T盒转录因子3和5基因多态性与指长比的关联性

目的:分析T盒转录因子3/5(TBX3/TBX5)基因5个位点(rs2242442、rs1061651、rs8853、rs11067101、rs6489956)多态性与指长比(2D∶4D)间的关联性。方法:采用体质测量法和多重PCR检测法,分析799名宁夏汉族大学生双手2D∶4D及TBX3和TBX5基因位点多态性的分布特征及其间的关系。结果:宁夏大学生女性左手和右手2D∶4D均显著高于男性;TBX3和TBX5基因5个位点基因型、等位基因频率在不同性别间的差异均无统计学意义;不论男性还是女性,5个SNPs位点多态性与2D∶4D均无显著关联。结论:宁夏汉族大学生群体2D∶4D存在显著性别差异,尚未发现TBX3和TBX5基因位点多态性与2D∶4D的形成有关。

转录因子配对盒基因6对骨髓间充干细胞向角膜缘干细胞样细胞分化的影响

背景:角膜病移植手术面临着角膜供者严重缺乏、术后发生免疫排异反应等诸多问题。在大力倡导角膜捐献的同时,急需找到一种新的替代性的治疗手段。目的:通过优化骨髓间充质干细胞培养条件,探讨转录因子配对盒基因6对骨髓间充质干细胞向角膜缘干细胞样细胞分化的影响。方法:根据细胞形态、成骨成脂分化能力、细胞表面抗原表达鉴定骨髓间充质干细胞及过表达配对盒基因6的骨髓间充质干细胞。按照培养细胞和培养基不同进行分组:对照组(骨髓间充质干细胞+完全培养基)、实验组A(骨髓间充质干细胞+条件培养基)、实验组B(骨髓间充质干细胞+条件培养基+细胞因子)、实验组C(过表达配对盒基因6的骨髓间充质干细胞+条件培养基+细胞因子)。诱导5,10 d时采用免疫荧光、流式细胞术检测p63、k14和k12的表达,流式细胞术检测细胞增殖指标Ki-67的表达和细胞凋亡率,Western blot法和RT-PCR法检测配对盒基因6的蛋白和mRNA表达。结果与结论:①诱导培养前,两组细胞均具有骨髓间充质干细胞的特性。②诱导培养后,均出现球型或卵圆形的细胞,呈悬浮生长。4组细胞的角膜缘干细胞样细胞特异性分子p63、k14表达阳性,实验组荧光表达量高于对照组(P<0.05),而角膜上皮分子k12表达阴性。随着培养条件的优化,实验组C的细胞增殖更明显,凋亡细胞更少。诱导5 d时,实验各组配对盒基因6的蛋白及mRNA表达量呈递增变化。③结果表明,条件培养基联合细胞因子诱导可加快骨髓间充质干细胞向角膜缘干细胞样细胞分化。过表达配对盒基因6的骨髓间充质干细胞向角膜缘干细胞样细胞定向分化的速度和比例更具有优越性,且其能促进细胞增殖、抑制细胞凋亡。

配对盒基因家族——发育过程中重要的转录因子

在大量的脊椎和无脊椎动物中发现的配对盒转录因子(paired box,PAX)及其同源物,在胚胎发育的许多阶段发挥着关键的作用。该基因家族因其具有保守的成对结构域而得名,除此之外其还具有八肽和同源域。根据结构域的组成和序列的同源性,该基因家族主要分为4个亚家族:PAX1/9(PAX1、PAX9),PAX2/5/8(PAX2、PAX5、PAX8),PAX3/7(PAX3、PAX7),PAX4/6(PAX4、PAX6)。各亚家族具有不同的特征结构,例如PAX1/9亚家族的PD-OP、PAX2/5/8亚家族的PD-OP-PTHD、PAX3/7亚家族的PD-OP-PTHD以及PAX4/6亚家族的PD和PTHD。其中,PAX家族的3个成员PAX2、PAX4和PAX6在胰腺发育和分化的多个阶段中发挥了重要作用,在调节胰岛激素的合成和分泌中也发挥了关键作用,揭示这些转录因子及其在胰腺中的原始和分化作用,为糖尿病的研究和治疗提供帮助。PAX1/9亚家族与肿瘤细胞的相互作用在癌症诊断和检测中具有重要作用,例如在肿瘤中PAX1的甲基化和PAX9表达程度等,而且PAX基因发挥作用具有时间性和空间性。在多种肿瘤中,发现PAX基因功能和结构异常。PAX3/7是作为骨骼肌发育的肌原性转录因子,PAX基因发挥作用具有时间性和空间性。在多种肿瘤中,发现PAX基因功能和结构异常。本文就上述内容进行综述。

m^(6)A相关基因在激素性股骨头坏死中的生物信息学分析

背景:m^(6)A修饰与股骨头坏死的发生发展相关,但在激素性股骨头坏死中的作用尚不清楚。目的:基于GEO数据库,采用生物信息学方法分析激素性股骨头坏死中表达差异的m^(6)A基因及互作miRNAs,探寻其潜在发病机制。方法:在GEO数据库中检索并下载与激素性股骨头坏死相关的mRNA表达谱数据集(GSE123568),通过R软件对数据集进行差异基因筛选及GO功能、KEGG通路富集分析。识别差异基因中的m^(6)A差异表达基因(m^(6)A-DEGs)并对其进行GO功能与KEGG通路富集分析,比较m^(6)A-DEGs的表达量并分析它们之间的相关性。最后通过Cytoscape构建m^(6)A-DEGs的PPI互作网络及筛选核心基因。使用TargetScan,miRTarBase和miRBD数据库预测m^(6)A-DEGs相关的潜在miRNAs,同时使用ChIPBase及hTFtarget数据库预测7个核心基因潜在转录因子,然后分别构建m^(6)A-miRNA与转录因子m^(6)A调控网络。最后使用数据集GSE74089验证7个核心m^(6)A-DEGs的表达水平。结果与结论:①从数据集中共筛选出2460个差异表达的基因,其中1455个上调,1005个下调。②从数据集中筛选出了14个m^(6)A-DEGs,包括3个下调和11个上调基因,m^(6)A-DEGs在激素性股骨头坏死中的表达具有显著差异(P<0.05),Spearman分析表明它们之间具有一定相关性。③m^(6)A-DEGs的GO和KEGG富集分析主要集中在骨髓细胞分化与发育、免疫受体与细胞因子受体活性、破骨细胞分化、AMPK与白细胞介素17信号通路。④m^(6)A-DEGs前7个核心基因包括YTHDF3,YTHDF1,YTHDF2,ALKBH5,METTL3,HNRNPA2B1及HNRNPC,它们在miRTarBase,miRDB和TargetScan数据库中共有44个miRNA重叠,在ChIPBase及hTFtarget数据库中共有79个重叠转录因子。⑤在GSE74089数据集中有6个核心m^(6)A-DEGs的表达水平与GSE123568数据集一致。⑥结果证实,根据生物信息学方法筛选的7个m^(6)A-DEGs可能通过调控多个miRNA、转录因子和AMPK及白细胞介素17信号通路表达,进而影响激素性股骨头坏死中骨髓细胞分化发育与破骨细胞分化,为进一步深入研究激素性股骨头坏死的发病机制和靶向治疗提供了数据支持和研究方向。

示-环指长比与6个指骨发育相关基因多态性的关联性

目的探讨6个指骨发育相关基因,即成纤维细胞生长因子受体2(FGFR2)、印度刺猬信号分子(IHH)、Msh同源盒1(MSX1)、Runx家族转录因子2(RUNX2)、SRY盒转录因子9(SOX9)及Wnt家族成员5A(WNT5A)13个位点单核苷酸多态性(SNP)与人类示-环指长比(2D∶4D)的关联性。方法采用数码相机拍摄宁夏地区731名在校大学生(男性358名,女性373名)手部正面照片,采用GraphPad Prism 8.0图像分析软件标记解剖点并测量示(2)指及环(4)指指长;多重PCR法进行6个基因13个SNP位点(rs1047057、rs755793、rs41258305、rs3731881、rs3100776、rs12532、rs3821949、rs45585135、rs3749863、rs1042667、rs12601701、rs1829556和rs3732750)的基因分型;单因素方差分析或独立样本t检验间接评估2D∶4D与13个SNP位点间的关联性。结果宁夏大学生女性左手和右手2D∶4D均显著高于男性(均P<0.01);13个SNP位点基因型、等位基因频率在不同性别间的差异均无显著统计学意义(均P>0.05);不同性别中,男性左手2D∶4D与SOX9基因rs12601701位点基因型显著关联(P<0.05),右手2D∶4D与WNT5A基因rs1829556位点基因型显著关联(P<0.05);女性右手2D∶4D与MSX1基因rs12532(P<0.01)和rs3821949(P<0.05)位点基因型显著关联。结论SOX9(rs12601701)、WNT5A(rs1829556)、MSX1(rs12532和rs3821949)基因多态性可能与宁夏地区人群2D∶4D的形成有关。

马铃薯StNAC6基因克隆及干旱胁迫表达分析

NAC对植物种子发育、细胞分裂分化、侧根形成等都有直接影响,它与DNA元件相结合发挥作用,能够有效提高植物的抗逆性。通过PCR方法从马铃薯冀张薯8号中克隆获得了1个StNAC6基因,并对StNAC6基因进行生物信息学分析,包含序列比对、理化性质预测、进化分析等。使用冀张薯8号组培苗作为试验材料,用浓度为10%、15%和20%的聚乙二醇6000(PEG-6000)处理0、6、12、24 h后,分析干旱胁迫下的表达模式,并在马铃薯开花期,采取不同的组织(花、根、茎、叶、块茎、葡匐茎)进行组织表达分析。结果表明,马铃薯NAC6基因全长为876 bp,共编码291个氨基酸,包含1个NAM结构域;等电点为7.04,相对分子量为33.61915 ku;StNAC6蛋白均含有丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸3种氨基酸磷酸化位点,属于不稳定亲水性蛋白;StNAC6第74、262位氨基酸存在N-糖基化位点;预测StNAC6定位于细胞核。荧光定性PCR结果显示,在不同含量PEG胁迫处理下,马铃薯StNAC6基因的相对表达量不相同,存在明显差异,说明该基因参与干旱应答响应;StNAC6基因在马铃薯茎、花中的相对表达量最高,说明其可能参与马铃薯生长调控。研究结果可为今后深入探究马铃薯NAC6转录因子的功能和调控机制奠定基础。

ATF6调控生殖相关基因HSPA1L表达的分子机制

目的探究内质网应激活化转录因子6(ATF6)对生殖相关基因热休克蛋白A1样蛋白(HSPA1L)表达的影响并初步阐明其调控分子机制。方法在人胚肾细胞系HEK-293T中转染ATF6过表达质粒,RT-qPCR和Western blot验证过表达效率;利用雄性ATF6敲除小鼠睾丸组织转录物组测序信息,筛选ATF6下游5个生殖相关基因;双荧光素酶报告基因实验选择启动子活性较高的下游基因并检测过表达ATF6对其启动子活性的影响;通过gene-regulation预测ATF6和下游基因启动子可能的结合位点;RT-qPCR和Western blot检测在HEK-293T细胞中过表达ATF6对于下游基因表达的影响;利用凝胶迁移实验(EMSA)确定ATF6与下游基因启动子是否结合。结果转染后HEK-293T细胞中ATF6的mRNA(P<0.001)和蛋白(P<0.05)表达水平明显升高。转录物组测序及双荧光素酶报告基因实验筛选出ATF6下游的生殖相关基因HSPA1L。ATF6能够促进HSPA1L的截短启动子活性(P<0.001)。过表达ATF6后,HSPA1L的表达量明显升高(P<0.001)。差异均有统计学意义。ATF6蛋白能与HSPA1L的启动子DNA序列aagtcgtcac相结合。结论内质网应激的关键分子ATF6通过结合生殖相关基因HSPA1L的启动子调控后者表达水平,这将为预防或治疗与内质网应激(ERS)有关的男性不育的深入研究奠定基础。

稻曲病病菌Zn_(2)(Ⅱ)Cys6型转录因子UvZC1基因的克隆及功能分析

为明确Zn_(2)(Ⅱ)Cys6型转录因子UvZC1在稻曲病病菌中的功能,利用CRISPR-Cas9结合同源片段双交换的方法,诱导野生型菌株Jt209发生UvZC1基因缺失突变。结果显示,与Jt209相比,UvZC1基因缺失突变体的生长速率和分生孢子量均显著下降,且突变体中部分与稻曲病病菌其他产分生孢子相关基因表达量发生变化;此外,该基因的缺失导致突变体对十二烷基硫酸钠(SDS)更敏感,而对氧化胁迫的耐受性增强;在稻曲病病菌接种水稻后24 h、48 h的侵染早期,UvZC1基因的表达量明显上升,但基因缺失突变体接种水稻后形成的稻曲球数量与野生型之间没有差异。综上所述,UvZC1基因参与稻曲病病菌营养生长、分生孢子产生和侵染水稻过程,还与稻曲病病菌细胞壁的完整性和响应氧化胁迫相关。

配对盒家族基因1甲基化与人乳头瘤病毒E6/E7mRNA检测在子宫颈病变患者诊断中的应用

目的:分析配对盒家族基因1(PAX1)甲基化检测与人乳头瘤病毒(HPV)E6/E7mRNA检测在子宫颈癌及癌前病变患者诊断中的临床应用价值。方法:回顾性分析2018年3月至2019年9月在郑州大学第一附属医院就诊的子宫颈病变406例患者。根据病理检查结果分为4组:子宫颈炎组(145例)、低级别鳞状上皮内病变(LSIL)组(76例)、高级别鳞状上皮内病变(HSIL)组(119例)和子宫颈癌组(66例)。所有患者均行PAX1甲基化检测,其中同时行HPV E6/E7mRNA检测的患者有159例,比较两种检测方法在诊断子宫颈癌及癌前病变(高级别子宫颈上皮内瘤变)患者中的诊断效能。结果:子宫颈炎组、LSIL组、HSIL组、子宫颈癌组的PAX1甲基化率分别为10.3%、13.2%、39.5%、83.3%,HPV E6/E7mRNA阳性率分别为50.0%、68.6%、84.0%、87.8%,差异均有统计学意义(P<0.05)。两种方法单独用于诊断子宫颈癌及癌前病变时,HPV E6/E7mRNA的敏感度为86.36%,特异度为43.01%;PAX1甲基化的敏感度为55.14%,特异度为88.69%;两者联合检测时敏感度为80.30%,特异度为88.18%。结论:PAX1甲基化在诊断子宫颈癌及癌前病变患者中具有较高的特异度,且在联合HPV E6/E7mRNA检测时具有更高的临床应用价值。

配对盒基因6/小鼠胚胎干细胞细胞系的建立及干细胞生物学特性分析

目的建立配对盒基因6(Pax6)/小鼠胚胎干细胞(m ESCs)细胞系并鉴定其干细胞生物学特性。方法体外培养m ESCs,将重组载体p EF1α-Pax6-IRES-AcGFP和空载体p EF1α-IRES-AcGFP分别用脂质体法转染m ESCs,经G418梯度及荧光蛋白双筛选后,使用细胞免疫荧光染色、免疫印迹法及RT-PCR技术检测Pax6的表达情况,流式细胞术检测Pax6/m ESCs阳性细胞的比例。将获得正确的细胞系分别采用细胞免疫荧光染色对其干细胞标志物阶段特异性胚胎抗原1(SSEA1)、八聚体结合转录因子4(OCT4)进行检测,碱性磷酸酶(AP)染色法对其多能性进行检测,流式细胞术检测增殖指数Ki67。将Pax6/m ESCs进行肾背囊下移植,移植物行HE染色观察其分化能力。结果 Pax6成功在m ESCs内表达,经G418筛选后,获得Pax6/m ESCs细胞系,流式结果显示,Pax6阳性率为90%,免疫荧光显示,干细胞标志物SSEA1、OCT4表达阳性且AP染色阳性,并且在体内移植后能向3个胚层分化。结论 Pax6成功在m ESCs内表达,经G418筛选后,获得细胞系Pax6/m ESCs并维持良好的干细胞特性。

认识人类配对盒基因Pax6,一个控制眼和大脑发育的关键基因

人类配对盒基因6（Pax6）是控制眼和大脑发育的关键基因。Pax6基因突变或表达水平改变导致一系列的眼部疾病。作为转录因子，Pax6在胚胎发育早期多个不同组织原基表达，单独或与其他转录因子共同作用，直接或间接调控不同下游基因的表达来调控眼、大脑、垂体、鼻及胰脏的发育。Pax6存在4种异构体，其功能受多种翻译后修饰的调控。全面认识Pax6的结构与功能及其与各种疾病的关系有助于眼科医师研究其突变或表达改变而引起的相关眼病的病理机制，为相关疾病的防治提供新的思路。

配对盒基因6抑制肝星状细胞活化的作用机制

目的探究配对盒基因6(Pax6)对血小板衍生因子(PDGF-BB)诱导下人肝星状细胞迁移能力的影响。方法体外培养人肝星状细胞系(LX-2),慢病毒感染LX-2敲减Pax6,使用PDGF-BB诱导其活化,实验分为4组:空白组(shNC+PBS)、实验组(shPax6+PBS)、PDGF-BB处理的空白组(shNC+PDGF-BB)、PDGF-BB处理的实验组(shPax6+PDGF-BB);采用划痕实验、Transwell小室细胞迁移实验,分析细胞迁移能力;细胞免疫荧光及蛋白质印迹技术检测细胞迁移相关蛋白的表达水平。结果PDGF-BB诱导下的LX-2活化,可促进其迁移能力增强;敲降Pax6后,能够抑制活化后细胞增强的迁移能力;蛋白质印迹技术实验结果表明,PDGF-BB刺激下能明显上调LX-2中N-cad表达、抑制E-cad表达;敲降Pax6后能抑制PDGF-BB诱导的N-cad表达、增加E-cad表达;细胞免疫荧光实验结果显示,PDGF-BB诱导下能明显上调Vimentin表达,敲降Pax6后,PDGF-BB对Vimentin的上调作用被抑制,E-cad与N-cad趋势同上述蛋白质印迹技术检测结果一致。结论敲降Pax6能抑制PDGF-BB诱导下LX-2增强的迁移能力,为临床抗肝纤维化药物开发提供了可能靶点,为治疗肝纤维化提供了新的策略。

结直肠癌患者组织细胞角蛋白7、尾型同源盒转录因子-2、抑制P53基因蛋白表达及意义

目的 分析结直肠癌患者组织细胞角蛋白7(CK7)、尾型同源盒转录因子-2(CDX2)、抑制P53基因蛋白(P53)表达及意义。方法 选取2016年8月至2021年8月于景德镇市第三人民医院确诊的60例结直肠癌(CRC)患者的癌组织及癌旁组织石蜡标本,采用免疫组化检测组织中的CK7、CDX2、P53阳性表达率。分析各指标阳性表达率与临床病理特征的关系。结果 CK7、CDX2在癌组织中的阳性表达率低于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05);P53在癌组织中的阳性表达率高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05);有淋巴结转移癌组织中的CK7、CDX2阳性表达率低于无淋巴结转移癌组织,差异有统计学意义(P<0.05);低分化、浆膜浸润型、Dukes C+D期癌组织中的CDX2阳性表达率低于高分化、非浆膜浸润型、Dukes A+B期癌组织,差异有统计学意义(P<0.05);有淋巴结转移、低分化、浆膜浸润型、Dukes C+D期中P53阳性表达率高于无淋巴结转移、中高分化、非浆膜浸润型、Dukes A+B期癌组织,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 在CRC癌组织中,CK7、CDX2阳性表达下调,P53阳性表达率上调,均可能参与着肿瘤的发生和发展,可作为评估患者病情进展的指标。

白细胞介素-6/糖蛋白130/转录激活因子3通路在百草枯诱导小鼠急性肺损伤中的作用机制

目的基于肺特异性白细胞介素-6(IL-6)敲除小鼠研究IL-6/糖蛋白130(gp130)/转录激活因子3(STAT3)通路在百草枯(PQ)诱导急性肺损伤(ALI)中的作用。方法野生型C57BL/6J小鼠分为IL-6野生型(IL-6 WT)组、IL-6 WT+PQ组,采用Sftpc(肺表面活性蛋白C基因)-Cre^(+)小鼠与IL-6^(FLOX/FLOX)小鼠交配的方式得到肺特异性IL-6敲除小鼠并分为IL-6 KO组、IL-6 KO+PQ组,单次腹腔注射PQ诱导ALI,比较四组小鼠肺组织病理改变、肺泡动脉氧分压差(PA-aO_(2))、肺组织湿/干质量比值(W/D)、IL-6/gp130/STAT3通路、核转录因子-κB(NF-κB) p65、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白细胞介素-1β(IL-1β)的差异。结果与IL-6 WT组比较,IL-6 WT+PQ组小鼠肺组织出现了典型的ALI病理改变,肺组织胞浆蛋白中IL-6、gp130、p-STAT3、TNF-α、IL-1β表达水平及胞核蛋白中NF-κB p65的表达水平、PA-aO_(2)、W/D明显增加(P <0.05);与IL-6 WT+PQ组比较,IL-6 KO+PQ组小鼠肺组织病理改变明显改善,肺组织胞浆蛋白中IL-6、gp130、p-STAT3、TNF-α、IL-1β的表达水平及胞核蛋白中NF-κB p65的表达水平、PA-aO_(2)、W/D明显降低(P <0.05)。结论 IL-6/gp130/STAT3通路激活与PQ诱导ALI有关。

番茄转录调控因子基因Pti5植物表达载体的构建及其转化烟草的研究

本实验构建了含有CaMV35S启动子控制下的Pti5 VP16基因的植物双元表达载体pBI121UCH1。通过根癌农杆菌叶盘转化法,将Pti5 VP16基因导入烟草SRI中,经卡那霉素筛选,获得了抗性植株。经PCR和Southern印迹分析,表明抗性植株中整合了Pti5 VP16基因,经抗病性鉴定转基因烟草植株的抗病性明显提高。

口腔鳞癌细胞中ITGB6基因主要转录调控区域的定位分析

目的:鉴定ITGB6基因在口腔鳞癌细胞中的主要调控区域,为研究基因在口腔鳞癌细胞中的转录调控机制奠定基础。方法:构建含有ITGB6基因转录起始点上游5'端侧翼区不同长度DNA序列的重组pGL2荧光素酶报告基因质粒,转染口腔鳞癌细胞株TCA8113和SAS,利用双荧光素酶报告基因系统检测启动子转录活性,并通过生物信息学方法预测ITGB6基因中潜在的主要转录因子结合位点。结果:获得一系列不同长度ITGB6基因5'侧翼区序列的重组荧光素酶报告基因质粒;当ITGB6基因5'端侧翼片段截短到-187～-35和-35～+27之间时,启动子活性均显著下降;生物信息学分析显示,在-187～-35区域有2个Ets-1的潜在结合位点,而在-35～+27区域有1个IRF-4潜在结合位点。结论:在口腔鳞癌细胞中,ITGB6基因-187^-35和-35^+27区域是主要的转录因子结合区。

miR-424靶向PTEN基因调控IL-6/STAT3信号通路影响骨髓瘤细胞增殖和凋亡的机制

目的探究miR-424靶向张力蛋白同源第10号染色体缺失的磷酸酶基因(PTEN)调控白细胞介素(IL)-6/信号转导与转录因子(STAT)3信号通路影响骨髓瘤(MM)细胞增殖和凋亡的机制。方法靶基因预测、双荧光素酶报告实验验证miR-424对PTEN的靶向调控作用;采用实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测骨髓瘤患者骨髓标本及骨髓瘤细胞株中miR-424、PTEN的表达,并分析miR-424表达与患者临床病理参数的关系;采用脂质体瞬时转染法将mimic NC、miR-424 mimic、anti-miR-424 mimic、si-control、si-PTEN转染H929、U266细胞并分为对照组、miR-NC组、miR-424组、anti-miR-424组、anti-miR-424+si-NC组和anti-miR-424+si-PTEN组;噻唑蓝(MTT)法及单克隆染色检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡水平,Western印迹检测PTEN、IL-6、STAT3、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、原癌基因(c-Myc)水平。结果双荧光素酶实验及Western印迹验证了miR-424对PTEN的靶向调控作用。MM患者骨髓标本及MM细胞株中miR-424水平明显高于正常骨髓标本及浆细胞,PTEN水平明显低于正常骨髓标本及浆细胞,且miR-424水平与PTEN水平呈负相关,与ISS分期、危险分层、轻链类型呈正相关关系。与miR-NC组相比,miR-424组细胞增殖能力、IL-6、STAT3、Bcl-2、c-Myc水平明显升高,凋亡率、PTEN、Bax水平明显降低;anti-miR-424组细胞增殖能力、IL-6、STAT3、Bcl-2、c-Myc水平明显降低,凋亡率、PTEN、Bax水平明显升高(P<0.05)。与anti-miR-424+si-NC组相比,anti-miR+424-si-PTEN组细胞增殖能力、IL-6、STAT3、Bcl-2、c-Myc水平明显升高,凋亡能力、PTEN、Bax水平明显降低(P<0.05)。结论MM细胞的增殖、凋亡受miR-424及PTEN的双重调控,miR-424可靶向PTEN调控IL-6/STAT3信号通路影响MM细胞的增殖和凋亡。

慢性心房颤动患者右心耳IL-1β、IL-6和肿瘤坏死因子-α基因表达的研究

目的 观察慢性心房颤动(房颤)患者右心耳白介素-1β(IL -1β)、白介素- 6(IL -6)和肿瘤坏死因子-α(TNF α)基因表达的改变。方法 将术中获取的48例风湿性瓣膜病患者的右心耳分为2组,其中窦性心律组27 例,慢性房颤组21 例,以GAPDH为内参照基因,采用逆转录聚合酶链反应(RT- PCR)技术测定心房组织中IL -1β、IL- 6和TNF -α的mRNA含量,用病理学检查评价心房组织纤维化程度,用免疫组织化学检查评价IL- 1β和TNF- α的表达情况。结果 与窦性心律组相比,慢性房颤组IL- 1β、IL- 6和TNF -α的mRNA表达显著增加。慢性房颤患者心房组织有显著的纤维化,而且心房肌细胞IL- 1β和TNF -α的表达强度也显著大于窦性心律组。结论 慢性房颤患者心房组织IL- 1β、IL -6和TNF- α的mRNA表达显著增加,炎症反应可能是房颤发生和维持的因素之一。

利拉鲁肽对结肠癌细胞增殖、凋亡及转录活化因子6通路的影响

目的探究利拉鲁肽对结肠癌细胞增殖、凋亡的影响及对转录活化因子6(ATF6)通路的影响。方法按照利拉鲁肽浓度0、10、100、1000 nM培养人结肠癌HCT116细胞24、48、72 h,人胆囊收缩素/缩胆囊素八肽(CCK⁃8)法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期、凋亡情况,蛋白质印迹法(Western Blot)检测作用后细胞中21KD蛋白(Bax)、半胱胺酸蛋白酶⁃3(Caspase⁃3)及ATF6通路蛋白ATF6 p50、CCAAT⁃增强子结合蛋白(C/EBP)同源蛋白(CHOP)的表达水平。结果与对照组相比,利拉鲁肽各浓度间增殖率均有显著变化(P<0.05),同一时间点随着利拉鲁肽浓度的增加,0、10、100、1000 nM各组细胞的增殖率分别为(97.16±35.67)%、(81.69±33.37)%、(76.12±30.23)%、(70.65±28.89)%;(86.17±33.98)%、(58.68±26.77)%、(39.74±10.67)%、(30.17±9.24)%;(83.82±31.19)%、(38.77±10.19)%、(22.98±6.78)%、(16.63±6.12)%,均呈下降趋势。同一浓度随着时间推移,24、48、72 h各时间点细胞增殖率分别为(97.16±35.67)%、(86.17±33.98)%、(83.82±31.19)%;(81.69±33.37)%、(58.68±26.77)%、(38.77±10.19)%;(76.12±30.23)%、(39.74±10.67)%、(22.98±6.78)%;(70.65±28.89)%、(30.17±9.24)%、(16.63±6.12)%。不同浓度利拉鲁肽作用于HCT116细胞72 h后,10、100、1000 nM浓度的利拉鲁肽组的G2/M期细胞比例较0 nM组显著减少(P<0.05),且随着浓度的增加G2/M期细胞呈现下降趋势。0、10、100、1000 nM利拉鲁肽作用下细胞凋亡率分别为(9.06±0.98)%、(10.45±1.12)%、(13.89±1.54)%、(56.08±14.33)%,依次升高(P<0.05)。与0 nM组比较,10、100、1000 nM浓度的利拉鲁肽组细胞的凋亡率依次显著升高(P<0.05);与10 nM组比较,100、1000 nM组凋亡率依次显著升高(P<0.05);与100 nM组比较,1000 nM组凋亡率显著升高(P<0.05)。蛋白质印迹法结果显示,10、100、1000 nM利拉鲁肽作用后细胞中Bax蛋白表达量分别为(0.69±0.13)、(0.93±0.24)、(1.19±0.25),显著升高(P<0.05),1000 nM组Bax蛋白表达量显著高于10 nM组(P<0.05),100、1000 nM两组间差异无统计学意义(P>0.05);Caspase⁃3蛋白表达量分别为(0.26±0.06)、(0.76±0.15)、(1.15±0.16)依次显著升高(P<0.05),100、1000 nM组Caspase⁃3蛋白表达量显著高于10 nM组(P<0.05),1000 nM组Caspase⁃3蛋白表达量显著高于100 nM组(P<0.05);ATF6 p50蛋白表达量分别为(0.69±0.11)、(0.96±0.09)、(1.20±0.08);CHOP蛋白表达量分别为(0.27±0.06)、(0.79±0.08)、(0.99±0.09),均显著升高(P<0.05),100、1000 nM组ATF6 p50、CHOP蛋白表达量显著高于10 nM组(P<0.05),1000 nM组ATF6 p50、CHOP蛋白表达量显著高于100 nM组(P<0.05)。结论利拉鲁肽对结肠癌HCT116细胞具有增殖抑制和凋亡促进作用,且呈时间⁃剂量的依赖性,其可能通过激活ATF6通路发挥促凋亡作用。

ERF类转录因子OPBP1基因重组质粒的构建及蛋白质表达

探讨了OPBP1基因的蛋白质表达方法 .利用DNA重组技术 ,将pGEM -OPBP1和pET - 32a分别进行SalⅠ和NotⅠ双酶切 ,连接 ,获得了重组质粒pET -OPBP1质粒 .IPTG诱导其蛋白质表达 .