—2013年4月在上海市闵行区中心医院妇科宫颈专科门诊就诊的121例患者的宫颈组织,以组织病理学诊断作为金标准,分为正常宫颈组(28例)、低级别病变组[病理诊断为宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅰ级,32例]、高级别病变组(病理诊断为CINⅡ或Ⅲ级,34例)和宫颈鳞癌组(27例)。采用焦磷酸测序法检测抑癌基因不同位置的甲基化情况。采用受试者ROC曲线确定宫颈组织PAX1基因甲基化表达水平对宫颈病变的诊断阈值。结果正常宫颈组、低级别病变组、高级别病变组和宫颈鳞癌组间年龄(F=4.31,P<0.01)和高危人乳头瘤毒阳性构成比(χ2=79.43,P<0.01)的差异有统计学意义。正常宫颈组宫颈组织PAX1基因甲基化定量水平为(4.92±4.45)%,低级别病变组为(5.55±5.05)%,高级别病变组为(10.21±14.39)%,宫颈鳞癌组为(41.97±23.02)%,差异有统计学意义(F=46.43,P<0.001);两两比较发现,除正常宫颈组与低级别病变组之间差异无统计学意义外(P>0.05),其他各组之间差异均有统计学意义(P值均<0.01)。宫颈组织PAX1基因甲基化定量检测诊断宫颈鳞癌的ROC曲线AUC为0.883,敏感度为81%,特异度为93%,最佳界值为20.55%。宫颈组织PAX1基因甲基化定量检测诊断宫颈鳞癌和高级别病变的AUC为0.680,敏感度为57%,特异度为90%,最佳界值为8.97%。结论焦磷酸测序法PAX1基因甲基化水平定量检测较以往的定性分析有较大优势,对于宫颈癌临床诊断具有潜在应用价值。

PAX1检测在子宫颈癌筛查及预后判定中的临床价值及相关分子机制

目的探究配对盒家族基因(PAX)1检测在子宫颈癌(CC)筛查及预后判定中的临床价值及相关分子机制。方法选择赣州市妇幼保健院CC患者90例,取其肿瘤组织;纳入同期于医院进行治疗的宫颈上皮内瘤样病变(CIN)患者74例,并取其CIN组织;纳入同期于医院实施子宫全切除术的患者45例,取其正常宫颈组织。比较3组不同宫颈组织PAX1甲基化指数(PMR)及蛋白阳性表达率,并分析PAX1基因甲基化对CC筛查及预后评估的效能。选择正常宫颈细胞系ECT1/E6 E7及宫颈癌细胞系Hela,比较两种细胞系PAX1 mRNA及蛋白表达水平;将Hela细胞分为空白对照组(不进行处理常规培养)、PAX1 mimics NC组(转染PAX1 mimics NC)、PAX1 mimics组(转染PAX1 mimics)、PAX1 inhibition NC组(转染PAX1 inhibition NC)、PAX1 inhibition组(转染PAX1 inhibition),观察各组细胞增殖、侵袭及迁移能力,并进一步比较各组细胞Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路相关分子(上皮钙依赖黏附蛋白(E-cadherin)、β-catenin)mRNA及蛋白表达水平。结果正常宫颈、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ组织中PAX1 PMR值均较CC组织显著降低(P<0.05);CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ组织中PAX1 PMR值均较正常宫颈组织显著升高,且随CIN分级增加而明显升高(P<0.05)。PAX1甲基化诊断CC的曲线下面积(AUC)、灵敏度、特异度分别为0.97、93.20%、62.25%。正常宫颈、不同CIN组织PAX1阳性表达率均较CC组织显著升高(P<0.05);CINⅡ、CINⅢ组织PAX1阳性表达率均较正常宫颈组织显著升高(P<0.05)。PAX1蛋白诊断CC患者预后的AUC、灵敏度、特异度分别为0.829、90.00%、62.40%。Hela细胞系PAX1 mRNA及蛋白表达水平较ECT1/E6 E7细胞系显著降低(P<0.05)。在24、48、72 h时,PAX1 mimics组细胞增殖能力较空白对照组显著降低(P<0.05);PAX1 inhibition组细胞增殖能力较空白对照组显著升高(P<0.05)。PAX1 mimics组细胞迁移、穿膜数、β-catenin mRNA及蛋白表达水平均较空白对照组显著降低,E-cadherin mRNA及蛋白表达水平均较空白对照组显著升高,E-cadherin mRNA及蛋白表达水平均较空白对照组显著降低(P<0.05);PAX1 inhibition组细胞迁移、穿膜数、β-catenin mRNA及蛋白表达水平均较空白对照组显著升高(P<0.05)。PAX1 mimics组β-catenin mRNA及蛋白表达水平均较空白对照组显著降低,E-cadherin mRNA及蛋白表达水平均较空白对照组显著升高(P<0.05);PAX1 inhibition组β-catenin mRNA及蛋白表达水平均较空白对照组显著升高,E-cadherin mRNA及蛋白表达水平均较空白对照组显著降低(P<0.05)。结论PAX1检测在CC临床筛查及早期病情评估方面具有较高价值,且上调PAX1表达可阻断CC细胞增殖、侵袭及迁移,其作用机制可能是通过调控Wnt/β-catenin通路实现的,可为PAX1在CC靶向治疗提供理论依据。

高危型人乳头瘤病毒感染患者宫颈脱落细胞JAM3/PAX1高甲基化诊断宫颈高级别病变

目的:传统的宫颈癌筛查手段——高危型人乳头瘤病毒(high-risk human papillomavirus,hrHPV)和宫颈脱落细胞学检测存在局限性。本研究通过检测宫颈脱落细胞中连接黏附分子3(junctional adhesion molecule 3,JAM3)/配对盒基因1(paired box gene 1,PAX1)高甲基化水平,并将其与液基薄层细胞学(liquid based cytology,LBC)进行比较,评价JAM3/PAX1甲基化对于宫颈高级别病变的诊断能力,以探索新的宫颈高级别病变的诊断模式,实现宫颈高级别病变“精准筛查”的目的。方法:回顾性收集2021年6月至2022年6月在中南大学湘雅三医院妇科阴道镜门诊接受检查的患者共136例,包括宫颈非高级别病变122例,高级别病变14例。研究的变量包括:基本临床信息(年龄、体重指数、是否绝经)、LBC、hrHPV、宫颈组织病理、阴道微生态结果、阴道镜结果(宫颈转化区类型)、JAM3(ΔCtJ)和PAX1(ΔCtP)基因甲基化的ΔCt值。首先通过logistic回归分析筛选影响宫颈高级别病变的影响因素,并进行相关性分析,然后用差异有统计学意义的变量构建条件推断树模型。结果:Logistic回归分析提示高级别宫颈病变组与非高级别宫颈病变组的PAX1与JAM3基因甲基化ΔCt值以及LBC检测结果差异均有统计学意义(均P<0.05)。相关性分析发现,宫颈病理结果与ΔCtP(r=-0.360,P<0.001)、ΔCtJ(r=-0.448,P<0.001)、LBC(r=-0.305,P<0.001)、菌群多样性(r=-0.183,P=0.037)呈负相关。条件推断树显示:当ΔCtJ>10.13时,全部为宫颈非高级别病变的患者;当ΔCtP>6.22时,非高级别病变的患者有117例,占97.5%,高级别病变者仅3例,占2.5%。ΔCtJ>8.61且LBC为不明确的非鳞状上皮细胞(atypical squamous cell of undetermined significance,ASC-US)或未见上皮内病变细胞时,105例(99.1%)为宫颈非高级别病变的患者,仅1例(0.9%)检出为高级别病变;当LBC结果为高级别病变时,仅9例患者检出高级别病变,3例检出非高级别病变;而当LBC提示低级别病变、ASC-US、未见上皮内病变细胞,且ΔCtP>6.22时,有117例(97.5%)的患者检出非高级别病变。结论:在人乳头瘤病毒感染妇女中,JAM3/PAX1双基因甲基化检测可独立应用于宫颈高级别病变/非高级别病变的分层诊断,且不依赖于宫颈脱落细胞学检测结果;亦可与LBC联合使用以弥补LBC敏感度低的缺点。此外,未来将甲基化试剂盒应用于大规模宫颈癌筛查,有利于发现更多宫颈高级别病变患者,并达到早筛、早治宫颈病变/癌的目的。

宫颈癌组织中Pax1、LMX1A表达及其与临床病理特征和预后的关系

目的探讨宫颈癌组织配对盒基因1(Pax1)、LIM同源框转录因子1A(LMX1A)蛋白表达及其与临床病理特征和预后的关系。方法选择103例均行宫颈癌根治术治疗的宫颈癌患者作为研究对象,收集宫颈癌根治术中切除的宫颈癌组织及相应癌旁组织,采用免疫组化法检测宫颈癌组织和癌旁组织中Pax1、LMX1A蛋白表达。分析Pax1、LMX1A蛋白表达与患者临床病理特征及预后的关系,采用单因素及多因素Cox比例风险回归分析影响宫颈癌患者预后的因素。结果宫颈癌组织中Pax1、LMX1A表达阳性率低于癌旁组织(P均<0.05)。Pax1和LMX1A蛋白表达与TNM分期和淋巴结转移有关(P均<0.05)。Kaplan-Meier生存曲线分析结果显示,Pax1和LMX1A表达阴性患者的5年生存率下降(P均<0.05)。TNM分期Ⅲ期、Pax1表达阳性和LMX1A表达阳性及有淋巴结转移是影响宫颈癌患者预后的因素(P均<0.05)。结论宫颈癌组织中Pax1和LMX1A表达下降,且Pax1和LMX1A表达与患者临床病理分期、淋巴结转移及预后有关。

PAX1基因甲基化特异性定量PCR检测在宫颈癌筛查中的意义

目的探讨定量测定配对盒家族基因1(PAX1)甲基化水平在宫颈癌筛查中的意义。方法收集正常宫颈组织20例、宫颈上皮内瘤变Ⅰ(CINⅠ)组织15例、CINⅡ组织16例、CINⅢ组织19例和宫颈癌组织22例。采用甲基化特异性实时定量聚合酶链反应(QMSP)定量检测不同宫颈组织中PAX1甲基化水平,甲基化特异性PCR(MS-PCR)检测宫颈癌组织PAX1基因区域甲基化情况,并同时行第2代杂交捕获-人乳头瘤病毒-DNA(HC2-HPV-DNA)检测。采用受试者工作特征曲线(ROC)比较两者对宫颈癌的诊断效率。甲基化率通过甲基化指数(PMR)进行指标量化。结果宫颈癌组织的PMR为(75.27±30.61)%,显著高于CINⅢ的(12.90±10.80)%和其他良性病变及正常组织(P<0.001)。QMSP检测PAX1甲基化的ROC曲线下面积(AUC)、灵敏度和特异度分别为0.98、100.0%和84.3%,优于HC2-HPV-DNA检测的0.82、100.0%和52.5%,差异有统计学意义(P<0.001)。MS-PCR检测结果显示,在癌组织原发灶、转移性癌组织、毗邻原发灶的正常组织和距原发灶边缘>3cm的正常组织中,PAX1的甲基化率分别为95.0%(19/20)、100.0%(4/4)、70.0%(14/20)和35.0%(7/20),组间比较差异有统计学意义(P<0.001)。结论 QMSP方法定量检测PAX1的甲基化具有极高的灵敏度,且其特异度超过目前常用的HC2-HPV-DNA检测方法,在临床筛查和宫颈癌的早期诊断中可能具有潜在的应用价值。

宫颈脱落细胞中PAX1和SOX1基因甲基化对宫颈癌实验诊断的临床研究

目的检测宫颈脱落细胞中配对盒家族基因1(paired box 1,PAX1)和性别决定区域Y盒蛋白1(sex determining region Y box 1,SOX1)甲基化的状态及表达水平,并分析其对宫颈病变及宫颈癌(cervical cancer,CC)的诊断价值。方法前瞻性选取2019年1月~2021年12月在阜阳市临泉县人民医院经病理检查确诊的58例宫颈癌患者为宫颈癌(CC)组,35例高级别鳞状上皮内病变(high-grade squamous intraepithelial lesions,H-SIL)患者为H-SIL组,33例低级别鳞状上皮内病变(low-grade squamous intraepithelial lesions,L-SIL)患者为L-SIL组,50例同期行健康体检的正常人群为Control组。分别取其宫颈脱落细胞,采用甲基化特异性实时定量PCR检测所有研究对象宫颈细胞中PAX1和SOX1甲基化状态和甲基化水平,并分析其甲基化状态与宫颈癌患者临床病理参数之间的关系。根据甲基化水平绘制受试者工作特征(ROC)曲线,根据曲线下面积(area under curve,AUC)分析PAX1和SOX1甲基化水平对宫颈病变及宫颈癌的诊断价值。结果L-SIL组患者PAX1和SOX1基因甲基化发生率分别为27.3%和21.2%,H-SIL组患者PAX1和SOX1基因甲基化发生率分别为34.3%和25.7%,CC组患者PAX1和SOX1基因甲基化发生率分别为82.8%和77.6%,显著高于Control组(0.0%,4.0%),差异均有统计学意义(F=53.805,46.228,均P<0.001)。Control组、L-SIL组、H-SIL组和CC组患者PAX1基因甲基化水平分别为1.86±0.64,1.55±0.28,1.46±0.30和0.98±0.21,SOX1基因甲基化水平分别为1.57±0.35,1.22±0.39,1.13±0.22和0.82±0.17,各组间差异均有统计学意义(F=5.230,4.764,均P<0.05)。PAX1和SOX1基因甲基化状态均与淋巴结转移有明显相关性,差异有统计学意义(χ^(2)=4.125,5.428,均P<0.05),与年龄、肿瘤大小、临床分期、组织学类型、分化程度及WHO病理分级等无相关性,差异均无统计学意义(χ^(2)=0.168~2.968,均P>0.05)。PAX1甲基化水平诊断L-SIL,H-SIL和CC时对应AUC分别为0.645,0.703和0.917,SOX1甲基化水平诊断L-SIL,H-SIL和CC时对应AUC分别为0.604,0.689和0.850。结论宫颈脱落细胞中PAX1和SOX1基因甲基化状态与宫颈癌患者淋巴结转移有关,且其甲基化水平对宫颈癌具有较高的诊断价值。

宫颈组织PAX1甲基化定量检测诊断高级别宫颈癌前病变价值

目的:探讨宫颈组织配对盒家族基因1(PAX1)的甲基化定量检测对高级别宫颈癌前病变的临床诊断价值。方法:选取2021年6月-2022年6月本院妇科接受检查且确诊为高危亚型HPV病毒感染患者64例作为研究对象,均接受病理诊断并依据结果分为正常宫颈组(n=19)、低级别宫颈癌前病变组(n=21)、高级别宫颈癌前病变组(n=24),收集各组宫颈组织标本,采用焦磷酸测序法检测各样本PAX1基因的甲基化水平,对比各组HPV病毒阳性感染率及PAX1甲基化阳性率情况及宫颈刮片和宫颈组织中PAX1基因甲基化水平,采用受术者工作特征曲线(ROC)分析PAX1基因甲基化水平诊断高级别宫颈癌前病变价值。结果:随着宫颈癌前病变级别的升高,受检者高危HPV病毒DNA定量值(392.17±95.62、442.18±113.47、533.38±203.15)无差异(P=0.204),但HPV阳性率及PAX1甲基化阳性率正常宫颈组(36.8%、0)、低级别宫颈癌前病变组(66.7%、9.5%)、高级别宫颈癌前病变组(91.7%、62.5%)逐渐升高(均P<0.05):ROC曲线分析,PAX1基因甲基化水平诊断高级别宫颈癌前病变的曲线下面积为0.785,灵敏度89.5%、特异度80.5%。结论:PAX1甲基化定量检测方法可有效诊断高级别宫颈癌前病变。

pax1蛋白在子宫颈癌中的表达及与预后的关系

目的:研究配对盒基因1(pax1)在子宫颈组织中的蛋白表达及其临床意义,探讨pax1蛋白与子宫颈癌预后的关系。方法:采用免疫组化法检测中日友好医院2011年8月至2017年10月收治的101例子宫颈癌、120例子宫颈上皮内瘤变(CIN)及20例正常子宫颈组织(对照组)中pax1蛋白表达水平,分析其子宫颈癌临床病理参数,采用受试者工作曲线(ROC)评估其诊断效能并随访,探讨其与子宫颈鳞癌(SCC)及子宫颈腺癌(AC)预后的关系。结果:①对照组的pax1蛋白表达水平(90.0%)高于CIN(73.3%)及子宫颈癌(38.6%),SCC患者pax1蛋白阳性表达率(20.9%)明显低于AC(70.0%)及特殊类型子宫颈癌(100.0%),差异有统计学意义(P<0.05)。②ROC曲线显示,pax1蛋白曲线下面积(AUC)为0.829,诊断子宫颈癌的灵敏度90.0%,特异度61.3%。③pax1蛋白阳性表达率与子宫颈癌患者的HPV感染、分化程度、组织类型及脉管浸润有关(P<0.05)。④SCC患者中pax1蛋白阳性组的生存时间明显高于阴性组(P=0.040),AC患者中pax1蛋白阳性组的生存时间与阴性组比较,差异无统计学意义(P=0.589)。结论:pax1蛋白的表达缺失与CIN及子宫颈癌进展密切相关,其诊断CINⅡ及以上的效能较高。pax1蛋白的表达缺失与SCC的发生发展及预后有一定的关系,pax1蛋白有望成为监测SCC患者预后的有效指标。

配对盒家族基因1甲基化检测在子宫颈癌诊断中的应用

目的检测配对盒家族基因1(PAX1)在不同宫颈病变宫颈脱落细胞中的甲基化水平,评估其作为宫颈上皮细胞癌变分子标志物的价值。方法采用焦磷酸测序法检测PAX1基因的甲基化情况。比较正常组织与低级别宫颈鳞状上皮内病变(LSIL)、高级别宫颈鳞状上皮内病变(HSIL)和宫颈癌组织(各组20例)甲基化水平的差异。并采用受试者工作特性曲线(ROC)确定癌变组与非癌变组之间的判别临界值。结果 1正常宫颈组PAX1基因甲基化水平为(4.57±2.43)%,LSIL组为(3.383±2.364)%,HSIL组为(13.64±13.35)%,宫颈癌组为(26.39±18.53)%,其中正常宫颈组与LSIL组PAX1基因甲基化水平比较,差异无统计学意义(P>0.05),其他各组间比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。2 ROC曲线下面积(AUC)为0.893,提示有较高的诊断价值。取PAX1甲基化水平27%作为临界值,检测灵敏度为97.1%,特异度为85.2%。结论焦磷酸测序法PAX1基因甲基化水平定量检测对于宫颈癌早期临床诊断具有潜在的诊断价值。

PAX1检测对宫颈上皮内瘤变和宫颈癌HPV感染的临床诊断价值

目的探讨配对盒家族基因1(paired boxed gene 1,PAX1)的甲基化定量检测以及免疫组化法等对高级别宫颈癌前病变的临床诊断价值。方法选取2014年1月至2016年10月在上海交通大学附属第六人民医院就诊的135例高危亚型人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)感染者为研究对象,根据病理诊断结果将其分为正常宫颈组(组Ⅰ,40例)、低级别宫颈癌前病变组[宫颈上皮内瘤变(cervical intraepi-thelial neoplasia,CIN)Ⅰ,组Ⅱ,44例]及高级别宫颈癌前病变组(CINⅡ~Ⅲ,组Ⅲ,51例)。采集各组患者宫颈组织标本,分别采用免疫组织化学法、免疫印记法、聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)、PAX1定量甲基化聚合酶链反应及焦磷酸测序法检测各组样本中的PAX1甲基化水平及表达情况,绘制患者PAX1甲基化水平接受者操作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC曲线)。结果组Ⅰ的PAX1甲基化水平为(4.53±2.62)%,组Ⅱ为(3.24±2.28)%,组Ⅲ为(13.67±5.38)%,三组比较差异具有显著性(F=22.35,P<0.001)。ROC曲线下面积为0.9216。PAX1甲基化水平对高级别宫颈癌前病变的诊断阈值为8.74%,灵敏度为86.27%,特异度为98.81%。结论采用焦磷酸测序法定量检测宫颈组织中PAX1甲基化水平能够有效诊断高级别宫颈癌前病变。

p16/Ki67细胞双染和配对盒家族基因1甲基化检测对细胞学未明确意义的不典型鳞状上皮细胞患者分流的作用

目的 探讨p16/Ki67细胞双染和配对盒家族基因1(PAX1)甲基化检测在细胞学未明确意义的不典型鳞状上皮细胞(ASC-US)患者中的分流作用。方法 选取2019年7月—2020年9月于郑州大学第一附属医院行宫颈癌筛查的患者25 532例,其中TCT结果为ASC-US,并接受p16/Ki67细胞双染、PAX1甲基化检测及阴道镜下活检且结果有效的患者共431例,以组织病理诊断为金标准,采用灵敏度、特异度、准确率、约登指数比较p16/Ki67细胞双染、PAX1甲基化及p16/Ki67细胞双染+PAX1甲基化联合检测(以下简称联合检测)诊断CIN2+、CIN3+的效能,并计算不同方法的阴道镜转诊率。结果 p16/Ki67细胞双染、PAX1甲基化和联合检测的阳性率均随着宫颈病变严重程度升高而升高。PAX1甲基化诊断CIN2+和CIN3+的灵敏度、特异度、准确率及约登指数分别为60.28%、92.07%、81.67%、0.524和78.48%、86.93%、85.38%、0.654,特异度和准确率均高于p16/Ki67细胞双染及联合检测(P<0.05),且约登指数最大。使用PAX1甲基化进行分流时,阴道镜转诊率降低73.13%。联合检测诊断CIN2+和CIN3+的灵敏度高于p16/Ki67细胞双染、PAX1甲基化单独检测,差异有统计学意义(P<0.05)。使用联合检测分流时,阴道镜转诊率降低44.78%,且诊断宫颈癌的准确率为100%。结论 对于分流细胞学ASC-US的患者,PAX1甲基化检测具有较高的特异度,可在一定程度上降低阴道镜转诊率。联合检测可提高灵敏度,对宫颈癌的诊断具有重要作用。

乳癌组织中Pax1的表达及其对乳癌MDA-MB-231细胞生物学行为的影响

目的:研究Pax1在乳癌组织中的表达及其对乳癌MDA-MB-231细胞生物学行为的影响。方法:采用Western blot检测200乳腺原发癌和癌旁组织中Pax1蛋白的表达。采用化学合成针对Pax1基因的两个小干扰RNA(siRNA-Pax1-1和siRNA-Pax1-2)下调该基因的表达,应用MTT和Transwell实验检测其对MDA-MB-231细胞生物学行为的影响。结果:Pax1在乳腺原发癌组织中的表达低于相应的癌旁组织,沉默Pax1表达可促进乳癌细胞增殖、迁移和侵袭(F=52.413和72.741,P<0.001)。结论:Pax1有望成为乳癌早期诊断和预测预后的生物分子标志物。

定量检测PAX1甲基化对于高级别宫颈癌前病变的诊断价值

目的:探讨配对盒家族基因1(paired boxed gene 1,PAX1)的甲基化定量检测对于高级别宫颈癌前病变的临床诊断价值。方法:以病理诊断为金标准,将122例高危亚型HPV病毒感染患者分为正常宫颈组(组I,n=39)、低级别宫颈癌前病变组(组II,n=40)和高级别宫颈癌前病变组(组III,n=43)。收集各组的宫颈组织标本,采用焦磷酸测序法检测各样本中PAX1基因的甲基化水平并进行统计学分析,绘制受试者工作特性(ROC)曲线,确定PAX1基因的甲基化水平对高级别宫颈癌前病变的诊断阈值。结果:组I的PAX1基因甲基化水平为(4.77±2.43)%,组II为(3.75±2.36)%,组III为(13.51±5.31)%,差异有统计学意义(F=23.13,P<0.001)。ROC曲线下面积为0.73。PAX1甲基化水平用于诊断高级别宫颈癌前病变的诊断阈值为4.15%,灵敏度为89.39%,特异度为79.15%。结论:采用焦磷酸测序法定量检测宫颈组织中PAX1基因的甲基化水平能够有效诊断高级别宫颈癌前病变。

PAX1甲基化与蛋白检测在宫颈鳞癌及上皮内病变中的应用价值分析

目的分析配对盒家族基因1(Paired boxed gene 1,PAX1)的甲基化检测与PAX1蛋白在宫颈鳞癌及上皮内病变中的阳性率及癌组的临床病理学意义。方法选取2014年1月至2018年10月在遵义医科大学附属医院确诊为宫颈病变的320例患者为研究对象,根据病理诊断结果将其分为慢性宫颈炎(组Ⅰ,93例)、低级别鳞状上皮内病变(组Ⅱ,20例),高级别鳞状上皮内病变(组Ⅲ,112例)及宫颈鳞癌(组Ⅳ,95例),并收集各组患者宫颈组织石蜡标本。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测PAX1甲基化情况作定性分析,运用免疫组织化学Envision法检测PAX1蛋白表达情况,利用同类PAX蛋白判读标准进行定性分析,分析不同分组的甲基化率、蛋白表达阳性率以及癌组的临床病理参数特征有无差异。结果4组患者PAX1甲基化率分别为1.08%(1/93)、25.00%(5/20)、66.07%(74/112)、89.47%(85/95),4组及组间两两比较均具有显著统计学差异(P<0.05);组Ⅳ,PAX1甲基化率与患者复发相关,差异具有统计学意义(P<0.05),与年龄、病理分型、淋巴结转移的病理特征无明显差异性(P>0.05);PAX1蛋白阳性率分别为1.08%(1/93)、70.00%(14/20)、96.43%(108/112)、89.47%(85/95),4组比较具有统计学差异(P<0.05),两两比较,组Ⅳ、组Ⅲ、组Ⅱ分别与组Ⅰ,组Ⅲ与组Ⅱ差异有统计学意义(P<0.05);组Ⅳ,PAX1蛋白的表达与年龄、病理分型、淋巴结转移、复发病理特征无明显差异性(P>0.05);4组患者总PAX1甲基化率、蛋白阳性率差异具有统计学意义(P<0.05),两种检测方法之间存在关联性,其关联强度?=0.338。结论①PAX1甲基化率随宫颈病变程度加重逐渐增高,且与宫颈鳞癌复发相关,推测PAX1甲基化可能与患者疾病进展相关联,有助于判断病变预后情况;②PAX1蛋白检测有助于宫颈高级别与低级别鳞状上皮内病变的鉴别,且在宫颈鳞癌的表达与临床病理特征无明显关联;③PAX1甲基化与PAX1蛋白表达随宫颈病变程度的加重总体呈上升趋势,PAX1甲基化与其蛋白表达呈正相关。

配对盒家族基因1甲基化状态与宫颈组织病变的相关性研究

目的:探讨定量测定配对盒家族基因1(PAX1)甲基化状态与宫颈组织病变的相关关系。方法:收集正常宫颈组织20例、宫颈上皮内瘤变CINI组织50例、CINII组织50例、CINIII组织50例和宫颈癌组织50例。采用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation specific PCR,MSP)分析宫颈病变组织中PAX1基因启动子区甲基化状态,结合定量PCR(real time-PCR)检测PAX1mRNA表达情况行综合分析。结果:宫颈癌组织中PAX1基因启动子甲基化率达94%(47/50),CINI组织中PAX1基因启动子甲基化率达40%(20/50),CINII 52%(26/50),CINIII 84%(42/50),而正常对照组织均无甲基化状态(P<0.05)。不同临床分期的宫颈癌组织PAX1甲基化率也不尽相同(P>0.05),病理组织学分化程度不同,PAX1甲基化率不同,呈负向相关性(P<0.05)。50例甲基化的宫颈癌组织中有PAX1mR N A表达,随着临床分期升级,PAX1mR N A表达增加,有统计学意义(P<0.05);而不同组织分化程度的PAX1mR N A表达量差异有统计学意义(P<0.05)。结论:DNA修复因子PAX1甲基化状态可能与子宫颈癌的病因学发生存在相关关系,在临床筛查和宫颈癌的早期诊断中可能具有潜在的应用价值。

SOX1和PAX1甲基化检测对高危型人乳头瘤病毒阳性者的分流作用

目的探讨宫颈脱落细胞中性别决定区Y框蛋白1(sex determining region Y box protein 1,SOX1)和配对盒家族基因1(paired box gene 1,PAX1)甲基化对高危型人乳头瘤病毒(high-risk human papilloma virus,HRHPV)阳性者的分流作用。方法选取2022年12月至2023年6月本院宫颈癌筛查中临床资料完整的HR-HPV阳性者243例,同时进行宫颈液基细胞学(TCT)和SOX1和PAX1甲基化检测,并转诊阴道镜和宫颈活体组织检查。比较PAX1和SOX1甲基化检测在宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)及宫颈癌中的诊断效能。结果在243例患者中,病理检查结果阴性(包括宫颈正常和宫颈炎患者)126例、CIN167例、CIN228例、CIN315例及鳞状细胞癌7例。Spearman相关性分析显示,SOX1和PAX1甲基化检出率与宫颈病变等级呈正相关(r=0.577,P<0.001)。在HR-HPV阳性患者中,SOX1和PAX1甲基化检测的敏感度、特异度、阳性预测值(PPV)、阴性预测值(NPV)及ROC曲线下面积(AUC)为82.0%、89.6%、67.2%、95.1%及0.858,均高于TCT(68.0%、69.9%、37.0%、89.4%及0.690,P<0.001),且SOX1和PAX1甲基化检测与病理结果的一致性(Kappa=0.662)优于TCT与病理结果的一致性(Kappa=0.289)。在非HPV 16/18型高危型HPV患者中,SOX1和PAX1甲基化检测的效能也高于TCT,SOX1和PAX1甲基化与病理结果的一致性(Kappa=0.586)也优于TCT与病理结果的一致性(Kappa=0.242)。结论在HR-HPV阳性者中,SOX1和PAX1甲基化率与CIN级别呈正相关,较TCT而言,HR-HPV检测联合甲基化检测可提高对CIN及宫颈癌的诊断率,降低阴道镜的转诊率。