中国对虾血清中酚氧化酶活力研究

1995年7—9月，以养殖中国对虾为材料，实验室用弧菌菌悬液注射感染对虾，血清中测得一定量的酚氧化酶（PO）。正常状态下对虾血清中的PO活力变化不大，而濒死对虾血清中PO活力变化较大。较低浓度的菌悬液能有效地提高PO活力，促使有机体对病原体的防御能力，这在实践中有重要意义。

日本血吸虫酚氧化酶的电泳及酶活性的研究

目的 观察日本血吸虫成虫酚氧化酶 ( phenol oxidase,PO)的酶谱及其活性。方法 将 42 d活成虫置含 0 .0 5 %戊巴比妥钠的 RPMI16 40培养基中 2 3℃孵育 8h后 ,分别收集雌、雄成虫 ,匀浆、超声粉碎、高速离心取上清 (含 PO) ,再进行聚丙烯酰胺凝胶电泳 ( PAGE)及酶染色后分析其酶谱 ;同时在紫外分光光度计下检测前后 2个时点的 A488值 ( A1,A2 ) ,PO活性相对值 =( A2 - A1) / ( min· m g样品蛋白 ) ,其活性值用每分钟每毫克蛋白 A488变化值表示。设立酚酶抑制剂 (丙烯基硫脲 )组 ,在该组成虫匀浆上清中预先加入丙烯基硫脲以观察其对酚氧化酶活性的抑制效果。结果 雌虫及雄虫均表现为迁移率相同的一条主带 ;但雄虫的酶带显色反应比雌虫弱。日本血吸虫雌虫及雄虫的酚氧化酶相对活性分别为 0 .16 5 m in- 1· mg- 1和 0 .0 80 5 min- 1· m g- 1 ;加入酚酶抑制剂后 ,酶活性被明显抑制。终浓度为 5 mm ol的丙烯基硫脲对成虫酚酶活性的抑制率为 85 .0 3%。当丙烯基硫脲终浓度达 2 5 m mol时 ,酚酶活性被完全抑制。结论 不仅雌性成虫含有日本血吸虫酚氧化酶 ,而且雄性成虫也含有少量的酚氧化酶且两者酶分子相同。雄性成虫含有的少量酚氧化酶的生理意义有待于进一步研究。

石蒜儿茶酚氧位甲基转移酶基因克隆与原核表达

采用同源克隆与RACE相结合的方法,首次从石蒜叶片中克隆到可能与加兰他敏生物合成相关的儿茶酚氧位甲基转移酶基因,命名为LrCOMT。核酸序列分析显示,该cDNA全长1 246bp,开放阅读框1 101bp,编码366氨基酸。氨基酸序列分析与比对发现,LrCOMT编码的氨基酸序列具有COMT蛋白的特征区域,且与鸢尾、玉米、烟草等植物COMT的同源性大于60%。将LrCOMT基因连接到原核表达载体pET-29a上,转化大肠杆菌BL21(DE3)的原核表达结果显示,重组蛋白受IPTG诱导表达,分子量大小约为40kD,与已报道的其他植物COMT大小基本一致。

精神分裂症攻击行为与儿茶酚氧位甲基转移酶基因多态性

目的研究中国昆明地区汉族人群儿茶酚氧位甲基转移酶(COMT)基因Val158Met多态性与精神分裂症攻击行为的相关性。方法采用外显攻击行为量表(OAS)测量88例符合美国精神障碍诊断与统计手册第4版(DSMⅣ)和中国精神障碍分类与诊断标准第3版(CCMD3)的精神分裂症患者;并应用聚合酶链反应(PCR)-限制性片段长度多态性(RFLP)的方法检测他们的COMT基因多态性。结果攻击行为患者与无攻击行为患者各基因型及基因型频数分布无显著差异;但分性别后发现:有攻击行为男性患者与无攻击行为男性患者等位基因频率比较有显著性差异(P<0.05),将158Met作为危险因素,OR值等于4.55,95%CI为1.36～15.19。而有、无攻击行为的女性患者间的等位基因频数比较无显著差异(P>0.05)。结论COMTVal158Met基因多态性与精神分裂症的攻击性行为有关,中国昆明地区的男性患者的低活性等位基因与攻击性行为显著相关联。

高效液相色谱法测定人体红细胞中儿茶酚氧位甲基转移酶的活性

采用高效液相色谱紫外检测法测定人体红细胞中儿茶酚氧位甲基转移酶 (COMT)的活性。以 3,4 二羟基苯甲酸 (DBA)作为酶反应底物 ,S 腺苷甲硫氨酸 (SAM)作为甲基供体 ,在镁离子的存在下 ,将SAM上的甲基转移到DBA 3位的氧上。色谱法测定反应产物 4 羟基 3 甲氧基苯甲酸 (4 OH 3 MBA)的生成量。人体红细胞中COMT活性的线性范围在 1U/mL～ 6 0U/mL ,最低检测限为 0 5U/mL(S/N≥ 5 ) ,方法的精密度良好 (平均RSD <10 % )。

首发抑郁障碍认知功能与儿茶酚氧位甲基转移酶基因多态性的关联分析

目的:探讨首发抑郁障碍认知功能与儿茶酚氧位甲基转移酶(COMT)基因多态性的关系。方法:应用聚合酶链反应及聚丙烯酰胺凝胶电泳方法,检测40例首发抑郁障碍患者和40例健康志愿者COMT基因多态性分布,并进行神经心理学评估。结果:COMT等位基因与基因型频率在两组间差异无显著性(均P>0.05);患者组神经心理学测验成绩在COMT等位基因、基因型之间差异均无统计学意义(均P>0.05);患者组持续错误数与基因型A/A呈负相关(r=-0.351,P=0.026),与等位基因G呈正相关(r=0.351,P=0.026)。结论:首发抑郁障碍的认知功能的改变与COMT基因多态性可能存在相关性。

高效液相色谱-电化学法测定人红细胞儿茶酚氧位甲基转移酶活性

目的:建立高效液相色谱-电化学法测定人体红细胞儿茶酚氧位甲基转移酶(COMT)活性。方法:以S-腺苷-L-甲硫氨酸(SAM)为甲基供体,3,4-二羟基苯甲酸(DBA)为酶反应底物,COMT催化DBA生成4-羟基-3-甲氧苯甲酸(4-OH-3-MBA),高氯酸沉淀蛋白后直接进样,电化学检测4-OH-3-MBA;以每毫克蛋白每分钟生成的4-OH-3-MBA的pmol数表示COMT活性。色谱柱为Nova-pak C18(3.9mm×150mm,4.0μm);流动相为0.1mol·L-1磷酸二氢钠缓冲液(内含EDTA0.15mmol·L-1)-甲醇(85∶15),pH3.2,流速0.8mL·min-1,柱温25℃;工作电位+900mV。结果:4-OH-3-MBA在0.2～6μmol·L-1范围内线性良好,r=0.9997(n=6),4-OH-3-MBA最低检测浓度为0.02μmol·L-1(S/N≥3);4-OH-3-MBA0.2,2,6μmol·L-1浓度的日内、日间精密度RSD在1.09%～7.71%之间,回收率在96.0%～100.3%之间。结论:本法准确、灵敏、简便,适于红细胞COMT活性测定。

我国福建汉族人群儿茶酚氧位甲基转移酶基因多态性研究

目的:了解福建省汉族人儿茶酚氧位甲基转移酶(COMT)1947位点基因多态性分布,为探讨该基因多态性与疾病的相关性及对药物代谢影响提供遗传背景资料。方法:应用聚合酶链反应技术-限制性内切酶分析检测了166名福建汉族正常人的COMT基因1947位点多态性,并比较了不同人群之间的基因型与等位基因频率。结果:福建汉族人COMT1947位点基因型(GG,GA和AA)分布频率分别是58.4%,36.7%,4.8%。COMT1947位点等位基因频率G和A分别是77%和23%。福建汉族人COMT1947位点的基因型分布和等位基因频率同肯尼亚人、日本人、台湾地区汉族人群比较差异无显著性,与美国、英国、芬兰和东南亚人比较,差异有极显著性(P<0.01)。福建汉族人COMT的GG纯合型显著高于美国、英国、芬兰和东南亚人群;而AA纯合型显著低于美国、英国、芬兰和东南亚人群。结论:福建汉族人COMT1947位点基因多态性分布不同于某些地区的人群,具有种族差异。

社区健康老人儿茶酚胺氧位甲基转移酶基因val158met多态性与综合认知训练效果的相关研究

目的探索儿茶酚胺氧位甲基转移酶(Catechol-O-methyltransferase,COMT)基因val158met多态性与社区健康老人综合认知训练效果的关系。方法对90名≥70岁的社区健康老人进行12周共24次的综合认知训练,干预前后采用中国老年成套神经心理测验(neuropsychological test battery for elderly,NTBE)评定认知功能,并通过TaqMan探针单核苷酸多态性基因分型技术检测COMT基因val158met多态性。结果基线时,COMT基因val158met多态性met等位基因携带组(n=38)组和未携带组(n=52)之间NTBE各项分测验成绩的差异均无统计学意义(P>0.05)。干预后,未携带met等位基因组NTBE 4项分测验成绩优于携带组(P<0.05);而与基线比较,未携带met等位基因组NTBE的成绩13项提高(P<0.05),1项下降(P<0.05);携带met等位基因组8项提高(P<0.05),3项下降(P<0.05)。结论 COMT基因val158met多态性与社区健康老人综合认知训练效果可能相关。

儿茶酚胺氧位甲基转移酶基因多态性研究

为分析中国汉族人儿茶酚胺氧位甲基转移酶 (COMT)基因多态性 ,用聚合酶链反应 限制性片段长度多态性 (PCR RFLP)技术分析了 53名正常中国汉族人COMT基因 1 94 7位点的多态性 ;并对NIaⅢ内切酶酶切后有异常带出现的标本PCR产物直接进行序列分析。发现中国汉族人COMT基因的A 1 94 7位点的频率为 0 .2 8;基因型G/G、G/A与A/A的频率分别为 0 .51 ,0 .4 2和 0 .0 7;并发现了C1 883/G和G1 966/T

正常中国汉人红细胞中儿茶酚氧位甲基转移酶的活性测定

目的 测定正常中国人群红细胞儿茶酚氧位甲基转移酶（COMT）活性浓度值，为研究COMT活性变化在疾病诊断中的应用提供依据。方法采用高效液相色谱法测定279名正常健康人（其中男性134例，女性145例）红细胞中COMT的活性浓度，用SPSS统计软件对性别间测定结果进行检验比较。结果男性和女性红细胞中COMT活性浓度分别为：（16．5±7．4）、（15．5±5．3）nmol·mL RBC^-1·h^-1。活性频率分布男性在6．0～37．4nmol·mL RBC^-1·h^-1，女性为5．4～37．2nmol·mL RBC^-1·h^-1，男女之间COMT活性浓度的差异无统计学意义（P〉0．05）。结论本法灵敏，简便，准确，重复性好，且测定结果与国外一些报道一致，适用于临床应用测定研究。本结果可作为中国健康人红细胞COMT活性正常值及今后研究的重要参考数据。

强迫症患者认知功能与儿茶酚氧位甲基转移酶基因多态性的关系

目的探讨强迫症(OCD)患者认知功能与儿茶酚氧位甲基转移酶(COMT)基因多态性之间的关联性。方法对88名OCD患者应用PCR及RFLP技术检测COMT基因的多态性;并采用威斯康星卡片分类测试(WCST)、连线试验A和B、韦氏积木拼图子测试测评所有患者的执行功能、注意和操作智商。结果 OCD患者COMT基因多态性频率分布符合Hardy-Weinberg平衡法则(χ2=0.00,P=0.99);患者的WCST测试,连线测试A和B以及韦氏积木拼图测试在G/G、G/A、A/A三个基因型组间均无显著性差异(P>0.05)。结论 OCD患者的执行功能、注意和操作智商可能并不会受COMT基因多态性的影响。

注意缺陷多动障碍执行功能与儿茶酚胺氧位甲基转移酶基因的关联分析

目的探讨注意缺陷多动障碍(attention-deficit hyperactivity disorder,ADHD)执行功能与儿茶酚胺氧位甲基转移酶(catechol-O-methyltransferase,COMT)基因rs4680多态性位点的关系。方法采用威斯康星分类测验(Wisconsin card sorting test,WCST)对114例符合美国精神障碍诊断与统计手册第四版(mental disorders versionⅣ,DSM-Ⅳ)诊断标准的ADHD儿童与76名正常对照组进行执行功能评估,并应用限制性片段长度多态性的方法进行COMT基因rs4680多态性位点分析。结果 ADHD组的WCST总应答数、完成第一个分类所需应答数和持续性应答数均明显高于正常对照组(P<0.05),而完成分类数明显低于正常对照组(P<0.01)。ADHD患者中不同基因型组之间WCST概念化水平百分数差异具有统计学意义(P=0.01),A/A组高于G/A组和G/G组(P<0.05),G/A组也高于G/G组但无统计学意义(P>0.05)。不同基因型组间WSCT其他指标的差异均无统计学意义(P≥0.05)。ADHD组和正常对照组之间COMT基因rs4680多态性基因型及等位基因的分布差异均无统计学意义(P>0.05)。结论本研究未发现COMT基因rs4680多态性与ADHD存在关联,但rs4680多态性可能与ADHD的某些执行功能指标有关。

胎盘儿茶酚氧位甲基转移酶基因多态性与子痫前期的关系

目的：探讨胎盘儿茶酚氧位甲基转移酶（COMT）基因rs4680、rs6269位点单核苷酸多态性（SNP）与子痫前期发病的关系。方法：选择2011年3月至2012年8月在南方医科大学附属深圳市妇幼保健院产科住院分娩的孕妇217例，其中子痫前期孕妇92例为子痫前期组，健康孕妇125例为对照组，收集两组孕妇产后胎盘组织，提取胎盘DNA，应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）平台及MassARRAY-IPLEX技术对COMT基因rs4680及rs6269位点进行检测，分析其基因型及等位基因分布情况。结果：胎盘组织COMT基因rs4680位点基因型GG、GA、AA的基因型频率和G、A等位基因频率在子痫前期组与对照组之间的分布差异均无统计学意义（P〉0.05）。两组胎盘COMT基因rs6269位点GG、GA、AA3种基因型频率差异有统计学意义（P=0.019）；且G、A等位基因频率在子痫前期组和对照组分布差异有统计学意义（X2=6.382，P=0.012），A／GOR=1.707（95％CI=1.125～2.590）。胎盘COMTrs4680与rs6269单核苷酸多态性与孕妇血压无明显相关性。结论：胎盘COMTrs6269单核苷酸多态性与子痫前期发生相关，携带A等位基因是发生子痫前期的危险因素；胎盘COMTrs4680单核苷酸多态性与子痫前期发生无关。

儿茶酚胺氧位甲基转移酶基因多态性与抑郁症的关联性研究

目的:探讨中国汉族人群抑郁症患者与儿茶酚胺氧位甲基转移酶(COMT)基因多态性之间的关系。方法:抽取110例抑郁症患者(抑郁症组)作研究,以114例正常人(正常对照组)作对照。应用聚合酶链式反应(PCR)扩增技术测定所有研究对象的COMT基因的基因型和等位基因。结果:COMT基因的3种基因型(A/A,A/G和G/G)在抑郁症组的分布分别为2.7%、25.5%和71.8%,在正常对照组分别为5.3%、49.1%和45.6%,两组间差异有显著性(P<0.05)。结论:COMT基因的多态性与抑郁症之间有显著关联。

儿茶酚胺氧位甲基转移酶基因Val158Met多态性与帕金森病抑郁的相关性

目的探讨儿茶酚胺氧位甲基转移酶(COMT)基因Val158Met多态性与中国帕金森病抑郁的相关性。方法 2016年6月至2017年12月,散发帕金森病患者268例,根据汉密尔顿抑郁量表评定结果分为抑郁组(n=116)和非抑郁组(n=152)。同时招募252例既往健康,无神经系统疾病,性别、年龄与患者相匹配的健康体检者作为对照组。两组留取外周血,提取基因组DNA。采用限制性片段长度多态性-聚合酶链反应(PCR-RELP)和限制性酶切,分析COMT基因Val158Met多态性。结果抑郁组、非抑郁组、对照组在COMT基因Val158Met位点基因型(χ~2=0.78,P>0.05)、等位基因(χ~2=0.25,P>0.05)分布均无显著性差异。结论 COMT基因Val158Met多态性并非中国帕金森病抑郁人群的遗传易感因素。

攻击行为与儿茶酚胺氧位甲基转移酶基因多态性研究

目的：探讨精神疾病伴发的攻击行为与儿茶酚胺氧位甲基转移酶(catechol-0-methyltransferase，COMT)基因多态性的关系。方法：研究组(有攻击行为)43例，疾病对照组41例。健康对照组156例。采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-KFLP)技术分析COMT基岗多态性。结果：①研究组的COMT基因型与健康对照组之间的差异有统计学意义。②研究组与疾病对照组之间的差异无统计学意义。③等位基因A携带患者在疾病症状(敌对性、情感平淡)及认知功能方面存在差异。结论：精神疾病患者其COMT基因多态性及等位基因分布频率与健康对照者不同。等位基因A携带患者的症状表现不同。攻击行为与COMT基因多态性无相关性。

反相高效液相色谱法测定4-羟基-3-甲氧基苯甲酸及间苯三酚对儿茶酚氧位甲基转移酶的抑制作用

目的建立反相高效液相色谱(RP-HPLC)法测定4-羟基-3-甲氧基苯甲酸含量和观察间苯三酚对儿茶酚氧位甲基转移酶(COMT)的抑制作用。方法利用COMT催化3,4-二羟基苯甲酸生成4-羟基-3-甲氧基苯甲酸的原理,通过提取小鼠肝脏匀浆中的COMT 20μL,在反应体系中分别加入1×10-3mol·L-1邻苯二酚及5×10-3,1×10-3,2×10-4mol·L-1间苯三酚各10μL,利用RP-HPLC法测定产物生成量来分析间苯三酚对COMT的抑制作用。结果间苯三酚在5×10-3,1×10-3,2×10-4mol·L-13个浓度下对COMT活性均有抑制作用,抑制率分别为25.3%,17.6%,8.9%。结论间苯三酚对COMT活性具有抑制作用,但抑制作用弱于同浓度的邻苯二酚。

地塞米松对乙炔雌二醇诱发的肝内胆汁淤积症孕鼠儿茶酚氧位甲基转移酶活性、胎盘和肝脏组织雌激素受体表达的影响

目的:研究地塞米松对雌激素诱发的肝内胆汁淤积症孕鼠儿茶酚氧位甲基转移酶(catechol-O-methyl-transferase,COMT)活性及肝脏和胎盘雌激素受体(estrogen receptor,ER)表达的影响,探讨地塞米松治疗妊娠期肝内胆汁淤积症(intrahepatic cholestasis of pregnancy,ICP)的作用机制。方法:选择SD孕鼠随机分为ICP对照组(A组)、ICP地塞米松干预组(B组)、非ICP对照组(C组)、非ICP地塞米松干预组(D组)。4组孕鼠均于见到阴道血性分泌物后剖腹取胎,计量胎鼠身长、体质量,计算死胎数量。光镜下观察各组孕鼠胎盘和肝脏组织病理学改变,并采用免疫组织化学法检测其ER的表达;采用高效液相色谱法检测各组孕鼠COMT的活性浓度;采用放射免疫法检测孕鼠血清游离雌三醇(unconjugated estriol,uE3)浓度。结果:(1)4组胎鼠中,死胎率A组高于B组和C组,差异有统计学意义(P<0.01)。(2)A组胎鼠身长和体质量低于B组和C组,差异有统计学意义(P<0.01),D组显著低于C组(P<0.01)。(3)4组孕鼠肝脏和胎盘组织病变积分结果比较,A组显著高于B组和C组,差异有统计学意义(P<0.01),C组与D组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。(4)孕鼠胎盘组织中ER主要分布于细胞浆内,少数在细胞核内表达,肝脏组织中ER主要分布在细胞膜上。4组孕鼠ER表达的平均光密度值比较,A组高于B组和C组,D组低于C组,差异均有统计学意义(均P<0.01)。(5)孕鼠红细胞COMT活性浓度比较,B组和C组均高于A组,D组高于C组,差异均有统计学意义(均P<0.01)。(6)孕鼠血清uE3浓度比较,B组和C组均低于A组,D组低于C组,差异均有统计学意义(均P<0.01)。(7)COMT活性浓度与uE3水平呈负相关(r=-0.381,P<0.05)。结论:地塞米松对雌激素诱发的肝内胆汁淤积的孕鼠具有保护作用,并能改善胎鼠预后,其机制与对孕鼠胎盘及肝脏细胞ER的表达及肝脏COMT活性浓度的调节作用有关。

儿茶酚氧位甲基转移酶基因多态性与迟发性运动障碍的关联研究

目的 探讨广东地区汉族人群中儿茶酚氧位甲基转移酶（COMT）基因Val158／108Met多态性与抗精神病药物所致迟发性运动障碍（TD）及其严重程度的关系。方法采用病例．对照研究。检测87例伴有TD和92例无TD的精神分裂症患者COMT基因Val158Met多态性分布，采用异常不自主运动量表（AIMS）评定TD的严重程度。比较两组间基因型和等位基因频率的差异，并分析该多态性与TD严重程度的关系。结果COMT基因型（Val／Val，Val／Met，Met／Met）频率在TD组（0．40，0．49，0．10）与非TD组（0．53，0．36，0．11）之间差异无显著性（P〉0．05）；等位基因（Val，Met）频率在两组间（TD组0．65，0．35，非TD组0．71，0．29）差异无显著性（P〉0．05）；不同基因型的男性TD患者的AIMS总分差异存在显著性（P=0．011），Met／Met纯合子的AIMS总分[（9．16±4．60）分]显著高于Val／Val纯合子和Val／Met杂合子[（6．73±2．19）分,（5．84±1．89）分]。结论 COMT基因Val158Met多态性与迟发性运动障碍易感性之间不存在关联，但可能与男性TD患者的症状严重程度相关。