黑牛肝菌多糖对小鼠酒精性肾损伤保护作用的研究

目的:研究黑牛肝菌多糖(RPBA)对酒精所致急性肝损伤小鼠肾损伤的保护作用。方法:小鼠被随机分为空白对照组、模型组、药物组(联苯双酯组,150mg/kg bw)、RPBA各剂量组(100、200、400mg/kg bw),连续灌胃30d,空白对照组按等量生理盐水灌胃。第31d给予50%乙醇(12mL/kg)建立动物急性肝损伤模型。小鼠处死后取肾脏测定各项抗氧化指标。结果:与模型组相比,RPBA各剂量组均能降低肾脏MDA含量(p<0.01),提高肾脏SOD活性、CAT活性、GSH-Px活性及GSH含量(p<0.01)。结论:RPBA能明显提高肾脏中抗氧化酶活性,减少脂质过氧化,对小鼠酒精性肾损伤具有明显保护作用。

贝那普利在大鼠酒精性肾损伤中作用的探讨

目的探讨血管紧张素转换酶抑制剂贝那普利在酒精引起的大鼠肾损伤过程中对肾组织的保护作用。方法以酒精灌胃法制备大鼠酒精性肝肾损伤模型,同时给予贝那普利[4mg/(kg·d)]灌胃,在4、8、12周收集尿液,放免法检测尿中β2-微量球蛋白(β2-MG)含量;利用光镜和透射电镜观察其肾组织病理改变;免疫组化法检测肾组织中转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达。结果与对照组相比较模型组尿β2-MG值明显增高(P<0.01),贝那普利组尿β2-MG值明显低于模型组(P<0.01);电镜下模型组肾组织在相应阶段出现间质内的纤维成分增多,而贝那普利组间质结构无明显改变;在免疫组化染色中模型组肾小管上皮细胞内TGF-β1呈阳性表达,随时间的增加阳性表达增加(P<0.01);贝那普利组阳性表达与模型组相比较明显减少(P<0.01)。结论大鼠酒精性肾损伤以肾小管-间质的炎性改变及形成肾间质纤维化为主要特征;肾组织中TGF-β1的阳性表达明显增加;贝那普利在酒精引起的肾损伤的过程中对肾脏具有保护作用,其机制可能与通过阻断肾素-血管紧张素系统(RAS),下调TGF-β1的表达,抑制细胞外基质(ECM)积聚等有关。

膳食5'-核苷酸对大鼠酒精性肾损伤保护作用的研究

为研究膳食5'-核苷酸对大鼠酒精性肾损伤的保护作用,选取35只SPF级雄性Wistar大鼠,随机分成5组:普通对照组、酒精组、葡萄糖等热量组、酒精+0.04%核苷酸干预组、酒精+0.16%核苷酸干预组。连续灌胃8周后,测定体重、肾体比、血肌酐(SCr)、尿肌酐(UCr)、血尿素氮(BUN)及24 h尿蛋白等相关指标;计算内生肌酐清除率(Ccr);检测血清炎症因子细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、单核细胞趋化因子-1(MCP-1)水平;HE染色观察肾脏组织病理学改变;免疫组化法观察肾脏足细胞标志蛋白PCX-1、肾间质转化生长因子-β(TGF-β)和纤连蛋白(FN)的表达。结果表明:膳食5'-核苷酸能够降低酒精引起的大鼠24 h尿蛋白、血肌酐升高并提高内生肌酐清除率(P<0.05),0.16%核苷酸干预组还能显著降低酒精引起的大鼠血尿素氮升高(P<0.05);减轻酒精导致的肾脏组织结构病理改变及血清炎症因子ICAM-1、MCP-1水平的升高(P<0.05);同时减轻甚至逆转酒精导致的肾脏PCX-1、TGF-β和FN表达的改变。由此可知,膳食5'-核苷酸可以通过减轻血液炎症反应,调节肾脏蛋白质分子的表达,对酒精造成的大鼠肾损伤产生一定的保护作用。

黑果枸杞汁调控Nrf2信号通路相关蛋白质表达改善大鼠酒精性肾损伤的作用机制

目的探讨黑果枸杞(LyciumruthenicumMurray)汁调控核因子E2相关因子2(nuclearfactorerythroid2-relatedfactor2,Nrf2)信号通路蛋白质表达改善大鼠酒精性肾损伤的作用机制。方法60只6w龄雄性SD大鼠随机分为空白对照组(C)、模型组(M)、低剂量黑果枸杞汁+模型组(LLM)、中剂量黑果枸杞汁+模型组(MLM)、高剂量黑果枸杞汁+模型组(HLM),每组12只。M、LLM组、MLM、HLM组每天13:00、19:00以20ml/kg[8 g/(kg bw·d)]分2次灌胃400 g/L乙醇,C组于相同时间点施以等体积蒸馏水。黑果枸杞汁各剂量组酒精灌胃4h前,分别以2.4、4.8、9.6 ml/(bw·d)黑果枸杞汁进行灌胃,其他组于相当时间点分别施以等体积蒸馏水。实验周期4w,末次实验结束后24h处死大鼠,取血及肾脏,计算肾脏指数,HE染色观察肾脏组织形态,免疫组化法检测肾脏Nrf2及磷酸化Nrf2(phosphorylated nuclear factor erythroid 2-related factor 2,p-Nrf2)、血红素氧合酶(heme oxygenase-1,HO-1)蛋白质表达,Jaffe苦味酸法检测血清肌酐(serum creatinine,Scr),二乙酰-肟法检测血清尿素氮(blood urea nitrogen,BUN),比色法测定大鼠肾脏组织超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malonaldehyde,MDA),荧光光度法测定活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)。结果与C组比较,M组肾脏组织形态发生病理改变;肾脏指数、Scr、BUN、肾脏MDA和ROS含量显著升高(P<0.05或P<0.01);肾脏SOD活性、p-Nrf2和HO-1蛋白质表达、p-Nrf2/Nrf2显著降低(P<0.01)。与M组比较,LLM、MLM、HLM组肾脏组织形态均有所改善,其中以HLM组最为显著;肾脏指数,LLM、MLM和HLM组均显著降低(P<0.05或P<0.01);BUN和Scr含量,MLM和HLM组均显著降低(P<0.05或P<0.01);肾脏p-Nrf2和HO-1蛋白质表达,MLM和HLM组均显著升高(P<0.05或P<0.01);肾脏p-Nrf2/Nrf2,HLM组显著升高(P<0.01);肾脏SOD活性,LLM、MLM和HLM组均显著升高(P<0.05或P<0.01);肾脏MDA含量,LLM、MLM和HLM组均显著降低(P<0.05或P<0.01);肾脏ROS含量,MLM和HLM组均显著降低(P<0.01)。黑果枸杞汁各剂量组组间比较,BUN含量,LLM和MLM组均显著高于HLM组(P<0.01);Scr含量,LLM组显著高于HLM组(P<0.05);肾脏p-Nrf2蛋白质表达,LLM和MLM组均显著低于HLM组(P<0.05或P<0.01);肾脏p-Nrf2/Nrf2和HO-1蛋白质表达,LLM组显著低于HLM组(P<0.05);肾脏SOD活性,LLM和MLM组均显著低于HLM组(P<0.05或P<0.01);肾脏MDA含量,LLM和MLM组均显著高于HLM组(P<0.01);肾脏ROS含量,LLM组显著高于HLM组(P<0.01)。结论黑果枸杞汁可以通过调控Nrf2信号通路,改善氧化应激,改善大鼠酒精性肾损伤。

p53、TGF-β1及炎性细胞因子在新型酒精性肾损伤小鼠模型中的表达

鉴于以往酒精性肾损伤模型的局限性,模拟人类常见饮酒模式,将20只小鼠随机分为对照组和酒精组,采用慢性酒精喂养加单次急性酒精灌胃的方法,建造新型酒精性肾损伤小鼠模型。通过苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining, HE)、过碘酸-雪夫染色法(periodic acid-Schiff staining,PAS)染色观察肾脏组织病理学改变,实时荧光定量PCR检测转化生长因子β1(transforming growth factor beta 1,TGF-β1)、炎性细胞因子和p53的mRNA表达水平,Western blotting检测p53蛋白的表达。结果显示,与对照组比较,酒精组小鼠肾质量、肾脏指数明显升高(P<0.01);HE染色显示肾小球系膜细胞轻度增生,肾小管上皮细胞肿胀、间距增宽,间质内小血管增生、扩张、水肿,周围伴有炎性细胞浸润;PAS染色显示肾小球系膜细胞和系膜基质轻度增生;TGF-β1、炎性细胞因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)及p53的mRNA表达增加(P<0.05);p53蛋白表达下调(P<0.01)。提示新型酒精性肾损伤小鼠模型构建成功,p53、TGF-β1及炎性细胞因子参与了新型酒精性肾损伤,这为今后的研究提供了可靠的模型和线索。

酒精性肝肾损害大鼠肾组织中转化生长因子-β_1的表达

目的探讨酒精引起的大鼠肝肾损伤模型中肾脏的病理学改变及肾组织中转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达。方法以酒精灌胃法制备大鼠酒精性肝肾损伤模型,以光镜和电镜观察肾组织病理改变;免疫组化染色观察肾组织中TGF-β1的表达。结果光镜下HE染色可见模型组肾组织在相应阶段出现肾小管间质内炎性细胞浸润、上皮细胞空泡变性肿胀及管腔闭塞等;电镜下模型组肾组织在相应阶段出现间质内的纤维成分增多;免疫组化染色模型组肾小管上皮细胞内TGF-β1呈阳性表达,随酒精负荷时间的增加阳性表达增加(P<0.01)。结论大鼠酒精性肾损伤以肾小管-间质的炎性改变及形成肾间质纤维化为主要病理特征;酒精性肾损伤模型机制可能与肾组织中TGF-β1的阳性表达明显增加有关。

大鼠酒精性肾损害及肾组织中转化生长因子β_1的表达

目的:探讨酒精引起的大鼠肾损伤模型的病理学改变及肾组织中转化生长因子β_1(TGF-β_1)的表达。方法:以酒精灌胃法制备大鼠酒精性肾损伤模型,以光镜和电镜观察肾组织病理改变,免疫组化染色观察肾组织中TGF-β_1的表达。结果:光镜下HE染色可见模型组肾组织在相应阶段出现肾小管间质内炎性细胞浸润,上皮细胞空泡变性肿胀,管腔闭塞等;电镜下模型组肾组织在相应阶段出现间质内的纤维成分增多;免疫组化染色模型组肾小管上皮细胞内TGF-β_1呈阳性表达,随酒精负荷时间的增加阳性表达增加(P<0.01)。结论:大鼠酒精性肾损伤以肾小管—间质的炎性改变及形成肾间质纤维化为主要病理特征:酒精性肾损伤模型机制可能与肾组织中TGF-β_1的阳性表达明显增加有关。