基于胱胺/壳聚糖/酶标纳米金自组装的的酪氨酶传感器的研制

通过自组装技术构制了一种简单有效的酪氨酸酶传感器。该法先通过戊二醛交联将壳聚糖固定在胱胺修饰的金丝电极上,进而通过氨基与纳米金的强力相互作用将酶标纳米金固定在壳聚糖层上。结果表明,酪氨酸酶能很好地保持其生物活性,所构制的传感器达到95%稳定状态电极的时间在15s以内。酚类化合物是通过酶催化产生的醌在-100mV(相对饱和甘汞电极)直接还原而测定的,传感器对邻苯二酚、苯酚、对甲基苯酚测定的灵敏度依次为2.216,4.828,4.885μA·μmol-1L.cm-2,检测限依次为0.32,0.60,0.18μmolL-1。二周后活性仍保持原有活性的75%。

三七复方提取液对酪氨酶抑制率作用的研究

本文测定5种按照一定的比列混合中药液对酪氨酸酶活性的抑制作用.用70%的乙醇水溶液回流提取三七,60%的乙醇水溶液回流提取苦参,蒸馏水回流提取白芨、白蔹,80%的乙醇水溶液回流提取白术,然后分别将每种提取液浓缩至膏状.用水将10mg的膏状物稀释为1mg/ml,采用紫外分光光度法在475nm波长下,对三七、白术、白及、白蔹、苦参5种药材混合液吸光度的测定,计算其对酪氨酸酶的抑制率,为三七化妆品的研究及开发提供参考价值.结果表明三七70%酒精的初提取物、白术80%酒精的初提取物、白芨水初提取物、白蔹水初提取物、苦参60%初提物混合液对酪氨酸酶具有抑制率作用.

鞣花酸抑制酪氨酸酶的动力学、荧光光谱分析及分子对接

以蘑菇酪氨酸酶为靶点,采用抑制动力学、荧光光谱分析结合分子对接模拟技术,系统研究鞣花酸(ellagic acid,EA)对酪氨酸酶的抑制作用及机理。体外研究与动力学结果表明,EA以可逆的混合型抑制方式显著抑制酪氨酸酶活性(IC_(50)=0.05mg/mL),其结合常数K_(I)<K_(IS),表明EA与游离酶的结合比与酶-底物复合物的结合更紧密。荧光光谱猝灭分析表明,EA与酪氨酸酶存在静态猝灭作用,两者通过自发的吸热过程结合生成复合物,主要作用力为疏水作用力,只有1个或1类结合位点。同步和三维荧光光谱分析表明,EA使酪氨酸酶的微环境极性增大,疏水能力减弱,酪氨酸酶的Trp残基更靠近结合位点。分子对接模拟分析进一步印证上述实验结果,形象地表明EA对酪氨酸酶为混合型抑制,EA主要通过疏水作用力和氢键与游离酶或酶-底物复合物进行结合,最终导致酶活性降低。本研究对EA在食品工业中作为保鲜剂的各种应用具有一定参考意义。

枹丝锥叶中多酚类成分的分离及其酪氨酸酶抑制活性研究

采用Chromatorex C18、Toyopearl HW-40F、Sephadex LH-20等柱层析法对枹丝锥叶80%甲醇提取物进行分离纯化,根据NMR数据及与文献对照确定化合物结构,考察了分离得到的主成分的酪氨酸酶抑制活性。从枹丝锥叶中分离鉴定得到18个化合物,其中酚酸类化合物9个,鞣花单宁类3个,黄酮类化合物6个,分别鉴定为原儿茶酸(1)、没食子酸(2)、顺式对羟基肉桂酸(3)、反式对羟基肉桂酸(4)、3-O-没食子酰基莽草酸(5)、4,5-二-O-没食子酰基奎宁酸(6)、1,3,5-三-O-没食子酰基奎宁酸(7)、3,4,5-三-O-没食子酰基奎宁酸(8)、1,3,4,5-四-O-没食子酰基奎宁酸(9)、2,3-O-(S)-六羟基二苯酰基-β-D-吡喃葡萄糖(10)、punicacortein A(11)、pterocarinin A(12)、槲皮素(13)、杨梅素-7-O-β-D-吡喃半乳糖苷(14)、山奈酚-3-O-β-D-吡喃木糖基(1→2)-β-D-吡喃半乳糖苷(15)、杨梅素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(16)、杨梅素-3-O-(6″-没食子酰基)-β-D-吡喃半乳糖苷(17)、杨梅素-3-O-(2″-没食子酰基)-β-D-吡喃半乳糖苷(18),所有化合物均为首次从枹丝锥中分离得到。化合物2、8、12、13对酪氨酸酶具有一定的抑制活性,其中化合物13对酪氨酸酶的抑制效果最好,半数抑制质量浓度(IC_(50))值为(0.420±0.08)g/L,优于阳性对照曲酸(IC_(50)值0.099 g/L±0.01 g/L)。

琯溪蜜柚疏果黄酮酶法辅助提取工艺优化及其抑制酪氨酸酶活性

本论文旨在探讨β-葡萄糖苷酶法辅助提取琯溪蜜柚疏果黄酮的工艺及提取得到的黄酮对酪氨酸酶抑制作用。以总黄酮提取量为指标,采用单因素实验及响应面试验对β-葡萄糖苷酶酶活力、酶解pH、温度及时间进行优化,并研究总黄酮提取物对酪氨酸酶的抑制作用。结果表明,通过单因素实验和响应面试验优化得到琯溪蜜柚疏果黄酮提取的最优条件是:β-葡萄糖苷酶酶活力0.0128 U/mL、酶解pH4.4、酶解温度35℃、酶解时间4.8 h,在该工艺条件下疏果总黄酮提取量为34.0 mg/g;该黄酮提取物对酪氨酸酶的半抑制浓度(IC50)为0.31 mg/mL。本研究结果说明酶法工艺可显著提高琯溪蜜柚疏果黄酮的提取量,且琯溪蜜柚疏果黄酮具有较强的酪氨酸酶抑制作用,研究结果为琯溪蜜柚疏果黄酮提取及应用提供了参考依据,有利于促进琯溪蜜柚的高值化利用。

高温处理对补骨脂浸膏中酪氨酸酶活性成分的影响

采用高效液相色谱法同时测定高温处理后补骨脂中补骨脂素、异补骨脂素、新补骨脂素异黄酮、补骨脂二氢黄酮用甲醚、大豆苷元、补骨脂甲素和补骨脂乙素等七种成分的含量变化,及采用体外酪氨酸酶多巴速率氧化微量法测定七种成分的酪氨酸酶活性,评价高温处理对补骨脂中酪氨酸酶活性成分的影响.结果显示,与高温处理前相比,高温处理后补骨脂中7种成分的含量发生了变化;在补骨脂注射液100℃30 min条件下,除大豆苷元的含量最高外,其他6种成分的含量均不是最高,但是补骨脂素和异补骨脂素的含量下降最多;补骨脂素和异补骨脂素在浓度较低时对酪氨酸酶具有抑制作用,其他5种成分对酪氨酸酶均有不同程度的激活作用.可见,高温处理对补骨脂中酪氨酸酶活性成分具有一定的影响,该研究可为补骨脂的进一步研究提供参考与依据.

铜藻多酚的提取工艺及其稳定性和抑制酪氨酸酶活性

对铜藻多酚提取工艺、稳定性及其对酪氨酸酶活性的抑制作用进行研究。以新鲜铜藻为原料提取铜藻多酚,以铜藻多酚提取率为指标,考察乙醇体积分数、提取时间、液料比对铜藻多酚提取率的影响,并根据Box-Behnken试验设计对铜藻多酚的提取条件进行优化,得到铜藻多酚的最佳提取条件:乙醇体积分数40%、超声时间53 min、液料比为60∶1(mL/g),在该条件下所制备的铜藻多酚具有较高的热和光照稳定性。以左旋酪氨酸和左旋多巴为底物,铜藻多酚浓度为700μg/mL时,对酪氨酸酶活性的抑制率分别为92.68%和39.18%。

川芎、益母草有效成分配伍对酪氨酸酶活性、黑色素生成的抑制效应研究

目的:探索川芎与益母草有效成分配伍对酪氨酸酶活性和黑色素生成的影响。方法:采用左旋多巴氧化法测定川芎水煎液和益母草水煎以及川芎总生物碱和益母草总生物碱不同质量配比对酪氨酸酶活性的抑制作用,筛选出最佳组合进行后续实验。MTT法检测所筛选出的组合对B16细胞存活率的影响。随后实验分为细胞对照组、α-MSH诱导模型组和模型+所筛选出的最佳组合(50、100、200μg·mL^(-1))、模型+阳性组(曲酸,100μg·mL^(-1))。NaOH裂解法和多巴氧化法检测细胞内黑色素含量和酪氨酸酶活性。结果:通过筛选得出川芎总生物碱和益母草总生物碱质量比为1:2的组合效果最佳。药物配伍25、50、100、200、250μg·mL^(-1)对B16细胞无明显抑制作用。与空白组相比,模型组B16细胞中酪氨酸酶活性、黑色素水平增高(P<0.05,P<0.01),各剂量药物干预后,小鼠黑色素瘤细胞B16中酪氨酸酶活性、黑色素水平降低(P<0.05,P<0.01)。结论:川芎总生物碱和益母草总生物碱质量比为1:2的组合对酪氨酸酶抑制效果最佳,且能显著抑制B16细胞内酪氨酸酶活性和黑色素的生成。

西番莲果皮中一个具有抑制酪氨酸酶活性的新木脂素类化合物

本文研究西番莲(Passiflora edulis Sims)果皮化学成分及其抑制酪氨酸酶活性。采用半制备液相色谱法对西番莲果皮乙醇提取物进行了分离纯化,结合波谱数据和文献报道鉴定其化合物结构。利用酪氨酸酶试剂盒检测酪氨酸酶抑制活性,采用Autodock Vina及Gromacs软件实现化合物与酪氨酸酶蛋白的分子对接。最终从西番莲果皮中分离鉴定3个化合物,分别为肌醇木脂素(1)、松柏苷(2)和紫丁香苷(3),其中化合物1为新的新木脂素类化合物。3个化合物对酪氨酸酶抑制率分别为(27.27±0.79)%、(1.35±0.44)%和(17.04±0.86)%,与酪氨酸酶蛋白的结合能分别为-8.3、-6.9、和-6.7 kcal/mol,表明肌醇木脂素具有良好酪氨酸酶抑制活性,与酪氨酸酶蛋白结合作用强,且分子动力学模拟结果表明肌醇木脂素配体-酪氨酸酶复合物结合作用稳定,且具有潜在的酪氨酸酶抑制活性。

曲酸三氮唑氨基硫脲席夫碱的合成及抑制酪氨酸酶活性研究

本研究基于蘑菇酪氨酸酶晶体结构特点,设计并合成了11个曲酸三氮唑氨基硫脲席夫碱衍生物。抑制酪氨酸酶活性研究发现,所有化合物均能一定程度抑制酪氨酸酶活性,其中化合物7j抑制效果最好,其IC_(50)为1.584μM,优于阳性对照曲酸(IC_(50)为22.230μM);作用机制研究表明,该化合物为混合型抑制剂,不仅能与游离酶结合,还能与酶-底物复合物相结合,其K_(I)和K_(IS)分别为0.059 3μM和0.100 6μM;进一步的荧光猝灭和实际抗褐变结果表明该化合物不仅对酪氨酸酶有很好的动态猝灭作用,其实际抗褐变效果也优于曲酸和抗坏血酸;上述研究结果为开发安全、高效的酪氨酸酶抑制剂提供了理论依据。

侧柏叶有效成分提取及酪氨酸酶活性影响评价

目的:研究侧柏叶有效成分总黄酮的最佳提取工艺,并评价有效提取成分对酪氨酸酶活性的影响。方法:采用单因素试验、正交试验考察了提取过程中各因素对侧柏叶总黄酮含量的影响;采用蘑菇酪氨酸酶多巴速率氧化法考察提取成分对酪氨酸酶活性的影响。结果:本实验确定最优的提取工艺为90%乙醇作为提取液,按照1∶15的料液比(g∶mL),以70℃的超声温度进行提取,超声时间为60 min,此条件下总黄酮提取量为1.394 mg/g。0.5 g/mL乙酸乙酯提取物的激活率最小,为-211.68%±2.42%;0.5 g/mL石油醚提取物的激活率最大,为20.30%±1.32%。结论:本研究确定了侧柏叶有效成分提取的最佳工艺,经过对有效成分活性测试可知,乙醇粗提取物和乙酸乙酯提取物对酪氨酸酶的活性有抑制作用且随着浓度升高而升高,石油醚提取物低浓度有抑制作用,高浓度有激活作用。

制首乌不同配伍方式对黑色素及酪氨酸酶活性的影响

目的观察制首乌不同配伍方式的水提物对黑色素上调率及酪氨酸酶活性的影响,优选制首乌“乌须发”最佳的配伍方式。方法分别采用蘑菇酪氨酸酶NaOH裂解法及多巴胺速率氧化法研究制首乌不同配伍方式对黑色素生物合成及酪氨酸酶活性的影响。结果制首乌不同配伍方式均具有黑色素上调的作用,整体表现为制首乌-黑芝麻>制首乌-侧柏叶>制首乌-桑椹>制首乌-女贞子,且在一定范围内呈一定的剂量依赖性;制首乌不同配伍方式对酪氨酸酶的激活率均不同,其中制首乌-侧柏叶和制首乌-桑椹对酪氨酸酶具有抑制作用,但是随着浓度的增加,抑制作用逐渐减弱;制首乌-黑芝麻和制首乌-女贞子对酪氨酸酶具有激活作用,制首乌-黑芝麻较制首乌-女贞子激活作用明显。结论制首乌-黑芝麻为制首乌“乌须发”的最佳配伍,制首乌-黑芝麻配伍能够激活酪氨酸酶的活性,上调黑色素含量。

曲酸提取工艺优化及其对酪氨酸酶抑制作用的分子机制

目的:开发新型、高效、安全、精准的酪氨酸酶抑制剂。方法:采用正交试验对曲酸提取工艺条件进行优化,通过酶动力学研究曲酸对酪氨酸酶的抑制作用,并借助分子对接技术分析其与不同来源酪氨酸酶的作用机理。结果:曲酸提取最优工艺条件为活性炭用量5%,脱色温度75℃,pH 2.0,脱色时间50 min,此时曲酸纯度为97.85%;曲酸对酪氨酸酶单酚酶及双酚酶的IC50分别为13.33,53.32μg/mL;曲酸与蘑菇、小鼠、猩猩及人酪氨酸酶的XP对接得分分别为-7.515,-5.011,-5.537,-3.638,MM-GBSA结果分别为94.47,-110.80,-1.17,6.45 kJ/mol。结论:最优工艺条件下可显著提高曲酸的纯度,曲酸对酪氨酸酶为竞争性抑制作用,不同来源酪氨酸酶与曲酸结合形成不同类型的非共价键,即抑制剂与不同种类酪氨酸的结合稳定性存在差异。

百合主要有效成分对小鼠B-16细胞黑色素含量、酪氨酸酶活性的影响

目的观察百合多糖与百合皂苷对小鼠B-16细胞中细胞活力、酪氨酸酶活性及黑色素含量的影响。方法选用同一传代小鼠B-16细胞并随机分为空白细胞组、空白对照组、熊果苷组、百合多糖组、百合皂苷组,共5组。空白细胞组加入180μL RPMI1640培养液;空白对照组加入180μL RPMI1640培养液和20μL高密度聚乙烯;熊果苷组、百合多糖组、百合皂苷组分别加入不同浓度(0.2、0.4、0.6、0.8 mg/mL)的熊果苷、百合多糖、百合皂苷,作用3 d后,用CCK-8法检测B-16细胞活力,用酪氨酸酶-多巴速率氧化法检测B-16细胞中酪氨酸酶的活性,以MTT法检测小鼠B-16细胞的黑色素含量。结果与空白细胞组比较,0.8 mg/mL熊果苷组细胞活力明显升高(P<0.01),0.4、0.6、0.8 mg/mL百合皂苷组细胞活力均明显降低(P<0.05,P<0.01);各浓度熊果苷、百合多糖组和0.6、0.8 mg/mL百合皂苷组酪氨酸酶活性均明显降低(P<0.01),0.2 mg/mL百合皂苷组酪氨酸酶活性明显升高(P<0.01)。与空白对照组比较,0.8 mg/mL熊果苷组细胞活力明显升高(P<0.01),0.6、0.8 mg/mL百合皂苷组细胞活力均明显降低(P<0.01);各浓度熊果苷、百合多糖组和0.6、0.8 mg/mL百合皂苷组酪氨酸酶活性均明显降低(P<0.01),0.2、0.4 mg/mL百合皂苷组酪氨酸酶活性均明显升高(P<0.01)。与0.2 mg/mL熊果苷组比较,0.8 mg/mL熊果苷组细胞活力、0.2 mg/mL百合皂苷组酪氨酸酶活性均明显升高(P<0.01)。与0.4 mg/mL熊果苷组比较,0.8 mg/mL熊果苷组细胞活力、0.4 mg/mL百合皂苷组酪氨酸酶活性均明显升高(P<0.01)。与0.6 mg/mL熊果苷组比较,0.6 mg/mL百合皂苷组酪氨酸酶活性均明显升高(P<0.01)。与0.4 mg/mL百合皂苷组比较,0.6、0.8 mg/mL百合皂苷组细胞活力均明显降低(P<0.05,P<0.01)。与0.6 mg/mL百合皂苷组比较,0.8 mg/mL百合皂苷组细胞活力明显降低(P<0.01)。在0.2、0.4 mg/mL浓度下,百合皂苷组酪氨酸酶活性均明显高于百合多糖组(P<0.01)。结论相较于百合皂苷、熊果苷,百合多糖能够在不影响小鼠B-16细胞活性的情况下,对B-16细胞内酪氨酸酶活性和黑色素含量起到抑制作用,推测百合多糖可能通过抑制细胞内酪氨酸酶的活性,进一步抑制黑色素的合成,达到美白的效果。

具有抑制酪氨酸酶活性乳酸菌的筛选及其成分分析

以抑制酪氨酸酶活性为筛选指标,对5株乳酸菌发酵上清液、菌体细胞和破碎提取物的酪氨酸酶抑制活性和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除率进行分析,结果表明,菌株发酵上清液抑制酪氨酸酶能力远高于菌体细胞和破碎提取物,其中MNJ-9菌株发酵上清液抑制酪氨酸酶能力可达68.9%。菌体细胞和破碎提取物仅为50.9%和34.8%。MNJ-9菌株发酵上清液对DPPH自由基清除能力可达93.1%。因此,对MNJ-9菌株进行16S rDNA菌种鉴定。基于液相色谱-质谱非靶向代谢组学对MNJ-9菌株发酵上清液进行主要成分分析。对其主要成分的10种化合物进行抑制率测定,结果表明,5-氨基戊酸抑制率最高。将5-氨基戊酸对小鼠黑色素瘤细胞(B16F10)进行细胞毒性实验、黑色素含量测定、细胞酪氨酸酶活性测定评价其美白能力。结果表明,5-氨基戊酸质量浓度为70μg/mL连续培养72 h时细胞存活率≥80%,细胞无明显毒性;质量浓度为10~70μg/mL时,细胞内黑色素含量和酪氨酸酶活性分别为85.4%~45.2%和76.53%~40.5%,说明5-氨基戊酸具有一定的美白能力。

酪氨酸酶、漆酶和谷氨酰胺转氨酶催化交联蛋白质的比较分析

蛋白质交联在食品加工、组织工程、酶工程和药物传递等领域具有广泛用途。以酪蛋白和牛血清白蛋白(BSA)为模式蛋白,考察酪氨酸酶、漆酶和谷氨酰胺转氨酶催化蛋白质交联的底物特异性及交联规律,揭示酶对底物蛋白质结构及反应条件的要求。采用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析酶催化蛋白质交联规律,激光粒度分布仪测量交联产物粒径。结果表明:酪氨酸酶、漆酶和谷氨酰胺转氨酶对底物的特异性有共同特征,即均可以催化结构松散的蛋白质分子(酪蛋白)交联,但不能催化结构紧密的蛋白质分子(BSA)交联;还原剂二硫苏糖醇(DTT)的加入能促进酶催化BSA交联反应;DTT对酪氨酸酶和谷氨酰胺转氨酶催化酪蛋白交联无影响,但抑制漆酶对酪蛋白的交联。

基于文献计量分析酪氨酸酶抑制剂研究现状与发展趋势

为深入了解我国酪氨酸酶抑制剂的研究现状及发展趋势,以中国知网(CNKI)数据库为文献来源,检索2002年-2022年与酪氨酸酶抑制剂研究有关的文献,利用数据库自带的可视化分析功能,对检索到的文献进行分析。结果表明:国内近20年酪氨酸酶抑制剂文献年发文量总体呈现上升的趋势。高校是研究酪氨酸酶抑制剂的主力。我国酪氨酸酶抑制剂研究的高频关键词为酪氨酸酶、抑制剂、酪氨酸酶抑制、酪氨酸酶抑制剂活性、化学成分等,而有关酪氨酸酶抑制剂生理功能作用机制的研究文献较少。本研究为酪氨酸酶抑制剂后续的研究方向提供科学依据,并为其在医学领域的应用提供有力的参考。

不同表面活性剂对酪氨酸酶活性的抑制性能测试

本文通过测定阴离子表面活性剂、阳离子表面活性剂和非离子表面活性剂作用下,黑色素细胞增殖抑制率、黑色素含量、酪氨酸酶活性、黑色素细胞生长率与黑色素合成抑制率,测试不同表面活性剂对酪氨酸酶活性的抑制性能。结果表明:3种表面活性剂对酪氨酸酶活性有很好的抑制作用,可降低黑色素含量,对黑色素细胞的生长有不同程度的抑制作用,黑色素细胞生长率降低,黑色素合成抑制率升高,浓度越高,抑制效果越好,吐温-80抑制效果最好,非离子表面活性剂对黑色素细胞的抑制作用最好。

不同蜂蜜抗氧化活性和抑制酪氨酸酶活性的比较

该研究采用分光光度法测定了10种蜂蜜中总酚酸和总黄酮的含量及对酪氨酸酶的活性抑制,采用1,1-二苯基苦基苯肼(DPPH)自由基清除法和铁离子还原(FRAP)法测定了其体外抗氧化活性。结果表明,10种蜂蜜总酚酸含量为116.46~2133.33 mg PCA/kg,总黄酮含量为8.31~120.81 mg QUE/kg,DPPH自由基清除IC50为16.25~674.22 mg/mL,铁离子还原FRAP值为0.50~7.39 mmol Fe^(2+)/kg,酪氨酸酶抑制IC50为9.15~350.26 mg/mL。荞麦蜜的DPPH自由基清除能力(IC50为16.25~45.83 mg/mL)、铁离子还原能力(3.21~7.39 mmol Fe^(2+)/kg)和酪氨酸酶活性抑制能力(IC50为9.15~14.16 mg/mL)显著高于其他几种蜂蜜(p<0.05)。蜂蜜抗氧化活性、酪氨酸酶抑制活性与蜂蜜中总酚酸、总黄酮含量显著相关(p<0.05)。该研究为蜂蜜功能性产品的开发提供了依据。

罗非鱼皮胶原肽的酪氨酸酶抑制活性与铜离子结合活性研究

为探明罗非鱼(Oreochromis)鱼皮胶原蛋白肽能否有效抑制黑色素的生成,采用酶解法制备出罗非鱼皮酪氨酸酶抑制肽(Tilapia skin tyrosinase inhibitory peptides,TSTIP),并开展其酪氨酸酶(Tyrosinase,TYR)抑制活性与铜离子(Cu^(2+))结合活性的相关性研究。结果显示,罗非鱼皮经碱性蛋白酶酶解4 h后的产物具有最高的TYR抑制活性和Cu^(2+)结合活性,且两者呈极显著正相关(R=0.856)。荧光光谱分析显示,TSTIP与TYR或Cu^(2+)结合后其内源荧光吸收强度的下降趋势一致,同时紫外吸收增强,且最大吸收波长发生红移。傅里叶变换红外光谱分析显示,TYR与Cu^(2+)主要通过羰基及氨基与TSTIP结合。圆二色谱分析显示,两种结合物中β-转角及无规则卷曲含量相对减少,β-折叠含量相对增多,该现象在TSTIP-Cu^(2+)结合物中更加明显。结果表明,TSTIP结合TYR产生的结构变化与结合Cu^(2+)相似,TSTIP可通过螯合TYR的活性中心Cu+2来抑制其活性。