推拿影响坐骨神经损伤大鼠行为学及神经营养素3、酪氨酸激酶受体C表达的研究

目的观察推拿对坐骨神经损伤大鼠行为学、神经营养素3(neurotrophin-3,NT-3)、酪氨酸激酶受体C(tyrosine receptor kinase C,TrkC)表达的影响,研究推拿修复坐骨神经损伤的机理。方法将大鼠分为正常组、假手术组、模型组、模型对照组、推拿组,采用大鼠坐骨神经夹持损伤法于右侧股骨中段下方夹持神经进行造模,7天后进行推拿干预,共20次。干预10次、20次后,分别通过坐骨神经功能指数(sciatic functional index,SFI)、斜板试验观察各组大鼠的行为学变化;再通过免疫组化法检测各组大鼠脊髓腹角NT-3、TrkC的表达情况,最后对各组数据进行统计分析。结果模型组和模型对照组大鼠行为学检测提示坐骨神经损伤大鼠的运动功能明显降低,在推拿干预后,斜板试验明显升高,神经功能恢复情况优于模型组和模型对照组(P<0.05);SFI有一定程度恢复,负值较模型组、模型对照组高,但差异无统计学意义(P>0.05)。模型组、模型对照组及推拿组脊髓NT-3、TrkC表达与正常组相比差异均有统计学意义(P<0.05),推拿组NT-3表达与模型组相比差异也有统计学意义(P<0.05),推拿组更高。结论中医推拿可以改善神经损伤大鼠的行为学表现,可能是通过促进NT-3及其受体TrkC的表达,发挥抑制细胞凋亡,促神经元存活的作用,最终实现促进神经功能恢复,改善其运动功能。

成年大鼠脊髓全横断损伤后酪氨酸激酶受体C在脊髓和大脑皮层的表达(英文)

目的研究神经营养因子3(neurotrophin-3, NT-3)的受体—酪氨酸激酶受体C(tyrosine kinase receptor C, TrkC)在脊髓损伤(spinal cord injury, SCI)后神经重塑中的作用。方法研究脊髓全横断损伤大鼠手术后第1、3、7和14 d时,低位胸髓节段和大脑中央前回TrkC的表达。结果损伤节段(T10-T11)双侧和临近节段(T9和T12)的TrkC蛋白水平在术后1-7 d显著下调,而在术后14 d快速增强。此外,TrkC mRNA表达水平的暂时性变化与TrkC蛋白的变化模式相似。TrkC蛋白和mRNA在损伤节段(T10-T11)的水平显著高于在临近节段(T9和T12)的水平。此外,TrkC蛋白和mRNA在吻侧节段的水平高于在尾侧节段的水平。与脊髓不同的是,运动皮层中并未检测到TrkC蛋白,并且TrkC mRNA的表达水平也很低。结论 TrkC可能与脊髓损伤后的神经功能重塑有关。

神经营养因子3与酪氨酸激酶受体C在卒中后抑郁模型大鼠额前皮质的表达

目的 探讨神经营养因子3（neurotrophic factor-3,NT-3）及其受体酪氨酸激酶受体C （tyrosine kinase receptors,TrkC）mRNA及蛋白在脑卒中后抑郁（post stroke depression,PSD）模型大鼠额前皮质的表达变化.方法 将实验大鼠进行行为学评分（Open-field法）,评分相近的大鼠被分为4组：正常组、抑郁组、卒中组及PSD组,每组13只.抑郁组：采用孤养法结合慢性不可预见的中等应激刺激（chronic unpredictable mild stress,CUMS）建立;卒中组：利用线栓法建立局灶性脑缺血大鼠模型;PSD组：动物建成脑缺血模型后孤养再加以CUMS方法建立PSD模型,并与正常对照组、卒中组及抑郁组作比较.于造模后第29天应用免疫组化及RT-PCR检测各组大鼠额前皮质NT-3及其高亲和力受体TrkC的免疫阳性细胞及mRNA的表达情况.结果 免疫组化实验结果发现,PSD组额前皮质NT-3免疫阳性细胞数[（10.11±2.89）个/视野]较正常对照组明显减少[（19.00±12.41）个/视野] （P〈0.05）,其余各组相比差异无统计学意义（P〉0.05）;PSD组大鼠额前皮质TrkC免疫阳性细胞数[（19.56±5.66）个/视野]较正常对照组[（25.11±3.95）个/视野]及脑卒中组[（29.67±7.38）个/视野]明显减少（P〈0.05）;抑郁组免疫阳性细胞数[（19.00±5.61）个/视野]也较正常对照组[（25.11±3.95）个/视野]及脑卒中组（29.67±7.38个/视野）明显减少（P〈0.05）;其余各组相比差异无统计学意义（P〉0.05）.RT-PCR检查结果显示各组大鼠额前皮质组织中均有 GAPDH、NT3和 TrkCmRNA的表达, PSD组大鼠额前皮质NT-3的表达明显低于正常对照组（P〈0.05）;其余各组比较差异无统计学意义（P〉0.05）;各组TrkCmRNA表达差异无统计学意义（P〉0.05）.结论 PSD大鼠额前皮质NT-3及其受体TrkC的表达减少可能与PSD发病有关.

推拿影响坐骨神经损伤大鼠NT-3及其受体TrkC表达的研究

目的:观察推拿对坐骨神经损伤大鼠行为学、NT-3、TrkC的影响,探讨推拿促进坐骨神经损伤修复的机制。方法:采用大鼠坐骨神经夹持损伤模型,通过斜板实验、BBB评分观察正常组、假手术组、模型组、模型对照组、推拿组大鼠的行为学变化;通过免疫组化染色观察各组大鼠脊髓腹角NT-3、TrkC的表达情况,最后统计比较各组差异。结果:模型组和模型对照组大鼠行为学检测提示坐骨神经损伤大鼠的运动功能明显降低,在推拿干预后,斜板试验、BBB评分明显升高,神经功能恢复情况优于模型组和模型对照组;模型组、模型对照组及推拿组NT-3、TrkC表达与正常组相比均有统计学差异,推拿组NT-3表达与模型组相比也有显著差异,推拿组更高。结论:中医推拿可以通过促进NT-3及其高亲和力受体TrkC的表达,发挥抑制细胞凋亡,促神经元存活的作用,最终改善坐骨神经损伤大鼠的运动功能,促进神经功能恢复。

下调酪氨酸激酶受体体C蛋白表达对膀胱癌细胞SCaBER的增殖抑制作用

【目的】通过检测膀胱癌细胞系中酪氨酸激酶受体C(tyrosine kinase receptor C,TrkC)中的表达水平及小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)干涉膀胱癌细胞中TrkC的表达,分析TrkC在膀胱癌中的作用。【方法】采用RT-PCR和Western blotting的方法检测人膀胱癌细胞株5 637、T24、SCaBER中TrkC的表达,根据TrkC基因序列设计并合成siRNA,构建质粒。用脂质体将p Silencer/TrkC和对照空载体p Silencer转染人膀胱癌细胞株SCaBER,通过Western blotting检测转染细胞的TrkC表达情况,绘制细胞生长曲线,克隆形成实验检测TrkC对SCaBER细胞增殖的影响的影响。【结果】RT-PCR和Western blotting结果均表明人膀胱癌细胞株5 637、T24、SCaBER中TrkC的表达水平明显高于人正常膀胱移行上皮细胞SV-HUC-1;成功利用siRNA下调SCaBER细胞中TrkC的表达后,细胞生长曲线及克隆形成实验结果显示SCaBER细胞出现生长抑制。【结论】TrkC在膀胱癌细胞中的表达高于正常膀胱上皮细胞,下调TrkC表达可以抑制膀胱癌细胞SCaBER增殖,TrkC可能成为膀胱癌基因治疗的新靶点。

SCF/c-Kit信号通路通过抑制肥大细胞增殖调控影响病理性瘢痕形成的研究

目的探讨配体干细胞因子/c-KIT原癌基因(SCF/c-kit)对肥大细胞增殖的影响,并进一步探讨其在病理性瘢痕形成中的作用。方法收集病理性瘢痕组织和正常组织,通过甲苯胺蓝染色法检测组织中肥大细胞数目,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测患者血清中干细胞因子SCF的表达,蛋白质印迹法(Western blotting)检测组织中SCF和其受体c-Kit的表达。建立病理性瘢痕裸鼠模型,16 d后将造模成功的裸鼠随机分为模型+沉默阴性对照(si-NC)组和模型+si-SCF组,分别于裸鼠瘢痕内注射si-NC、si-SCF质粒和脂质体混合液0.25 mL,另设对照组,注射等体积磷酸盐缓冲液(PBS)。7 d后收集标本,游标卡尺测量裸鼠瘢痕体积大小,V.G染色检测瘢痕组织Ⅰ型胶原含量,甲苯胺蓝染色评估瘢痕组织肥大细胞数目,Western blotting检测组织中SCF和c-Kit的表达。结果病理性瘢痕患者的瘢痕组织出现大量肥大细胞,同时在病理性瘢痕患者血清中发现SCF高表达,而且在其瘢痕组织中SCF和c-Kit蛋白表达也增多;在病理性瘢痕模型裸鼠体内沉默SCF,抑制了c-Kit的表达,减小了模型裸鼠的瘢痕体积,降低了瘢痕组织中Ⅰ型胶原含量,还抑制了肥大细胞增殖。结论SCF/c-Kit信号通路可能是通过抑制肥大细胞增殖,来调控病理性瘢痕的形成。SCF/c-Kit的表达失控可能也是病理性瘢痕形成的一个重要诱因。

脑卒中后抑郁大鼠小脑NT-3及其受体Trk-C表达变化

目的探讨脑卒中后抑郁(Post stroke depression,PSD)大鼠小脑神经营养因子3(Neurotrophic factor-3,NT-3)及其受体Trk-C的表达变化,了解神经营养因子在脑卒中后抑郁大鼠小脑中的作用。方法根据行为学评分分数,将得分相近的52只健康成年SD大鼠随机分为四组:正常组、卒中组、抑郁组、PSD组,每组13只。脑卒中组:采用线栓法[1]建立局灶性脑缺血大鼠模型;抑郁组:采用孤养法并给予慢性不可预见的中等应激刺激(Chronic unpredictable mild stress,CUMS)造模;PSD组:采用线栓法建立局灶性脑缺血大鼠模型后再加以CUMS和孤养法造模。于造模后29 d各组取0.5 cm厚,约100 mg的小脑。采用免疫组化及RT-PCR法检测各组大鼠小脑组织中NT-3及Trk-C的免疫阳性细胞及mRNA的表达。结果免疫组化结果显示PSD组小脑组织中NT-3免疫阳性细胞数(15.67±6.70个/视野)较正常对照组(24.11±9.17个/视野)明显减少(P<0.05),其余各组相比差异无统计学意义。RT-PCR检测结果显示各组大鼠小脑组织中均有NT-3、Trk-C mRNA的表达。PSD组NT-3表达最少,与各组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 PSD大鼠小脑NT-3表达减少可能与PSD发病有关。

神经营养因子-3 mRNA及其受体TrkC mRNA在大鼠变应性鼻炎鼻黏膜中的表达

目的探讨神经营养因子-3 mRNA（neurotrophin-3 mRNA,NT-3 mRNA）及其受体酪氨酸蛋白激酶受体CmRNA（tyosine kinase C mRNA,TrkC mRNA）在变应性鼻炎鼻黏膜中的表达情况。方法将出生6~8周健康SD大鼠30只随机分成实验组20只和对照组10只,实验组以卵清蛋白致敏激发制成大鼠变应性鼻炎模型,采用逆转录-多聚酶链反应（reverse transcriptive polymerase chain reaction,RT-PCR）对20例实验组大鼠鼻黏膜中NT-3 mRNA和TrkC mRNA的表达情况进行检测,并与对照组大鼠进行比较。结果实验组NT-3/β-Actin（内参照）为2.968±0.828,对照组为0.267±0.127,两组比较差异有统计学意义（P〈0.01）;实验组的TrkC/β-Actin（内参照）为9.708±2.717,对照组为1.146±0.424,两组比较差异有统计学意义（P〈0.01）。NT-3 mRNA与TrkC mRNA的表达呈正相关（r=0.67,P〈0.01）。结论神经营养因子-3及其受体TrkC与大鼠变应性鼻炎的发生有着密切关系。

pSilencer4.1-cmv-TrkC质粒对前列腺癌细胞株PC3增殖的影响

【目的】通过pSilencer4.1-cmv-TrkC siRNA干涉质粒转染下调人前列腺癌细胞系PC3中酪氨酸激酶受体C(tyrosinelcinase C,TrkC)的表达,观察TrkC在前列腺癌细胞中的作用。【方法】根据TrkC基因序列设计并合成siRNA,构建质粒。用脂质体将pSilencer/TrkC和对照空载体pSilencer转染人前列腺癌细胞系PC3,通过Western blotting检测转染细胞的TrkC表达情况,绘制细胞生长曲线,流式细胞仪检测TrkC对细胞周期及凋亡的影响。【结果】成功利用脂质体转染PC3细胞后,Western blotting鉴定结果显示:TrkC的表达水平显著降低,细胞生长曲线及流式细胞仪检测结果显示pSilencer4.1-cmv-TrkC脂质体转染的PC3细胞出现生长抑制及凋亡增加。【结论】下调TrkC表达可以抑制前列腺癌细胞PC3增殖,TrkC可能参与了前列腺癌的发生发展过程。

DCs和NSPCs共培养促进NSPCs增殖及其机制的初步研究

目的观察体外Transwell共培养系统中树突状细胞(dendritic cells,DCs)对神经干/前体细胞(neural stem/progenitor cells,NSPCs)增殖的影响,初步探讨神经营养因子-3(neurotrophin-3,NT-3)在DCs调控NSPCs中的作用机制。方法根据是否采用Transwell小室将DCs和NSPCs共培养分为分隔培养(DCs/NSPCs组)和混合培养(DCs+NSPCs组),ELISA法测定DCs组、NSPCs组、DCs+NSPCs组、DCs/NSPCs组共培养48 h上清中的NT-3的含量。为观察NT-3在DCs调控NSPCs中的作用及可能的机制,成球法检测NSPCs组、NSPCs/DCs+K252a组、NSPCs+DCs组、NSPCs+NT-3组的NSPCs增殖,免疫细胞荧光法和Western blot法检测各组NSPCs表面酪氨酸激酶受体C(TrkC)的表达。结果 ELISA实验结果显示,Transwell共培养48 h上清NT-3的含量,NSPCs/DCs组较DCs组和NSPCs组明显升高(P<0.05)。镜下观察、测量结果显示NSPCs/DCs组和NSPCs+NT-3组神经球数量增多,平均直径明显增大(P<0.05)。免疫细胞荧光和Western blot检测结果表明,NSPCs+DCs组和NSPCs+NT-3组中NSPCs的TrkC表达较NSPCs组和NSPCs/DCs+K252a组高(P<0.05)。结论体外DCs与NSPCs共培养,促进NSPCs增殖、NT-3的分泌及TrkC的表达,NT-3可能是通过TrkC受体参与NSPCs增殖的调控。

c-Kit和n-NOS2双重染色在豚鼠膀胱Cajal样间质细胞的表达

提要:目的研究c-Kit与n-NOS2在豚鼠膀胱Cajal样间质细胞的共表达情况。方法采用培养成年豚鼠膀胱Cajal样间质细胞,c-Kit免疫荧光和n-NOS2免疫荧光双重染色。结果豚鼠膀胱内Cajal样间质细胞体为梭形或卵圆形,常见2～3个细长的突起。c-Kit和n-NOS2免疫荧光双重染色发现两种抗体在Cajal样间质细胞共表达。结论本研究结果提示在豚鼠膀胱Cajal样间质细胞内c-Kit和n-NOS2共存,Cajal样间质细胞具备产生NO的功能,Cajal样间质细胞存在调节膀胱自律活动的结构基础。

人神经营养素-3受体基因的扩增及其重组腺病毒载体的构建

【目的】构建人神经营养素-3(neurotrophin-3,NT-3)受体(即酪氨酸蛋白激酶受体C,tyrosineproteinkinaseC,TrkC)基因重组的腺病毒表达载体。【方法】从人脑组织mRNA中扩增TrkC基因全长cDNA,定向克隆于穿梭质粒pShuttle中,获得一个带有CMV启动子的表达盒。再将表达盒与腺病毒骨架DNA(Adeno-XviralDNA)体外连接,形成重组腺病毒质粒(pAd-TrkC)。用pAd-TrkC转染人胚肾293细胞后包装成有感染能力的重组腺病毒颗粒(Adeno-TrkC)。【结果】TrkC基因RT-PCR扩增产物为2478bp。Adeno-TrkC经PCR鉴定为正确重组子。【结论】应用体外连接法已构建了人TrkC重组腺病毒表达载体,这为进一步应用NT-3进行基因治疗中枢神经损伤奠定了基础。

脊髓损伤后14天大鼠运动功能、NT-3和TrkC表达的变化及不同电针的影响

为了研究不同电针对脊髓损伤(SCI)大鼠(Rattus norvegicus)脊髓内神经营养因子3(NT-3)及其酪氨酸激酶受体C(Trk C)表达的影响,探讨NT-3,Trk C在实验性脊髓损伤发病及修复过程中的作用机制及不同电针干预对其的影响.将雄性清洁级SD大鼠随机分为空白、模型、脉冲电针及音乐电针4个组别,每组12只,采用改良式的Allen’s打击法复制模型.两组电针组选取"大椎"、"命门"进行不同电针干预,1次/日,20 min/次,空白组及模型组在治疗组治疗时进行抓取束缚,保证处理条件的相同.SCI后14天,通过BBB(Basso-Beattic-Bresnahan)评分评价大鼠后肢运动功能的变化,采用HE染色、尼氏染色观察大鼠受损脊髓病理改变及神经元情况,Western blot检测NT-3,Trk C在大鼠受损脊髓表达的情况.BBB结果显示,经脉冲电针与音乐电针治疗后,脊髓损伤大鼠后肢运动功能较模型组均有改善(P<0.01),且音乐电针评分高于脉冲电针,但两组比较无统计学差异;HE染色与尼氏染色结果示,经14天脉冲电针与音乐电针治疗脊髓损伤大鼠神经元形态均可得到恢复,且音乐电针优于脉冲电针;Western blot结果显示,损伤脊髓大鼠中NT-3,Trk C经脉冲与音乐电针治疗后较模型组均有显著升高(P<0.01),且音乐电针对NT-3,Trk C表达的影响高于脉冲电针,但两组比较无统计学差异.脉冲电针与音乐电针均能诱导SCI大鼠脊髓内NT-3及Trk C表达,促进脊髓损伤后神经再生修复功能,且音乐电针较脉冲电针作用略胜一筹.

Tivantinib

c-Met在很多肿瘤中过度表达,并在控制多信号转导途径(包括肿瘤生长和转移)中发挥重要作用。Tivantinib是一个口服有效的小分子c-Met受体酪氨酸激酶抑制剂,为新型的靶向抗肿瘤药,由美国ArQule公司、日本Daiichi和Kyowa HakkoKirin公司联合开发,用于治疗多种癌症。目前,本品正在进行的临床研究涉及的肿瘤种类主要有小眼转录因子(microphthalmia transcription factor,MiT)型肿瘤、非小细胞肺癌、结肠直肠癌、胃癌、肝细胞癌、胰腺癌、生殖细胞癌和实体瘤等。Tivantinib显示出抗肿瘤谱广、疗效确切、不良反应较轻、患者耐受性好等特点。