长链非编码RNA配对盒基因8反义RNA1在恶性肿瘤中的研究进展

长链非编码RNA(lncRNA)是一类长度大于200个核苷酸的RNA转录本。配对盒基因8反义RNA1(PAX8-AS1)是lncRNA的一种,在甲状腺癌、乳腺癌、子宫内膜癌、急性白血病、肾上腺皮质癌等多种恶性肿瘤中异常表达,通过作为竞争性内源RNA和其单核苷酸多态性等机制调节癌细胞的增殖、凋亡、侵袭和耐药性,对癌症的诊断、治疗及预后具有非常重要的价值。本文就lncRNA PAX8-AS1在恶性肿瘤中的作用机制及潜在应用进行综述。

抑制长非编码RNA配对盒8反义RNA 1对心肌缺血再灌注细胞氧化应激和细胞凋亡水平的影响

目的探讨抑制长非编码RNA配对盒8反义RNA 1(long non-coding RNA PAX8-AS1,lncRNA PAX8-AS1)对心肌缺血再灌注(myocardial ischemia-reperfusion,MI/R)细胞氧化应激和细胞凋亡水平的影响。方法以H9c2心肌细胞为研究对象,将细胞分为4组:空白对照组、MI/R组、si-con组、si-PAX8-AS1组。实时定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测各组心肌细胞PAX8-AS1的表达水平;化学比色法检测各组细胞丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)浓度;流式细胞术检测心肌细胞凋亡率;Western blot检测各组细胞B细胞淋巴瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白质(Bcl-2 associated X protein,Bax)蛋白表达。结果与空白对照组(1.00±0.06)相比,MI/R组(2.63±0.08)、si-con组(2.59±0.04)、si-PAX8-AS1组PAX8-AS1 mRNA表达水平(1.41±0.03)均显著升高,差异有统计学意义(F=687.811,P<0.05);与si-con组相比,si-PAX8-AS1组PAX8-AS1 mRNA表达水平显著降低,差异有统计学意义(LSD-t=27.281,P<0.05)。与空白对照组相比,MI/R组、si-con组、si-PAX8-AS1组MDA浓度、心肌细胞凋亡率及Bax蛋白表达均显著升高,SOD、GSH-Px浓度及Bcl-2蛋白表达均显著降低,差异有统计学意义(均P<0.05);与si-con组相比,si-PAX8-AS1组MDA浓度、心肌细胞凋亡率及Bax蛋白表达降低,SOD和GSH-Px浓度及Bcl-2蛋白表达均升高,差异有统计学意义(均P<0.05)。结论抑制PAX8-AS1表达后可抑制心肌MI/R损伤细胞氧化应激水平并降低细胞凋亡水平。

LncRNA ZEB1-AS1和LncRNA SOX2OT在糖尿病肾病患者中的表达及与肾功能的相关性研究

目的探究长链非编码RNA锌指E盒结合同源盒蛋白1反义链1(LncRNA ZEB1-AS1)和长链非编码RNA性别决定相关基因簇2重叠转录本(LncRNA SOX2OT)在糖尿病肾病(DN)患者中的表达及与肾功能的相关性。方法选取于2021年11月—2023年12月在武汉大学人民医院肾内科收治的DN患者106例为DN组,并根据24 h尿蛋白定量(24 h Upro)水平分为正常蛋白尿亚组43例(<30 mg)、微量蛋白尿亚组39例(30~<300 mg)、大量蛋白尿亚组24例(≥300 mg),另选取同期医院单纯糖尿病患者106例作对照组,检测患者血清LncRNA ZEB1-AS1、LncRNA SOX2OT水平;Pearson法分析LncRNA ZEB1-AS1和LncRNA SOX2OT与肾功能指标的相关性;Logistic分析影响DN患者肾功能损伤的因素。结果DN组血清LncRNA ZEB1-AS1、LncRNA SOX2OT水平低于对照组(t=11.471、10.257,P均<0.001)。血清LncRNA ZEB1-AS1、LncRNA SOX2OT比较,正常尿蛋白亚组>微量尿蛋白亚组>大量尿蛋白亚组(F=58.720、117.722,P均<0.001),BUN、SCr、UA水平比较,正常尿蛋白亚组<微量尿蛋白亚组<大量尿蛋白亚组,差异均有统计学意义(F=122.493、595.589、53.178,P均<0.001);LncRNA ZEB1-AS1、LncRNA SOX2OT分别与BUN、SCr、UA呈负相关(r=-0.487、-0.498、-0.521,-0.527、-0.515、-0.534,P均<0.001);Logistic回归分析显示,糖尿病病程长及高BUN、SCr、UA水平是影响DN患者肾功能损伤的危险因素[OR(95%CI)=1.672(1.128~2.479)、2.839(1.534~5.253)、2.754(1.512~5.017)、2.693(1.464~4.954)],高LncRNA ZEB1-AS1、LncRNA SOX2OT是保护因素[OR(95%CI)=0.875(0.798~0.959)、0.898(0.832~0.969)]。结论血清LncRNA ZEB1-AS1、LncRNA SOX2OT水平与DN患者肾功能有关,可能是评估DN患者肾功能的潜在指标。

lncRNA PAX8-AS1对结直肠癌细胞增殖、凋亡和侵袭的作用及其机制

目的:探讨长链非编码RNA配对盒8反义RNA 1(PAX8-AS1)在人结直肠癌(CRC)组织中的表达水平及其对CRC细胞增殖、凋亡及侵袭的作用,并阐明其作用机制。方法:采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测94例CRC患者癌组织和癌细胞中PAX8-AS1 mRNA和miR-22-3p表达水平。将PAX8-AS10 siRNA小分子序列与miR-22-3p inhibitors分别转染或共转染至CRC细胞中,转染后细胞分为si-NC组(转染阴性序列)、si-PAX8-AS1组(转染PAX8-AS1 siRNA)、si-PAX8-AS1+inhibitors NC组(共转染PAX8-AS1 siRNA和inhibitors NC)和si-PAX8-AS1+inhibitors组(共转染PAX8-AS1 siRNA和miR-22-3p inhibitors),另取未经任何转染的SW480细胞作为对照组。RTqPCR法检测转染后各组细胞中PAX8-AS1 mRNA和miR-22-3p表达水平,MTT法检测各组细胞增殖活性,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Transwell小室实验检测各组细胞迁移和侵袭率,Western blotting法检测各组细胞中B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和cleaved Caspase-3蛋白表达水平,双荧光素酶报告基因实验验证PAX8-AS1与miR-22-3p的靶向关系。结果:RT-qPCR法检测,与癌旁组织比较,癌组织中PAX8-AS1 mRNA表达水平明显升高(P<0.01),miR-22-3p表达水平明显降低(P<0.01);与人正常结肠上皮细胞NCM460比较,SW480、SW620、HT-29和LoVo细胞中PAX8-AS1 mRNA表达水平均明显升高(P<0.05或P<0.01),miR-22-3p表达水平均明显降低(P<0.05或P<0.01)。与对照组和si-NC组比较,si-PAX8-AS1组细胞中PAX8-AS1 mRNA表达水平明显降低(P<0.01),miR-22-3p表达水平明显升高(P<0.01);与si-NC组比较,si-PAX8-AS1+inhibitors NC组细胞中miR-22-3p表达水平明显升高(P<0.01)。MTT法检测,与对照组比较,si-PAX8-AS1组、si-PAX8-AS1+inhibitors NC组和si-PAX8-AS1+inhibitors组细胞培养48和72 h时细胞增殖活性均明显降低(P<0.01);与si-NC组比较,si-PAX8-AS1+inhibitors NC组细胞培养48和72 h时细胞增殖活性均明显降低(P<0.01)。流式细胞术检测,与对照组比较,si-PAX8-AS1组细胞凋亡率明显升高(P<0.01);与si-NC组比较,si-PAX8-AS1组和si-PAX8-AS1+inhibitors NC组细胞凋亡率明显升高(P<0.01)。Transwell小室实验检测,与对照组比较,si-PAX8-AS1组细胞迁移和侵袭率明显降低(P<0.01);与si-NC组比较,si-PAX8-AS1组和si-PAX8-AS1+inhibitors NC组细胞迁移和侵袭率明显降低(P<0.01)。Western blotting法检测,与对照组和si-NC组比较,si-PAX8-AS1组细胞中Bax和cleaved Caspase-3蛋白表达水平明显升高(P<0.01),Bcl-2蛋白表达水平降低(P<0.05)。TargetScan预测PAX8-AS1与miR22-3p存在靶向结合位点。双荧光素酶报告基因实验,与共转染mimics NC的细胞比较,miR-22-3p mimics共转染后PAX8-AS1-WT细胞中荧光素酶活性明显降低(P<0.01)。结论:PAX8-AS1在人CRC组织中高表达,沉默PAX8-AS1可抑制CRC细胞增殖、迁移和侵袭,并诱导细胞凋亡,其机制可能与上调miR22-3p表达有关。

LncRNA FOXD3-AS1靶向miR-127-3p对AngⅡ诱导的血管平滑肌细胞的影响

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)叉头盒转录基因D3反义RNA1(FOXD3-AS1)对血管紧张素(Ang)Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法采用0.001 mol/L的AngⅡ处理人主动脉VSMCs。实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测FOXD3-AS1和miR-127-3p的表达水平。CCK-8、流式细胞术、Transwell、Western印迹检测细胞活力、凋亡、迁移、侵袭及磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)和蛋白激酶B(AKT)的磷酸化水平。双荧光素酶报告基因实验和RT-qPCR验证FOXD3-AS1和miR-127-3p的靶向调控关系。结果AngⅡ诱导后VSMCs细胞存活率、迁移和侵袭细胞数、FOXD3-AS1、p-PI3K和p-AKT表达显著升高,凋亡率、miR-127-3p表达显著降低(P<0.05)。抑制FOXD3-AS1表达或过表达miR-127-3p后,AngⅡ处理的VSMCs细胞存活率、迁移和侵袭细胞数、p-PI3K和p-AKT表达显著降低,凋亡率显著升高(P<0.05)。FOXD3-AS1靶向负性调控miR-127-3p表达。抑制FOXD3-AS1能够逆转抑制miR-127-3p对AngⅡ处理的VSMCs细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭及p-PI3K和p-AKT表达的影响(P<0.05)。结论抑制FOXD3-AS1能够降低AngⅡ诱导的VSMCs细胞增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡,其机制可能与上调miR-127-3p和抑制PI3K/AKT信号通路有关。

LncRNA FAM83H-AS1调控miR-136-5p/HOXC10轴对胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)序列相似性家族83成员H反义RNA 1(lncRNA FAM83H-AS1)调控微小RNA-136-5p(miR-136-5p)/同源异型盒基因10(HOX10)轴对胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法体外培养人胶质瘤细胞U87,对U87细胞转染质粒,并将细胞分为对照组、si-NC组、si-FAM83H-AS1组、miR-NC组、miR-136-5p mimics组、si-FAM83H-AS+NC inhibitor组、si-FAM83H-AS+miR-136-5p inhibitor组、miR-136-5p mimics+HOXC10 NC组、miR-136-5p mimics+HOXC10组。检测胶质瘤组织与细胞U87中FAM83H-AS1、miR-136-5p、HOXC10的表达。细胞计数盒8(CCK-8)法检测U87细胞增殖;流式细胞仪检测U87细胞凋亡;蛋白免疫印迹(WB)法检测U87细胞中HOXC10、Cyclin D1、Bcl-2、Bax蛋白的表达;双荧光素酶报告系统分析miR-136-5p与FAM83H-AS1、HOXC10的靶向关系。结果胶质瘤组织中FAM83H-AS1表达水平显著升高,miR-136-5p表达水平降低(P<0.05);沉默FAM83H-AS1表达或过表达miR-136-5p,U87细胞凋亡率、Bax蛋白表达显著升高,细胞存活率、HOXC10 mRNA、Cyclin D1、Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.05);双荧光素酶报告基因显示,miR-136-5p与FAM83H-AS1、HOXC10均有靶向关系;抑制miR-136-5p表达可逆转沉默FAM83H-AS1表达对U87细胞增殖的抑制作用,HOXC10过表达可逆转过表达miR-136-5p对U87细胞增殖的抑制作用。结论FAM83H-AS1通过调控miR-136-5p/HOXC10轴促进胶质瘤细胞增殖,抑制细胞凋亡。

膀胱癌组织中PAX8、PITX1表达及其与临床特征、预后的关系

目的:探讨膀胱癌组织中配对盒基因8(PAX8)、垂体同源框1(PITX1)表达及其与临床特征、预后的关系。方法:选取2015年6月—2017年6月93例膀胱癌患者于潜江市中心医院手术时取得的膀胱癌组织标本作为膀胱癌组,对应癌旁组织标本作为癌旁组。检测膀胱癌组及癌旁组PAX8、PITX1表达情况,分析膀胱癌患者临床特征,比较两组PAX8、PITX1阳性率,比较不同临床特征膀胱癌患者膀胱癌组织PAX8、PITX1阳性率,分析膀胱癌患者随访期间预后情况,并对其进行单因素及多因素分析。结果:膀胱癌组PAX8阳性率高于癌旁组,PITX1阳性率低于癌旁组,差异有统计学意义(P<0.05)。低分化、Ⅲ期、浸润深度为T_(3)~T_(4)、有淋巴结转移的膀胱癌患者膀胱癌组织PAX8阳性率、PITX1阴性率均高于中/高分化、Ⅰ~Ⅱ期、浸润深度为T_(1)~T_(2)、无淋巴结转移的膀胱癌患者,差异有统计学意义(P<0.05)。93例膀胱癌患者连续随访5年后,41例患者死亡,52例患者存活,存活率为55.91%(52/93)。膀胱癌组织PAX8阴性表达患者的5年生存率明显高于PAX8阳性表达患者,膀胱癌组织PITX1阳性表达患者的5年生存率明显高于PITX1阴性表达患者,中/高分化、无淋巴结转移的膀胱癌患者5年生存率明显高于低分化、有淋巴结转移的膀胱癌患者,差异有统计学意义(P<0.05)。低分化、淋巴结转移、PAX8阳性表达、PITX1阴性表达均是膀胱癌患者死亡的危险因素(P<0.05)。结论:膀胱癌患者PAX8呈高表达、PITX1呈低表达,二者可以作为预测膀胱癌患者预后的生物学指标。

宫颈癌组织中lncRNA HOXD-AS1、miR-133a-3p的表达变化及其临床意义

目的观察宫颈癌组织中长链非编码RNA同源盒基因D-反义链1(lncRNA HOXD-AS1)、微小RNA-133a-3p(miR-133a-3p)的表达变化,并探讨其临床意义。方法选取手术切除的宫颈癌及其癌旁组织各92例份,采用qRT-PCR法检测上述组织lncRNA HOXD-AS1、miR-133a-3p,分析两指标间及其与宫颈癌临床病理参数的关系,Kaplan-Meier曲线分析不同lncRNA HOXD-AS1、miR-133a-3p表达水平宫颈癌患者术后3年总生存率,Cox回归分析法分析宫颈癌患者预后不良的影响因素。结果宫颈癌组织中lncRNA HOXD-AS1、miR-133a-3p相对表达量分别为2.064±0.644、0.947±0.305,癌旁组织分别为1.044±0.275、1.572±0.563,两者比较,P均<0.05。宫颈癌组织中lncRNA HOXD-AS1与miR-133a-3p表达呈负相关(r=-0.663,P<0.05)。lncRNA HOXD-AS1、miR-133a-3p表达与宫颈癌FIGO分期、淋巴结转移有关(P均<0.05)。lncRNA HOXD-AS1≥2.064患者(40例)和lncRNA HOXD-AS1<2.064患者(52例)术后3年总生存率分别为30.00%(12/40)、67.31%(35/52),两者比较,P<0.05;miR-133a-3p≥0.947患者(45例)和miR-133a-3p<0.947患者(47例)术后3年总生存率分别为68.89%(31/45)、34.04%(16/47),两者比较,P<0.05。多因素分析显示,FIGO分期Ⅲ~Ⅳ期、淋巴结转移、lncRNA HOXD-AS1≥2.064为宫颈癌患者预后不良独立风险因素,miR-133a-3p≥0.947为独立保护因素(P均<0.05)。结论宫颈癌组织中lncRNA HOXD-AS1表达升高,miR-133a-3p表达降低,两指标可能成为宫颈癌患者预后评估指标,lncRNA HOXD-AS1≥2.064及miR-133a-3p≥0.947时是宫颈癌患者预后不良的影响因素。

结肠癌组织SATB2、SIRT1、HOTAIR表达及与预后的相关性

目的研究结肠癌组织特定富含AT碱基DNA序列结合蛋白2(SATB2)、沉默信息调节因子1(SIRT1)和同源盒基因转录反义RNA(HOTAIR)表达水平及与预后的关系。方法选取2014年1月—2016年6月我院102例结肠癌,根据患者预后分为死亡组和存活组,检测2组肿瘤组织SATB2、SIRT1及HOTAIR表达水平,并分析其与患者预后的关系。结果本组中位随访时间为72个月,102例随访期间死亡67例(65.69%),中位总体生存期(OS)为63个月。死亡组肿瘤最大径和AJCC分期Ⅲ+Ⅳ期患者占比均大于存活组,肿瘤分化程度低于存活组,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。死亡组SATB2阳性率低于存活组,SIRT1阳性率和HOTAIR mRNA相对表达量高于存活组,差异有统计学意义(P<0.01)。多因素Cox回归分析显示,肿瘤低分化、AJCC分期Ⅲ+Ⅳ期、SIRT1阳性和HOTAIR mRNA为结肠癌患者死亡的危险因素,SATB2阳性为结肠癌患者死亡的保护因素(P<0.05,P<0.01)。SATB2阳性患者中位OS(69个月)长于SATB2阴性患者(54个月),SIRT1阳性患者中位OS(57个月)短于SIRT1阴性患者(78个月),HOTAIR mRNA≥47.85患者中位OS(57个月)短于HOTAIR mRNA<47.85患者(78个月),差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论结肠癌组织SATB2、SIRT1和HOTAIR表达均为影响患者预后的重要因素。

Pax8与Pax1蛋白在宫颈癌组织中的表达及与临床病理特征和预后的关系

目的探讨配对盒基因8(Pax8)与配对盒基因1(Pax1)在宫颈癌组织中的表达及与临床病理特征和预后的关系。方法选取2014年6月至2016年6月收治80例拟进行手术治疗的宫颈癌患者作为研究对象,将术中切除的癌组织标本纳入观察组,癌旁组织标本(距肿瘤边缘4 cm处)纳入对照组。采用免疫组化法检测两组Pax8与Pax1蛋白的表达。分析Pax8、Pax1蛋白表达与宫颈癌临床病理特征的关系,并采用Cox比例风险回归分析影响宫颈癌患者预后的相关因素。结果观察组Pax8、Pax1蛋白阳性表达率显著高于对照组(68.75%vs 35.00%,70.00%vs 36.25%,P<0.01)。Pax8与Pax1蛋白表达在不同宫颈癌肿瘤分期、不同分化程度、有无淋巴结转移、不同浸润深度差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。随访5~36个月,宫颈癌患者中位生存期21个月,其中Pax8阳性表达者和阴性表达者的中位生存期分别为12、36个月,Pax1阳性表达者和阴性者表达者中位生存期分别为13、34个月,差异有统计学意义(P<0.05)。单因素和多因素分析显示,肿瘤低分化、淋巴结转移、浸润深度≥1/2、肿瘤Ⅲ期、Pax8与Pax1阳性表达均为影响宫颈癌患者预后的独立因素(P<0.05,P<0.01)。结论Pax8与Pax1蛋白在宫颈癌组织中的表达水平升高,且与宫颈癌患者的临床病理特征有关,Pax8蛋白或Pax1蛋白表达阳性者预后较差,Pax8与Pax1蛋白表达可作为判断宫颈癌预后的生物学指标。