雷酚内酯通过NF-κB途径逆转肺气管上皮细胞上皮间充质转化进程的研究

目的探讨雷酚内酯对肺气管上皮细胞上皮间充质转化(EMT)进程的影响。方法首先通过细胞计数试剂盒8法检测雷酚内酯对Beas-2b细胞活性的影响,确定雷酚内酯用药剂量。将细胞分为对照组、模型组、1μmol/L雷酚内酯组和10μmol/L雷酚内酯组。对照组不作任何处理;模型组细胞给予10 ng/mL TGF-β1联合10 ng/mL TNF-α处理48 h;雷酚内酯组细胞在模型基础上,添加终浓度为1μmol/L或10μmol/L雷酚内酯进行共孵育48 h。使用相差显微镜观察各组细胞形态变化,免疫荧光实验检测EMT标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和波形蛋白(Vimentin)的表达。通过RT-PCR和Western blot法检测E-cadherin、α-SMA和Vimentin mRNA和蛋白表达水平。进一步通过Western blot法检测NF-κB通路及EMT相关转录因子Snail家族锌指1(SNAI1)、锌指E-Box绑定同源盒1(ZEB1)和Twist家族BHLH转录因子1(TWIST1)蛋白表达水平。结果1μmol/L和10μmol/L的雷酚内酯能够提高细胞活性,并降低模型组细胞的迁移能力。免疫荧光和Western blot结果显示,雷酚内酯可抑制由TGF-β联合TNF-α诱导的EMT,与模型组比较,1μmol/L雷酚内酯组和10μmol/L雷酚内酯组α-SMA、Vimentin蛋白荧光强度下调,E-cadherin蛋白荧光强度上调。此外,对EMT相关转录因子的检测结果显示,模型组细胞磷酸化p65、TWIST1、ZEB1、SNAI1蛋白表达水平均上调,而雷酚内酯能够下调以上EMT相关转录因子。结论雷酚内酯可通过抑制NF-κB降低EMT相关转录因子SNAI1、ZEB1和TWIST1的表达,从而抑制由TGF-β联合TNF-α诱导的Beas-2b细胞的EMT进程。

雷酚内酯的抗炎免疫药理作用

雷酚内酯（triptophenolideTN）是由雷公藤醋酸乙酯提取物中分离的一种白色片状结晶。口服TN能显著抑制二甲苯及巴豆油所致急性炎症；且可使小鼠肾上腺VitC含量明显降低。TN可明显抑制DNCB和BSA诱导的迟发超敏反应；并可使大、小鼠外周血ANAE＋淋巴细胞明显减少，显示TN对T淋巴细胞的免疫功能有抑制作用，TN还能显著提高大、小鼠血清总补体含量及抑制循环中1gG的形成量。其对小鼠腹腔Mφ吞噬功能呈现小剂量促进、大剂量抑制的双向作用。

雷酚内酯的波谱学数据与结构确证

对雷酚内酯对照品的紫外吸收光谱(UV)、红外吸收光谱(IR)、质谱(MS)、核磁共振(NMR)谱(包括~1H NMR、^(13)C NMR、DEPT、~1H-~1H COSY、NOE、~1H-^(13)C HSQC和~1H-^(13)C HMBC谱图)进行了分析,对其~1H和^(13)C NMR谱峰进行了全归属,纠正了文献[5]的归属错误,确证了雷酚内酯对照品的化学结构.

高速逆流色谱分离雷公藤中的雷酚内酯异构体

利用高速逆流色谱法从雷公藤植物粗提物分离得到一个化合物。两相溶剂体系为正己烷/乙酸乙酯/甲醇/水(2∶3∶3∶2,V/V/V/V),水相作流动相,有机相作固定相。经单晶X-衍射分析确定该化合物为雷酚内酯异构体。晶体参数为:晶体为正交晶系,空间群为P2(1)2(1)2(1);晶胞参数为:a=0.71913(10)nm,b=1.25227(19)nm,c=3.5786(5)nm;晶胞体积为V=3.2227(8)nm3;Z=8。

雷酚内酯晶体结构的再研究

邓福孝等于1982年从福建产的雷公藤(Tripterygium wilfordu Hook.f.)根皮中分离出雷酚内酯,通过IR,UV,MS和NMR等研究得出其分子式为C_(20)H_(24)O_3,结构式为l式。

高速逆流色谱制备雷酚内酯异构体的研究

以选定的溶剂体系为基础,研究温度、转速对高速逆流色谱技术分离制备雷酚内酯异构体工艺的影响。研究结果表明,在选定的溶剂体系(正己烷∶乙酸乙酯∶甲醇∶水=2∶3∶3∶2,V/V/V/V)下,流动相流速为2.0 mL/min时,正向洗脱,分离较佳的恒温水浴循环水温度为25.0℃、转速为800 r/min,此时管柱内固定相的保留率为60.0%,管路工作压力为0.15 MPa。

雷酚内酯的极谱催化波研究

用线性扫描伏安法研究了雷酚内酯在不同缓冲体系及氧化剂作用下的极谱行为。实验表明 ,在含有 0 .1mol/LKCl、pH 4.3的HAc NaAc缓冲溶液、6.0× 1 0 - 3mol/LH2 O2 的体系中 ,雷酚内酯产生催化波 ,其一阶导数波的峰电位为- 1 .0 3V (vs.SCE) ,峰电流与其浓度在 3.2× 1 0 - 8～ 3.2× 1 0 - 7mol/L的范围内有良好的线性关系 (n =6,r=0 .9989)。

雷公藤药材中雷酚内酯的薄层扫描法测定

目的：建立雷公藤中雷酚内酯含量测定的方法。方法：采用薄层扫描法，样品上柱纯化，以氯仿乙醚（２∶１）展开，Ｋｅｄｄｌｅ试剂显色，扫描，外标两点法计算。结果：线性范围为２．１～１０．５μｇ，ｒ＝０．９９８。结论：本法可作为雷公藤质量控制的方法。

反相高效液相色谱法测定大白鼠血浆中雷酚内酯浓度

雷酚内酯(Triptophenolide)是从中药雷公藤(Tripterygium wilfordii Hook.f.)根的有效部位醋酸乙酯提取物中分离得到的一种二萜内酯化合物,经药理和临床研究证明,它具有抗炎、免疫抑制作用,是雷公藤治疗类风湿关节炎的有效成分。配合临床研究,我们对雷酚内酯进行了药物动力学研究,采用液-固净化富集技术进行血样预处理,反相高效液相色谱法测定大白鼠血浆雷酚内酯的血药浓度,方法简便、灵敏、准确,取得了较好结果。

薄层扫描法测定复方雷公藤胶囊中香酚内酯的研究

目的 :建立控制复方雷公藤胶囊的质量方法。方法 :对雷公藤、丹参、黄芪、三七等四味中药用薄层色谱法进行定性鉴别 ,用薄层扫描法对雷公藤中的雷酚内酯进行定量分析。结果 :定性、定量方法灵敏、重现性好 ,雷酚内酯的含量为 2 .0 5± 0 .0 4μg·g-1,RSD为 2 .0 3%。结论

雷酚内酯的极谱行为研究

研究雷酚内酯在多种体系中的极谱行为。实验表明 ,在不同体系和不同pH范围 ,雷酚内酯产生两个还原波 ,其峰电流和峰电位受酸度影响的情况不同 ,而在B -R缓冲体系条件下 ,峰电流明显受溶液酸度的影响 ,但峰电位基本上保持不变 ;在pH =6.1的B -R缓冲溶液中 ,雷酚内酯的两峰电位分别为 -0 .1 1V和-1 .1V(vs.SCE) ,两峰的峰电流与雷酚内酯的浓度在 3 .1 2 9× 1 0 - 6 mol·L- 1～ 3 .1 2 9× 1 0 - 5mol·L- 1的范围内成良好的线性关系 ,线性回归方程分别为iP′(nA·s- 1) =3 1 1 6+2 .447× 1 0 7c(mol·L- 1) (r =0 .9994)和iP′(nA·s- 1) =1 3 5 2 +4 .83 3× 1 0 7c(mol·L- 1) (r =0 .9993 ) ;循环伏安研究表明 。

雷酚内酯对IgA肾病大鼠肾间质纤维化和Th1/Th2漂移的调控

目的:探讨雷酚内酯对IgA肾病大鼠肾间质纤维化和Th1/Th2免疫失衡的调控。方法:采用牛血清白蛋白+脂多糖+四氯化碳联合建立IgA肾病模型。考马斯亮蓝法检测尿蛋白。肌氨酸氧化酶法检测血清肌酐。二乙酰肟比色法检测血清尿素氮。ELISA法检测血清中IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10的水平。免疫荧光法观察肾小球IgA的沉积。HE染色法观察肾组织病理。Masson法观察肾间质纤维化。蛋白印迹法分析TGF-β1和MCP-1的表达。结果:与正常对照组相比,模型组尿蛋白、血清肌酐和尿素氮水平明显升高(P<0.05)。与模型组相比,雷酚内酯组尿蛋白、肌酐和尿素氮水平明显降低(P<0.05)。与正常对照组相比,模型组IL-2和IFN-γ水平明显下降,IL-4和IL-10水平明显升高(P<0.05)。与模型组比较,雷酚内酯组IL-2和IFN-γ水平明显升高,IL-4、IL-10水平及IL-4/IFN-γ比值明显降低(P<0.05)。与正常对照组相比,模型组肾组织IgA沉积增加,胶原纤维增多,TGF-β1和MCP-1表达明显升高(P<0.05)。雷酚内酯可减少IgA的沉积和胶原纤维,抑制TGF-β1和MCP-1的表达(P<0.05)。结论:雷酚内酯可保护IgA肾病大鼠的肾功能,减轻肾间质纤维化,改善Th1/Th2漂移。

基于三重四级杆高分辨质谱系统的雷酚内酯在大鼠体内代谢途径分析

研究雷酚内酯在大鼠体内的生物代谢转化规律。方法:主要分析雷酚内酯在大鼠体中代谢的相关途径以及产物。结果:雷酚内酯可以在大鼠体中,通过甲基化、三氧化等途径,转变为各种代谢产物。结论:本方法作为雷酚内酯在大鼠体内的代谢产物的快速鉴定,为雷公藤植物的药物研究提供重要参考。

湖北产雷公藤的内酯成分

从湖北产雷公藤（Tripterygium Wilfodii Hook. F.）的根皮中分离得到三个二萜内酯:山海棠素甲醚（hypolide methyl ether,Ⅰ）、雷酚酮内酯（triptonolide,Ⅱ）及异雷酚新内酯（isoneotriptophenolide,Ⅲ）;一个降倍半萜内酯——雷藤素（Wilforonide,Ⅳ）。后两者系新化合物,其结构由UV、IR、1H-NMR、13C-NMR和MS等数据推定。

有机磷腈盐/三乙基硼二元催化体系协同催化环氧化物与二氢香豆素的开环交替共聚

通过使用有机磷腈盐催化剂三[三(二甲氨基)亚氨基]氯化磷(P_(4)^(+)Cl^(-))与三乙基硼(TEB)组成的二元协同催化体系,实现了3,4-二氢香豆素(DHC)与多种环氧化物的开环交替共聚.系统考察了聚合温度和催化剂用量等因素对聚合活性和选择性的影响.研究结果表明,通过优化聚合反应条件,P_(4)^(+)Cl^(-)/TEB催化体系对多种环氧化物与DHC的开环交替共聚表现出较高的催化活性和选择性,避免了分子内酯交换等副反应.研究了反应动力学,利用核磁共振氢谱(^(1)H NMR),体积排阻色谱(SEC)和基质辅助激光解吸/电离时间飞行质谱(MALDI-TOF-MS)对聚合物结构进行表征,结果表明产物为端基明确、分子量可控的高度交替结构的醚酯共聚物.

雷公藤甲素的半合成研究

以雷酚内酯为原料，经甲基化、氧化、去甲基化、还原、环氧化等七步反应合成了雷公藤甲素。其结构经红外光谱、核磁共振光谱、质谱确证。

活性炭固相萃取/胶束电动色谱联用技术用于雷公藤3种有效成分的测定

建立了活性炭固相萃取/胶束电动色谱法同时测定中药雷公藤中的雷公藤甲素、雷公藤内酯酮和雷酚内酯的方法。优化了萃取p H值、乙醇洗脱体积、电泳运行缓冲溶液p H值与浓度、胶束SDS的浓度及进样时间、电压等条件。进行电泳分离之前,分析物用活性炭进行吸附后用2.0 m L乙醇洗脱。在214 nm波长处,分离电压20 k V,20 mmol/L硼酸-10 mmol/L硼砂（p H 8.0）-20 mmol/L SDS运行缓冲溶液条件下,3种成分在8 min内得到完全分离,雷公藤甲素、雷公藤内酯酮在4.0×10^-5-4.0×10^-3mol/L,雷酚内酯在4.0×10^-5-1.0×10^-3mol/L浓度范围内线性关系良好,其回收率为81.0%-102.9%,方法的检出限分别为1.42×10^-6,7.90×10^-7,2.96×10^-7mol/L,相对标准偏差（RSD）分别为3.2%,5.4%,3.5%。所建立的方法简单、快速、准确,成功用于雷公藤片样品的测定。

雷公藤及其有效成分在复方制剂工艺中动态变化的研究

以雷公藤中的有效成分雷酚内酯及总生物碱为指标，研究雷公藤及含雷公藤的中药复方制剂中，雷公藤单独提取及其与方中相关药材共同提取时的动态变化。结果表明，雷公藤用８倍量７５％乙醇加热回流提取３次，每次１ｈ，其有效成分雷酚内酯及总生物碱含量较高；而雷公藤与方中其它药材共同提取时，总的趋势是，雷酚内酯的含量下降，而总生物碱含量则有提高。

雷公藤两种活性成分热稳定性研究

目的:研究雷公藤两种活性成分雷酚内酯与5,5’-二甲氧基落叶松脂素的热稳定性,为探讨雷公藤煨制机理提供参考。方法:采用热重、微商热重和差热分析技术测得热分析曲线,综合多升温速率法和单一升温速率法进行动力学处理,计算热分解的表观活化能和指前因子对数值并推测理论贮存期。结果:雷酚内酯与5,5’-二甲氧基落叶松脂素均为一步失重分解,差热曲线均有两个吸热峰,为熔点峰和热分解反应最快峰。雷酚内酯热分解机制为二维扩散,表观活化能83.61 k J/mol,指前因子对数值14.39;5,5’-二甲氧基落叶松脂素分解机制为相界面反应,表观活化能105.20 k J/mol,指前因子对数值18.16。推测雷酚内酯和5,5’-二甲氧基落叶松脂素的理论贮存期均为3年。结论:雷酚内酯和5,5’-二甲氧基落叶松脂素热分解温度大于200℃,热分解活化能表明两者具有较高的热稳定性。因此,在雷公藤200℃煨制过程中,雷酚内酯和5,5’-二甲氧基落叶松脂素可能不发生变化。

雷公藤的干燥工艺研究

目的 :确定雷公藤浸膏的干燥条件。方法 :雷公藤浸膏在不同的干燥温度和时间下 ,测定其有效成分雷酚内酯及雷公藤内酯醇的含量。结果 :雷公藤浸膏在 80°C干燥 48h后 ,其有效成分雷公藤内酯醇和雷酚内酯的损失较小 ,而在 10 0°C烘 48h后 ,雷酚内酯及雷公藤内酯醇的含量约下降 15 .0 %～ 30 .0 %。结论 :雷公藤浸膏的干燥温度应控制在 80°C以下较为适宜。