J亚群禽白血病病毒囊膜蛋白胞浆区酪氨酸基序及其变体的表达

J亚群禽白血病病毒(ALV-J)囊膜蛋白Env被认为与其致病致瘤密切相关,然其分子基础尚不清楚。在Env胞浆区发现免疫及肿瘤疾病发生相关的酪氨酸基序(Yxx M、ITIM、类ITAM)基础上,研究对Gen Bank中不同ALV-J毒株Env进行了统计分析。结果发现,34.7%ALV-J毒株Env仅存在ITIM,63.9%ALV-J毒株Env同时具有ITIM以及Yxx M,1.4%ALV-J毒株Env具有Yxx M以及类ITAM。同时,还构建了JS-NT以及4817毒株Env相应酪氨酸变体表达质粒,并在DF1细胞中获得了良好的表达。这些发现及构建的表达质粒,为进一步研究ALV-J Env在ALV-J致病致瘤中的作用及其分子机理奠定了基础。

共抑制受体T细胞免疫球蛋白和免疫受体酪氨酸抑制基序结构域免疫抑制机制的研究进展

恶性肿瘤的发生、发展与免疫检查点受体有紧密联系,肿瘤细胞可以通过激活免疫检查点来逃避免疫监视。T细胞免疫球蛋白和免疫受体酪氨酸抑制基序结构域(TIGIT)是一种在免疫细胞上表达的抑制性受体。TIGIT可以通过多种机制抑制T细胞和天然杀伤(NK)细胞等免疫细胞的功能,使肿瘤细胞逃避免疫系统的监视,本文将对TIGIT的免疫抑制机制研究进展进行系统综述。

外周血CD3^(+)T细胞上程序性死亡因子-1 T细胞免疫球蛋白及免疫受体酪氨酸抑制基序在子宫内膜异位症中的表达和价值

目的探讨外周血CD3^(+)T细胞上程序性死亡因子-1(PD-1)、T细胞免疫球蛋白及免疫受体酪氨酸抑制基序(TIGIT)在子宫内膜异位症(EM)的表达和价值。方法采用前瞻性病例-对照研究,收集在复旦大学附属妇产科医院诊断为EM的患者(EM组)和相同年龄的子宫肌瘤者(对照组)的外周血。采用流式细胞术检测抗凝外周血中CD3^(+)T细胞上表面分子PD-1和TIGIT的百分含量,并比较在两组间的差异。结果两组患者的年龄、体质指数(BMI)及产次比较差异均无统计学意义(均P>0.05),子宫内膜异位症组研究对象有痛经症状的比例显著高于对照组(P<0.001)。EM患者外周血中CD3^(+)T细胞占淋巴细胞的比例为(65.73±12.10)%,与对照组组中CD3^(+)T细胞(64.98±7.22)%比较,差异无统计学意义(P>0.05)。PD-1^(+)CD3^(+)T细胞占CD3^(+)T细胞的比例在EM组中为(25.57±8.01)%,显著高于对照组中的(21.46±7.15)%,差异有统计学意义(P<0.05)。TIGIT^(+)CD3^(+)T细胞占CD3^(+)T细胞的比例在EM组中为(10.23±2.80)%,显著高于对照组中的(8.90±2.13)%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论PD-1和TIGT在EM患者外周CD3^(+)T细胞中表达异常升高,提示其与EM的发生可能相关。

新型免疫检查点抑制剂T细胞免疫球蛋白和免疫受体酪氨酸抑制性基序结构域在抗肿瘤免疫治疗中的研究进展

T细胞免疫球蛋白和免疫受体酪氨酸抑制性基序结构域[T-cell immunoglobulin and immunoreceptor tyrosinebased inhibitory motif(ITIM)domain,TIGIT]是新型T细胞或NK细胞抑制性受体,可通过与肿瘤细胞、被感染细胞表面的多种配体相结合,激活免疫细胞内部负性刺激信号,从而抑制细胞过度活化和促炎性细胞因子的过度分泌,在肿瘤、病毒感染以及多种自身免疫性疾病的免疫发病机制中发挥重要的调节功能。最近,TIGIT在癌症免疫治疗中受到了广泛关注,研究显示,TIGIT在癌症患者T细胞和NK细胞中表达升高,且与疾病进展和不良临床预后相关,研究者尝试通过阻断TIGIT与其配体的结合来增强T细胞或NK细胞的活性以进行治疗干预。目前已经有很多关于在不同小鼠肿瘤模型中使用抗TIGIT单抗治疗导致瘤体消退的相关报道,TIGIT有望成为下一代癌症免疫治疗的靶点,现在一些临床试验正在评估抗TIGIT单克隆抗体对不同类型癌症患者的疗效。最近,抗TIGIT单抗(tiragolumab)在与抗程序性死亡受体-配体1(programmed cell death ligand 1, PD-L1)药物联合治疗非小细胞肺癌时表现出显著临床疗效,然而TIGIT阻断治疗的具体作用机制还有待阐明。

免疫抑制受体LILRB4在肿瘤和炎症性疾病中的研究进展

白细胞免疫球蛋白样受体LILRB4(ILT3或CD85k)是免疫抑制受体家族成员,主要表达于髓系来源免疫细胞的细胞膜,在免疫调节中通过激活自身抑制基序(ITIM)或抑制Fc受体激活基序(ITAM)发挥免疫抑制作用。在肿瘤中,LILRB4受体被激活后产生免疫抑制性的肿瘤微环境协助肿瘤的侵袭和转移。在炎症疾病中,LILRB4在单核细胞、巨噬细胞、肥大细胞等多种细胞上表达并减轻炎症反应。目前LILRB4已成为肿瘤以及多种炎症性疾病的治疗靶点,针对急性髓细胞性白血病(AML)的抗LILRB4单克隆抗体已进入临床试验。本综述从LILRB4的结构分布、信号转导、治疗靶点、新药开发等几方面进行探讨。

双磷酸化His-PZR蛋白的表达与分离纯化

目的获得纯化的双磷酸化His-PZR蛋白。方法本试验采用His-PZR与C-Src重组原核表达载体共同转化E.coliBL21菌株的方法,通过IPTG诱导表达,Ni-NTA纯化及HPLC分离纯化等技术,获得双磷酸化的His-PZR蛋白。结果成功表达了His-PZR蛋白,约占全菌体蛋白的8.5%,相对分子质量约为10 000;并分离纯化出双磷酸化的His-PZR蛋白。结论双磷酸化His-PZR蛋白的表达和纯化,为进一步研究His-PZR与SHP蛋白间的作用机制及其在信号转导过程中的功能奠定了基础。

汉滩病毒G1蛋白胞质区ITAM样基序功能的研究

汉滩病毒（HTNV）的G1蛋白胞质区尾段包含保守的免疫受体酪氨酸活化基序（ITAM）样基序，该基序与许多重要的免疫受体胞质区ITAM基序同源性较高。为了研究HTNV的G1ITAM样基序的免疫信号转导功能，首先人工合成了一段保守的酪氨酸残基磷酸化的G1ITAM样基序多肽，应用体外蛋白激酶共沉淀实验，分别从Jur—kat细胞和Raji细胞裂解物中初筛到5～9种与该基序相互作用的磷酸化蛋白或激酶；然后通过突变体分析、体外磷酸化实验和体外激酶共沉淀-免疫印迹分析，进一步确证了G1ITAM样基序在体外可以与Src家族蛋白酪氨酸激酶（PTK）Lyn、Fyn及其下游Syk家族激酶Syk、ZAP-70相互作用，而这种相互作用依赖于该基序中两个高度保守的酪氨酸残基的存在。上述研究表明，HTNVG1蛋白胞质区包含一个高度保守的功能性ITAM样基序，该基序在体外可以与TCR和BCR信号转导中关键的PTK相互作用，为进一步探讨HTNVG1蛋白ITAM样基序在肾综合征出血热（HFRS）免疫信号传递中的作用奠定了基础。

汉滩病毒G1蛋白胞质区ITAM样基序与Syk细胞内相互作用

目的:研究汉滩病毒(HTNV)G1蛋白胞质区ITAM样基序与Syk的细胞内相互作用。方法:构建用于研究Syk和G1 ITAM样基序之间相互作用的哺乳动物细胞双杂交系统,验证G1 ITAM样基序与Syk之间是否存在细胞内相互作用。结果:哺乳动物细胞双杂交分析证实G1 ITAM样基序在哺乳动物细胞内可以与Syk相互作用;而突变体分析表明,这种相互作用依赖于该基序中两个高度保守的酪氨酸残基的存在。结论:HTNV G1蛋白胞质区高度保守ITAM样基序在体外和哺乳动物细胞内可以与Syk相互作用,为进一步探讨G1蛋白ITAM样基序在HFRS免疫信号传递中的作用及其与血管内皮损伤的关系奠定了基础。

用Gateway技术克隆并表达汉滩病毒G1蛋白ITAM样基序

目的:克隆并表达汉滩病毒(HTNV)囊膜糖蛋白(G1)胞质区尾段ITAM样基序及其突变体.方法:采用RT-PCR方法,扩增HTNVG1蛋白ITAM样基序及其中2个保守酪氨酸残基突变基序编码基因,应用Gateway技术将目的基因克隆至pDESTTM15表达载体,在BL21-AI中经L-阿拉伯糖诱导表达,免疫印迹确证融合蛋白的表达.结果:成功地构建了2个含汉滩病毒G1胞质区尾段ITAM样基序编码序列表达载体pDEST-ITAM-L,pDEST-ITAM和1个含保守酪氨酸残基突变的G1ITAM样基序编码序列表达载体pDEST-ITAM-YY-FF(Y615F,Y628F),并在大肠埃希杆菌中得到高效表达,免疫印迹证实目的蛋白与GST融合表达.结论:获得了3种与谷胱甘肽-S-转移酶(GST)融合的G1ITAM样基序及其突变基序的重组蛋白,为进一步探讨HTNVG1蛋白ITAM样基序在HFRS免疫信号传递中的作用奠定了基础.

复发性自然流产患者T细胞中T细胞免疫球蛋白和免疫受体酪氨酸抑制基序的表达

目的:探讨复发性自然流产(recurrent spontaneous abortion,RSA)患者T细胞中T细胞免疫球蛋白和免疫受体酪氨酸抑制基序(T cell immunoglobulin and immunoreceptor tyrosine-based inhibitory motif domain,TIGIT)的表达情况,为其可能作为治疗靶点提供理论依据。方法:采集21例正常早孕者及23例RSA患者的抗凝外周血,分别检测其CD3^+T细胞表面分子TIGIT的百分比及细胞因子IL-10和IFN-γ的表达情况。结果:RSA组患者TIGIT+细胞所占CD3^+T细胞的百分比为(41.52±7.17)%,高于早孕组中的该百分比[(36.09±4.03)%],差异有统计学意义(P<0.05);RSA组TIGIT+CD3^+T细胞中IL-10阳性细胞所占百分比分别为(11.68±5.90)%,低于早孕组TIGIT+CD3^+T细胞中IL-10阳性细胞所占百分比[(16.33±6.65)%],差异有统计学意义(P<0.05);而CD3^+T细胞中IFN-γ的表达在2组间差异无统计学意义。结论:负性共刺激分子TIGIT在RSA患者中异常表达,可能参与了母胎免疫的调控,与RSA的发生相关。

汉滩病毒G1蛋白胞质区ITAM样基序与Syk的体外相互作用

目的研究汉滩病毒（HTNV）G1蛋白胞质区ITAM样基序与Syk的体外相互作用。方法通过体外激酶共沉淀和免疫印迹分析，获取G1ITAM样基序在体外可以与Syk相互作用的证据。结果体外激酶共沉淀一免疫印迹分析证明，在体外HTNVG1 ITAM样基序可以与Syk相互作用。结论HTNVGI蛋白胞质区高度保守ITAM样基序在体外可以与Syk相互作用，为进一步探讨G1蛋白ITAM样基序在HFRS免疫信号传递中的作用及其与血管内皮损伤的关系奠定了基础。

复发性流产患者CD4^+T细胞及调节性T细胞上T细胞免疫球蛋白和免疫受体酪氨酸抑制基序的表达

目的探讨CD4^+T细胞及调节性T(Treg)细胞上T细胞免疫球蛋白和免疫受体酪氨酸抑制基序(T cell immunoglobulin and immunorecep tortyrosine-based inhibitory motif domain,TIGIT)与复发性流产(RSA)发病的关系。方法采用前瞻性病例-对照研究收集2017年7月—2018年8月期间在复旦大学附属妇产科医院的60例RSA患者(RSA组)和68例相同孕周正常早孕者(对照组)的外周血。采用流式细胞术检测抗凝外周血中CD4^+T细胞及Treg细胞上表面分子TIGIT的百分含量。结果CD4+T细胞在外周血中的比例组间比较差异无统计学意义,且TIGIT^+CD4^+T细胞的比例组间差异也无统计学意义(P>0.05);Treg细胞在RSA组外周血中的比例低于对照组(P=0.02);但RSA组TIGIT^+FoxP3^+CD4^+T细胞所占比例为56.41%±12.36%,高于对照组中的表达(47.82%±10.53%),差异有统计学意义(P=0.03)。结论TIGIT在RSA患者外周血Treg细胞上的表达异常升高,提示其与RSA的发生可能相关。

ITAM两步磷酸化基础上的TCR识别模型

将T细胞受体 (TCR)的活性与免疫酪氨酸受体激活基序 (ITAM)活性联系起来 ,深入考虑了TCR与其配体的亲和力和离解率 .结果表明抗原多肽上信号氨基酸部分的细小差别 ,将有效地引起截然不同的T细胞应答反应 .

共抑制受体T细胞免疫球蛋白和免疫受体酪氨酸抑制基序与自身免疫病

共抑制受体又称免疫检查点受体,在调节免疫应答、维持机体免疫稳态中发挥着重要的作用。以共抑制受体所在通路为治疗靶点的生物制剂已被研发并推广至临床应用。作为近年发现的新的共抑制受体之一,业有研究证实T细胞免疫球蛋白及免疫酪氨酸样抑制基序(TIGIT)的异常表达与肿瘤、感染等疾病的发生、发展密切相关。本综述拟对TIGIT的分子结构特点、作用机制及其在自身免疫病中的研究进展进行小结。

T细胞免疫球蛋白和免疫受体酪氨酸抑制性基序结构域介导的T细胞耗竭在慢性感染性疾病中的研究进展

肿瘤和慢性感染中存在着T细胞耗竭现象。耗竭T细胞是一群持续高表达抑制性受体而免疫效应功能和增殖能力降低的T细胞。阻断耗竭T细胞表面抑制性受体可一定程度逆转其耗竭程度,恢复部分免疫功能,为肿瘤和慢性感染的免疫治疗提供新思路。T细胞免疫球蛋白和免疫受体酪氨酸抑制性基序结构域(T-cell immunoglobulin and immunoreceptor tyrosine-based inhibitory motif domain,TIGIT)是近年新发现的抑制性受体,与配体结合后可通过多种机制对T细胞效应功能进行负性调控,与T细胞耗竭密切相关。本研究就TIGIT及其相关受体、配体的分布、功能,TIGIT介导T细胞免疫负性调控的作用机制,以及TIGIT在慢性感染性疾病中的研究进展进行综述。

子宫内膜癌组织中TMIGD2,TIGIT的表达及其与临床病理特征的相关性研究

目的 探究子宫内膜癌(endometrial cancinoma)组织中跨膜和免疫球蛋白结构域2(transmembrane and immunoglobulin domain containing 2,TMIGD2),T细胞免疫球蛋白和免疫受体酪氨酸抑制基序结构域(T cell immunoglobulin and immunoreceptor tyrosine-based inhibitory motif domain,TIGIT)的表达及其与临床病理特征的相关性。方法 选取2016年1月~2018年1月唐山市妇幼保健院诊治的160例子宫内膜癌患者为研究对象,收集患者术中切除的癌组织及癌旁正常组织。采用免疫组织化学法检测TMIGD2和TIGIT表达;对子宫内膜癌组织TMIGD2与TIGIT表达的相关性进行Spearman法分析;采用Kaplan-Meier法分析子宫内膜癌组织TMIGD2,TIGIT表达与患者预后的关系;影响子宫内膜癌患者预后的因素采用COX回归分析。结果 子宫内膜癌组织中TMIGD2和TIGIT高表达率分别为67.50%,72.50%,均高于癌旁正常组织的21.25%,17.50%,差异具有统计学意义(χ^(2)=69.327,97.778,均P<0.01)。子宫内膜癌组织中TMIGD2与TIGIT表达呈正相关(r=0.422,P<0.001);TMIGD2,TIGIT表达水平均与FIGO分期、淋巴结转移、肌层浸润程度有关(χ^(2)=6.565~20.323,均P<0.05);TMIGD2,TIGIT低表达组患者生存率分别为82.69%,86.36%,均高于高表达组的38.89%,40.52%,差异具有统计学意义(χ^(2)=27.045,26.925,均P<0.05)。COX回归分析发现FIGO分期高(HR=2.716,P=0.04)、TMIGD2高表达(HR=1.314,P=0.02)、TIGIT高表达(HR=4.303,P<0.01)是子宫内膜癌患者预后的危险因素。结论 子宫内膜癌组织中TMIGD2和TIGIT均高表达,均与临床病理特征及预后有密切联系。

靶向TIGIT肿瘤免疫治疗的研究进展

近年来,免疫疗法在肿瘤治疗领域取得了重大突破,通过阻断免疫细胞表达的抑制性受体与肿瘤细胞表达的抑制性配体的相互作用,刺激宿主自身免疫系统对肿瘤抗原的反应能力来增强抗肿瘤活性.这种肿瘤靶向疗法又称免疫检查点靶向治疗[1].该疗法是当前肿瘤治疗领域研究的热点,如靶向程序性死亡受体1(programmed cell death-1,PD-1)/程序性死亡配体1(programmed cell death-ligand 1,PD-L1)或细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(cytotoxic T lymphocyte-associated antigen-4,CTLA-4)在肿瘤免疫治疗中取得了显著的临床疗效,但整体应答率有限[2].

免疫抑制性受体TIGIT在慢性病毒感染中的作用研究进展

T淋巴细胞免疫球蛋白和免疫受体酪氨酸抑制性基序结构域(TIGIT)是近年来新发现的表达于活化的T淋巴细胞、NK细胞表面的免疫抑制性受体。TIGIT可通过与肿瘤细胞、病毒感染细胞表面的配体结合,激活免疫细胞内部负刺激信号,抑制免疫细胞活化、增殖以及产生细胞因子减少,导致病原体无法清除,从而发生肿瘤以及病毒感染慢性化。目前对于TIGIT介导病毒感染慢性化的具体作用机制尚未完全阐明,探讨TIGIT在慢性病毒感染中的作用有助于为慢性病毒感染的治疗提供参考。

约氏疟原虫感染小鼠肺组织TIGIT^(+)CD8^(+)T细胞数量增加但细胞因子分泌能力降低

目的研究含免疫球蛋白和免疫受体酪氨酸抑制基序结构域T细胞免疫受体(TIGIT)对疟原虫感染小鼠肺脏中CD8^(+)T细胞功能的影响。方法约氏疟原虫(Plasmodium yoelii)感染小鼠12 d后,分离肺脏,称体质量,拍照;消化后分离肺脏淋巴细胞,计数、染色,流式细胞术检测CD8^(+)、TIGIT^(+)CD8^(+)T细胞的含量;流式细胞术检测TIGIT^(+)CD8^(+)T细胞的L选择素(CD62L)、CD69、程序性死亡蛋白1(PD-1)、CD25和CX3C趋化因子受体1(CX3CR1)的表达情况;佛波酯(PMA)和离子霉素刺激后,检测TIGIT^(+)CD8^(+)T细胞分泌γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素21(IL-21)、IL-4、IL-17和IL-10的能力。结果疟原虫感染小鼠体质量减轻,肺脏变黑变暗,肺脏质量和占体质量比明显增加。与正常组小鼠相比,疟原虫感染后小鼠肺组织CD8^(+)T细胞和TIGIT^(+)CD8^(+)T细胞百分比和绝对数量显著升高。与正常小鼠TIGIT^(+)CD8^(+)T细胞相比,感染组TIGIT^(+)CD8^(+)T细胞中表达CD62L的细胞百分比显著降低,表达CD69、PD-1、CX3CR1的细胞百分比显著升高,感染组TIGIT^(+)CD8^(+)T细胞可分泌IL-21、IL-4、IL-17、IL-10的细胞百分比显著降低。结论疟原虫感染后,小鼠肺脏病变明显,TIGIT^(+)CD8^(+)T细胞数量增加,该细胞群表达多种活化相关分子,但分泌细胞因子的能力降低。

TIGIT在类风湿性关节炎患者外周血CD56^(+)T细胞的表达及作用

目的检测类风湿性关节炎(RA)患者外周血CD56^(+)T细胞的比例变化以及含免疫球蛋白和免疫受体酪氨酸抑制基序结构域的T细胞免疫受体(TIGIT)在CD56^(+)T细胞表面的表达,探讨TIGIT在RA中对CD56^(+)T细胞功能的影响。方法选取50例RA患者及20例健康人,采用流式细胞术检测外周血CD56^(+)T细胞的比例,并且分析CD56^(+)T细胞比例与疾病临床指标的相关性;流式细胞术检测RA患者外周血CD56^(+)T细胞表达TIGIT的水平;密度梯度离心法分离外周血单个核细胞并进行培养;流式细胞术检测RA患者外周血表达γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素17A(IL-17A)的CD56^(+)T细胞的比例;探究IFN-γ和IL-17A在TIGIT-CD56^(+)T细胞与TIGIT+CD56^(+)T细胞之间的表达差异;ELISA检测RA患者血清IL-17A的水平。结果与健康对照组相比,RA患者外周血CD56^(+)T细胞的比例降低,表达IL-17A的CD56^(+)T细胞的比例显著降低;RA患者血清中IL-17A的水平升高。RA患者的CD56^(+)T细胞高表达TIGIT分子,IFN-γ主要来源于TIGIT-CD56^(+)T细胞;表达IL-17A的TIGIT-CD56^(+)T细胞与TIGIT+CD56^(+)T细胞的比例无明显差异。结论TIGIT的异常表达影响CD56^(+)T细胞分泌因子的功能,进而参与RA疾病进程。并且IFN-γ主要来源于TIGIT-CD56^(+)T细胞,TIGIT可能不影响CD56^(+)T细胞的IL-17A分泌水平。