基于TGF-β1/Smads通路探讨女贞子酒蒸前后治疗糖尿病肾纤维化的作用机制

目的基于转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smads通路探讨女贞子酒蒸前后改善糖尿病肾病(DN)大鼠肾纤维化的作用与机制。方法随机选取8只SD雄性大鼠作为空白组,其余大鼠高脂饲料喂养联合腹腔注射1%链脲佐菌素(65 mg/kg)建立DN模型。DN模型大鼠随机分为模型组、二甲双胍阳性药组,女贞子低、高剂量组,酒女贞子低、高剂量组,每组8只。各给药组大鼠灌胃相应药物,空白组和模型组大鼠灌胃等体积蒸馏水,1次/d,连续8周。血糖仪检测空腹血糖,考马斯亮蓝法检测24 h尿蛋白量,ELISA法测定血清中肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)水平,Masson染色法观察大鼠肾组织病理变化,qRT-PCR法测定肾组织TGF-β1、Smad 3、Smad 7 mRNA表达水平,Western blotting法测定肾组织TGF-β1、Smad 3、磷酸化Smad 3(p-Smad 3)、Smad 7、磷酸化Smad 7(p-Smad 7)蛋白表达水平。结果与空白组相比,模型组大鼠血糖、24 h尿蛋白及血清中Scr、BUN水平显著升高(P<0.01);肾组织可见肾小球周围有胶原纤维增生,中度纤维化,系膜基质重度增生,基底膜增厚,肾小球萎缩;肾组织TGF-β1、Smad 3 mRNA表达及TGF-β1、Smad 3和p-Smad 3蛋白表达明显上调(P<0.01),肾组织Smad 7 mRNA表达及Smad 7、p-Smad 7蛋白表达明显下调(P<0.01);与模型组相比,女贞子酒蒸前后大鼠肾纤维化及肾损伤均有不同程度改善,血糖、24 h尿蛋白及血清BUN、SCr水平显著降低(P<0.05或P<0.01),肾组织TGF-β1、Smad 3 mRNA表达及TGF-β1、Smad 3、p-Smad 3蛋白表达水平明显下调(P<0.05或P<0.01),肾组织Smad 7 mRNA表达及Smad 7和p-Smad 7蛋白表达水平显著升高(P<0.05或P<0.01),且酒女贞子的改善效果优于女贞子。结论女贞子酒蒸后抗DN大鼠肾纤维化作用增强,可能是通过调控TGF-β1/Smads通路增强对DN大鼠肾纤维化的治疗作用。

不同蒸、炖工艺的酒女贞子外观性状和主成分比较

为了研究蒸法和炖法对酒女贞子的外观性状及主成分影响的变化规律,探究蒸、炖工艺对酒女贞子的质量影响。按照2020年版《中华人民共和国药典》方法制备蒸、炖酒女贞子样品,结合中式传统色片比较蒸、炖工艺对酒女贞子外观性状的影响,采用高效液相色谱(HPLC)法及药典浸出物测定法测定蒸、炖酒女贞子的主成分及浸出物,比较蒸、炖工艺对酒女贞子的浸出物、特女贞苷及红景天苷含量的影响。结果表明,蒸法和炖法对酒女贞子的外观性状有较大影响,相同的炮制时间炖法酒女贞子颜色为黑色,蒸法颜色为褐色,分别在蒸制10 h、炖制12 h后的饮片性状才能符合2020年版《中华人民共和国药典》标准;蒸法和炖法对酒女贞子浸出物无明显差异;在蒸、炖过程中特女贞苷含量呈降低趋势,在相同时间内蒸法的降低速度快于炖法;红景天苷含量呈上升趋势,相同时间内蒸法的升高速度快于炖法。由此可知,蒸法和炖法对酒女贞子外观性状、内在成分的变化规律影响较大,2种方法的炮制原理虽然相同,但主成分变化率差异较大,结合酒女贞子外观性状及内在成分含量变化,酒女贞子采用蒸法需蒸制10 h以上,采用炖法需炖制12 h以上。

女贞子酒蒸过程中4种裂环环烯醚萜苷类成分的动态变化

目的探讨女贞子酒蒸过程中4种裂环环烯醚萜苷类成分的动态变化规律。方法采用HPLC梯度洗脱的方法同时测定女贞子生品及酒蒸不同时间炮制品（4,8,12,16,20,24 h）中特女贞苷、橄榄苦苷、女贞苷G13、女贞苷的量。流动相为乙腈-0.1%甲酸溶液,梯度洗脱;柱温25℃;检测波长235 nm;体积流量1.0 m L/min。结果特女贞苷、橄榄苦苷、女贞苷G13、女贞苷依次在0.035 5-1.78μg、0.004 12-0.206μg、0.011 2-0.560μg、0.001 46-0.072 8μg范围内线性关系良好（r〉0.999 5）,平均回收率在97.7%-100.0%之间。在24 h之内,随着酒蒸时间的延长,4种苷类成分均呈现逐渐降低的趋势。结论炮制对女贞子中裂环环烯醚萜苷类成分含有量具有显著影响,女贞子酒蒸后特女贞苷、橄榄苦苷、女贞苷G13、女贞苷均产生质变。研究结果为揭示女贞子的炮制机理提供了实验依据。

正交试验法优选酒蒸女贞子最佳炮制工艺

目的:优选酒蒸女贞子的最佳炮制工艺。方法:采用正交试验设计,以齐墩果酸、特女贞苷为含量指标综合评判,研究女贞子酒蒸工艺的三个关键因素即蒸前润制时间(A)、黄酒用量(B)和蒸制时间(C)对成品质量的影响,优选女贞子酒蒸工艺的技术参数。结果:蒸制时间(C)和黄酒用量(B)是女贞子炮制的关键因素,蒸前润制时间(A)对结果无显著影响,影响程度大小顺序为C>B>A。结论:女贞子蒸法炮制工艺为C3B2A1:取净女贞子加入其重量20%的黄酒拌匀,润制或不润,蒸或炖8h,取出,干燥。

蒸制工艺对酒女贞子外观性状和主要成分的影响

目的:探究女贞子酒制过程中外观性状及主要成分随蒸制时间的变化规律,为修订《中华人民共和国药典》(以下简称《中国药典》)2015年版酒女贞子含量测定的方法提供依据。方法:按《中国药典》2015年版方法制备不同蒸制时间的酒女贞子样品,结合PANTONE色卡观察酒女贞子性状变化,采用高效液相色谱法(HPLC)对样品中特女贞苷、红景天苷、酪醇、松果菊苷、毛蕊花糖苷、芦丁6个成分含量进行测定,采用统计软件分析酒女贞子蒸制过程中性状、主要成分随蒸制时间的变化规律。结果:随蒸制时间的增加,酒女贞子颜色逐渐加深,并伴有白霜,酒蒸6~24 h的样品符合《中国药典》2015年版酒女贞子性状标准,蒸制时间超过12 h时,酒女贞子的性状不再发生变化;女贞子在酒蒸过程中,特女贞苷、松果菊苷、毛蕊花糖苷含量降低,芦丁含量略有下降,红景天苷和酪醇含量升高。结论:经酒制后,女贞子外观性状、内在成分均发生明显变化,两者存在一定相关性,可反映女贞子的炮制质量,建议以含量相对较高、含量差异较小且生物活性强的红景天苷作为酒女贞子含量测定的指标成分。

女贞子酒蒸前后分别配方的二至丸HPLC指纹图谱差异分析

目的比较女贞子酒蒸前后分别配方的二至丸HPLC指纹图谱差异,研究女贞子酒蒸对二至丸化学成分的影响。方法采用HPLC法测定不同批次的女贞子生品与酒蒸品分别配方的二至丸指纹图谱,并进行相似度评价;采用主成分分析(PCA)、正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)法研究女贞子生品与酒蒸品分别配方的二至丸HPLC指纹图谱差异,筛选出其差异成分。结果女贞子酒蒸前后分别配方的二至丸HPLC指纹图谱具有35个共有峰,10批生女贞子配方的二至丸HPLC指纹图谱相似度为0.936~0.994,10批酒蒸女贞子配方的二至丸HPLC指纹图谱相似度为0.937~0.995;女贞子酒蒸前后配方的二至丸HPLC指纹图谱具有显著差异,共筛选出羟基酪醇、特女贞苷、女贞苷G13、女贞酸、红景天苷、毛蕊花糖苷、酪醇、油女贞苷、松果菊苷等14种差异成分。结论女贞子酒蒸对二至丸的化学成分影响显著,建立的指纹图谱结合PCA、OPLS-DA可有效区分女贞子生品与酒蒸品配方的二至丸,辨识出的差异成分为二至丸质量标志物的选择提供了科学依据。

酒制对女贞子主要化学成分的影响

用酒蒸和酒炖两种方法分别炮制女贞子2 h、4 h、8 h、10 h。测定不同方法炮制后女贞子中齐墩果酸、特女贞苷的含量,并以齐墩果酸和特女贞苷的含量变化作为综合指标,考察女贞子不同炮制工艺之间的差异。结果表明,酒制后女贞子中齐墩果酸含量比生品升高,特女贞苷含量比生品降低,在酒蒸4 h的时候,其综合质量评分最高。女贞子较佳的炮制工艺为酒蒸4 h。

不同类型女贞子对AA肉鸡抗氧化功能的影响

选用1日龄AA肉鸡公雏360羽,随机分成6组,每组6个重复,每个重复10只鸡。试验1组(对照)饲喂基础日粮,试验2～6组在基础日粮中分别添加5 mg/kg黄霉素,0.5%、1%女贞子原粉,0.5%、1%酒蒸女贞子原粉。研究不同类型女贞子作为饲料添加剂对AA肉鸡抗氧化功能的影响。结果表明:添加酒蒸女贞子原粉可提高4周肝脏和8周血清T-SOD、CAT、T-AOC活性(P<0.05);1%女贞子、酒蒸女贞子可降低4周和8周血清MDA含量(P<0.05),1%酒蒸女贞子可降低4周肝脏MDA含量(P<0.05);添加酒蒸女贞子可提高8周血清和肝脏GSH-Px活性(P<0.05)。说明女贞子、酒蒸女贞子对肉鸡抗氧化功能均有积极作用。其中,添加1%酒蒸女贞子原粉的效果更佳。

女贞子酒蒸过程中5种苯乙醇类成分的变化规律

目的:探讨女贞子酒蒸过程中5种苯乙醇类成分的动态变化规律。方法:采用HPLC同时测定女贞子生品及酒蒸不同时间(4,8,12,16,20,24 h)炮制品中松果菊苷、毛蕊花糖苷、红景天苷、酪醇及羟基酪醇的含量。结果:在24 h内,随着酒蒸时间的延长,松果菊苷含量逐渐降低,红景天苷含量逐渐增加,酪醇、羟基酪醇含量均先逐渐升高后达到稳定状态,而毛蕊花糖苷含量呈先升高后降低的趋势,以红景天苷含量变化最为显著。结论:炮制对女贞子中苯乙醇类成分含量具有显著影响;女贞子酒蒸后,松果菊苷、毛蕊花糖苷产生质变,红景天苷、酪醇、羟基酪醇发生量变。为揭示女贞子的炮制机制与女贞子饮片的规范化炮制及研发提供了实验依据。

女贞子研究进展

女贞子为木樨科植物女贞Ligus+rum lu-cidum Ait的成熟果实。《神农本草经》列为上品,主要将其用于滋补强身,现临床用女贞子仍取其补益肝肾、滋阴明目等作用。近年来对女贞子的研究颇多,兹将其研究结果概述如下。 化学成份 现已知女贞子主要含有三类有效成份: 1.三萜类化合物:女贞子含齐墩果酸(OLA)、乙酰齐墩果酸、熊果酸等三萜类化合物(1,2),其中OLA含量为4.3％。

响应面法优化女贞子的酒蒸工艺

目的优化女贞子的最佳酒蒸工艺。方法采用高效液相色谱(HPLC)法测定酒蒸女贞子中红景天苷的含量,色谱柱为ZORBAX SB-C18(4.6 mm×250.0 mm,5.0μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液,梯度洗脱,柱温25℃,检测波长224 nm,流速1 mL/min,进样量10μL。以女贞子中红景天苷的含量作为考察指标,采用单因素法考察黄酒用量、闷润时间以及蒸制时间对红景天苷含量的影响,并运用响应面法优化女贞子的酒蒸工艺。结果红景天苷的回归方程为Y=7 185.2X-40.251(r=0.999 5),表明红景天苷在0.020~0.600μg范围内具有良好的线性关系;精密度、重复性、稳定性均符合试验要求;红景天苷的平均回收率为100.71%,RSD为1.92%。响应面法优化的最优炮制工艺为:黄酒用量15.14%,闷润时间2.95 h,蒸制时间9.97 h。结论该法操作简便、准确,灵敏度、精密度高,分析速度快,可作为酒蒸女贞子药材的质量控制;响应面法优化女贞子酒蒸工艺方法简便可靠,能更好地保障酒女贞子的质量。

女贞子酒蒸过程中新女贞苷、木樨榄苷-11-甲酯和女贞酸的动态变化

目的：分析女贞子酒蒸过程中3种裂环环烯醚萜苷类成分的动态变化规律。方法：采用HPLC同时测定女贞子生品及酒蒸不同时间（4，8，12，16，20，24h）炮制品中新女贞苷、木樨榄苷-11-甲酯和女贞酸含量，流动相乙腈（A）-0．1％甲酸溶液（B）梯度洗脱（0～19min，12％～25％A），检测波长235nm。结果：新女贞苷、木樨榄苷-11-甲酯、女贞酸的线性范围分别为0．0345～3．450，0．00586～0．586，0．0286～2．860μg，平均加样回收率分别为99．49％，99．02％，97．80％。女贞子酒蒸后新女贞苷、木樨榄苷-11-甲酯含量显著降低，而女贞酸含量显著升高；在24h内，随着蒸制时间的延长，新女贞苷、木樨榄苷-11-甲酯含量逐渐降低，而女贞酸含量逐渐升高后达稳定状态。结论：女贞子酒蒸后新女贞苷、木樨榄苷．11一甲酯产生质变，女贞酸发生量变，为科学阐释女贞子炮制机制及其饮片的规范化管理提供实验依据。

熙春酒方

[来源]《随息居饮食谱 [原料]枸杞子龙眼肉女贞子生地仙灵脾绿豆各100克柿饼500克烧酒10公斤。 [制作]1.将女贞子于冬至一日九蒸九晒；生地洗净晒干；仙灵脾去皮毛；绿豆洗净晒干。2．将上述药物装入布袋内，扎紧，备用。3.将瓷坛装烧酒，再放入药袋。

不同类型女贞子对AA肉鸡生产性能及免疫功能的影响

研究不同类型女贞子作为饲料添加剂对AA肉鸡生产性能和免疫功能的影响。选用1日龄AA肉鸡公雏360羽,随机分成6组。对照组饲喂基础日粮,试验组在基础日粮中分别添加5 mg/kg黄霉素、0.5%和1%女贞子原粉、0.5%和1%酒蒸女贞子原粉。结果表明:饲料中添加女贞子原粉及酒蒸女贞子原粉均可显著提高肉鸡生长后期日增重及降低饲料增重比(P<0.05);添加1%酒蒸女贞子原粉能显著提高肉鸡生长前期的胸腺指数、血清C3、C4含量(P<0.05),生长后期法氏囊指数、血清溶菌酶含量(P<0.05);添加女贞子、酒蒸女贞子原粉均对血清免疫球蛋白、IL-2含量有显著提高作用(P<0.05),其中添加1%酒蒸女贞子原粉的效果更好。在促进AA肉鸡生长、增强免疫功能方面,添加1%酒蒸女贞子原粉的效果更佳。