丹酚酸B对2型糖尿病小鼠心肌病氧化应激的作用及机制

目的探讨丹酚酸B(Sal B)对2型糖尿病小鼠心肌病(DCM)氧化应激的作用及潜在机制。方法60只C57BL/6J小鼠分为空白组(n=12,Control组,正常饲料,灌胃生理盐水)和高脂高糖(HG)组[n=48,HFG组,链脲佐菌素(STZ)联合HFG饲料构建DCM模型],造模成功的HFG组小鼠分为DCM组(灌胃生理盐水)、Sal B低剂量[1.50 mg/(kg·d)]组(Sal B.L组)、Sal B高剂量[3.00 mg/(kg·d)]组(Sal B.H组)及200 mg/(kg·d)二甲双胍治疗组(Metformin组),灌胃连续8周;麻醉各组小鼠,采用小动物超声仪检测仰卧位时各组小鼠心脏的左室射血分数(LVEF)、缩短分数(FS)、左室收缩末期容积(LVESV)及左室收缩期末期内径(LVIDs);处死各组小鼠,取心脏制作切片、苏木素-伊红(HE)和Masson染色观察心肌组织形态学特征;采用试剂盒检测各组小鼠心肌组织中细胞丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽(GSH)的水平,采用Western blot分析氧化应激蛋白Kelch样ECH关联蛋白1(Keap1)、核因子-E2相关因子2(Nrf2)、磷酸化Nrf2(pNrf2)、过氧化物酶1(PRDX1)、血红素加氧酶1(HO-1)及凋亡相关蛋白活化的半胱氨酸蛋白(Cleaved-caspase3)、B淋巴细胞瘤-2蛋白(Bcl2)、Bcl2关联X(bax)蛋白的表达;SD乳鼠心脏提取分离培养原代新生大鼠心肌细胞(PNRCMs)构建DCM体外模型,将PNRCMs分为40 mmol/L甘露醇(Mannitol)组、空白(Control)组、40 mmol/L HG(HG)组、40 mmol/L HG+25μmol/L Sal B(Sal B低剂量,Sal B.L)组、40 mmol/L HG+50μmol/L Sal B(Sal B高剂量,Sal B.H)组、40 mmol/L HG+0.25 mmol/L二甲双胍(Metformin)组,检测各组细胞的活性氧(ROS)、MDA、SOD及GSH水平,采用Western blot检测氧化应激蛋白Keap1、Nrf2、pNrf2、PRDX1、HO-1及凋亡相关蛋白Cleaved-caspase3、bax、Bcl2蛋白的表达;采用实时定量反转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)法检测氧化应激相关基因Keap1、Nrf2、PRDX1及HO-1信使RNA(mRNA)的表达;采用Nrf2抑制剂(ML385)和激动剂(甲基巴多索隆)进一步分析氧化应激蛋白Keap1、Nrf2、pNrf2、PRDX1及HO-1的表达。结果与Control组比较,DCM组小鼠的LVEF、FS降低(P<0.01),LVESV、LVIDs升高(P<0.01),心肌组织排列紊乱、间质细胞增多并伴有炎性细胞浸润及胶原沉积,心肌组织中MDA含量增加、SOD和GSH减少(P<0.01),心肌组织中Keap1、Cleaved-caspase3及bax蛋白表达上调,Nrf2、pNrf2、PRDX1、HO-1及Bcl2蛋白表达下调(P<0.01);与Control组比较,HG组心肌细胞中ROS表达增加,SOD表达下降(P<0.05),MDA含量增加、GSH表达下降(P<0.01),心肌细胞中的Keap1、Cleaved-caspase3及bax蛋白表达增加(P<0.01),Nrf2、pNrf2、PRDX1、HO-1及Bcl2蛋白表达下降(P<0.01),心肌细胞中的Keap1 mRNA表达升高(P<0.05),Nrf2、PRDX1及HO-1 mRNA表达降低(P<0.05);与DCM组比,Sal B.L和Sal B.H组小鼠的LVEF、FS增加(P<0.01)、LVESV、LVIDs降低(P<0.01),心肌组织排列整齐、炎性细胞浸润减少、心肌胶原沉积减少,心肌组织中MDA含量减少、SOD和GSH含量增加(P<0.01),心肌组织中Keap1、Cleaved-caspase3及bax表达下调,Nrf2、pNrf2、PRDX1、HO-1及Bcl2蛋白表达上调(P<0.05);与HG组相比,Sal B.L和Sal B.H量组心肌细胞中ROS表达、MDA含量减少,SOD和GSH含量增加(P<0.05),心肌细胞中的Keap1、Cleaved-caspase3及bax蛋白表达减少(P<0.05),Nrf2、pNrf2、PRDX1、HO-1及Bcl2表达增加(P<0.05);心肌细胞中的Keap1 mRNA表达降低(P<0.05),Nrf2、PRDX1和HO-1 mRNA表达升高(P<0.05);进一步采用Nrf2抑制剂ML385和激动剂甲基巴多索隆干预,与HG组相比,Sal B.H组心肌细胞中的Nrf2、pNrf2、PRDX1及HO-1表达增加(P<0.05);与Sal B.H组相比,ML385和Sal B联用组心肌细胞中的Nrf2、pNrf2、PRDX1及HO-1的表达减少(P<0.05)。结论Sal B可降低2型糖尿病小鼠DCM的氧化应激作用,其机制与Keap1/Nrf2信号通路蛋白的表达有关。

以丹酚酸B为指标性成分的复方巴戟天健骨颗粒整体质量评价

目的:通过复方巴戟天健骨颗粒中丹酚酸B质量控制研究,评价制剂质量。方法:色谱柱采用Sino Chrom ODS-BP (4.6 mm × 250 mm, 5 μm),流动相乙腈-0.1%磷酸水,等度洗脱,体积流量1.2 mL•min−1,柱温30℃,检测波长286 nm。结果:丹酚酸B在考察的浓度范围内线性关系良好(r = 1.000),线性范围为8.25~165.00 μg/mL,平均加样回收率为99.16%,RSD为1.52%。结论:该方法操作简便、准确、重复性好,可为复方巴戟天健骨颗粒质量控制提供实验依据。

丹酚酸B通过SIRT1/PGC-1α通路对Aβ_(1-42)干预N2A细胞保护作用研究

目的观察沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)/过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α(PGC-1α)的表达及检测活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量和线粒体膜电势,探讨丹酚酸B(SalB)减轻β淀粉样多肽1-42(Aβ1-42)干预小鼠来源神经瘤母细胞(N2A)后氧化应激损伤的作用及机制。方法使用10μM Aβ1-42寡聚体干预N2A细胞构建阿尔茨海默病(AD)细胞模型,使用40μM SalB干预细胞为对照组,模型组和SalB干预组。使用MTT法检测不同实验组细胞活力;DCFH-DA染色测定实验组细胞内ROS水平;ELISA法检测SOD,MDA水平;Western blot法和RTPCR法分别检测不同实验组SIRT1、PGC-1α蛋白和mRNA水平。结果与Aβ干预N2A细胞构建的模型组相比,SalB组处理后的模型组细胞活力显著升高(P<0.001),SalB组细胞中ROS水平显著下降(P<0.01),SOD水平显著上升(P<0.001),MDA生成显著减少(P<0.05),有效恢复线粒体膜电势(P<0.05)。另外,SalB处理后模型组细胞的SIRT1、PGC-1α蛋白和mRNA水平均升高。结论SalB可以显著降低Aβ干预N2A细胞后诱导的氧化应激反应,减少ROS产生及下调MDA水平,上调SOD水平,该神经保护作用可能与上调SIRT1/PGC-1α通路相关。

负载丹酚酸B甲基丙烯酰化明胶水凝胶对椎间盘退变的作用

背景:丹酚酸B可抑制H2O2诱导的细胞损伤,有效清除过量的活性氧,发挥抗氧化特性,已被应用于许多疾病的治疗研究中。但是,有关丹酚酸B在椎间盘退变中作用及其作用机制的研究相对较少。目的:以甲基丙烯酰化明胶水凝胶为载体,通过体外细胞实验与动物体内实验观察丹酚酸B对氧化应激诱导的椎间盘退变的作用以及作用机制。方法:制备负载丹酚酸B的甲基丙烯酰化明胶水凝胶(载药水凝胶)。①体外细胞实验:分离提取成年SD大鼠腰椎髓核细胞,选择第3代髓核细胞,分组处理:A组加入完全培养基;B组加入含H2O2的完全培养基;C组接种于未载药水凝胶上,加入含H2O2的完全培养基;D组接种于载药水凝胶上,加入含H2O2的完全培养基;E组接种于载药水凝胶上,加入含H2O2与TLR4信号通路抑制剂的完全培养基,检测细胞增殖、氧化应激、炎症反应、细胞基质相关蛋白的基因表达以及TLR4/核因子kB信号通路蛋白表达。②动物体内实验:将60只成年SD大鼠随机分为正常组、针刺组、针刺+丹酚酸组、针刺+水凝胶组、针刺+载药水凝胶组,每组12只,后4组采用针刺建立椎间盘退变模型后依次注射生理盐水、丹酚酸B溶液、未载药水凝胶、载药水凝胶治疗,术后4周分别进行影像学检测、病理组织形态观察。结果与结论:①体外细胞实验:与A组比较,B组细胞增殖下降,氧化应激反应及炎症反应增强,细胞外基质降解酶(基质金属蛋白酶3、基质金属蛋白酶13、ADAMTS4、ADAMTS5)的表达增加(P<0.05),细胞外基质(Ⅱ型胶原、蛋白聚糖)的合成减少(P<0.05),TLR4/核因子kB信号通路蛋白表达增加(P<0.05);与B组比较,D、E组细胞增殖升高,氧化应激反应及炎症反应减弱,细胞外基质降解酶的表达减少(P<0.05),细胞外基质的合成增加(P<0.05),TLR4/核因子kB信号通路蛋白表达减少(P<0.05),其中以E组效果更显著。②动物体内实验:术后4周,针刺+载药水凝胶组退变椎间盘的椎间盘高度指数、MRI指数以及椎间盘病理组织学评分均较针刺组有了显著改善,而单纯注射水凝胶或是丹酚酸B溶液虽也可一定程度地改善椎间盘退变情况,但均不及注射载药水凝胶组。③结果表明,负载丹酚酸B的甲基丙烯酰化明胶水凝胶可抑制退变椎间盘组织中的氧化应激反应与炎症反应,抑制细胞外基质的降解,缓解椎间盘退变的进程,该作用可能通过抑制TLR4/核因子kB信号通路来完成的。

丹酚酸B对肝损伤小鼠肠道菌群和短链脂肪酸代谢的影响

本研究旨在探讨丹酚酸B(salvianolic acid B,Sal B)对小鼠肝损伤的干预作用,以及对肠道菌群和短链脂肪酸(short-chain fatty acids,SCFAs)代谢的影响。通过皮下注射20%CCl 4溶液建立小鼠肝损伤模型,在造模的同时给予Sal B和阳性药2-脱氧-葡萄糖(2-deoxy-D-glucose)灌胃干预,干预结束后通过苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)、Masson、天狼星红染色观察小鼠肝脏病理变化;采用生化试剂盒检测血清谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)水平;运用16S rRNA测序技术检测小鼠肠道菌群结构变化;通过气相色谱法测定小鼠粪便中SCFAs的含量。结果显示,Sal B可以显著降低CCl 4诱导的肝损伤小鼠血清ALT、AST水平(P<0.001),并减轻肝组织病理损伤。测序结果显示,Sal B可以部分恢复肝损伤小鼠的肠道菌群结构,同时显著增加肠道中异丁酸、异戊酸、丙酸和戊酸的含量(P<0.001)。本实验揭示了Sal B可以减轻CCl 4所诱导的小鼠肝损伤,机制可能与其对肠道菌群和SCFAs紊乱的调节有关。

丹酚酸B通过调控AMPK介导的铁死亡保护缺氧/复氧诱导的肾小管上皮细胞的损伤

目的:探究丹酚酸B(Salvianolic acid B,Sal B)对于缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)所致肾小管上皮细胞损伤的保护作用及其机制。方法:体外实验细胞分组为正常对照(Con)组,Sal B+Con组、H/R组、Sal B+H/R组,以及Con组、H/R组、Sal B+H/R组、H/R+CC(Compound c,AMPK抑制剂)组、H/R+Sal B+CC组两部分。体外实验用CCK‑8法检测HK‑2细胞活性;细胞震碎,取上清,用酶标仪检测GSH和MDA的含量;Western blot检测p‑AMPK、GPX4、ACSL4和FSP1蛋白的表达情况;细胞免疫荧光检测铁死亡指标GPX4、ACSL4蛋白的表达情况;流式细胞术检测线粒体膜电位和细胞凋亡。结果:体外实验结果显示,Sal B在20~160μmol/L对正常HK‑2细胞活性无明显毒性(P>0.05);与模型组相比,20、40、80μmol/L的Sal B呈剂量依赖性提高HK‑2细胞的活性(P<0.01)。与模型组相比,H/R+Sal B组细胞MDA含量降低,GSH含量升高,p‑AMPK、GPX4和FSP1蛋白的表达水平升高,ACSL4蛋白的表达降低,细胞线粒体膜电位显著升高,细胞凋亡率显著下降(P<0.05);H/R+AMPK组较H/R+Sal B组FSP1和GPX4蛋白表达水平降低,ACSL4蛋白的表达水平升高(P<0.05),细胞线粒体膜电位显著降低(P<0.05),加入Sal B可以逆转这一情况(P<0.05)。结论:Sal B可减轻H/R的肾小管上皮细胞的损伤,其机制可能与激活AMPK通路减轻肾小管上皮细胞铁死亡有关。

丹酚酸B调控NLRP3/caspase-1/GSDMD介导焦亡改善小鼠肾纤维化

【目的】观察丹酚酸B对肾纤维化小鼠的改善作用及机制。【方法】将36只BALB/c小鼠随机分为假手术组,模型组,丹酚酸B低、中、高剂量组及VX765[半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(caspase-1)抑制剂]组,每组6只。丹酚酸B低、中、高剂量组分别以相应剂量50、100、200 mg·kg^(-1)·d^(-1)丹酚酸B生理盐水混悬液灌胃,VX765组以50 mg·kg^(-1)·d^(-1)VX765生理盐水混悬液灌胃,假手术组和模型组灌胃等体积生理盐水,每日1次。7 d后,除假手术组外,其他各组小鼠采用单侧肾脏缺血再灌注损伤联合对侧肾切除术建立急性肾损伤后肾纤维化模型。造模后各组继续灌胃相应体积药物21 d。给药结束后,采用苏木素-伊红(HE)染色及马松(Masson)染色观察肾组织病理学变化,采用肌氨酸氧化酶法检测血清肌酐(SCr),采用脲酶法检测尿素氮(BUN),酶联免疫吸附分析(ELISA)检测血清中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)水平,蛋白质免疫印迹(Western Blot)法检测肾组织纤维化蛋白α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(vimentin)、转化生长因子β(TGF-β)及焦亡相关蛋白裂解型半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶1(cl-caspase-1)、caspase-1前体(pro-caspase-1)、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、裂解型白细胞介素1β(cl-IL-1β)、白细胞介素1β(IL-1β)、消皮素D-N端片段(GSDMD-N)、消皮素D(GSDMD)表达。【结果】与假手术组比较,模型组小鼠血清SCr、BUN、NGAL水平升高(P<0.05或P<0.01),HE及Masson染色显示肾间质有炎性细胞浸润及大量胶原沉积,纤维化相关蛋白α-SMA、vimentin、TGF-β表达水平升高(P<0.01),焦亡相关蛋白cl-caspase-1/pro-caspase-1、NLRP3、cl-IL-1β/IL-1β、GSDMD-N/GSDMD表达水平亦升高(P<0.05或P<0.01);与模型组比较,丹酚酸B高剂量组血清SCr、BUN、NGAL水平显著降低(P<0.05或P<0.01),肾间质炎性细胞浸润及胶原沉积减轻,纤维化蛋白α-SMA、vimentin、TGF-β及焦亡相关蛋白cl-caspase-1/pro-caspase-1、NLRP3、cl-IL-1β/IL-1β、GSDMD-N/GSDMD表达水平降低(P<0.05或P<0.01)。丹酚酸B高剂量组上述各指标与VX765组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。【结论】丹酚酸B可能通过抑制NLRP3/caspase-1/GSDMD通路介导的细胞焦亡,减轻小鼠肾纤维化。

丹酚酸B抑制HuH-7细胞的Hippo/YAP通路机制研究

目的 探讨丹酚酸B(salvianolic acid B,Sal B)对人肝癌HuH-7细胞是否具有抑制作用,并探讨其是否通过Hippo/YAP信号通路发挥作用。方法 采用TGF-β1 (9 pmol·L^(-1))或MST1/2抑制剂XMU-MP-1 (5、10μmol·L^(-1))刺激HuH-7细胞,用Sal B(50μmol·L^(-1))处理HuH-7细胞。用CCK-8和EdU检测细胞增殖情况,用细胞划痕实验检测细胞迁移情况,用免疫荧光染色法检测YAP和TAZ的表达和分布,用Western blot检测p-MST1、MST1、p-YAP、YAP、p-TAZ、TAZ和CTGF的蛋白表达水平。结果 Sal B抑制了TGF-β1或XMU-MP-1刺激的HuH-7细胞的增殖。同时,Sal B抑制了TGF-β1刺激的HuH-7细胞的迁移。值得注意的是,与XMU-MP-1对HepG2细胞迁移能力的促进作用不同,XMU-MP-1在本实验中不能明显促进HuH-7细胞的迁移。此外,Sal B可上调p-MST1、MST1、p-YAP、p-TAZ的蛋白表达,降低YAP、TAZ、CTGF的表达。结论 Sal B抑制HuH-7细胞的作用可能与激活Hippo/YAP信号通路有关。

丹酚酸B对术后腹膜粘连大鼠的抗粘连作用

目的研究丹酚酸B(SAB)对大鼠腹膜粘连防治效果其作用机制。方法采用盲肠钳夹和腹膜损伤方法建立大鼠腹膜粘连模型,通过粘连等级综合评分法计算大鼠术后粘连得分,并取腹壁和盲肠壁组织切片进行苏木精-伊红(HE)染色,观察组织病理结构变化。实时荧光定量PCR检测术后大鼠粘连组织基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和基质金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)mRNA的表达。酶链免疫吸附法(ELISA)检测术后大鼠血清转化生长因子-β1(TGF-β1)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、大鼠腹壁组织或粘连组织MMP-9和TIMP-1表达水平。结果与模型组相比,SAB中、高剂量组(40、80 mg/kg)可有效降低术后粘连评分(P<0.05或P<0.01)。组织病理学切片结果显示SAB中、高剂量组能够减少粘连、血管化程度以及炎症细胞的浸润。ELISA结果显示SAB中、高剂量组可明显降低粘连大鼠血清TGF-β1和炎症因子IL-6、TNF-α的表达量(P<0.05或P<0.01)。qPCR和ELISA结果表明中、高剂量组能够逆转大鼠粘连组织MMP-9 mRNA和蛋白表达量的降低、TIMP-1 mRNA和蛋白表达量升高趋势,恢复MMP-9和TIMP-1水平的平衡(P<0.05或P<0.01)。结论SAB能降低大鼠术后腹膜粘连程度,其机制与降低粘连关键因子TGF-β1、减轻术后炎症反应和调节MMP-9与TIMP-1平衡有关。

丹酚酸B通过PI3K/AKT/mTOR信号通路对衰老巨噬细胞生物学功能的影响研究

目的:分析丹酚酸B通过磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/苏氨酸蛋白激酶B(AKT)/雷帕霉素靶标(mTOR)信号通路对衰老巨噬细胞生物学功能的影响。方法:以小鼠骨髓巨噬细胞为研究对象,利用3%过氧化氢溶液建立巨噬细胞衰老模型。实验分为对照组、衰老组和丹酚酸B组,对照组为未衰老的巨噬细胞,衰老组为衰老的巨噬细胞,丹酚酸B组为经丹酚酸B处理衰老的巨噬细胞,干预浓度分别为10μmol/L、50μmol/L、100μmol/L。以细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测细胞活性,实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测炎症因子表达,免疫双荧光法检测衰老巨噬细胞向M1和M2型极化情况,蛋白质印迹法(WB)检测PI3K、AKT、mTOR表达。结果:从0 h至72 h,各组检测到的吸光度(OD)值逐渐增加。在72 h时,衰老组巨噬细胞增殖活力低于对照组(P<0.05)。与衰老组比较,10μmol/L、50μmol/L、100μmol/L丹酚酸B组巨噬细胞增殖活力均更高(P<0.05)。100μmol/L、50μmol/L丹酚酸B组巨噬细胞增殖活力均高于10μmol/L丹酚酸B组(P<0.05)。100μmol/L丹酚酸B组巨噬细胞增殖活力虽低于对照组,但差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组比较,衰老组和100μmol/L丹酚酸B组白细胞介素(IL)-1β、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)相对表达量均上升(P<0.05),IL-4、IL-10、精细氨酸1(Arg1)相对表达量均下降(P<0.05)。与衰老组比较,100μmol/L丹酚酸B组IL-1β、iNOS、TNF-α相对表达量均下降(P<0.05),IL-4、IL-10、Arg1相对表达量均上升(P<0.05)。与衰老组比较,100μmol/L丹酚酸B组CD206表达上调,CD86表达下调。与对照组比较,衰老组p-PI3K、p-AKT、p-mTOR表达量均上升(P<0.05)。与衰老组比较,100μmol/L丹酚酸B组p-PI3K、p-AKT、p-mTOR表达量均下降(P<0.05)。100μmol/L丹酚酸B组中p-PI3K表达量高于对照组(P<0.05),而p-AKT、p-mTOR表达量与对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:丹酚酸B可通过PI3K/AKT/mTOR信号通路增强衰老巨噬细胞增殖活力并促进其向M2型极化。

丹酚酸B对帕金森病小鼠肠功能紊乱的保护作用及机制研究

目的:探讨丹酚酸B(SalB)对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱导的帕金森病(PD)模型小鼠的肠道功能紊乱的保护作用及机制。方法:48只C57BL/6成年雄性小鼠随机分为正常对照组(Control组)、SalB对照组(SalB组)、模型组(MPTP组)、SalB治疗组(MPTP+SalB组)。腹腔注射MPTP构建PD小鼠模型,腹腔注射SalB治疗;采用爬杆实验检测小鼠行为;通过测定首粒黑便排出时间、小鼠粪便含水量评估小鼠肠道功能;免疫组化分析小鼠中脑黑质酪氨酸羟化酶(TH)阳性细胞数量、结肠Toll样受体4(TLR4)表达水平;HE染色组织切片观察小鼠结肠黏膜病理改变;免疫组化法测定小鼠黑质TH及结肠TLR4表达水平,ELISA法测定小鼠结肠组织中钙卫蛋白(CP)、TNF-α含量;Western blot检测小鼠中脑及结肠TH、结肠紧密连接蛋白(ZO-1)及TLR4/MyD88/NF-κB信号通路蛋白表达水平。结果:与正常对照组比较,模型组小鼠爬杆及转弯时间均明显增加,首粒黑便排出时间显著延长,粪便含水量明显减少;中脑TH阳性细胞数量明显减少,结肠TLR4阳性细胞数增加,中脑、结肠TH蛋白水平均显著降低,结肠黏膜病理损伤评分明显增加,结肠CP、TNF-α水平显著升高,结肠ZO-1表达明显减少;结肠TLR4、MyD88、Nuclear NF-κB p65及p-NF-κB p65蛋白表达水平均明显增加;与模型组比较,SalB治疗组小鼠爬杆及转弯时间均明显减少、首粒黑便排出时间显著缩短、粪便含水量明显增加;中脑TH阳性细胞数量明显增加,结肠TLR4阳性细胞数减少,中脑、结肠TH蛋白表达升高;结肠黏膜病理损伤评分明显降低,结肠CP、TNF-α含量显著减低,结肠ZO-1表达明显增加;结肠TLR4、MyD88、Nuclear NF-κB p65及p-NF-κB p65蛋白表达水平均明显下降。结论:SalB对MPTP诱导的PD模型小鼠具有神经及肠道双重保护作用,SalB缓解肠道炎症可能与抑制TLR4/MyD88/NF-κB炎症信号通路有关。

生物3D打印丹酚酸B⁃海藻酸钠⁃明胶皮肤支架促进糖尿病大鼠创面愈合

目的:探讨生物3D打印丹酚酸B(salvianolic acid B,SAB)⁃海藻酸钠⁃明胶皮肤支架对糖尿病大鼠创面的治疗作用。方法:按照SAB占海藻酸钠与明胶总重的百分比制成含0%、0.5%、1.0%、1.5%SAB的生物墨水,采用生物3D打印技术制备不同规格的皮肤支架。扫描电镜观察微观结构,高效液相色谱测定SAB体外累积释放浓度。皮肤支架用于治疗2型糖尿病大鼠创面,分为空白对照组、凡士林纱布组以及皮肤支架组(0%SAB、0.5%SAB、1.0%SAB、1.5%SAB组)。于第7、14天观察创面愈合、渗出情况,同时取创面组织进行HE、Masson、活性氧(reactive oxygen species,ROS)染色,并检测超氧化物歧化酶(super⁃oxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH⁃PX)、过氧化氢酶(catalase,CAT)及丙二醛(malondial⁃dehyde,MDA)水平。结果:扫描电镜下,4组皮肤支架均呈网孔状立体结构,孔隙分布均匀。SAB累积释放量随时间延长逐渐增加。各组创面均愈合良好,1.0%SAB组创面修复优于其他各组。第7天时,1.0%SAB组ROS水平均低于其他各组(P<0.05);第14天时,1.0%SAB组ROS水平低于除1.5%SAB组外的其他各组(P<0.01),1.0%SAB组和1.5%SAB组ROS表达水平差异无统计学意义(P=0.136)。第7天时,1.0%SAB组SOD、GSH⁃PX及CAT水平均高于其他各组(P<0.05),MDA水平低于空白对照组、凡士林纱布组及0%SAB组(P<0.05);第14天时,1.0%SAB组SOD、GSH⁃PX及CAT水平高于空白对照组、凡士林纱布组和0%SAB组(P<0.05),MDA水平低于空白对照组、凡士林纱布组(P<0.05)。HE染色显示,各组创面皮肤均修复较好,1.0%SAB组新生组织较多。Masson染色显示,第7、14天时,0.5%、1.0%、1.5%SAB组创面胶原蛋白沉积多于其他各组(P<0.05)。结论:1.0%SAB⁃海藻酸钠⁃明胶皮肤支架在第7、14天时不仅可以抑制ROS的产生,并上调各种抗氧化酶的表达,抑制创面组织内氧化应激反应,还可以促进胶原沉积,最终促进糖尿病大鼠的创面愈合。

丹酚酸B对心肌缺血再灌注损伤的作用

目的:探究丹酚酸B对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的作用及其可能的作用机制。方法:本实验选用人诱导多功能干细胞来源的心肌细胞(hiPSC-CMs),通过缺氧6 h复氧24 h建立心肌损伤模型,选取丹酚酸B(7.5、15、30、60和120μg/mL)5个剂量研究其对hiPSC-CMs及hiPSC-CMs心肌损伤模型阻抗与场电位的影响。后进行动物实验,分为假手术组,心肌缺血再灌注模型组,丹酚酸B低(15 mg/kg)、中(30 mg/kg)、高(60 mg/kg)剂量组,阳性对照普萘洛尔(2.5 mg/kg)组,灌胃给药4 d后,进行冠状动脉左前降支结扎手术(缺血30 min,再灌注24 h)建立大鼠MIRI模型,采用TTC染色法观察大鼠心脏缺血区域面积;HE染色法观察大鼠心肌结构病理形态;全自动生化分析仪测定血清中心肌酶活性探究丹酚酸B用药在MIRI中的作用;使用试剂盒检测丹酚酸B在MIRI过程中可能存在的抗氧化机制。结果:丹酚酸B有增强hiPSC-CMs收缩力,减轻心肌损伤,改善场电位功能的作用。并且可以有效减少MIRI模型大鼠的心肌缺血面积,改善心肌结构损伤,降低心肌酶活性。此外,还能够降低MIRI大鼠血清中丙二醛(MDA)含量,提升超氧化物歧化酶(SOD)活性和还原型谷胱甘肽(GSH)活性,在改善心肌损伤的过程中发挥抗氧化作用。结论:丹酚酸B可以有效降低MIRI,并发挥着改善心肌细胞生理功能,保护心脏的作用。其作用机制可能与降低血清MDA水平、提高SOD和GSH活性有关。

丹酚酸B在帕金森病动物模型中的神经保护作用及临床应用进展

作为一种逐渐进展的神经系统变性疾病,帕金森病在老年人群体中的发病率较高,主要病理机制为多巴胺神经元丧失、神经纤维缠结的形成、氧化应激和线粒体功能受损、炎症反应和蛋白质代谢异常。丹酚酸B作为一种从丹参中提取的活性成分,其对帕金森病的神经保护作用机制为抗氧化作用、改善线粒体功能、调控神经炎症、抑制细胞凋亡、促进神经元分化与增值和影响肠道菌群。丹酚酸B作为辅助药物与常规治疗药物联合使用,具有增强疗效、减少副作用的功效,其为临床进行帕金森病早期诊断及治疗提供了方法及依据。

丹酚酸B通过抑制Toll样受体4/核因子κB信号通路对小鼠BV2细胞炎症模型保护作用的研究

目的探讨丹酚酸B对1-甲基-4-苯基-吡啶离子(MPP+)诱导的小鼠BV2小胶质细胞神经炎症反应的影响及作用机制.方法将BV2细胞分为空白对照组、MPP+组,以及低、中、高浓度丹酚酸B+MPP+处理组.低、中、高浓度组的细胞分别用10、50、100μmol/L丹酚酸B处理2h.此后用1 mmol/L MPP+处理细胞24 h.MPP+组仅用1 mmol/L MPP+处理24 h.采用流式细胞术和CCK-8法分别检测细胞凋亡和存活情况,采用Western blot法、免疫组化法、免疫荧光法检测各组细胞中Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)和核因子κB(NF-κB)p65蛋白表达水平,酶联免疫吸附法测定肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素lβ(IL-1β)和白细胞介素6(IL-6)水平.结果与对照组比较,MPP+组细胞TLR4、MyD88、p-NF-κB p65蛋白及炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6表达水平增加(P<0.01);与MPP+组相比,低、中、高浓度丹酚酸B+MPP+处理组细胞,TLR4、MyD88、p-NF-κB p65蛋白及炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6表达水平与丹酚酸B浓度成正比降低(P<0.01).结论在MPP+诱导的小鼠炎症细胞模型中,丹酚酸B可通过抑制TLR4/NF-κB炎症信号通路激活而发挥抗炎作用.

丹酚酸B多重护肤功效的综合评价

目的:本文利用非酶糖基化反应模型、人永生化角质形成(HaCaT)细胞光老化模型、人胚胎皮肤成纤维细胞(ESF)内的胶原蛋白含量测定、酪氨酸酶抑制实验和细胞酪氨酸酶抑制实验对丹酚酸B(Sal B)的多重护肤活性进行了系统评价。方法:通过非酶糖基化反应模型评价了Sal B抗糖基化效果;HaCaT细胞光老化模型评价了Sal B抗皮肤衰老活性;天狼猩红-苦味酸染色法测定ESF中胶原蛋白含量,评价了Sal B紧致皮肤的活性;蘑菇酪氨酸酶抑制实验、小鼠皮肤黑色素瘤细胞(B16-F10)中酪氨酸酶活性抑制实验,评价了Sal B的美白作用,结合分子对接,推断了Sal B抑制酪氨酸酶的作用位点。结果:Sal B能抑制晚期高级糖化终末产物(AGEs)生成,具有抗糖基化作用,也能增强紫外损伤的HaCaT细胞活力,具有明确的抗皮肤细胞光老化作用,其作用机制与提高细胞中的超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)等抗氧化物活性和含量有关。Sal B还能增加ESF中胶原蛋白含量,从而发挥紧致皮肤的功效。Sal B可通过氢键作用、疏水作用等方式与酪氨酸酶结合,抑制其活性,从而发挥良好的美白功效。结论:本文利用多种模型综合评价了Sal B的多重护肤功效,以期为Sal B在护肤产品中的开发利用提供理论依据。

丹酚酸B减轻骨关节炎模型大鼠软骨组织损伤

目的探究丹酚酸B对骨关节炎模型大鼠的软骨组织损伤、低氧诱导因子-1(HIF-1)和血管内皮生长因子(VEGF)的影响。方法构建骨关节炎模型大鼠,大鼠随机分为假手术组、骨关节炎组[切断交叉韧带法(ACLT)]、尼美舒利组、丹酚酸B高(40 mg/kg)和低(10 mg/kg)剂量组及丹酚酸B+HIF-1激活组,每组12只。显微CT机检测关节处骨结构;番红固绿染色和Masson染色观察软骨组织病理学变化;检测血清白介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量、诱导性一氧化氮合酶(iNOS)的活性;Western blot检测软骨组织HIF-1、VEGF、基质金属蛋白酶13(MMP-13)及活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(ceaved caspase-3)表达。结果与假手术组相比,骨关节炎组软骨组织损伤严重,踝骨骨体积分数(BV/TV)降低,踝骨表面积与骨体积比值(BSA/BV)、血清中IL-6、TNF-α含量、iNOS活性、软骨HIF-1、VEGF、MMP-13及cleaved caspase-3蛋白表达升高(P<0.05);与骨关节炎组相比,尼美舒利组、丹酚酸B高和低剂量组软骨组织逐渐恢复,踝骨BV/TV升高,BSA/BV、血清IL-6、TNF-α含量、iNOS活性、软骨HIF-1、VEGF、MMP-13和cleaved caspase-3蛋白表达量降低(P<0.05);与丹酚酸B高剂量组相比,丹酚酸B+HIF-1激活组软骨组织损伤加重,踝骨BV/TV降低,BSA/BV、血清IL-6、TNF-α含量、iNOS活性、软骨HIF-1、VEGF、MMP-13及cleaved caspase-3蛋白表达升高(P<0.05)。结论丹酚酸B可通过调控HIF-1/VEGF通路,抑制HIF-1、VEGF表达,缓解骨关节炎。

丹酚酸B对视网膜静脉阻塞损伤大鼠模型视网膜的保护作用及对血管新生的影响

目的:探讨丹酚酸B对视网膜静脉阻塞(RVO)损伤大鼠模型视网膜的保护作用及对血管新生的影响。方法:SD大鼠随机分为对照组、模型组和丹酚酸B组,每组各10只,除对照组外,模型组和丹酚酸B组大鼠均采用孟加拉红联合激光光动力法诱导RVO,其中丹酚酸B组大鼠腹腔注射丹酚酸B 50mg/(kg·d),对照组和模型组大鼠仅给予等量生理盐水,连续21d。荧光素眼底血管造影(FFA)技术观察给药前后视网膜静脉结构;HE染色观察大鼠视网膜组织病理变化;视网膜电图(ERG)评估大鼠视网膜功能;免疫荧光染色技术检测各组大鼠视网膜组织中血管内皮生长因子A(VEGFA)荧光表达情况;Western blotting法检测视网膜组织中HIF-1α、STAT3、p-STAT3及VEGFA蛋白相对表达量。结果:与对照组比较,模型组大鼠视网膜阻塞处血流再通,有效侧支循环丰富,但形状不规则,有荧光渗漏;丹酚酸B组大鼠视网膜静脉循环恢复,形状逐渐规则,血管侧支减少;模型组和丹酚酸B组视网膜有不同程度病理损伤,同时两组大鼠ERG a波和b波振幅、视网膜总层(RTL)、内核层(INL)和外核层(ONL)厚度降低,VEGFA荧光强度增强,HIF-1α、p-STAT3及VEGFA蛋白相对表达量升高(P<0.05);与模型组比较,丹酚酸B大鼠视网膜组织病理学损伤有所减轻,ERG a波和b波振幅、RTL、INL和ONL厚度升高,VEGFA荧光强度减弱,HIF-1α、p-STAT3及VEGFA蛋白相对表达量降低(P<0.05)。结论:丹酚酸B可减轻RVO大鼠视网膜组织病理学损伤,改善视网膜功能,这可能与抑制HIF-1α/STAT3/VEGFA途径激活,减少血管新生有关。

丹酚酸B对创伤后应激障碍大鼠神经特异核蛋白和神经生长相关蛋白43表达的影响

目的观察丹酚酸B对创伤后应激障碍(PTSD)大鼠脑组织神经特异核蛋白(NeuN)和神经生长相关蛋白(GAP)43表达的影响,探讨丹酚酸B影响PTSD大鼠学习记忆能力的机制。方法将大鼠随机分为正常组、模型组、帕罗西汀组(4.2 mg/kg)、丹酚酸B低、中、高剂量组(10、20、40 mg/kg)。除正常组外,其余各组采用单次延长应激(SPS)构建PTSD大鼠模型。每天灌胃给药1次,连续14 d。末次给药结束24 h后,Morris水迷宫检测各组空间学习记忆能力;免疫荧光实验检测各组皮层和海马NeuN和GAP43表达的变化;分光光度计检测各组血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)的变化。结果与正常组比较,模型组逃避潜伏期明显延长,穿越原平台所在位置的次数明显减少,皮层和海马NeuN和GAP43表达明显减少,血清SOD和GSH-PX含量明显降低,MDA含量明显升高(P<0.01)。与模型组比较,丹酚酸B各剂量组逃避潜伏期明显缩短,穿越原平台所在位置的次数明显增多,皮层和海马NeuN和GAP43表达明显增多,血清SOD和GSH-PX含量明显升高,MDA含量明显降低(P<0.01)。结论丹酚酸B可以提高PTSD大鼠空间学习记忆能力,其机制可能与丹酚酸B上调皮层和海马NeuN和GAP43的表达、抑制氧化应激反应有关。

丹酚酸B对去卵巢骨质疏松小鼠的生物学变化及机制

目的丹酚酸B是传统中药丹参的重要生物活性组分,临床应用广泛。新近发现,丹酚酸B具有防治骨质疏松的作用。本研究拟在前期工作基础上,系统地研究丹酚酸B对去卵巢骨质疏松小鼠的作用,探讨其对小鼠间充质干细胞(MSCs)成骨分化的影响。方法将18只8周龄SPF级别的C57雌性小鼠分为假手术组、骨质疏松组、丹酚酸B治疗组。骨质疏松组和丹酚酸B治疗组行双侧卵巢摘除术。而假手术组则保持正常的卵巢结构,同时去除局部的脂肪。3组均于术后3日内给予抗生素进行抗感染治疗。4周内,丹酚酸B治疗组给予丹酚酸B 2.5 mg/kg腹腔注射,连续12周,2天1次,其余2组在相同的时间内给予等量生理盐水。16周后,在麻醉状态下将所有小鼠处死。应用MicroCT测量了小鼠右后股骨的骨密度。采用qRT-PCR技术,分析小鼠左后股骨骨髓MSCs中Runx2和Osterix的表达。将小鼠右后股骨进行液氮研磨处理,提取蛋白质,用WB法测定OPG和RANKL的含量。结果骨质疏松组小鼠股骨骨密度比假手术组低(P<0.05),丹酚酸B治疗组小鼠股骨骨密度比骨质疏松组高,但差异无显著性意义(P<0.05)。骨质疏松组小鼠Runx2和Osterix水平低于假手术组(P<0.05),丹酚酸B治疗组小鼠Runx2和Osterix水平比骨质疏松组高(P<0.05)。骨质疏松组小鼠OPG和RANKL蛋白水平低于假手术组(P<0.05),丹酚酸B组小鼠OPG和RANKL蛋白水平比骨质疏松组高(P<0.05)。结论绝经后骨质疏松症早期对小鼠的骨质疏松具有一定的影响,但还需要更多的实验来验证本研究的结论。