蛋白酪氨酸激酶2/信号传导与转录激活因子3信号通路在大鼠肾脏移植慢性排斥反应中的作用机制

目的探讨蛋白酪氨酸激酶2/信号传导与转录激活因子3(JAK2/STAT3)信号通路在大鼠肾脏移植慢性排斥反应中的作用机制。方法将60只大鼠分为空白对照组[供鼠(10只)、受鼠(10只)均为Lewis大鼠]、阳性对照组[供鼠(10只)为F344大鼠,受鼠(10只)为Lewis大鼠]和STAT3拮抗组[供鼠(10只)为F344大鼠,受鼠(10只)为Lewis大鼠],检测其术前及术后12周血肌酐(SCr)及尿素氮(BUN)水平并进行比较。比较3组大鼠肾脏组织病理学变化和慢性移植损伤指数(CADI)评分。采用免疫组化检测转化生长因子(TGF)-β1/果蝇母性DPP同源蛋白(Smad)3、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)纤维化指标。采用蛋白质印记法(Western blot)检测TGF-β1、α-SMA、JAK2和STAT3蛋白的表达。结果空白对照组和STAT3拮抗组大鼠血清SCr及BUN水平均低于阳性对照组(P<0.05)。阳性对照组大鼠肾脏组织弥漫性炎症细胞浸润表现较明显,其他两组大鼠中炎症细胞浸润较少。阳性对照组大鼠CADI评分明显高于其他两组(P<0.05)。空白对照组和STAT3拮抗组大鼠肾脏组织中TGF-β1、α-SMA、JAK2和STAT3蛋白表达水平明显低于阳性对照组(P<0.05)。结论STAT3的特异性抑制剂可在大鼠肾脏移植慢性排斥反应中抑制JAK2/Smad3信号通路所引起的炎症反应,对肾脏移植起到一定的保护作用。

黄连解毒汤对脑梗死合并胃损伤大鼠干细胞因子/酪氨酸激酶受体信号通路的影响

目的:探讨黄连解毒汤对脑梗死合并胃损伤大鼠干细胞因子/酪氨酸激酶受体(SCF/C-kit)信号通路的影响。方法:将80只健康10周龄雄性Wistar大鼠随机分为模型组、黄连解毒汤组、奥美拉唑组、假手术组、正常组,以上各组再分设4 d组、7 d组,共10组。采用线栓法建立大脑中动脉梗死模型。黄连解毒汤组给予黄连解毒汤(27 mg/ml)混悬液,奥美拉唑组给予奥美拉唑(15 mg/ml)悬浊液,其余组给予1 ml 0.9%氯化钠溶液灌胃,4 d组连续灌胃4 d,7 d组连续灌胃7 d。采用HE染色法观察大鼠胃组织病理形态学变化,并进行病理损伤评分;采用实时荧光定量检测大鼠胃组织SCF、C-kit mRNA表达水平;采用Western blot检测大鼠胃组织中SCF、C-kit蛋白表达水平。结果:与正常组、假手术组比较,模型组、黄连解毒汤组、奥美拉唑组大鼠胃黏膜病理评分均明显升高(4、7 d组均P<0.01),胃组织SCF、C-kit mRNA和蛋白表达水平均明显降低(P<0.01);正常组、假手术组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。与模型组比较,黄连解毒汤组、奥美拉唑组大鼠胃黏膜病理评分均显著降低(4、7 d组均P<0.01),胃组织SCF、C-kit mRNA和蛋白表达水平均明显升高(P<0.01)。与奥美拉唑组比较,黄连解毒汤组大鼠胃黏膜病理评分均明显降低(P<0.05),胃组织SCF、C-kit mRNA和蛋白表达水平均明显升高(P<0.05)。结论:黄连解毒汤对脑梗死合并胃损伤大鼠的胃黏膜具有一定的保护作用,其机制可能与黄连解毒汤升高大鼠胃组织SCF、C-kit mRNA及蛋白的表达水平有关。

酪氨酸激酶抑制剂治疗难治复发性急性淋巴细胞白血病研究进展

目前,中国儿童急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)患者的5年无事件生存率(event-free survival,EFS)已达70%[1-2]。基于基因组异常特征划分的不同ALL亚型预后差别很大,如ETV6-RUNX1重排单纯化疗5年EFS已达80%~97%,而Ph+ALL单纯化疗5年EFS仅约30%[3-4]。复发是ALL预后不良的重要因素,约20%的儿童ALL会经历复发,其长期总治愈率仅40%~50%[5-6]。此外,约2.4%的初诊ALL经过4~6周的标准诱导治疗不能获得完全缓解,该部分诱导失败(induction failure,IF)患者再次诱导的缓解率和总的生存率不尽如人意[7]。因此,提升这部分难治复发性ALL患者的总体治愈率对于儿童ALL治疗的发展具有重大意义。

PIM1基因对急性髓系白血病U937细胞增殖、凋亡及JAK2/STAT3信号通路的影响

目的:探讨PIM1基因对急性髓系白血病(AML)U937细胞增殖、凋亡的影响,以及对JAK2/STAT3通路的调控作用。方法:收集初诊成人AML患者和单纯缺铁性贫血患者的骨髓单个核细胞,荧光定量PCR检测PIM1 mRNA表达。将AML细胞系U937细胞分为:U937组(U937细胞正常培养)、Si-PIM1组(U937细胞转染含PIM1 mRNA的低表达腺病毒载体)、Si-NC组(U937细胞转染不含PIM1 mRNA的低表达腺病毒载体)、CoA1组(U937细胞中加入浓度为20μmol/L的JAK2激活剂CoA1)、Si-PIM1+CoA1组(U937细胞转染含PIM1 mRNA低表达的腺病毒载体并加入浓度为20μmol/L的CoA1)。培养24 h。荧光定量PCR和蛋白印迹法检测U937细胞PIM1 mRNA和蛋白、JAK2/STAT3通路、细胞周期、凋亡相关蛋白表达;噻唑蓝法检测细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞周期变化及凋亡率。结果:AML患者骨髓单个核细胞中PIM1 mRNA表达水平高于单纯缺铁性贫血患者(P<0.05)。与U937组相比,Si-PIM1组细胞PIM1 mRNA和蛋白、p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3、Cyclin D1、CDK2蛋白、细胞增殖活性、S期比例、G2/M期比例降低(均P<0.05),p27、Caspase-3蛋白、G0/G1期、凋亡率升高(均P<0.05),而CoA1组上述指标的变化情况与Si-PIM1组正好相反,CoA1可逆转Si-PIM1对U937细胞的作用效果。U937组、Si-PIM1+CoA1组、Si-NC组U937细胞上述指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论:敲低PIM1基因表达可抑制U937细胞增殖、促进凋亡,缓解ALM进程,且上述作用可能与抑制JAK2/STAT3通路活化有关。

人参二醇对APP-SH-SY5Y细胞中Tau蛋白磷酸化及Fyn/GluN2B信号通路的影响

目的:研究人参二醇(PD)对转染APP基因的人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y(APP-SH-SY5Y)中Tau蛋白磷酸化的影响及其作用机制。方法:采用分子对接技术验证PD与非受体酪氨酸激酶Fyn的靶向性。在体外培养SH-SY5Y细胞,构建APP-SH-SY5Y细胞模型和绿色荧光蛋白(GFP)-SH-SY5Y细胞模型(对照细胞),通过检测细胞中β淀粉样蛋白(Aβ1-42)的表达来验证APP-SH-SY5Y细胞模型是否构建成功。以GFP-SH-SY5Y细胞为对照,采用CCK-8法检测5、10、20、30、40μmol/L的PD和125、250、500、1000、2000 nmol/L的PP2(Fyn抑制剂,阳性对照)作用24 h对APP-SH-SY5Y细胞存活率的影响,以确定最佳给药浓度。以APP-SH-SY5Y细胞为对象,分别检测最佳浓度PD、PP2作用24后细胞中Ca2+浓度及磷酸化Tau蛋白(p-Tau)/Tau、磷酸化非受体酪氨酸激酶Src(p-Src)/Fyn、磷酸化谷氨酸受体2B(p-GluN2B)/GluN2B比值。结果:分子模拟对接结果显示,PD可靶向结合Fyn蛋白。与GFP-SH-SY5Y细胞比较,APP-SH-SY5Y细胞中Aβ1-42蛋白表达水平显著升高(P<0.01)。PD和PP2的最佳作用浓度分别为20μmol/L和500 nmol/L。20μmol/L PD、500 nmol/L PP2均可显著升高细胞的存活率,显著降低细胞中Ca2+浓度以及p-Tau/Tau、p-Src/Fyn、p-GluN2B/GluN2B比值。结论:PD可通过抑制Fyn/GluN2B信号通路来降低APP-SH-SY5Y细胞中Ca2+浓度及Tau蛋白的磷酸化水平。

基于干细胞生长因子/酪氨酸激酶受体信号通路探讨温和灸对肝郁脾虚证腹泻型肠易激综合征大鼠内脏高敏感的影响

目的:观察温和灸对肝郁脾虚证腹泻型肠易激综合征(IBS-D)模型大鼠干细胞生长因子(SCF)/酪氨酸激酶受体(c-kit)信号通路及内脏高敏感的影响,探讨温和灸治疗肝郁脾虚证IBS-D大鼠的可能作用机制。方法:将24只Wistar雄性大鼠随机分为正常组、模型组、西药组、温和灸组,每组6只。采用冰醋酸灌肠+束缚应激方式建立肝郁脾虚证IBS-D大鼠模型。西药组予匹维溴铵灌胃(15 mg/kg),每日1次;温和灸组选取双侧“天枢”“上巨虚”“太冲”予温和灸治疗,每次20 min,每日1次。两组均连续干预14 d。干预结束后,观察各组大鼠一般情况,检测稀便率(LSR);检测引起腹部回缩反射(AWR)达3分时的最小容量阈值;旷场实验检测大鼠直立次数、修饰次数及总穿格数;HE染色法观察各组大鼠结肠组织病理形态变化;甲苯胺蓝染色法检测结肠组织中肥大细胞(MC)计数;ELISA法检测大鼠血清5-羟色胺(5-HT)和P物质(SP)含量;实时荧光定量PCR法检测结肠组织SCF、c-kit的mRNA相对表达量;Western blot法检测大鼠结肠组织SCF、c-kit的蛋白相对表达量。结果:与正常组比较,模型组大鼠体质量、AWR达3分时的最小容量阈值降低(P<0.05),LSR升高(P<0.01),总穿格数、直立次数、修饰次数均减少(P<0.05),结肠组织中MC数量明显增加(P<0.01),血清中5-HT、SP含量明显升高(P<0.01),结肠组织SCF、c-kit的mRNA、蛋白的表达明显升高(P<0.01)。治疗后,与模型组比较,西药组、温和灸组大鼠体质量增加(P<0.05),AWR达3分时的最小容量阈值明显增加(P<0.01),LSR降低(P<0.05),总穿格数、直立次数、修饰次数均增加(P<0.05),结肠组织中MC计数减少(P<0.05),血清中5-HT、SP含量降低(P<0.01);与模型组比较,温和灸组大鼠结肠组织SCF、c-kit的mRNA、蛋白表达降低(P<0.05)。正常组大鼠结肠组织结构完整,无糜烂及水肿;模型组大鼠结肠组织黏膜层可见少量炎性细胞浸润;西药组大鼠结肠组织可见少量淋巴细胞聚集;温和灸组大鼠结肠组织可见少量中性粒细胞聚集。结论:温和灸可降低肝郁脾虚证IBS-D模型大鼠的内脏高敏感性,改善其腹痛、腹泻及精神状态等症状,其作用机制可能与下调SCF/c-kit信号通路的表达,减少MC数量,降低5-HT、SP水平有关。

基于JAK2信号通路探究散瘀止痛续骨方对肱骨骨折大鼠骨微结构的保护机制

目的基于酪氨酸激酶(JAK2)信号通路探究散瘀止痛续骨方对肱骨骨折大鼠骨微结构保护机制。方法选取健康大鼠40只,平均分为正常组、模型组、散瘀止痛续骨方组、杜仲提取物组各10只。除正常组外,其余组别大鼠均建立肱骨骨折大鼠模型,对照组及模型组采用相同体积生理盐水1次/d灌胃,散瘀止痛续骨方组采用散瘀止痛续骨方制剂3 g/kg灌胃,杜仲提取物组采用生药5 g/kg进行灌胃,连续给药30 d后,通过骨微结构、苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠病理组织形态,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中骨形态发生蛋白(BMP)7、神经肽(NP)Y表达,Western印迹和荧光定量聚合酶链反应(PCR)分别检测JAK2、信号转导和转录激活因子(STAT)3表达。结果与正常组比较,模型组血清中BMP7、NPY、骨小梁数量(Th.N)、骨小梁厚度(Tb.Th)、BV/TV、骨密度(BMD)、连接密度(Conn.D)表达明显降低,骨小梁分离度(Tb.Sp)表达、JAK2、STAT3 mRNA及蛋白表达明显升高(P<0.05),与模型组比较,散瘀止痛续骨方组BMP7、NPY、Th.N、Tb.Th、BV/TV、BMD、Conn.D表达明显升高,Tb.Sp表达、JAK2、STAT3 mRNA及蛋白表达显著降低(P<0.05),与散瘀止痛续骨方组比较,杜仲提取物组BMP7、NPY、Th.N、Tb.Th、BV/TV、BMD、Conn.D表达明显降低,Tb.Sp表达、JAK2、STAT3 mRNA及蛋白表达明显升高(P<0.05)。正常组肱骨骨结构基本正常,骨皮质未见变薄,骨髓腔大小正常,无受损状况产生,细胞间排列整齐且均匀分布,未见破骨细胞产生;模型组肱骨骨皮质变薄且细胞间、排列稀疏,骨髓腔扩大、断裂明显,骨髓脂肪组织增生明显,可见大量破骨细胞;散瘀止痛续骨方组骨结构趋于稳定,骨基质中少量骨细胞沉积,组织密度增大,组织细胞排列趋于有序,有新生组织生成;杜仲提取物组骨组织中仍有受损现象,伴随破骨细胞分布,骨髓脂肪组织间仍有破骨少量细胞。结论散瘀止痛续骨方可降低血清BMP7、NPY表达,和抑制JAK2、STAT3蛋白水平,改善骨折中的骨微结构及病理变化,从而发挥促进骨愈合的作用。

基于JAK/STAT信号通路的中药治疗慢性萎缩性胃炎药理机制研究进展

现关于中医药干预慢性萎缩性胃炎(chronic atrophic gastritis,CAG)的临床研究和基础实验研究已成为消化系统疾病中的研究热点。Janus蛋白酪氨酸激酶(Janus protein tyrosine kinase,JAK)/信号转导子与激活子(signal transducer and activator of transcription,STAT)信号通路的状态与消化道疾病的发生与进展十分密切。诸多研究表明中药可通过多种机制调控该信号通路干预CAG的进展,大致可分为以下几个方面:通过抑制JAK2/STAT3、核转录因子-κB/STAT1通路激活或促使白介素-4(interleukin-4,IL-4)/STAT6激活达到干预CAG的目的;同时降低IL-6、IL-1β等相关炎症因子表达,不仅可抑制相关通路激活,亦可起到减轻胃黏膜炎症的作用;再者上调抑癌基因p21、下调原癌基因表达防止受损的胃黏膜进一步恶化;最后还可调节生存素、B淋巴细胞瘤2家族调控细胞凋亡/增殖平衡机制逆转胃黏膜萎缩及肠化生。

山茱萸新苷经GFRα1/Ret信号通路对慢性脑低灌注大鼠认知功能障碍的改善作用

目的:探讨山茱萸新苷经胶质细胞源性神经营养因子受体α1(GFRα1)/受体酪氨酸激酶(Ret)信号通路对慢性脑低灌注大鼠认知功能障碍的改善作用。方法:50只SD大鼠采用随机数字表法分为5组:假手术组、模型组、阳性对照组(石杉碱甲,250μg·kg-1)、山茱萸新苷低、高剂量组(67.5,270 mg·kg-1),每组10只。除假手术组外,其余各组采用双侧颈总动脉闭塞(BCCAO)法制作慢性脑低灌注大鼠模型。造模成功后,山茱萸新苷低、高剂量组和阳性对照组分别灌胃给予相应药物,假手术组和模型组给予等量生理盐水,1次/d,持续给予21 d。给药结束后,进行Morris水迷宫实验;HE染色观察大鼠海马组织病理学改变;检测海马组织中胶质细胞源神经营养因子(GDNF)、GFRα1、Ret、磷酸化-Akt(p-Akt)、B细胞淋巴瘤白血病-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)水平。结果:模型组大鼠海马区细胞结构疏松,海马萎缩、神经元变性坏死;与模型组相比,山茱萸新苷各剂量组和阳性对照组大鼠海马区细胞结构和神经元形态得以修复,神经元变性坏死现象得到改善。与假手术组比较,模型组大鼠目标象限游泳时间、平均游泳速度、GDNF、GFRα1、Ret、p-Akt和Bcl-2水平降低,Bax水平增加(P<0.05);与模型组比较,山茱萸新苷各剂量组和阳性对照组大鼠目标象限游泳时间、平均游泳速度、GDNF、GFRα1、Ret、p-Akt和Bcl-2水平增加,Bax水平降低(P<0.05),且山茱萸新苷高、低剂量组及阳性对照组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论:山茱萸新苷对慢性脑低灌注大鼠认知功能障碍有改善作用,其机制可能与GFRα1/Ret信号通路的激活有关。

苦豆碱调节IL-6/JAK1/STAT3信号通路对结直肠癌细胞增殖、凋亡和免疫逃逸的影响

目的:探讨苦豆碱(ALO)调节IL-6/酪氨酸激酶1(JAK1)/信号转导和转录激活因子3(STAT3)通路对结直肠癌(CRC)细胞行为的影响。方法:SW480分为CK组(正常培养的SW480细胞)、ALO低剂量组(ALO-L组,0.2 mmol/L)、ALO中剂量组(ALO-M组,0.4 mmol/L)、ALO高剂量组(ALO-H组,0.8 mmol/L)、ALO-H+激活剂(IL-6激活剂重组人IL-6蛋白)组(0.8 mmol/L+100 ng/ml)。CCK-8、平板克隆实验检测SW480细胞增殖;流式细胞术检测SW480细胞凋亡;Western blot检测细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、IL-6、p-JAK1、p-STAT3蛋白表达。将自然杀伤细胞NK-92MI分别与上述5组细胞共培养,并依次命名为CK共培养组、ALO-L共培养组、ALO-M共培养组、ALO-H共培养组、ALO-H+激活剂共培养组,检测共培养细胞上清液中TNF-α、IFN-γ水平及共培养体系中NK-92MI的免疫杀伤率。结果:与CK组相比,ALO-L组、ALO-M组、ALO-H组OD_(450)值、克隆形成率、PCNA、IL-6、p-JAK1、p-STAT3蛋白表达降低,细胞凋亡率、Bax蛋白表达升高,且呈剂量依赖性(P<0.05);与ALO-H组相比,ALO-H+激活剂组SW480细胞OD_(450)值、克隆形成率、PCNA、IL-6、p-JAK1、p-STAT3蛋白表达升高,细胞凋亡率、Bax蛋白表达降低(P<0.05);ALO-L共培养组、ALO-M共培养组、ALO-H共培养组上清中TNF-α、IFN-γ水平、NK-92MI细胞免疫杀伤率高于CK共培养组,且呈剂量依赖性(P<0.05);与ALO-H共培养组相比,ALO-H+激活剂共培养组上清中TNF-α、IFN-γ水平、细胞免疫杀伤率降低(P<0.05)。结论:ALO可能通过抑制IL-6/JAK1/STAT3信号通路抑制SW480细胞增殖、免疫逃逸,促进细胞凋亡。

氧化苦参碱和苦参碱通过调控酪氨酸激酶-信号转导及转录激活因子信号通路对肝癌细胞SMMC-7721增殖凋亡的影响

目的观察苦参碱和氧化苦参碱对肝癌细胞SMMC-7721增殖凋亡及酪氨酸激酶（JAK）-信号转导及转录激活因子（STAT）通路的影响。方法应用苦参碱和氧化苦参碱干预肝癌细胞SMMC-7721，通过噻唑蓝（MTT）法检测对苦参碱和氧化苦参碱肝癌细胞增殖的影响，采用双荧光染色观察苦参碱和氧化苦参碱干预肝癌SMMC-7721细胞凋亡率的变化，并以反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测苦参碱和氧化苦参碱对肝癌SMMC-7721细胞STAT3、STAT5 mRNA的影响。结果（1）随着苦参碱和氧化苦参碱药物浓度和作用时间增加，细胞增殖抑制率上升，苦参碱和氧化苦参碱作用各时间组的细胞增殖抑制率与作用浓度呈显著正相关（r＝0.851～0.989），苦参碱和氧化苦参碱各浓度组不同作用时间比较细胞增殖抑制率差异有统计学意义。（2）在双荧光检测中，活细胞被吖啶橙（AO）染成绿色，凋亡细胞则被溴乙锭（EB）染成橘红色。苦参碱2.5 mg/ml作用48 h组凋亡率为52.1%，氧化苦参碱2.5 mg/ml作用48 h组凋亡率为29.6%，这说明相同浓度苦参碱比氧化苦参碱作用显著（χ2＝9.100，P＝0.003）。（3）不同浓度苦参碱和氧化苦参碱作用于肝癌SMMC-7721细胞后，STAT3、STAT5 mRNA表达量均明显下降，与用药前比较差异有统计学意义。STAT3、STAT5 mRNA在对照组细胞中的表达是0.76±0.06和0.72±0.04，在苦参碱1.0 mg/ml组的表达是0.50±0.04和0.43±0.03，在苦参碱2.5 mg/ml组的表达是0.25±0.03和0.22±0.04，在氧化苦参碱1.0 mg/ml组的表达是0.64±0.03和0.60±0.06，在氧化苦参碱2.5 mg/ml组的表达是0.49±0.06和0.41±0.06。相同浓度苦参碱和氧化苦参碱比较，苦参碱对肝癌SMMC-7721细胞STAT3、STAT5 mRNA的影响更显著，差异有统计学意义。结论苦参碱和氧化苦参碱能显著抑制SMMC-7721细胞增殖、促进其凋亡，其机制可能与下调STAT3、STAT5的基因表达，抑制细胞信号转导通路有关。

c-Myc调控葡萄糖转运蛋白4激活酪氨酸激酶/信号转导与转录激活因子促进三阴性乳腺癌机制研究

目的探讨c-Myc调控葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)激活酪氨酸激酶(JAK)/信号转导与转录激活因子(STAT)信号通路促进三阴性乳腺癌(TNBC)进展机制。方法通过生信分析GLUT4、c-Myc关联性及GLUT4与乳腺癌临床病理特征间关系。收集三阴性乳腺癌患者临床样本,免疫组织化学检测GLUT4和c-Myc表达水平。构建敲除c-Myc的MDA-MB-231细胞株,通过实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)及蛋白质印迹法(Western blot)检测GLUT4表达水平。构建敲除GLUT4和同时敲除GLUT4及c-Myc的MDA-MB-231细胞株,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测增殖,流式细胞仪检测凋亡,Transwell检测迁移和侵袭。Western blot进一步分析c-Myc调控GLUT4对JAK/STAT的影响。正态分布计量资料比较采用独立样本t检验,多组资料组间比较采用方差分析。结果生信分析结果显示,在乳腺癌中GLUT4明显下调(P<0.01)且与乳腺癌TNM分期、病理分级、PAM50分型等相关。免疫组织化学评分结果显示,c-Myc在TNBC癌组织中表达显著高于癌旁组织(7.233比4.567,t=4.551,P<0.01),而GLUT4显著低表达(4.800比7.933,t=5.702,P<0.01)。在MDA-MB-231细胞中敲除c-Myc,RT-qPCR结果显示,c-Myc敲除组GLUT4表达量高于阴性对照组(2.486±0.273比1.070±0.140,F=55.005,P<0.01),Western blot结果显示,c-Myc敲除组GLUT4表达量高于阴性对照组(0.691±0.041比0.431±0.055,F=29.027,P<0.01)。构建GLUT4低表达的MDA-MB-231细胞株,RT-qPCR结果显示,GLUT4沉默组表达量低于阴性对照组,差异有统计学意义(0.507±0.076/0.137±0.025/0.317±0.085比1.150±0.200,F=45.016,P<0.01)。CCK-8结果显示,组细胞存活率高于阴性对照组(128.614±13.780比95.875±9.130,F=26.927,P<0.01),继续敲除c-Myc后细胞存活率低于阴性对照组(70.977±5.906比95.875±9.130,F=26.927,P<0.01)。流式细胞术结果显示,同时敲除GLUT4及c-Myc后细胞凋亡高于阴性对照组(12.170±1.283比3.263±0.691,F=102.946,P<0.01)。Transwell结果显示,敲除GLUT4后细胞迁移数高于阴性对照组[(237.333±14.364)个比(156.667±10.693)个,F=91.074,P<0.01]、侵袭数高于阴性对照组[(257.000±9.539)个比(152.333±5.132)个,F=90.437,P<0.01],细胞迁移侵袭能力增强,而同时敲除c-Myc和GLUT4后细胞迁移数低于阴性对照组[(67.000±14.177)个比(156.667±10.693)个,F=91.074,P<0.01]、侵袭数低于阴性对照组[(91.667±13.650)个比(152.333±5.132)个,F=90.437,P<0.01],细胞迁移侵袭能力减弱。Western blot结果显示,敲除GLUT4后c-Myc(0.814±0.060比0.447±0.028)、p-JAK2(0.629±0.038比0.380±0.030)、p-STAT3(0.698±0.029比0.288±0.016)表达量均高于相应阴性对照组(F=17.541,P<0.01),而继续敲低c-Myc后,GLUT4表达量高于单纯敲低GLUT4组(0.618±0.029比0.529±0.049,F=68.772,P<0.05),p-JAK2(0.510±0.033比0.629±0.038)、p-STAT3(0.410±0.050比0.698±0.029)表达量低于单纯敲低GLUT4组(F=68.772,P<0.01)。结论在三阴性乳腺癌中,c-Myc可抑制GLUT4表达并通过调控JAK/STAT信号通路影响肿瘤细胞的增殖侵袭和凋亡。

二甲双胍通过阻断Src/STAT3信号通路诱导胃癌MGC-803细胞凋亡的实验研究

目的:探讨二甲双胍通过阻断Src酪氨酸激酶(Src)/信号转导及转录激蛋白3(STAT3)信号通路诱导胃癌MGC-803细胞凋亡的机制。方法:设MGC803细胞组、氟尿嘧啶组(100.0μg·ml^-1)和二甲双胍低(80.0μg·ml^-1)、高(160.0μg·ml^-1)剂量组,各组细胞置于CO2培养箱(37℃、5%CO2、2%O2、93%N2)。以上各组每孔设6个平行样,培养72 h。培养结束后,细胞计数试剂盒-8(CCK-8)测定细胞活力,结晶紫染色测定单克隆形成数目,Transwell室测定侵袭能力,FACScan流式细胞仪测定细胞凋亡水平,实时荧光定量PCR(RT-PCR)及蛋白质印迹法(West Blot)测定p-SRC、p-STAT3 m RNA和蛋白水平。结果:氟尿嘧啶组和二甲双胍组的吸光度(A)值、存活率水平、克隆形成数目、穿膜数、p-SRC、p-STAT3 m RNA及蛋白表达水平显著低于MGC803细胞组(P<0.05),凋亡率显著高于MGC803细胞组(P<0.05)。二甲双胍低剂量组的A值、存活率水平、克隆形成数目、穿膜数、P-SRC、P-STAT3 m RNA、蛋白表达水平显著高于氟尿嘧啶组(P<0.05),凋亡率显著低于氟尿嘧啶组(P<0.05)。二甲双胍高剂量组与氟尿嘧啶组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:二甲双胍能抑制胃癌MGC-803细胞增殖,促进胃癌MGC-803细胞凋亡;其机制与二甲双胍抑制P-SRC、P-STAT3 mRNA和蛋白的表达有关。

电针对脑梗死大鼠脑组织中BDNF/TrkB/PI3K信号通路的影响

目的:探究电针对脑梗死大鼠脑组织中脑源性神经营养因子/酪氨酸激酶/磷脂酰肌醇3激酶(BDNF/TrkB/PI3K)通路的影响。方法:采用改良线栓法构建脑梗死大鼠模型,将建模成功的大鼠随机分为模型组、电针组、抑制剂组、电针+抑制剂组,每组15只,另随机取15只大鼠作为假手术组;抑制剂组、电针+抑制剂组大鼠经右侧脑室注射10μg/kg K252a,电针组、电针+抑制剂组大鼠对百会、风府、心俞、内关4个穴位进行电针干预,1次/d,连续干预7 d。干预结束后,对各组大鼠进行神经功能缺损评分;2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色法分析大鼠脑梗死面积;酶联免疫吸附(ELISA)法检测大鼠血清IL-8、TNF-ɑ、IL-2水平;Western blotting法检测大鼠脑组织中BDNF/TrkB/PI3K通路相关蛋白表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠神经功能缺损评分、脑梗死面积及血清IL-8、IL-2、TNF-ɑ含量均明显升高(P<0.05),BDNF、TrkB蛋白相对表达量及p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT均明显降低(P<0.05)。与模型组比较,电针组大鼠神经功能缺损评分、脑梗死面积及血清IL-8、IL-2、TNF-ɑ含量均明显降低(P<0.05),BDNF、TrkB蛋白相对表达量及p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT均明显升高(P<0.05);抑制剂组大鼠神经功能缺损评分、脑梗死面积及血清IL-8、IL-2、TNF-ɑ含量均明显升高(P<0.05),BDNF、TrkB蛋白相对表达量及p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT均明显降低(P<0.05);电针+抑制剂组大鼠各指标与模型组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。与电针组比较,电针+抑制剂组大鼠神经功能缺损评分、脑梗死面积及血清IL-8、IL-2、TNF-ɑ含量均明显升高(P<0.05),BDNF、TrkB蛋白相对表达量及p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT均明显降低(P<0.05)。结论:电针可通过激活BDNF/TrkB/PI3K信号通路,减轻脑梗死大鼠脑组织炎症反应,改善神经功能。

硝普钠对实验性脑出血大鼠神经功能及蛋白酪氨酸激酶2/信号传导与转录激活因子3通路的影响

目的研究硝普钠对实验性脑出血大鼠神经功能及蛋白酪氨酸激酶2/信号传导与转录激活因子3(JAK2/STAT3)通路的影响。方法将60只大鼠随机分为对照组,模型组和实验组,每组20只。模型组和实验组大鼠通过注射Ⅶ型胶原酶及肝素混合液构建实验性脑出血模型,对照组予以等量0. 9%NaCl;实验组大鼠于建模后6,24,72,120 h予以腹腔注射硝普钠1 mg·kg^(-1),模型组及对照组则予以等量0. 9%NaCl。用称重法测定各组大鼠脑含水量;用DNA断裂的原位末端标记法(TUNEL)检测大鼠脑组织细胞凋亡情况;用蛋白免疫印迹法检测大鼠脑组织JAK2/STAT3通路蛋白表达。结果对照组,模型组和实验组建模后72 h脑含水量分别为(76. 05±2. 04)%,(84. 91±2. 58)%,(79. 68±3. 01)%;神经细胞凋亡率分别为(7. 52±1. 86)%,(50. 23±2. 43)%,(26. 24±2. 37)%;脑组织中p-JAK2蛋白相对表达量分别为0. 07±0. 13,1. 26±0. 05,0. 33±0. 05,p-STAT3蛋白相对表达量分别为0. 20±0. 03,0. 38±0. 06,0. 26±0. 09,差异均有统计学意义(均P <0. 05)。结论硝普钠对实验性脑出血大鼠的脑损伤有一定的保护作用,可能与其调控JAK2/STAT3通路,减轻脑组织细胞凋亡有关。

有氧运动干预非酒精性脂肪肝小鼠肝脏JAK2/STAT5信号通路的变化

背景:酪氨酸激酶2/信号传导及转录激活因子5信号通路在脂质代谢中起重要作用,运动有效预防与治疗非酒精性脂肪肝与改善内脏脂质沉积和脂质代谢密切相关。目的:探讨有氧运动对非酒精性脂肪肝小鼠肝脏酪氨酸激酶2/信号传导及转录激活因子5信号通路的影响及可能作用机制。方法:6周龄C57BL/6雄性小鼠48只,分为普通膳食组及高脂膳食诱导组(n=24),第10周末2组各随机抽取4只进行油红O染色观察肝脏病理形态变化。确定造模成功后,普通膳食组随机分为普通膳食+安静组、普通膳食+运动组(n=10);高脂膳食诱导组随机分为非酒精性脂肪肝+安静组、非酒精性脂肪肝+运动组(n=10),连续干预8周,直至实验结束。观察小鼠肝脏病理形态变化,检测小鼠肝脏组织泌乳素受体、肝脏酪氨酸激酶2、信号传导及转录激活因子5a、肝脏酪氨酸激酶2磷酸化、信号传导及转录激活因子5磷酸化蛋白表达量。结果与结论:(1)与普通膳食+安静组相比,非酒精性脂肪肝+安静组肝细胞脂肪变性加重,肝脏内酪氨酸激酶2/信号传导及转录激活因子信号通路蛋白表达量降低;(2)与非酒精性脂肪肝+安静组相比,非酒精性脂肪肝+运动组的肝细胞脂肪变性减轻,肝脏内酪氨酸激酶2/信号传导及转录激活因子5信号通路蛋白表达量升高;(3)肝脏病理形态指标与催乳素受体、肝脏酪氨酸激酶2、肝脏酪氨酸激酶2磷酸化、信号传导及转录激活因子5磷酸化均呈显著负相关(P<0.05);(4)提示有氧运动干预可通过调节非酒精性脂肪肝小鼠肝脏酪氨酸激酶2/信号传导及转录激活因子5信号通路,改善肝内脂质沉积及肝脏脂肪变性程度。

表皮生长因子受体基因沉默介导酪氨酸激酶/信号转导与转录激活因子信号通路对胶质瘤细胞凋亡的调控机制

目的探讨表皮生长因子受体(EGFR)基因介导酪氨酸激酶(JAK)/信号转导与转录激活因子(STAT)信号通路对胶质瘤细胞凋亡的调控机制。方法收集甘肃省人民医院2017年1月至2019年6月胶质瘤患者手术切除的胶质瘤组织及瘤旁组织。细胞进行细胞分组与转染,分成7组:Blank组、NC组、oe-EGFR组、小干扰RNA(siRNA)-EGFR组、Gefitinib组、NSC 228155组和siRNA-EGFR+NSC 228155组。实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)法检测胶质瘤组织和转染后各组细胞中EGFR、JAK1、STAT3、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)和bcl-2相关X蛋白(bax) mRNA和蛋白的表达。噻唑蓝(MTT)法和流式细胞术分别检测各组细胞转染后细胞增殖与凋亡。两组间比较采用Student’st检验,多组间比较应用单因素方差分析。结果胶质瘤组织中的EGFR、JAK1、STAT3、bcl-2 mRNA(EGFR:t=13.630,P<0.01;JAK1:t=16.650,P<0.01;STAT3:t=17.420,P<0.01;bcl-2:t=17.010,P<0.01)和蛋白(EGFR:t=15.590,P<0.01;JAK1:t=11.680,P<0.01;STAT3:t=9.295,P<0.01;bcl-2:t=13.960,P<0.01)表达量显著高于癌旁组织,而Bax mRNA(t=21.480,P<0.01)和蛋白(t=10.950,P<0.01)表达量显著低于癌旁组织,差异有统计学意义(均P<0.05)。Blank组和NC组组间差异无统计学意义(均P>0.05);siRNA-EGFR组和Gefitinib组Bax mRNA(F=48.300,P<0.01)和蛋白(F=28.330,P<0.01)表达量显著高于NC组,而EGFR、JAK1、STAT3、bcl-2 mRNA(EGFR:F=138.000,P<0.01;JAK1:F=234.300,P<0.01;STAT3:F=106.300,P<0.01;bcl-2:F=186.500,P<0.01)和蛋白(EGFR:F=63.540,P<0.01;JAK1:F=61.720,P<0.01;STAT3:F=54.660,P<0.01;bcl-2:F=77.480,P<0.01)表达量显著低于NC组,细胞增殖能力明显低于NC组(24 h:F=23.650,P<0.01;48 h:F=44.450,P<0.01;72 h:F=32.160,P<0.01),而细胞凋亡明显高于NC组(F=50.810,P<0.01),差异有统计学意义(均P<0.05);oe-EGFR组和NSC 228155组各因子和指标趋势逆转,差异有统计学意义(均P<0.05);而siRNA-EGFR+NSC 228155组各因子和指标与NC组相比差异无统计学意义(均P>0.05)。结论沉默EGFR表达,抑制JAK/STAT信号通路的激活,有助于抑制胶质瘤细胞增殖,并促进细胞凋亡。

龙眼肉调节肠道菌群和BDNF-TrkB通路抗AD的作用机制研究

目的:基于肠道菌群和脑源性神经营养因子(BDNF)-酪氨酸激酶受体B (TrkB)信号通路探讨龙眼肉抗阿尔茨海默病(AD)的作用机制。方法:采用煎煮法制备龙眼肉水提取物,采用D-半乳糖(140 mg·kg–1,ip)/AlCl3(20 mg·kg–1,ig)联合诱导建立小鼠AD模型,Morris水迷宫检测小鼠学习记忆能力,16S-rDNA测序检测小鼠粪便菌群多样性,Western blot检测小鼠海马区淀粉样前体蛋白(APP)、磷酸化Tau蛋白(p-Tau)、BDNF、TrkB和p-TrkB表达。结果:龙眼肉缩短了AD小鼠的逃避潜伏期(P<0.01);增加了其平台穿越次数、停留时间和停留时间百分比(P<0.001);降低了AD小鼠海马APP、p-Tau蛋白水平(P<0.05);改变了AD小鼠粪便微生物在界、门、纲、目、科、属、种7个层面上的多样性差异,以属水平为例,使异常升高的拟普雷沃菌属、瘤胃球菌科_UCG-014属、普雷沃氏菌科_UCG-001属、理研菌科RC9_gut_group属、瘤胃梭菌属和瘤胃球菌属_1丰度显著降低(P<0.05),鼠杆菌属和毛螺菌科_UCG-001属丰度显著升高(P<0.01);并且提高了BDNF、p-TrkB及p-TrkB/TrkB相对表达(P<0.05)。结论:龙眼肉可以改善AD小鼠的学习记忆能力,调节菌群多样性、激活BDNF-TrkB信号通路可能是其抗AD的作用机制。

非受体酪氨酸激酶-信号转导和转录激活因子信号通路作为结肠癌治疗新靶点的研究进展

癌变的结肠细胞增殖、侵袭和转移时依赖血管生成及有利的肿瘤微环境。非受体酪氨酸激酶-信号转导和转录激活因子（JAK-STAT）信号通路参与慢性炎症相关的肿瘤发生、癌细胞增殖、肿瘤血管生成、免疫逃逸、肿瘤转移多个过程，因此有望成为分子靶向治疗的新靶点。现对JAK-STAT信号通路在结肠癌发生、发展中的研究进展进行综述，并初步探讨JAK-STAT在靶向治疗及预后评估方面的应用前景。

木犀草素对视网膜缺血-再灌注损伤(RIRI)大鼠TLR4/Syk/NF-κB信号通路及视网膜的影响

目的探讨木犀草素对视网膜缺血-再灌注损伤(RIRI)大鼠Toll样受体4(TLR4)/脾脏酪氨酸激酶(Syk)/核因子-κB(NF-κB)信号通路及视网膜的影响。方法40只SD大鼠随机分为对照组、模型组、木犀草素低剂量组(5 mg·kg^(-1))、木犀草素高剂量组(10 mg·kg^(-1)),每组10只,除对照组外,其余各组大鼠制备RIRI模型,造模成功后分别进行腹腔注射不同试剂处理,每天1次,持续7 d。各组大鼠给药结束后24 h行光学相干断层扫描(OCT)检查,测量视盘周围视网膜厚度;取各组大鼠视网膜行HE染色观察视网膜组织病理形态、行TUNEL染色观察视网膜组织细胞凋亡情况;行酶联免疫吸附试验(ELISA)测定各组大鼠视网膜中超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)水平,并检测大鼠视网膜中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平;利用Western blot检测各组大鼠视网膜TLR4/Syk/NF-κB信号通路相关蛋白表达水平。结果与对照组相比,模型组大鼠视网膜出现水肿、空泡变性及凋亡等损伤,视网膜厚度(156.31±18.76)μm、视网膜神经节细胞数(66.25±15.18)个·mm-1、SOD活性(50.33±1.98)U·mg^(-1)均显著降低(均为P<0.05),视网膜细胞凋亡率(21.36±2.04)%、视网膜中MDA(1.82±0.14)μmol·g^(-1)、TNF-α(98.42±11.25)g·L^(-1)、IL-6(87.34±7.62)g·L^(-1)含量及TLR4、p-Syk/Syk、p-NF-κB/NF-κB蛋白相对表达水平均显著升高(均为P<0.05)。与模型组相比,木犀草素低剂量组、木犀草素高剂量组大鼠视网膜水肿等损伤程度逐渐减轻,视网膜厚度(170.62±12.46)μm、(183.54±13.75)μm、视网膜神经节细胞数(86.74±16.21)个·mm-1、(105.44±14.23)个·mm-1、SOD活性(65.26±2.64)U·mg^(-1)、(73.48±3.13)U·mg^(-1)均依次增加(均为P<0.05),视网膜细胞凋亡率(16.75±1.55)%、(9.65±1.23)%、视网膜中MDA(1.23±0.12)μmol·g^(-1)、(0.86±0.09)μmol·g^(-1)、TNF-α(61.48±8.37)g·L^(-1)、(36.83±8.49)g·L^(-1)、IL-6(55.47±6.12)g·L^(-1)、(38.71±3.85)g·L^(-1)含量及TLR4、p-Syk/Syk、p-NF-κB/NF-κB蛋白相对表达水平均依次降低(均为P<0.05)。结论木犀草素可抑制RIRI大鼠TLR4/Syk/NF-κB信号激活,减轻视网膜组织氧化应激及炎症损伤,进一步减轻视网膜损伤。