离子交换树脂法与酚仿法对质粒DNA提取效果的比较

通过两种不同方法对质粒ＤＮＡ提取效果的比较，证实了阴离子交换树脂法能够获得高纯度的质粒ＤＮＡ，满足分子生物学的试验要求，操作简便、快速，不污染实验室的环境，是一种较理想的制备高纯度质粒ＤＮＡ的提取方法。

利用改进的酚-氯仿法从猪毛囊中提取基因组DNA

为提高从猪毛囊组织中提取基因组DNA的效率，文章在借鉴从其他组织提取基因组DNA方法的基础上，对经典的酚-氯仿法的反应体系和步骤进行了改进。利用改进的酚-氯仿抽提法，从猪的毛囊组织中快速、高效地提取了高质量基因组DNA。利用该方法从1-6根猪毛囊中提取的基因组DNA可满足基于PCR技术的相关分子生物学实验需要。

碘化钾与酚/氯仿提取外周血基因组DNA方法的比较

目的建立碘化钾快速提取外周血基因组DNA的方法。方法采用碘化钾法和酚/氯仿提取法,直接从人外周血中提取基因组DNA,并以此为模板,进行人类生长激素(HGH)基因片段的扩增及鉴定。结果此方法提取的DNA量大,DNA体外扩增结果稳定。结论该方法较传统酚/氯仿提取基因组DNA法快速、简便、经济,可用于PCR模板DNA的制备。

运用酚-氯仿法结合磁珠法提取蝇蛆体内人类DNA

目的建立运用酚-氯仿法结合磁珠法从蝇蛆嗉囊内提取人类DNA的方法,从而提高STR分型检验的灵敏度。方法采用酚-氯仿法对蝇蛆嗉囊内容物中的人类DNA进行提取,提取产物经磁珠法纯化浓缩后用QuantifilerTM人类DNA定量试剂盒在7500型实时荧光定量PCR仪上进行PCR定量,再用AmpF■STR IndentifilerTM试剂盒在3130XL-Avant遗传分析仪上对这些DNA样本进行STR分型。结果本研究建立的方法可增加模板DNA浓度约为单独使用酚-氯仿法的2倍。用此方法提取到的DNA浓度[(0.218±0.041)ng/μL]可获得全部16个STR分型结果。结论酚-氯仿法结合磁珠法可以有效地提高提取到的人类DNA样本STR分型检验的灵敏度,对于从事法医昆虫学方面研究的工作者有较好的实用价值。

用改进的酚-氯仿法提取鱼类基因组DNA效果的分析

提取鱼类基因组DNA的研究报道并不多见,效果也各有差异。本文以泰山螭霖鱼、东平湖鲤鱼、东平湖鲫鱼为材料,采用改进的酚-氯仿法提取基因组DNA,并进行了紫外分光光度、琼脂糖凝胶电泳、微卫星PCR扩增等方法的鉴定。结果表明,本方法提取的基因组DNA浓度在0.9μg/μL^3.25μg/μL之间,A260/A280比值在1.79~1.87之间,电泳条带整齐明亮,适合微卫星PCR扩增,且整个操作过程使用试剂较少,简单易行。

改良酚-氯仿法提取及不同试剂盒扩增检测陈旧性人骨DNA

目的:探讨改良酚-氯仿法提取及不同试剂盒扩增对陈旧性人骨DNA检测的效果。方法:用传统和改良的酚-氯仿法对30例陈旧性人骨进行DNA提取,用Identifiler-plus试剂盒、Minifiler试剂盒和Godeneye TM 20A试剂盒行荧光标记和复合扩增,Genetic Analyzer软件对基因位点进行检测和分析。结果:改良酚-氯仿法提取及3种试剂盒对陈旧性人骨DNA基因位点检出469、262、588个,高于传统法的307、175、436个。结论:改良酚-氯仿法、3种试剂盒PCR复合扩增能对陈旧性人骨DNA进行有效提取和检测。

酚氯仿法和快速煮沸法提取阴道毛滴虫DNA效果比较

目的比较聚合酶链反应(PCR)检测阴道毛滴虫中酚氯仿法和快速煮沸法提取阴道毛滴虫DNA的效果。方法收集滴虫性阴道炎患者的阴道分泌物滴虫阳性标本72份和阴性标本1份,分别采用酚氯仿法和快速煮沸法提取滴虫DNA,并对其PCR阳性检出率进行比较。结果酚氯仿法提取DNA的PCR阳性检出率为76.4%,快速煮沸法为72.2%,两种方法提取阴道毛滴虫阳性标本DNA的PCR结果比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论快速煮沸法与酚氯仿法提取取阴道毛滴虫DNA的效果接近,但快速煮沸法操作简便,耗时短,成本低,更适用于在临床推广应用。

人体生物样本的预处理方式、RNA提取方法及质量控制技术应用进展

人体生物样本包括血液、组织、尿液等,血液样本常见的预处理方式包括离心分离白细胞、红细胞和血小板,组织样本需要进行粉碎和裂解等,尿液样本则需要离心去除沉淀物,这些预处理方式可以有效减少携带杂质和降解因子,从而保证后续RNA提取的质量。人体生物样本RNA提取方法包括酚氯仿法、硅基柱法和磁珠法等,酚氯仿法操作简单但易受污染,硅基柱法具有较高的纯度但成本较高,磁珠法结合了快速、自动化和高回收率等优点,选择合适的提取方法需根据实验需求来确定。在人体生物样本质量控制方面,需要注重RNA纯度、浓度以及完整度,通过使用分光光度计检测A260/A280比值,采用专业仪器检测浓度,同时运用生化分析仪器检测RIN值,可以有效评估RNA质量。

DNA提取方法的比较及改良

用于处理 DNA检材以分离和提取 DNA的方法很多.不同的方法有不同的优缺点,其适用的分析技术也不同 [1～ 5].在法医检案的实际应用过程中经常会遇到不少的问题,如微量检材的 DNA提取,既要纯度高,又要回收率高;常用的几种方法单独进行时则很难达到这样的要求.本文就几种常用的方法进行了改良及它们效果比较.

不同提取方法和不同组织对中华绒螯蟹DNA提取效果的比较研究

为了优化中华绒螯蟹基因组DNA提取方法,采用酚-氯仿法和试剂盒法分别对中华绒螯蟹的鳃、肌肉、血淋巴液和刚毛4种组织进行DNA提取,并从纯度、浓度、片段完整性及微卫星标记PCR扩增效果4个方面评价提取DNA的质量。结果显示:酚-氯仿法提取的DNA片段比试剂盒法提取的更完整,且DNA浓度较高,但纯度稍低;无论何种提取方法,刚毛和血淋巴液中的DNA纯度都高于鳃和肌肉,4种组织中的DNA含量依次为鳃>肌肉>刚毛>血淋巴液,未剪碎刚毛中未能提取到基因组DNA;微卫星标记的电泳结果表明,两种提取方法下4种组织中提取的DNA均可满足微卫星标记的应用要求。综上,本研究建立了一种简便的非损伤性中华绒螯蟹的采样及其DNA提取方法,这对于进行中华绒螯蟹遗传育种和分子标记研究等方面具有一定的积极作用。

一种适于PCR扩增的快速提取猪基因组DNA的碱裂解法

以大白猪背最长肌、脾脏、耳组织为材料,用碱裂解法和酚-氯仿法分别提取猪基因组DNA,用紫外分光光度计、琼脂糖凝胶电泳、PCR扩增检测DNA的产量和质量,结果发现2种方法提取的DNA产量没有明显差异。通过猪MC4R、TEF-1基因特异引物进行PCR扩增均能得到目的条带。碱裂解法提取的DNA原液稀释5倍、10倍后作为模板均获得了较为稳定的扩增产物。该结果表明,简单、快速、无毒的碱裂解法适用于动物定性PCR检测时DNA的提取。

一种从鱼类肌肉组织中提取基因组DNA的简易方法

以泰山螭霖鱼、黄河鲤鱼、东平湖鲫鱼为材料,采用改进的酚-氯仿抽提法和蛋白酶K消化法提取基因组DNA,并对其进行紫外分光光度、琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳、微卫星PCR扩增等方法的鉴定。结果表明,本方法提取的鱼类基因组DNA浓度为0.9～3.25μg/μL,D260nm/D280nm值为1.79～1.87,电泳条带整齐明亮,适合微卫星PCR扩增。因此,本方法能够从鱼类肌肉组织中获得较为纯净的基因组DNA,适于进一步的分子生物学研究之用。

鲫鱼基因组DNA提取方法的探讨

以鲫鱼的血液、肌肉、肝、肾为材料,采用苯酚-氯仿法、试剂盒法提取鲫鱼基因组DNA,对不同方法提取的结果进行了紫外分光光度、琼脂糖凝胶电泳、微卫星PCR扩增等方法的鉴定。结果表明不同方法提取的鲫鱼基因组DNA浓度在385.8～3167.5ng/μL,A260/280比值处于1.66～1.87,所提取的DNA适合微卫星PCR扩增。因此,用苯酚-氯仿法对鲫鱼的血液、肌肉、肝、肾,用试剂盒法对鲫鱼的血液均能提取鲫鱼基因组DNA。

结合于红细胞表面单链短核苷酸提取方法学建立研究

目的建立用于红细胞消减SELEX筛选的单链短核苷酸的提取方法。方法使用高灵敏度的硅烷磁珠法提取结合于红细胞表面的单链短核苷酸,并采用实时荧光定量PCR法对其进行定量检测。同时以常用的酚氯仿提取法为对照,评价硅烷磁珠提取法的优劣。结果硅烷磁珠法提取结合于红细胞表面的单链短核苷酸的拷贝数为(4.79±0.13)×10^(10)/μL,而常用的酚氯仿法为(3.61±0.14)×10^(10)/μL。两者相比统计学差异显著(t=17.825,P<0.05)。结论与酚氯仿提取法相比,硅烷磁珠法提取ssDNA的灵敏度更高,可获得更多的结合于红细胞表面的单链短核苷酸。

不同方法提取鳗鲡病原菌DNA模板的差异分析

利用吸光值、琼脂糖电泳及PCR差异扩增等指标,对酚-氯仿法、水煮法、碱裂解法3种方法制备的鳗鲡病原菌DNA模板进行了差异分析.结果表明:1)不同方法提取的病原菌模板DNA的浓度、纯度及分子质量大小存在差异,但以这3种方法提取的病原菌DNA为模板,均能成功扩增到细菌16S rD-NA和外膜蛋白的保守序列.其中,酚-氯仿提取的模板DNA浓度较低、纯度较高;水煮法和碱裂解法提取的模板DNA浓度较高、纯度较低.2)电泳显示,3种方法获得的模板DNA扩增出的16S rDNA保守序列条带均一,没有显著差异,但在外膜蛋白保守序列的扩增中却因菌种和模板提取方法的不同而存在差异.

两种DNA提取法对腐败胎盘组织STR分型结果的比较

在法医物证检验工作中,对于新鲜的人体组织检材,一般采用Chelex-100法提取DNA就可得到理想的STR分型结果,但是对于高度腐败的人体组织,单纯地依靠此法检测存在失败的可能。笔者运用两种不同的DNA提取法对高度腐败的胎盘组织进行了DNA提取，并对其STR基因座分型的检出率、DNA含量及纯度进行了比较。

外周血基因组DNA提取方法比较

目的建立快速经济有效提取微量外周血基因组DNA的方法。方法采用酚/氯仿提取法、NaCL沉淀法和试剂盒法,直接从人外周血中提取基因组DNA,并以此为模板,进行肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)基因片段的扩增及鉴定。结果酚/氯仿法和试剂盒法提取的DNA量大,需血量少,用于PCR扩增结果稳定。结论酚/氯仿提取外周血DNA稳定、高效、经济,可用于批量临床标本的制备。

血液中DNA提取方法的比较研究

通过蛋白酶K和SDS消化破碎细胞，用酚一氧仿去除蛋白质，用异丙醇沉淀解离出DNA。此法获取的DNA与用酚抽提法、甲醇胺解聚法、异丙醇沉淀法、血细胞DNA快速提取法获得的DNA比较，分子长度较大，纯度较高，能够同时满足以噬菌作为载体的DNA构建基因组文库和PCR实验的要求。

三种提取卤虫基因组DNA方法的比较

以盐生动物卤虫为材料,分别用氯化钠高盐沉淀法和两种酚/氯仿抽提法对卤虫基因组DNA进行了提取;并用紫外光分光光度计法、琼脂糖电泳法和PCR对所提取的DNA进行检测,将它们在DNA的产量、质量等方面的优缺点进行比较,通过三种方法的比较,认为改进的酚-氯仿法是卤虫基因组DNA的最佳提取方法.

红碱淖遗鸥血液基因组DNA提取方法的比较研究

采用酚-氯仿法和改良Miller盐析法从红碱淖遗鸥冷冻血液样品中提取基因组DNA,以筛选遗鸥冷冻血液DNA的最佳提取方法。结果显示:酚-氯仿法琼脂糖凝胶电泳DNA样品亮度和清晰度较高,条带较粗,纯度较高;而改良Miller盐析法提取基因组DNA,获得率较低,并且难以去除杂质;酚-氯仿法提取时,酶解16 h比酶解10 h的DNA提取效果好,说明在一定时间范围内,延长酶解时间可有效地提高DNA提取效果。上述结果提示,酚-氯仿法对遗鸥冷冻血液基因组DNA提取的效果优于改良Miller盐析法。