外周血酪氨酸羟化酶含量与首发抑郁症的相关性研究

目的探讨外周血酪氨酸羟化酶(TH)含量与首发抑郁症的相关性,为阐明抑郁症的临床诊断及发病机制提供科学依据。方法选取2021年7月至2022年9月在我院就诊的40例首发抑郁症患者为病例组,另选取在我院体检中心进行健康体检的46名健康者为对照组。两组研究对象均进行汉密尔顿焦虑量表(HAMA)和汉密尔顿抑郁量表(HAMD)评分,并采集外周血测定TH含量。比较两组的TH含量及在不同性别和不同年龄段中的含量;通过偏相关分析TH含量与HAMA、HAMD评分的相关性;通过受试者工作特征曲线(ROC)的曲线下面积(AUC)来评价TH对抑郁症的诊断价值。结果病例组的TH含量显著低于对照组(P<0.05)。病例组的HAMA、HAMD评分与TH含量呈负相关(P<0.05)。ROC曲线分析显示,TH预测抑郁症的AUC为0.660。结论外周血TH含量降低可能与首发抑郁症的发生和发展有关,可作为抑郁症的生物学标志,对预测抑郁症具有一定的临床价值。

4例酪氨酸羟化酶基因突变致多巴胺反应性肌张力障碍分析

目的:提高临床医师对酪氨酸羟化酶基因(TH)突变致多巴胺反应性肌张力障碍的认识。方法:采用回顾性研究方法,分析我院2019年8月至2021年1月诊治的4例TH突变致多巴胺反应性肌张力障碍患儿的临床表现、治疗随访情况及基因特征。结果:4例患儿均来自汉族,非亲缘关系,不同家系;男3例,女1例;3~6月龄起病,均以运动发育落后起病,伴有面部表情及自主活动减少、情绪淡漠、不规则低热、鼻腔分泌物增多、眼睑下垂,动眼危象、流涎等表现,部分有晨轻暮重特点。4例患儿均给予口服多巴丝肼片治疗,临床症状均有改善。4例患儿共发现6种突变,均为复合杂合突变,其中c.755T>C突变未见相关文献报道。结论:TH突变致多巴胺反应性肌张力障碍,多于1岁内起病,以肌张力异常及运动发育落后为主要症状,多巴丝肼治疗有效,早期发现并规范用药能取得较好临床效果。

酪氨酸羟化酶基因新型突变所致多巴反应性肌张力障碍1例

多巴反应性肌张力障碍临床罕见,发病率低。本文报告1例酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)基因新型突变致多巴反应性肌张力障碍患者的临床资料,为临床诊治提供参考。患者为29岁女性,肢体震颤伴手足姿势异常19年,儿童期急性起病,慢性加重,主要表现为四肢震颤,行走时足尖着地及双手肌肉痉挛,症状存在昼夜波动性特点。查体可见双上肢轻微姿势性及静止性震颤。基因检测提示患者TH基因EXON9 C.943G>A错义突变(遗传自父亲)及TH基因EXON8 C.851A>G错义突变(遗传自母亲)的杂合突变,C.851A>G位点既往未见报告。予小剂量左旋多巴治疗,患者症状明显改善。分析该病例特点及文献回顾表明,多巴反应性肌张力障碍患者诊断主要依赖于基因检测,且不同的临床表型对左旋多巴反应不同。

酪氨酸羟化酶缺乏症致多巴反应性肌张力障碍1例报告和文献复习

酪氨酸羟化酶缺乏症致多巴反应性肌张力障碍是一种可治疗的神经代谢疾病,临床中比较罕见。现报告1例酪氨酸羟化酶缺乏症致多巴反应性肌张力障碍患者并复习相关文献,探讨酪氨酸羟化酶缺乏症致多巴反应性肌张力障碍的发病机制、临床表现及诊断治疗,最后得出外周血清泌乳素可能是酪氨酸羟化酶缺乏症的生物标记物,临床怀疑酪氨酸羟化酶缺乏症的患者进行基因检测可能是确诊的唯一途径,尽早识别确诊和左旋多巴治疗,可能会明显改善预后。

自发性高血压大鼠肝阳上亢证模型肾上腺组织的酪氨酸羟化酶基因表达研究

目的 :研究自发性高血压大鼠 (SHR)肝阳上亢证模型的酪氨酸羟化酶 (TH)基因表达水平及潜阳方对其影响。方法 :采用免疫组织化学方法和原位杂交法分别测定该模型肾上腺组织TH蛋白质及mRNA表达。结果 :SHR肝阳上亢证模型TH蛋白质及mRNA表达均明显增强 ,经用具有平肝熄风作用的潜阳方治疗后 ,其表达水平下降。提示 :SHR肝阳上亢证模型具有肾上腺组织TH表达增强的特点。

MES23.5细胞酪氨酸羟化酶的种属来源及其重组酶的活性测定

MES 2 3 5细胞作为研究神经变性疾病的工具 ,是一种杂交瘤性多巴胺能神经元细胞系 ,由大鼠胚胎中脑细胞与小鼠神经母细胞瘤 胶质瘤细胞系N18TG2杂交而成 .其酪氨酸羟化酶 (tyrosinehydroxylase ,TH)的动物种属来源不清楚 .应用反转录聚合酶链反应 (RT PCR)法从MES 2 3 5细胞系中克隆了编码TH的cDNA ;结构分析表明 ,其cDNA编码区由 14 97碱基构成 ,共编码 4 98个氨基酸 ,与大鼠和小鼠TH的同源程度分别为 93%和 10 0 % .该杂交瘤细胞系表达小鼠TH .将该cDNA亚克隆至原核表达载体pGEX 4T 1,经原核细胞表达、亲和层析得到了电泳纯的基因重组小鼠TH(recombinantmousetyrosinehydroxylase ,rmTH) .改良和建立了一种体外分析TH活性的新方法 .活性分析证明 ,纯化的rmTH能催化L 酪氨酸发生加单氧反应生成L 3,4 二羟基苯丙氨酸 (L 多巴 ) .rmTH的表观分子量为 5 6kD ;其酶促加单氧反应的最适pH值为 7 0 .乙二胺四乙酸能显著抑制此酶的活性 ,而亚铁离子能明显增强其活性 .

家蚕酪氨酸羟化酶基因BmTh的表达及功能

酪氨酸羟化酶作为儿茶酚胺合成的限速酶,广泛存在于昆虫、哺乳动物和人类中,是其新陈代谢不可缺少的酶类。在其他昆虫中,酪氨酸羟化酶参与了黑色素的合成,并在昆虫外骨骼的硬化过程中发挥关键作用。为了研究家蚕Bombyxmori酪氨酸羟化酶基因的生理生化功能,本文对其基因结构、表达特征及功能进行了研究。基于家蚕基因组和基因芯片数据的生物信息学分析表明,BmTh位于家蚕1号染色体上,含有8个外显子,编码561个氨基酸。基因芯片数据显示在家蚕5龄第3天的头部和体壁组织中的表达量较高,RT-PCR验证结果与此一致。利用石蜡组织切片材料和RNA探针对BmTh进行表达定位,原位杂交结果显示在家蚕头部边缘和体壁上有明显的杂交信号。在幼虫发育至熟蚕时注射酪氨酸羟化酶抑制剂3-indole-L-tyrosine(3-IT),20mmol/L的浓度对幼虫几乎没有影响,50mmol/L的浓度导致幼虫变态不完全和化蛹困难,100mmol/L的浓度使幼虫致死且体色变黑。结果提示,BmTh对家蚕变态发育起重要作用,是家蚕正常发育不可缺少的关键基因。

电针对震颤麻痹大鼠中脑黑质和肾上腺髓质酪氨酸羟化酶的影响──免疫荧光组化方法

我们以前的实验证明电针“阳陵泉”和“舞蹈震颤区”等穴，可使震颤麻痹大鼠的旋转次数明显少于对照组。本研究旨在通过免疫荧光组化方法显示电针对动物模型中脑黑质及肾上腺髓质酪氨酸羟化酶（TH）的影响。结果表明：在健侧黑质内可见有TH阳性细胞，电针组的TH阳性细胞数明显多于对照组，而且荧光亮度也比对照组强。在6-羟多巴胺毁损侧的黑质区内，仅在电针组见到个别TH阳性细胞及纤维。双侧肾上腺髓质内均有TH阳性细胞反应，电针组的荧光反应强于对照组，结果提示电针可能使TH活性增强。

虫酰肼对甜菜夜蛾多巴脱羧酶和酪氨酸羟化酶的抑制作用

虫酰肼模拟昆虫蜕皮激素的作用干扰新表皮的形成。为了探讨虫酰肼对昆虫新表皮形成的影响是否与抑制表皮形成相关酶的活性有关,本研究应用高效液相色谱-荧光检测法(HPLC-RP),测定了甜菜夜蛾Spodopteraexigua5龄幼虫用虫酰肼处理不同时间(24,48和72h)后多巴脱羧酶和酪氨酸羟化酶的活性。结果表明:用LC11(28.41μmol/L)和LC33(85.23μmol/L)两个亚致死剂量的虫酰肼处理5龄幼虫后,多巴脱羧酶和酪氨酸羟化酶的活性均受到明显抑制,高浓度的抑制作用大于低浓度的抑制作用。随着处理时间的延长,同一剂量的抑制作用逐渐增强。进一步测定虫酰肼处理24,48和72h后5龄幼虫血淋巴、脂肪体、中肠、表皮和头部的多巴脱羧酶和酪氨酸羟化酶的活性,可看出虫酰肼对幼虫不同组织的多巴脱羧酶和酪氨酸羟化酶的活性也具有相似的抑制作用。结果提示,虫酰肼对甜菜夜蛾幼虫多巴脱羧酶和酪氨酸羟化酶活性具有明显抑制作用,幼虫新表皮形成受阻可能与虫酰肼抑制多巴脱羧酶和酪氨酸羟化酶的活性有关。

精神分裂症致炎性细胞因子、酪氨酸羟化酶基因表达水平与临床症状的关系

目的检测精神分裂症患者致炎性细胞因子(白介素-1β、肿瘤坏死因子-α)和酪氨酸羟化酶(TH)的基因表达水平,探讨其与临床症状的关系。方法采用送转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和半定量技术,分别检测39例精神分裂症患者,25例同胞对照和30例正常对照外周血单个核细胞IL-1β、TNF-α和TH的基因表达水平,同时应用PANSS量表评定精神分裂症患者临床症状。结果IL-1β在病例组、同胞对照组和正常对照组的基因表达水平分别为1.52±1.01、1.18±0.99和0.55±0.33;TNF-α在三组样本的基因表达水平分别为1.52±1.09、1.01±0.87和0.61±0.32;TH在三组样本的基因表达水平分别为0.74±0.38、0.70±0.29和0.28±0.20。其中病例组与同胞对照组IL-1β、TNF-α、TH基因表达水平无显著差异(P>0.05);病例组和同胞对照组的IL-1β、TNF-α、TH基因表达水平均显著高于正常对照组(P<0.05或P<0.01)。同时发现IL-1β(r=0.420)、TNF-α(r=0.430)基因表达水平与PANSS量表的一般病理症状分显著相关(P<0.01)。结论精神分裂症患者存在多巴胺功能亢进和致炎性细胞因子的过度表达,且可能受遗传背景影响。致炎性细胞因子可能参与精神分裂症一般病理症状的形成。

美多巴和中药合用对帕金森病大鼠酪氨酸羟化酶(TH)及TH mRNA的影响

目的探讨中西药合用治疗帕金森病(PD)的作用机制。方法采用6-羟基多巴胺(6-OHDA)注射于脑右侧黑质造成偏侧PD模型,并采用中西药物(含美多巴135mg/Kg、中药为3.006g/ml)治疗,同时设立正常对照组、假手术组。用免疫组化和RT-PCR的方法观察对酪氨酸羟化酶(TH)阳性细胞及THmRNA表达的影响。结果中西药合用可以升高TH的含量,提高TH的活力,阻止或缓解6-OHDA对黑质及纹状体的损毁作用;THmRNA的表达亦明显增加,且与TH的变化趋势是一致的。结论中西药合用对TH含量的升高作用可能是通过影响TH mRNA而产生的。

去肾交感神经术对自发性高血压大鼠肾胺酶及酪氨酸羟化酶的影响

目的:通过观察自发性高血压大鼠(SHR)去肾交感神经手术前后血压、肾胺酶浓度、肾脏酪氨酸羟化酶(TH)与肾胺酶表达水平的变化,探讨去肾交感神经术降低血压的可能机制。方法:将SHR大鼠(n=48)随机分为基线组、手术组、假手术组和对照组,同批同周龄WKY大鼠(n=12)作为基线对照组,同条件喂养至12周龄测各组血压,首批处死SHR基线组、WKY组,采血、取肾脏组织送检;手术组、假手术组与对照组继续监测血压,于去肾交感神经术后1,6周时分批处死每组大鼠各6只,分别采血、取肾脏组织送检。采用ELISA方法测定血浆肾胺酶浓度,Western印迹测定肾脏TH、肾胺酶蛋白表达水平。结果:与WKY组大鼠比较,SHR基线组大鼠血压、肾脏TH蛋白表达水平明显升高(P<0.05),血浆肾胺酶浓度及蛋白表达水平明显下降(P<0.05);术后1周,手术组大鼠平均动脉压与TH蛋白表达水平较基线组明显降低且明显低于假手术组及对照组(P<0.05),手术组肾胺酶水平较基线组明显增高并明显高于假手术组及对照组(P<0.05);术后6周,手术组平均动脉压与TH水平较术后1周上升而肾胺酶浓度及水平较术后1周降低,较基线组、假手术组与对照组差异无统计学意义(P>0.05);假手术组与对照组较基线组各项指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论:去肾交感神经术降低血压的作用可能与其抑制交感神经,升高肾胺酶浓度及其蛋白表达水平有关。

人脂肪组织来源的酪氨酸羟化酶、胆碱乙酰转移酶、谷氨酸脱羧酶的表达

目的:探讨人脂肪组织来源的基质细胞(ADSCs)分化为神经细胞的神经递质关键酶TH、CHAT、GAD的表达情况。方法:分离培养人ADSCs,采用神经诱导培养基(NIM)进行诱导培养,倒置相差显微镜下连续观察细胞生长情况和形态变化,免疫组化法和免疫荧光技术检测神经递质多巴胺(DA)、乙酰胆碱(Ach)和!-氨基丁酸(GABA)合成过程中的关键酶——酪氨酸羟化酶(TH)、胆碱乙酰转移酶(CHAT)和谷氨酸脱羧酶(GAD)的表达情况。结果:①经NIM诱导后,ADSCs可分化为神经细胞。诱导分化后,1h、5h未见TH、CHAT和GAD阳性表达。1d、5d出现TH、CHAT和GAD阳性表达。②免疫荧光单标结果:诱导后的细胞内有TH、CHAT和GAD表达。免疫荧光双标结果:GAD与TH、CHAT与TH可同时表达于同一个诱导后的细胞内。结论:ADSCs可分化为神经细胞,分化后的神经细胞具有合成神经递质DA、Ach和GABA的功能。

Forskolin上调MN9D细胞Nurr1的表达及Nurr1过表达对酪氨酸羟化酶的影响

目的寻找能激活MN9D细胞内源性孤儿核受体(Nurrl)表达的信号分子,研究Nurrl表达增高对酪氨酸羟化酶(TH)表达的影响,探讨激活Nurrl表达的信号机制。方法用蛋白激酶A激动剂Forskolin或蛋白激酶C激动剂PMA作用于MN9D细胞,用免疫荧光细胞化学及Westernblot方法检测MN9D细胞内源性Nurrl表达的变化,以及Nurrl表达增加对TH表达的影响。利用PKA信号转导通路的特异性抑制剂H89探讨激活Nurrl表达的信号机制。结果1·从加入Forskolin1h起,直至6h,MN9D细胞Nurrl表达比未加Forskolin组明显增加(P<0·05);Forskolin主要增加MN9D细胞核内Nurrl含量,而细胞浆内Nurrl含量变化不明显;Forskolin作用后MN9D细胞TH表达无明显变化。2·用蛋白激酶A的特异性抑制剂H89预处理后,Forskolin仍具有增加Nurrl表达的作用。结论Forskolin可增加MN9D细胞内源性Nurrl表达及核转位,单纯Nurrl表达及核转位增加不影响MN9D细胞TH的表达,TH表达的激活可能还需要其他特殊的细胞(或神经元)环境或共激活因子的共同作用。Forskolin增加MN9D细胞内源性Nurrl表达及核转位的作用不是主要通过激活PKA信号转导通路完成的。

酪氨酸羟化酶与帕金森病的关系研究

酪氨酸羟化酶(Tyrosine hydroxylase, TH)是多巴胺(Dopamine,DA)生物合成途径的关键酶,帕金森病(Parkinson's disease, PD)是由于黑质纹状体DA严重不足导致的一种神经变性疾病.研究了TH主导的DA代谢调节与PD发生的相互关系,TH结构、DA代谢的调节以及TH在PD发生发展和治疗中的作用.

小鼠酪氨酸羟化酶启动子克隆

为了克隆小鼠酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)启动子,并对其特异性调控能力进行研究,本实验采用重叠延伸PCR高保真扩增出小鼠TH启动子片段,测序正确后,重组构建质粒,并用TH启动子调控EGFP基因的表达。然后分别转染MN-9D细胞(TH+)和ECV细胞(TH-),观察EGFP基因在细胞内表达情况。结果显示:扩增出小鼠TH启动子序列与GenBank报道一致;单酶切和质粒PCR鉴定证实小鼠TH启动子和EGFP基因已经克隆入重组质粒中;小鼠TH启动子能调控EGFP在MN-9D细胞中表达,不能调控EGFP在ECV细胞内表达。初步确定克隆的小鼠TH启动子具有特异性调控目的基因表达的能力。

酪氨酸羟化酶重组腺病毒在293细胞中的表达及体外活性测定

目的构建一种能够携带酪氨酸羟化酶(TH)进入帕金森氏病动物模型体内的重组腺病毒,该病毒能够使TH基因转录并且能够翻译成具有活性的功能蛋白。方法将TH基因插入穿梭质粒,重组穿梭质粒与腺病毒基因组在BJ-5183中进行同源重组,将重组成功的腺病毒基因组转染293细胞,使其在293细胞中包装出重组腺病毒,RT-PCR和免疫荧光检测目的基因的转录和表达。利用毛细管电泳法检测L-DOPA的生成。结果成功构建能够表达TH基因的重组腺病毒,RT-PCR能够扩增目的插入片段,毛细管电泳能够检测到L-DOPA的生成。结论该重组腺病毒能够在体外很好地表达具有活性的酪氨酸羟化酶,为利用该基因对帕金森氏病动物模型进行基因治疗打下基础。

参附注射液联合左旋多巴对帕金森病小鼠黑质组织形态及酪氨酸羟化酶水平的影响

目的研究参附注射液联合左旋多巴对帕金森病小鼠黑质组织形态及酪氨酸羟化酶水平的影响。方法 1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)腹腔注射制备帕金森病小鼠模型,分别给予左旋多巴、参附注射液、参附注射液+左旋多巴14 d后,检测小鼠神经行为学,ELISA法检测血液及脑组织中酪氨酸羟化酶(TH)水平,HE染色观察脑组织黑质区神经元,免疫组化染色、Western blot法检测脑组织黑质区TH蛋白表达。结果参附注射液可显著缩短爬杆时间,增加悬挂能力评分,提高TH水平及蛋白表达(P<0.05,P<0.01),联合左旋多巴应用时上述指标改善更明显(P<0.05,P<0.01)。结论参附注射液对帕金森病小鼠有神经保护作用,联合左旋多巴时效果更强。

清醒自由活动大鼠脑酪氨酸羟化酶活性的测定

目的 :建立清醒自由活动大鼠脑内酪氨酸羟化酶 (TH)活性的测定方法。方法 :应用脑微透析技术收集经 6 羟基多巴胺 (6 OHDA)预处理的大鼠 ,在L 芳香族氨基酸脱羧酶抑制剂 3 羟苄肼·盐酸 (NSD10 15 )灌流下 ,脑纹状体细胞外的透析液 ;用高效液相色谱 电化学检测方法测定透析液内多巴 (DOPA)水平 ,来反映脑内TH的活性。并观察TH抑制剂以及多巴胺受体的抑制剂和激动剂对其的影响。结果 :预先用 6 OHDA处理导致大鼠纹状体透析液内DOPA缺失 ,用NSD10 15阻断DOPA向多巴胺 (DA)转化 ,可测得DOPA的水平 ,且DA的代谢产物 3,4 二羟基苯乙酸水平逐步下降。但在TH抑制剂α 甲基 ρ 酪氨酸作用下DOPA又可消失 ,说明测定的DOPA是来自多巴胺神经末梢。另外 ,腹腔内给予多巴胺受体激动剂盐酸阿朴吗啡后 ,脑透析液中DOPA水平减少 ;而给予多巴胺受体抑制剂氟哌啶醇后 ,微透析液中DOPA水平增加。本研究测得在 0 .0 1mmol·L-1NSD10 15灌流下 ,经 6 OHDA预处理的 ,插入探针 2 4hSD大鼠纹状体中DOPA水平为 (0 .39± 0 .12 ) pmol·min-1(x±s,n =5 )。结论 :在脱羧酶抑制剂NSD 10 15灌流期间 ,测得预先用 6 OHDA处理大鼠纹状体透析液中DOPA水平可以认为是脑组织TH活性的指数 ,经工具药验证 。

精神分裂症IL-1β、TNF-α和酪氨酸羟化酶的基因表达水平

目的:检测精神分裂症患者IL-1β、TNF-α和酪氨酸羟化酶(TH)的基因表达水平,探讨精神分裂症的外周神经免疫机制。方法:采用RT-PCR和半定量技术,分别检测39例精神分裂症患者、25例同胞对照和30例正常对照外周血单个核细胞IL-1β、TNF-α和TH的基因表达水平。结果:研究显示IL-1β在病例组、同胞对照组和正常对照组的基因表达水平分别为1·52±1·01、1·18±0·99和0·55±0·33;TNF-α在三组样本的基因表达水平分别为1·52±1·09、1·01±0·87和0·61±0·32;TH在三组样本的基因表达水平分别为0·74±0·38、0·70±0·29和0·28±0·20。其中病例组与同胞对照组IL-1β、TNF-α、TH基因表达水平无显著差异(P>0·05);病例组和同胞对照组的IL-1β、TNF-α、TH基因表达水平均显著高于正常对照组(P<0·05或P<0·01),且对照组IL-1β和TNF-α基因表达水平显著相关(r=0·847,P<0·01);IL-1β和TH基因表达水平显著相关(r=0·666,P<0·01)。病例组只有IL-1β和TNF-α基因表达水平表现为显著相关(r=0·942,P<0·01)。结论:精神分裂症患者可能存在致炎性细胞因子和儿茶酚胺类神经递质的过度表达,且可能受遗传背景影响。儿茶酚胺类神经递质和致炎性细胞因子的基因表达之间可能具有一种交互机制,而精神分裂症患者的这种交互机制发生了紊乱。