酪氨酸激酶受体通路相关基因在原发胶质母细胞瘤中的表达及其意义

背景与目的:胶质母细胞瘤是颅内最常见的肿瘤之一,其发病率和死亡率均较高,但我们对其分子生物学机制仍了解甚少。本研究应用低密度表达谱芯片检测人脑原发胶质母细胞瘤组织中酪氨酸激酶受体通路相关基因的表达情况,进一步分析其表达变化的意义。方法:使用TaqMan低密度表达芯片技术检测26个酪氨酸激酶受体通路相关基因在10例原发胶质母细胞瘤及9例正常脑组织(脑外伤减压术中所取大脑组织)并通过统计学分析其在胶质母细胞瘤和正常脑组织中的表达差异。结果:在正常脑组织中,丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)系统的两个基因MAP2K1及MAP2K4的Ct值分别为1.6±1.7和2.2±2.1,而在原发胶质母细胞瘤中的Ct值分别为3.9±1.5和5.0±2.0,其与正常脑组织的Ct差值分别为-2.3和-2.8(P<0.05)。结论:MAP2K1和MAP2K4基因在原发胶质母细胞瘤中的表达明显下调;酪氨酸激酶受体通路相关基因中MAPK系统基因的表达差异可能与原发胶质母细胞瘤的发生、发展密切相关。

黄连解毒汤对脑梗死合并胃损伤大鼠干细胞因子/酪氨酸激酶受体信号通路的影响

目的:探讨黄连解毒汤对脑梗死合并胃损伤大鼠干细胞因子/酪氨酸激酶受体(SCF/C-kit)信号通路的影响。方法:将80只健康10周龄雄性Wistar大鼠随机分为模型组、黄连解毒汤组、奥美拉唑组、假手术组、正常组,以上各组再分设4 d组、7 d组,共10组。采用线栓法建立大脑中动脉梗死模型。黄连解毒汤组给予黄连解毒汤(27 mg/ml)混悬液,奥美拉唑组给予奥美拉唑(15 mg/ml)悬浊液,其余组给予1 ml 0.9%氯化钠溶液灌胃,4 d组连续灌胃4 d,7 d组连续灌胃7 d。采用HE染色法观察大鼠胃组织病理形态学变化,并进行病理损伤评分;采用实时荧光定量检测大鼠胃组织SCF、C-kit mRNA表达水平;采用Western blot检测大鼠胃组织中SCF、C-kit蛋白表达水平。结果:与正常组、假手术组比较,模型组、黄连解毒汤组、奥美拉唑组大鼠胃黏膜病理评分均明显升高(4、7 d组均P<0.01),胃组织SCF、C-kit mRNA和蛋白表达水平均明显降低(P<0.01);正常组、假手术组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。与模型组比较,黄连解毒汤组、奥美拉唑组大鼠胃黏膜病理评分均显著降低(4、7 d组均P<0.01),胃组织SCF、C-kit mRNA和蛋白表达水平均明显升高(P<0.01)。与奥美拉唑组比较,黄连解毒汤组大鼠胃黏膜病理评分均明显降低(P<0.05),胃组织SCF、C-kit mRNA和蛋白表达水平均明显升高(P<0.05)。结论:黄连解毒汤对脑梗死合并胃损伤大鼠的胃黏膜具有一定的保护作用,其机制可能与黄连解毒汤升高大鼠胃组织SCF、C-kit mRNA及蛋白的表达水平有关。

奥氮平介导环磷酸腺苷反应元件结合蛋白/脑源性神经营养因子/酪氨酸蛋白激酶受体B通路对精神分裂模型大鼠的神经修复作用

目的 探讨奥氮平通过对环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)/脑源性神经营养因子(BDNF)/酪氨酸蛋白激酶受体B(TrkB)通路的影响对精神分裂模型大鼠的神经修复作用。方法 将60只大鼠纳入对照组、模型组、奥氮平低、中、高剂量组,各组均10只。模型组、奥氮平低、中、高剂量组大鼠进行MK-801腹腔注射0.2 mg/(kg·d),对照组注射等量生理盐水。模型建立成功24 h后,奥氮平低、中、高剂量组分别以0.5、1.0、1.5 mg/(kg·d)奥氮平溶液灌胃,对照组、模型组同剂量生理盐水灌胃。按照共济失调和刻板行为标准对大鼠行为学进行评分;Morris水迷宫实验评定大鼠认知功能及学习能力;ELISA法检测大鼠血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)水平;观察海马组织病理学变化;检测海马区细胞凋亡及CREB/BDNF/TrkB通路相关蛋白表达。结果 与对照组比较,模型组大鼠共济失调、刻板行为评分、TNF-α、IL-6表达、细胞凋亡率极显著增加(P<0.01),奥氮平低、中剂量组显著增加(P<0.05)。与对照组比较,模型组大鼠跨越平台次数、目标象限停留时间、CREB、磷酸化CREB(p-CREB)、磷酸化TrkB(p-TrkB)、TrkB、BDNF蛋白相对表达极显著减少(P<0.01),奥氮平低、中剂量组显著减少(P<0.05)。与模型组比较,奥氮平低、中剂量组跨越平台次数、目标象限停留时间显著增加(P<0.05),奥氮平高剂量组极显著增加(P<0.01)。模型组以及奥氮平低剂量组中海马细胞肿大明显、细胞核破碎分裂、固缩,组织排列杂乱;奥氮平中、高剂量组大鼠海马细胞中少见破碎分裂以及核固缩现象,整体组织与对照组大鼠相似。结论 奥氮平对精神分裂症模型大鼠的神经修复作用机制涉及到改善大鼠认知功能受损、保护大鼠海马神经细胞以及激活CREB/BDNF/TrkB信号通路的表达。

基于干细胞生长因子/酪氨酸激酶受体信号通路探讨温和灸对肝郁脾虚证腹泻型肠易激综合征大鼠内脏高敏感的影响

目的:观察温和灸对肝郁脾虚证腹泻型肠易激综合征(IBS-D)模型大鼠干细胞生长因子(SCF)/酪氨酸激酶受体(c-kit)信号通路及内脏高敏感的影响,探讨温和灸治疗肝郁脾虚证IBS-D大鼠的可能作用机制。方法:将24只Wistar雄性大鼠随机分为正常组、模型组、西药组、温和灸组,每组6只。采用冰醋酸灌肠+束缚应激方式建立肝郁脾虚证IBS-D大鼠模型。西药组予匹维溴铵灌胃(15 mg/kg),每日1次;温和灸组选取双侧“天枢”“上巨虚”“太冲”予温和灸治疗,每次20 min,每日1次。两组均连续干预14 d。干预结束后,观察各组大鼠一般情况,检测稀便率(LSR);检测引起腹部回缩反射(AWR)达3分时的最小容量阈值;旷场实验检测大鼠直立次数、修饰次数及总穿格数;HE染色法观察各组大鼠结肠组织病理形态变化;甲苯胺蓝染色法检测结肠组织中肥大细胞(MC)计数;ELISA法检测大鼠血清5-羟色胺(5-HT)和P物质(SP)含量;实时荧光定量PCR法检测结肠组织SCF、c-kit的mRNA相对表达量;Western blot法检测大鼠结肠组织SCF、c-kit的蛋白相对表达量。结果:与正常组比较,模型组大鼠体质量、AWR达3分时的最小容量阈值降低(P<0.05),LSR升高(P<0.01),总穿格数、直立次数、修饰次数均减少(P<0.05),结肠组织中MC数量明显增加(P<0.01),血清中5-HT、SP含量明显升高(P<0.01),结肠组织SCF、c-kit的mRNA、蛋白的表达明显升高(P<0.01)。治疗后,与模型组比较,西药组、温和灸组大鼠体质量增加(P<0.05),AWR达3分时的最小容量阈值明显增加(P<0.01),LSR降低(P<0.05),总穿格数、直立次数、修饰次数均增加(P<0.05),结肠组织中MC计数减少(P<0.05),血清中5-HT、SP含量降低(P<0.01);与模型组比较,温和灸组大鼠结肠组织SCF、c-kit的mRNA、蛋白表达降低(P<0.05)。正常组大鼠结肠组织结构完整,无糜烂及水肿;模型组大鼠结肠组织黏膜层可见少量炎性细胞浸润;西药组大鼠结肠组织可见少量淋巴细胞聚集;温和灸组大鼠结肠组织可见少量中性粒细胞聚集。结论:温和灸可降低肝郁脾虚证IBS-D模型大鼠的内脏高敏感性,改善其腹痛、腹泻及精神状态等症状,其作用机制可能与下调SCF/c-kit信号通路的表达,减少MC数量,降低5-HT、SP水平有关。

龙眼肉调节肠道菌群和BDNF-TrkB通路抗AD的作用机制研究

目的:基于肠道菌群和脑源性神经营养因子(BDNF)-酪氨酸激酶受体B (TrkB)信号通路探讨龙眼肉抗阿尔茨海默病(AD)的作用机制。方法:采用煎煮法制备龙眼肉水提取物,采用D-半乳糖(140 mg·kg–1,ip)/AlCl3(20 mg·kg–1,ig)联合诱导建立小鼠AD模型,Morris水迷宫检测小鼠学习记忆能力,16S-rDNA测序检测小鼠粪便菌群多样性,Western blot检测小鼠海马区淀粉样前体蛋白(APP)、磷酸化Tau蛋白(p-Tau)、BDNF、TrkB和p-TrkB表达。结果:龙眼肉缩短了AD小鼠的逃避潜伏期(P<0.01);增加了其平台穿越次数、停留时间和停留时间百分比(P<0.001);降低了AD小鼠海马APP、p-Tau蛋白水平(P<0.05);改变了AD小鼠粪便微生物在界、门、纲、目、科、属、种7个层面上的多样性差异,以属水平为例,使异常升高的拟普雷沃菌属、瘤胃球菌科_UCG-014属、普雷沃氏菌科_UCG-001属、理研菌科RC9_gut_group属、瘤胃梭菌属和瘤胃球菌属_1丰度显著降低(P<0.05),鼠杆菌属和毛螺菌科_UCG-001属丰度显著升高(P<0.01);并且提高了BDNF、p-TrkB及p-TrkB/TrkB相对表达(P<0.05)。结论:龙眼肉可以改善AD小鼠的学习记忆能力,调节菌群多样性、激活BDNF-TrkB信号通路可能是其抗AD的作用机制。

人参二醇对APP-SH-SY5Y细胞中Tau蛋白磷酸化及Fyn/GluN2B信号通路的影响

目的:研究人参二醇(PD)对转染APP基因的人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y(APP-SH-SY5Y)中Tau蛋白磷酸化的影响及其作用机制。方法:采用分子对接技术验证PD与非受体酪氨酸激酶Fyn的靶向性。在体外培养SH-SY5Y细胞,构建APP-SH-SY5Y细胞模型和绿色荧光蛋白(GFP)-SH-SY5Y细胞模型(对照细胞),通过检测细胞中β淀粉样蛋白(Aβ1-42)的表达来验证APP-SH-SY5Y细胞模型是否构建成功。以GFP-SH-SY5Y细胞为对照,采用CCK-8法检测5、10、20、30、40μmol/L的PD和125、250、500、1000、2000 nmol/L的PP2(Fyn抑制剂,阳性对照)作用24 h对APP-SH-SY5Y细胞存活率的影响,以确定最佳给药浓度。以APP-SH-SY5Y细胞为对象,分别检测最佳浓度PD、PP2作用24后细胞中Ca2+浓度及磷酸化Tau蛋白(p-Tau)/Tau、磷酸化非受体酪氨酸激酶Src(p-Src)/Fyn、磷酸化谷氨酸受体2B(p-GluN2B)/GluN2B比值。结果:分子模拟对接结果显示,PD可靶向结合Fyn蛋白。与GFP-SH-SY5Y细胞比较,APP-SH-SY5Y细胞中Aβ1-42蛋白表达水平显著升高(P<0.01)。PD和PP2的最佳作用浓度分别为20μmol/L和500 nmol/L。20μmol/L PD、500 nmol/L PP2均可显著升高细胞的存活率,显著降低细胞中Ca2+浓度以及p-Tau/Tau、p-Src/Fyn、p-GluN2B/GluN2B比值。结论:PD可通过抑制Fyn/GluN2B信号通路来降低APP-SH-SY5Y细胞中Ca2+浓度及Tau蛋白的磷酸化水平。

脑源性神经营养因子及其酪氨酸激酶受体B信号通路在神经性疾病研究进展

本文通过查阅大量的文献资料,对脑源性神经营养因子(BDNF)和BDNF/酪氨酸激酶受体B(TrkB)信号通路的研究趋势、信号通路阐述和信号通路涉及的神经性疾病进行综述,以期对研究神经性疾病及治疗的机制起引导启发作用。

艾司西酞普兰联合氟西汀治疗老年脑卒中后抑郁的疗效及对海马脑源性神经营养因子-酪氨酸蛋白激酶受体B通路的影响

目的探讨艾司西酞普兰联合氟西汀治疗老年脑卒中后抑郁的疗效及对海马脑源性神经营养因子(BDNF)-酪氨酸蛋白激酶受体B(TrkB)通路的影响。方法选取2018年1月至2021年12月武警山东省总队医院收治的脑卒中后抑郁患者89例作为研究对象,按照治疗方法不同分为两组。对照组(n=44)采用氟西汀治疗,观察组(n=45)采用艾司西酞普兰联合氟西汀治疗。比较两组临床疗效,汉密尔顿抑郁量表(HAMD)、Barthel评分,血清BDNF、TrkB水平及成本-效果。结果观察组治疗有效率(91.11%)高于对照组(75.00%)(χ^(2)=4.121,P<0.05)。治疗后,观察组HAMD评分低于对照组,Barthel评分及血清BDNF、TrkB水平高于对照组(P<0.05)。观察组成本-效果低于对照组(P<0.05)。结论艾司西酞普兰联合氟西汀治疗老年脑卒中后抑郁疗效显著,能有效改善患者抑郁症状,提高生活自理能力,调控血清BDNF、TrkB水平,且经济性更佳。

电针联合五子衍宗丸通过调节BDNF/TrkB/CREB信号通路对帕金森病小鼠的治疗作用

目的:观察电针联合五子衍宗丸对帕金森病小鼠黑质脑源性神经营养因子(BDNF)/酪氨酸激酶受体B(TrkB)/环磷酸腺苷反应原件结合蛋白(CREB)通路的影响。方法:将108只雄性C57BL/6小鼠按照随机数字表法分为正常组、模型组、电针组、五子衍宗丸组、联合观察组、抑制剂组、电针+抑制剂组、五子衍宗丸+抑制剂组、联合+抑制剂组9组,每组12只。除正常组、抑制剂组外,其余组给予1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)腹腔注射造模,第1天15 mg/kg,第2天20 mg/kg,第3~7天30 mg/kg,均0.2 mL/次,1次/d。自造模第1天进行干预,电针观察组别给予电针干预,五子衍宗丸观察组别早晚给予五子衍宗丸药液,抑制剂注射组别腹腔注射TrkB抑制剂ANA-12,连续干预14 d。干预结束后对比各组步态实验、旷场实验、爬杆实验结果,小鼠黑质酪氨酸羟化酶(TH)及BDNF、TrkB、CREB表达。结果:与正常组比较,模型组出现明显的运动障碍,黑质TH平均荧光强度及TH、BDNF、TrkB、CREB蛋白表达低(P<0.05);与模型组比较,电针组、五子衍宗丸组、联合观察组运动障碍均得到改善,黑质TH平均荧光强度及TH、BDNF、TrkB、CREB蛋白表达高(P<0.05);与电针组、五子衍宗丸组比较,联合观察组的运动障碍得到改善,其他指标表达增高(P<0.05)。结论:电针联合五子衍宗丸可能通过调控BDNF/TrkB/CREB信号通路来改善PD小鼠的运动障碍,保护多巴胺能神经元。

山茱萸新苷经GFRα1/Ret信号通路对慢性脑低灌注大鼠认知功能障碍的改善作用

目的:探讨山茱萸新苷经胶质细胞源性神经营养因子受体α1(GFRα1)/受体酪氨酸激酶(Ret)信号通路对慢性脑低灌注大鼠认知功能障碍的改善作用。方法:50只SD大鼠采用随机数字表法分为5组:假手术组、模型组、阳性对照组(石杉碱甲,250μg·kg-1)、山茱萸新苷低、高剂量组(67.5,270 mg·kg-1),每组10只。除假手术组外,其余各组采用双侧颈总动脉闭塞(BCCAO)法制作慢性脑低灌注大鼠模型。造模成功后,山茱萸新苷低、高剂量组和阳性对照组分别灌胃给予相应药物,假手术组和模型组给予等量生理盐水,1次/d,持续给予21 d。给药结束后,进行Morris水迷宫实验;HE染色观察大鼠海马组织病理学改变;检测海马组织中胶质细胞源神经营养因子(GDNF)、GFRα1、Ret、磷酸化-Akt(p-Akt)、B细胞淋巴瘤白血病-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)水平。结果:模型组大鼠海马区细胞结构疏松,海马萎缩、神经元变性坏死;与模型组相比,山茱萸新苷各剂量组和阳性对照组大鼠海马区细胞结构和神经元形态得以修复,神经元变性坏死现象得到改善。与假手术组比较,模型组大鼠目标象限游泳时间、平均游泳速度、GDNF、GFRα1、Ret、p-Akt和Bcl-2水平降低,Bax水平增加(P<0.05);与模型组比较,山茱萸新苷各剂量组和阳性对照组大鼠目标象限游泳时间、平均游泳速度、GDNF、GFRα1、Ret、p-Akt和Bcl-2水平增加,Bax水平降低(P<0.05),且山茱萸新苷高、低剂量组及阳性对照组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论:山茱萸新苷对慢性脑低灌注大鼠认知功能障碍有改善作用,其机制可能与GFRα1/Ret信号通路的激活有关。

红景天甙调控BDNF/TrkB通路对听觉剥夺模型大鼠听皮层可塑性的影响

目的 探讨红景天甙调控脑源性神经生长因子(BDNF)/受体酪氨酸激酶(Trk)B通路对听觉剥夺模型大鼠听皮层可塑性的影响。方法 肌内注射庆大霉素诱导建立听觉剥夺模型大鼠,随机分为模型组、K252a(BDNF/TrkB通路抑制剂,100μg/kg)组、红景天苷(50 mg/kg)组、红景天苷(50 mg/kg)+K252a(100μg/kg)组,每组12只,另取12只大鼠肌内注射等剂量生理盐水,设为对照组,以药物分组处理后,测定大鼠听性脑干反应(ABR)阈值,评测其听力情况;以扫描电镜观察各组大鼠耳蜗组织病理改变;以苏木素-伊红(HE)染色检测各组大鼠听皮层神经元病理改变;以试剂盒测定听皮层及耳蜗组织活性氧(ROS)水平;以酶联免疫吸附试验(ELISA)测定大鼠血清致炎因子白细胞介素(IL)-18、肿瘤坏死因子(TNF)-α、干扰素(IFN)-γ水平;以Western印迹法检测大鼠听皮层及耳蜗组织BDNF/TrkB通路蛋白(p-TrkB/TrkB、BDNF)表达。结果 与对照组相比,模型组毛细胞结构改变,大小不一,且排列紊乱,数目缺失,与螺旋神经节细胞周围突结合发生裂隙,同时听皮层神经元萎缩变小,胞质减少,细胞核出现固缩碎裂,且分布杂乱,数目明显减少,听皮层神经元与耳蜗组织均出现明显病理损伤,ABR阈值、ROS水平、血清IL-18、TNF-α及IFN-γ水平显著升高(P<0.05),p-TrkB/TrkB、BDNF蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。与模型组、红景天苷+K252a组分别相比,红景天苷组听皮层神经元与耳蜗组织病理损伤均减轻,ABR阈值、ROS水平、血清IL-18、TNF-α及IFN-γ水平均降低(P<0.05),p-TrkB/TrkB、BDNF蛋白表达水平均升高(P<0.05);K252a组听皮层神经元与耳蜗组织病理损伤均加重,ABR阈值、ROS水平、血清IL-18、TNF-α及IFN-γ水平均升高(P<0.05),p-TrkB/TrkB、BDNF蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。结论 红景天苷可清除ROS,减少炎性因子合成释放,抑制炎症,减轻听觉剥夺模型大鼠听皮层神经元与耳蜗组织损伤,改善其听力降低症状,通过激活BDNF/TrkB通路实现。

百会穴久留针法改善缺血性脑卒中小鼠神经功能的作用及机制

目的研究百会穴久留针法通过脑源性神经营养因子(BDNF)/酪氨酸受体激酶B(TrkB)通路改善缺血性脑卒中小鼠神经功能的作用及机制。方法选择雄性C57BL/6J小鼠48只,随机分为假手术1组、模型1组、久留针1组、普通留针组,每组12只。后3组采用线栓法制备缺血性脑卒中模型,手术造模后第1天起久留针1组和普通留针组分别给予百会穴久留针和普通留针治疗,连续14 d。另选择雄性C57BL/6J小鼠40只,随机分为假手术2组、模型2组、久留针2组、久留针3组,每组10只。后3组采用线栓法制备缺血性脑卒中模型,针灸治疗前分别给予腺相关病毒100μl单次尾静脉注射。采用改良神经功能缺损评分(mNSS)及水迷宫实验的逃避潜伏期、目标象限停留时间、穿越原平台次数评价神经功能。结果与假手术1组比较,模型1组mNSS评分、目标象限停留时间、穿越原平台次数及缺血脑组织BDNF、TrkB表达明显降低,细胞凋亡率及裂解型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);与模型1组比较,久留针1组和普通留针组mNSS评分、目标象限停留时间、穿越原平台次数及缺血脑组织BDNF、TrkB表达明显增加,细胞凋亡率及裂解型Caspase-3表达明显降低,且久留针1组上述变化较普通留针组更为显著,差异有统计学意义(P<0.05)。与久留针2组比较,久留针3组mNSS评分、目标象限停留时间、穿越原平台次数及缺血脑组织中BDNF表达明显降低(P<0.05),细胞凋亡率及裂解型Caspase-3表达明显增加[(16.41±2.25)%vs(7.59±1.09)%;1.46±0.16 vs 0.94±0.12,P<0.05]。结论百会穴久留针治疗对缺血性脑卒中小鼠神经功能的改善作用更为显著,激活BDNF/TrkB通路是其发挥神经保护作用的相关分子机制。

miR-138调控TrkA-TRPV1信号通路对KOA模型大鼠软骨损伤的影响

目的探究miR-138调控TrkA-TRPV1信号通路对膝骨性关节炎(KOA)模型大鼠软骨损伤的影响。方法选取40只健康SD大鼠,随机分为正常组、模型组、沉默组、过表达组,分别进行干预。对比各组大鼠行为学、软骨组织学评分,检测关节液中炎性因子[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素(IL)-1、IL-6]及软骨组织中骨代谢标志物[基质金属蛋白酶(MMP-13)、Ⅱ型胶原(ColⅡ)]、TrkA、TRPV1、miR-138表达水平,分析miR-138对KOA大鼠软骨损伤的影响。结果与正常组相比,模型组、沉默组、过表达组大鼠行为学、软骨组织学评分升高(P<0.05);与过表达组相比,模型组、沉默组大鼠行为学、软骨组织学评分升高(P<0.05)。与正常组相比,模型组、沉默组、过表达组大鼠TNF-α、IL-1、IL-6水平及MMP-13、TrkA、TRPV1表达升高,ColⅡ、miR-138表达降低(P<0.05);与过表达组相比,模型组、沉默组大鼠TNF-α、IL-1、IL-6水平及MMP-13、TrkA、TRPV1表达升高,ColⅡ、miR-138表达降低(P<0.05)。结论miR-138可缓解KOA模型大鼠软骨损伤,其机制或与TrkA-TRPV1信号通路的抑制相关。

润肠颗粒对小鼠便秘的改善作用及机制

目的探讨润肠颗粒对小鼠便秘的改善作用及潜在机制。方法将小鼠随机分为正常对照组、模型组、润肠颗粒低剂量组(5 g/kg)、润肠颗粒高剂量组(10 g/kg)和莫沙必利组(0.003 g/kg,阳性对照),每组6只。后4组小鼠灌胃洛哌丁胺(0.004 g/kg),每天2次,持续给药3 d后开始药物治疗,正常对照组和模型组小鼠灌胃纯水,各药物组小鼠灌胃相应药物,连续给药7 d。末次给药后,测定小鼠粪便含水量和肠道推进率,观察结肠和回肠组织结构以及结肠黏液分泌量,检测结肠组织中酪氨酸激酶受体c-kit、黏蛋白2(MUC2)、干细胞因子(SCF)蛋白表达水平以及炎症因子[肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、IL-1β、诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)]和促进肠道运动相关因子[神经型一氧化氮合酶(nNOS)、平滑肌肌球蛋白轻链激酶(smMLCK)、5-羟色胺受体4(5-HT4R)、MUC2、SCF、c-kit]mRNA表达水平。结果与模型组比较,润肠颗粒低、高剂量组和莫沙必利组小鼠粪便含水量,肠道推进率,结肠组织中c-kit蛋白表达水平和MUC2、SCF蛋白相对表达量以及促进肠道运动相关因子(润肠颗粒低剂量组nNOS和SCF除外)mRNA相对表达量均显著增加(P<0.05或P<0.01);炎症因子mRNA相对表达量均显著降低(P<0.05或P<0.01);结肠和回肠损伤均改善;润肠颗粒高剂量组小鼠结肠黏液分泌量显著增加(P<0.01)。结论润肠颗粒具有润肠通便的作用,能够改善小鼠便秘,其润肠机制可能与促进结肠黏液分泌和MUC2表达有关,其通便机制可能与激活SCF/c-kit信号通路有关。

针刺对PSCI模型大鼠海马蛋白BDNF、TrKb表达的影响

目的观察针刺对卒中后认知障碍(PSCI)模型大鼠海马脑源性神经营养因子(BDNF)/酪氨酸激酶受体B(TrKb)信号通路的影响,探究针刺疗法对PSCI的改善作用及其可能作用机制。方法40只SD雄性大鼠,随机取8只为假手术组(Sham),其余大鼠采用线栓法建立右侧大脑中脑动脉闭塞(MCAO)模型,造模完成后进行Zea-Longa神经功能评分和Morris水迷宫筛选认知障碍大鼠,并随机分为模型组(MCAO)、针刺组(MAS)。MAS组给予百会、神庭、风府、神门针刺治疗,每日1次,每次15 min,每周6次,共28 d。Sham组及MCAO组仅进行抓摸后放回笼中。结果Zea-Longa神经功能评分和水迷宫实验结果显示,MAS组较MCAO组神经缺损和学习记忆能力改善更明显(P<0.05);HE染色结果显示,MAS组较MCAO组神经元变性减少,组织结构紧凑,神经元数量增多;WB、RT-PCR结果显示,MAS组较MCAO组BDNF、TrKb表达水平上升(P<0.05)。结论针刺可提高PSCI模型大鼠学习记忆能力,其机制可能与促进BDNF/TrKb信号通路有关。

孕期咖啡因暴露所致雌性子代胎鼠肾脏宫内发育迟缓及其发生机制

目的观察孕期咖啡因暴露(PCE)♀胎肾发育病理学变化和皮质酮(CORT)处理对原代后肾间充质细胞基因表达的影响,探究PCE影响胎鼠肾脏发育的可能机制。方法受孕Wistar大鼠于孕9-20 d(GD 9-20)经口灌胃咖啡因(30、120 mg·kg^(-1)·d^(-1)),孕鼠于GD20处死,取♀胎鼠并收集肾脏,检测肾脏病理学变化和基因表达;在原代后肾间充质细胞上给予不同浓度CORT(250、500、1 000μg·L^(-1))处理24 h,检测细胞基因表达。结果与对照组相比,PCE组♀胎肾肾小球的球囊空虚,鲍曼囊腔变大,毛细血管网发育不良,GDNF/c-Ret信号通路抑制;CORT处理原代后肾间充质细胞下调AT_1R/AT_2R及GDNF/c-Ret信号通路的表达。结论 PCE♀胎鼠肾脏发育不良,其机制与PCE所致高血CORT下胎肾局部AT_1R/AT_2R及GDNF/c-Ret信号通路的表达抑制有关。

苦参碱对缺氧/复氧小鼠海马神经元HT22细胞活力、凋亡的影响及机制研究

目的探讨苦参碱对缺氧/复氧(H/R)小鼠海马神经元HT22细胞活力、凋亡及脑源性神经营养因子(BDNF)/酪氨酸激酶受体B(TrkB)信号通路的影响。方法将处于对数生长期的HT22细胞分为对照组、H/R组及苦参碱低、中、高浓度组。对照组HT22细胞用无血清DMEM培养基在正常环境下培养28 h;H/R组HT22细胞在缺氧培养箱中维持4 h后在常氧条件下培养24 h;苦参碱低、中、高浓度组的H/R处理同H/R组,同时给予浓度分别为10、20、30μmol/L的苦参碱进行干预,培养24 h。检测HT22细胞活力、凋亡情况及凋亡相关蛋白[B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)]和BDNF/TrkB信号通路蛋白水平。结果与对照组比较,H/R组HT22细胞吸光度值、存活率、Bcl-2、BDNF、TrkB蛋白水平降低,细胞凋亡率、Bax、Caspase-3蛋白水平升高,差异有统计学意义(P<0.05);与H/R组比较,苦参碱低、中、高浓度组HT22细胞吸光度值、存活率、Bcl-2、BDNF、TrkB蛋白水平依次升高,细胞凋亡率、Bax、Caspase-3蛋白水平依次降低,差异有统计学意义(P<0.05),呈浓度依赖性。结论苦参碱能减轻H/R导致的神经元HT22细胞活力的降低,抑制HT22细胞凋亡,其机制可能与激活BDNF/TrkB信号通路有关。

基于雌激素受体通路探讨青娥丸对CUMS大鼠的抗抑郁机制

目的:研究青娥丸对慢性温和不可预知应激模型(CUMS)大鼠的抗抑郁效果,及其对雌激素受体及相关信号通路的调控作用,探讨青娥丸的抗抑郁机制。方法:54只SD大鼠建立CUMS抑郁大鼠模型,实验设为正常组、模型组、草酸依他普伦组(6.3 mg·kg^-1)及青娥丸低、中、高剂量组(1.71,5.13,15.39 g·kg^-1)。CUMS造模4周后给予各组相应药物治疗2周,采用行为学[糖水消耗实验(SPT),强迫游泳实验(FST),旷场实验(OFT)]评价大鼠抑郁状态;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测雌激素受体α(ERα),雌激素受体β(ERβ),脑源性神经营养因子(BDNF)及酪氨酸激酶受体B(Trk B)的蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠的糖水消耗率及旷场得分均下降(P<0.05,P<0.01),游泳不动时间显著延长(P<0.01),同时ERα,ERβ,BDNF和Trk B的蛋白表达水平下降(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,各给药组大鼠的行为学表现得到改善,糖水消耗率及旷场得分增加(P<0.05,P<0.01),游泳不动时间减少(P<0.05),同时ERα,ERβ,BDNF和Trk B蛋白的表达明显上调(P<0.05,P<0.01),其中青娥丸中剂量组的调节作用更为显著。结论:青娥丸可改善CUMS模型大鼠的抑郁样行为,其机制可能与上调ERα,ERβ的表达,激活雌激素受体介导的ERβ/BDNF/Trk B通路起到神经保护作用有关。

消癥止痛汤联合脑针治疗子宫内膜异位症大鼠的作用机制探讨

目的:通过观察消癥止痛汤及脑针对子宫内膜异位症(Endometriosis,EMs)大鼠模型血管内皮生长因子(Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF)、促血管生成素-2(Angiopoietin-2,Ang-2)、异位病灶及其周围组织中对神经纤维蛋白质基因产物9.5(Protein Gene Product 9.5,PGP9.5)表达阳性的神经纤维密度、脑源性神经营养因子/酪氨酸激酶受体B(Brainderived Neurotrophic Factor/Tyrosine Receptor Kinase B,BDNF/TrkB)信号通路的影响,从抗神经血管生成的角度探讨其治疗机制。方法:采用自体移植法对SD大鼠进行EMs造模,将造模成功的32只大鼠随机分为4组,每组8只,分别为模型组、中药组、脑针组和针药结合组,6只未造模的大鼠作为假手术组,根据分组情况给予灌胃给药及脑针治疗,4周后,分别用酶联免疫吸附剂测定法(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA)对大鼠静脉血清中VEGF、Ang-2水平进行测定,用免疫组化(Immunohistochemistry,IHC)法对异位病灶中PGP9.5进行测定,用蛋白质免疫印迹(Western Blot)法对BDNF/TrkB信号通路中的关键因子BDNF和TrkB蛋白进行测定。结果:在VEGF、Ang-2、PGP9.5水平上,与假手术组相比,模型组明显升高,中药组、脑针组干预后均有所下降,且中药组效果优于脑针组,针药结合组下降最为明显;在BDNF和TrkB蛋白表达水平上,与假手术组相比,模型组明显上调,中药组及脑针组有所下调,中药组效果优于脑针组,且针药结合组和中药组的表达差异无统计学意义。结论:消癥止痛汤联合脑针对EMs具有治疗作用,其作用机制可能是通过改善VEGF、Ang-2、PGP9.5水平,调节BDNF/TrkB信号通路中的关键因子BDNF、TrkB,从而抗神经血管异常生成而实现的。

食管癌化疗耐药相关基因的初步筛选及其临床意义

目的初步筛选食管癌细胞中的耐药相关基因,分析其与食管癌患者预后不良的相关性,探讨其调控食管癌耐药的潜在机制。方法分析GDSC数据库中收录的食管癌细胞系对药物敏感性的数据,筛选出同时对顺铂和多西他赛相对敏感或耐药的细胞系;借助R语言edgeR软件包,以log2(变化倍数)大于1或小于–1且P<0.05为筛选标准,对两组细胞系转录组数据进行差异表达基因分析;选择在耐药组中相对高表达的基因进行GO生物学过程富集聚类分析,了解其可能调控的与耐药相关的信号通路;结合文献报道,获得新的可能与化疗耐药相关的基因。在食管癌患者肿瘤组织的转录组数据中分析所获得的基因的表达水平与患者临床病理特征及预后的相关性,最终通过STRING数据库在线预测与筛选获得的基因表达产物互作的蛋白,分析其发挥作用的潜在机制。结果初步筛选获得同时对顺铂和多西他赛相对耐药和敏感的食管癌细胞系各5株;分析耐药和敏感两组细胞系的转录组数据,最终共筛选获得1097个差异表达基因,包括在耐药组中高表达的基因532个、低表达的基因565个。将耐药组高表达的基因进行GO富集分析,发现受体蛋白酪氨酸激酶通路被显著富集,该通路中的差异表达基因FGR的表达水平与临床食管癌患者肿瘤T分期(P=0.021)、临床分期(P=0.007)及预后(P=0.0021)显著相关。蛋白相互作用分析表明,FGR与多个蛋白直接或间接互作,FGR可能主要以激酶的形式发挥作用。结论受体蛋白酪氨酸激酶通路与食管癌细胞耐药显著相关,该信号通路中的FGR基因表达水平与食管癌患者的临床病理分期及预后显著相关,其可能通过磷酸化下游靶蛋白进而调控食管癌细胞的耐药。