火菇素酪氨酸微区的研究

用紫外差光谱和荧光光谱技术对火菇素的酪氨酸微区进行了研究,结果表明火菇素表现典型的酪氨酸残基紫外275nm吸收峰,ε_(max)=20322L·mol^(-1)·cm^(-1),紫外差光谱滴定发现,当10.1<pH<12.5时,差光谱吸收△A_(294.4nm)与pH变化相关性明显,其酪氨酸表观离解常数pK_a＇=11.4.荧光研究表明,火菇素不含色氨酸而只表现出酪氨酸荧光,在激发波长为280nm时最大发射波长为305nm,pH和SDS对其荧光性质有较大的影响;KI几乎不能猝灭火菇素的荧光,丙烯酰胺是其强猝灭剂.研究表明,酪氨酸残基位于火菇素的疏水内核,在火菇素分子中酪氨酸残基和其它疏水氨基酸残基形成疏水微区,疏水微区结构比较稳定.

跨膜衔接蛋白PAG1棕榈酰化位点突变对CD59介导的Jurkat细胞信号转导的影响

为探讨跨膜衔接蛋白——富含鞘磷脂的脂膜微区结合酪氨酸磷酸化蛋白(phosphoprotein associated with glycosphing-olipid-enriched microdomains 1,PAG1)棕榈酰化位点突变对CD59介导的Jurkat细胞活化、增殖等生物学效应的影响,通过慢病毒转染技术建立PAG1棕榈酰化位点突变的Jurkat细胞株,用CD59单克隆抗体刺激试验组和阴性对照组。用免疫荧光检测PAG1、CD59在细胞上的表达及定位关系;CCK-8法及FACS检测细胞的增殖、凋亡情况;Western blotting检测Jurkat细胞信号转导通路中相关信号蛋白的变化。结果显示,PAG1、CD59分子均定位于细胞膜上且表达位置重叠。棕榈酰化位点突变后,PAG1与CD59分子虽出现点簇状聚集现象,但二者并不重叠。位点突变不影响细胞增殖和凋亡(P>0.05),但CD59单克隆抗体刺激后,细胞凋亡水平显著下降(P<0.05),且TCR活化通路下游分子非受体酪氨酸激酶Fyn、淋巴细胞特异性蛋白酪氨酸激酶(lymphocyte-specific protein tyrosine kinase,Lck)、磷脂酶Cγ1(phospholipase Cγ1,PLC-γ1)表达均下降。该研究提示,PAG1棕榈酰化位点突变后不能抑制CD59介导的Jurkat细胞增殖。