有氧运动干预非酒精性脂肪肝小鼠肝脏JAK2/STAT5信号通路的变化

背景:酪氨酸激酶2/信号传导及转录激活因子5信号通路在脂质代谢中起重要作用,运动有效预防与治疗非酒精性脂肪肝与改善内脏脂质沉积和脂质代谢密切相关。目的:探讨有氧运动对非酒精性脂肪肝小鼠肝脏酪氨酸激酶2/信号传导及转录激活因子5信号通路的影响及可能作用机制。方法:6周龄C57BL/6雄性小鼠48只,分为普通膳食组及高脂膳食诱导组(n=24),第10周末2组各随机抽取4只进行油红O染色观察肝脏病理形态变化。确定造模成功后,普通膳食组随机分为普通膳食+安静组、普通膳食+运动组(n=10);高脂膳食诱导组随机分为非酒精性脂肪肝+安静组、非酒精性脂肪肝+运动组(n=10),连续干预8周,直至实验结束。观察小鼠肝脏病理形态变化,检测小鼠肝脏组织泌乳素受体、肝脏酪氨酸激酶2、信号传导及转录激活因子5a、肝脏酪氨酸激酶2磷酸化、信号传导及转录激活因子5磷酸化蛋白表达量。结果与结论:(1)与普通膳食+安静组相比,非酒精性脂肪肝+安静组肝细胞脂肪变性加重,肝脏内酪氨酸激酶2/信号传导及转录激活因子信号通路蛋白表达量降低;(2)与非酒精性脂肪肝+安静组相比,非酒精性脂肪肝+运动组的肝细胞脂肪变性减轻,肝脏内酪氨酸激酶2/信号传导及转录激活因子5信号通路蛋白表达量升高;(3)肝脏病理形态指标与催乳素受体、肝脏酪氨酸激酶2、肝脏酪氨酸激酶2磷酸化、信号传导及转录激活因子5磷酸化均呈显著负相关(P<0.05);(4)提示有氧运动干预可通过调节非酒精性脂肪肝小鼠肝脏酪氨酸激酶2/信号传导及转录激活因子5信号通路,改善肝内脂质沉积及肝脏脂肪变性程度。

补阳还五汤通过调控PI3K/Akt、JAK2/STAT3信号促进BMSC趋化迁移对外伤性脊髓损伤大鼠神经元活性及认知功能的影响

目的研究补阳还五汤通过调控磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)、内源性酪氨酸激酶(JAK)2/信号传导和转录启动因子(STAT)3信号促进骨髓间充质干细胞(BMSCs)趋化迁移对外伤性脊髓损伤大鼠的神经元活性及认知功能的影响。方法选取健康大鼠53只,随机分为健康组(健康大鼠常规饲养)、损伤组(建立脊髓损伤模型)、干预组(补阳还五汤治疗)、对照组(甲泼尼龙治疗),每组12只,剩余5只大鼠用于补阳还五汤含药血清制备。流式细胞术鉴定BMSCs细胞。Transwell小室法测大鼠BMSCs迁移。高架十字迷宫和Morris水迷宫实验检测大鼠认知功能。苏木素-伊红(HE)染色检测脊髓组织病理形态。TUNEL测脊髓组织神经细胞凋亡。免疫组化检测p-JAK2、p-STAT3。Western印迹测PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt。结果传代后的培养细胞呈旋窝状或放射状贴壁生长,细胞多呈星形、梭形或三角状,培养3代后,细胞贴壁加快、形态均一,呈旋窝状或单层放射状生长。培养细胞表面抗原CD29、CD90为阳性,CD31、CD45为阴性,提示其为BMSCs细胞。与健康组相比,损伤组总路程、进入开臂次数、穿越平台次数显著降低,不同时间的潜伏期显著升高(P<0.05)。与损伤组相比,干预组与对照组总路程、进入开臂次数、穿越平台次数显著升高,不同时间的潜伏期显著降低(P<0.05)。干预组与对照组各指标对比无统计学差异(P>0.05)。健康组脊髓组织结构完整。损伤组脊髓组织疏松水肿,有细胞空泡变性产生。相较于损伤组,干预组与对照组大鼠脊髓组织病理形态有所改善。与健康组相比,损伤组BMSCs、PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt显著降低,神经细胞凋亡率、p-JAK2、p-STAT3显著升高(P<0.05)。与损伤组相比,干预组BMSCs、PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt显著升高,神经细胞凋亡率、p-JAK2、p-STAT3显著降低(P<0.05)。干预组与对照组各指标水平无统计学差异(P>0.05)。结论补阳还五汤通过激活PI3K/Akt通路抑制JAK2/STAT3信号通路的激活,促进BMSCs的迁移,减轻神经细胞的凋亡,起到神经保护的作用,从而改善脊髓损伤大鼠的认知功能。

lncRNA ARAP1-AS2通过JAK2/STAT3信号通路对小鼠糖尿病肾病的影响

目的探讨lncRNA锚蛋白重复和pH结构域/反义RNA(ARAP1-AS)2通过酪氨酸激酶(JAK)2/信号转导和转录激活因子(STAT)3信号通路对糖尿病肾病的影响及其机制。方法将MPC-5细胞分为对照组、高糖组、高糖+pcDNA3.1组、高糖+pcDNA3.1-ARAP1-AS2组、高糖+AG490组、高糖+pcDNA3.1-ARAP1-AS2+AG490组。四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)检测细胞存活率;流式细胞术检测MPC-5细胞凋亡率;Western印迹检测细胞增殖核抗原KI67、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)3、酪氨酸激酶(JAK)2、磷酸化(p)-JAK2、信号转导和转录激活因子(STAT)3、磷酸化STAT3(p-STAT3)蛋白表达;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测ARAP1-AS2和突触孔蛋白(Synaptopodin)、结蛋白(Desmin)、波形蛋白(Vimentin)mRNA的表达水平。结果与对照组比较,高糖诱导的MPC-5细胞的存活率及KI67表达水平明显降低,细胞凋亡率及Caspase3表达水平明显升高,Synaptopodin mRNA表达水平明显降低,Desmin mRNA、Vimentin mRNA表达水平明显升高,p-JAK2、JAK2、p-STAT3、STAT3表达水平明显升高,ARAP1-AS2表达水平明显降低(P<0.05);过表达ARAP1-AS2后,高糖诱导的MPC-5细胞的存活率及KI67表达水平明显升高,细胞凋亡率及Caspase3表达水平明显降低,Synaptopodin mRNA表达水平明显升高,Desmin mRNA、Vimentin mRNA表达水平明显降低,p-JAK2、JAK2、p-STAT3、STAT3表达水平明显降低(P<0.05)。JAK2/STAT3信J号通路抑制剂AG490增强了ARAP1-AS2对高糖诱导的足细胞增殖、凋亡及Synaptopodin、Desmin、Vimentin表达的影响。结论过表达lncRNA ARAP1-AS2可能通过抑制JAK2/STAT3信号通路促进MPC-5细胞存活,抑制高糖诱导的足细胞损伤。

蕨麻乙醇提取物通过JAK2/STAT3信号通路对心肌缺血再灌注大鼠心肌细胞损伤的作用

目的探讨蕨麻乙醇提取物通过酪氨酸激酶(JAK)2/信号转导和转录激活因子(STAT)3信号通路对心肌缺血再灌注(I/R)大鼠心肌细胞损伤的作用。方法选取雄性SD大鼠100只随机分为对照(control)组、模型(I/R)组和低、中、高剂量药物处理组。对照组正常饲喂大鼠;模型组建立大鼠心肌I/R模型;低、中、高剂量药物处理组分别使用0.9、1.8、3.6 g/kg的蕨麻乙醇提取物灌胃建模后的大鼠。噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡,试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)及乳酸脱氢酶(LDH)水平;Western印迹检测酶切的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Cleaved-caspase)-3、JAK2、磷酸化(p)-JAK2、STAT3、磷酸化(p)-STAT3蛋白表达水平。结果I/R处理后心肌细胞存活率显著降低,细胞凋亡率显著升高,Cleaved-caspase-3蛋白表达显著升高,MDA、LDH水平显著升高,SOD水平显著降低(P<0.05);低、中、高剂量蕨麻乙醇提取物处理后可明显抑制I/R处理的心肌缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡及氧化应激作用,明显促进心肌细胞增殖(P<0.05);I/R处理的心肌细胞中p-JAK2、p-STAT3蛋白表达显著降低(P<0.05),而低、中、高剂量蕨麻乙醇提取物处理后p-JAK2、p-STAT3蛋白表达显著升高(P<0.05);JAK2/STAT3信号通路抑制剂AG490处理心肌细胞后,细胞存活率显著降低,细胞凋亡率显著升高,Cleaved-caspase-3蛋白表达显著升高,MDA、LDH水平显著升高,SOD水平显著降低(P<0.05)。结论蕨麻乙醇提取物可能通过激活JAK2/STAT3信号通路减轻I/R处理的心肌细胞损伤。

JAK2/STAT5通路在胰岛对妊娠适应中的作用

目的探讨妊娠中晚期SD大鼠胰岛功能增强的机制。方法以妊娠15 d的SD大鼠(实验组,n=24)和同批次未妊娠的雌性SD大鼠(对照组,n=24)作为实验对象。通过原位灌注胰岛分离的方法获得单个胰岛,用胰酶消化胰岛,形成单个细胞,原代分离的胰岛加入含5.6 mmol/L葡萄糖和15%FBS的DMEM培养基终止消化,用含2.8 mmol/L葡萄糖(对照)或5.6 mmol/L葡萄糖的KRB缓冲液培养1 h,利用全细胞膜片钳记录B细胞膜电压依赖型钾通道(Kv)电流。采用Real-Time PCR技术测定胰岛JAK2/STAT5通路的关键分子催乳素受体(PRLR)、Janus蛋白酪氨酸激酶(JAK2)、信号转导和转录激活子5(STAT5A和STAT5B)、葡萄糖代谢的关键分子葡萄糖转运体2(GLUT2)、葡萄糖激酶(GK),以及胰岛素分泌相关的分子ATP敏感性钾通道(KATP)、电压依赖性钙通道(VDCC)mRNA的表达。结果在10～60 mV膜电压条件下,实验组大鼠在5.6 mmol/L葡萄糖刺激下,胰岛单个B细胞细胞膜Kv电流显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。实验组大鼠胰岛组织PRLR、JAK2、STAT5A、STAT5B、GLUT2、VDCC、KATPmRNA的相对表达量上调,分别为对照组的2.50、1.84、1.54、2.45、1.41、1.68、1.55倍(P<0.05或P<0.01),两组大鼠胰岛组织GK mRNA的相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论妊娠中晚期SD大鼠胰岛功能增强可能与催乳素促进JAK2/STAT5通路、葡萄糖代谢及胰岛素分泌相关分子的表达有关,为糖尿病的治疗提供了新的思路。

白细胞介素-6和JAK2/STAT3信号通路在急性肺损伤中的作用

急性肺损伤(acute lung injury,ALI)是一种引起肺内皮和上皮屏障破坏的急性炎症疾病,临床表现为肺浸润、低氧血症和肺水肿,现在被重新归类为中度或轻度急性呼吸窘迫综合征(ARDS)。ALI是常见的呼吸系统疾病,更是重症患者发病和死亡的重要原因,在全球范围内病死率居高不下,其发病机制尚未完全阐明。但越来越多证据集中在炎症激活、细胞凋亡、氧化应激损伤、凝血功能异常等方面。非受体型酪氨酸蛋白激酶2(JAK2)/信号转导及转录激活蛋白3(STAT3)信号通路在调控细胞凋亡、增殖、分化和炎症反应中起重要作用。炎症细胞因子白细胞介素(IL)-6可激活JAK2/STAT3通路,介导炎症因子的进一步释放,引发级联放大的炎症反应参与ALI发生、发展等多个环节,被认为是ALI发展过程中的关键信号通路之一。本文以IL-6、JAK2/STAT3信号通路为对象,阐明其介导的信号通路在ALI发展中的作用及研究进展。

microRNA125a-3p对滋养层细胞功能的调控作用及机制

目的观察microRNA125a-3p(miR-125a-3p)在滋养层细胞中的表达,探讨其对滋养层细胞增殖、侵袭和凋亡的调控及机制。方法荧光实时定量PCR检测人滋养层细胞系HTR-8/SVneo、绒癌细胞系JAR和JEG-3中miR-125a-3p的表达情况。以HTR-8/SVneo和JEG-3细胞为实验对象,分为3组:空白对照组(CK组),未做任何处理;阴性对照组(NC组),转染NC-inhibitor;实验组(inhibitor组),转染miR-125a-3p inhibitor。以Transwell、流式细胞仪、CCK8法分别检测细胞的侵袭、凋亡及增殖能力。Western blot检测Fyn蛋白表达情况及ERK1/2、STAT3磷酸化水平。荧光实时定量PCR检测Fyn mRNA水平,免疫共沉淀法检测Fyn活性水平。结果miR-125a-3p mRNA表达水平在HTR-8/SVneo、JAR和JEG-3细胞中依次降低,两两比较均有统计学差异(P<0.01)。抑制HTR-8/SVneo和JEG-3中miR-125a-3p后,细胞的凋亡水平明显降低,侵袭和增殖能力均明显升高(P<0.05);Fyn mRNA和蛋白的表达及活性水平均明显升高(P<0.05);ERK1/2及STAT3的磷酸化水平均不同程度增加(P<0.05)。结论本研究首次在滋养层细胞中检测到miR-125a-3p的表达。miR-125a-3p通过作用于Fyn和ERK1/2-STAT3信号通路可抑制滋养层细胞的增殖、侵袭,促进其凋亡。

硝普钠对实验性脑出血大鼠神经功能及蛋白酪氨酸激酶2/信号传导与转录激活因子3通路的影响

目的研究硝普钠对实验性脑出血大鼠神经功能及蛋白酪氨酸激酶2/信号传导与转录激活因子3(JAK2/STAT3)通路的影响。方法将60只大鼠随机分为对照组,模型组和实验组,每组20只。模型组和实验组大鼠通过注射Ⅶ型胶原酶及肝素混合液构建实验性脑出血模型,对照组予以等量0. 9%NaCl;实验组大鼠于建模后6,24,72,120 h予以腹腔注射硝普钠1 mg·kg^(-1),模型组及对照组则予以等量0. 9%NaCl。用称重法测定各组大鼠脑含水量;用DNA断裂的原位末端标记法(TUNEL)检测大鼠脑组织细胞凋亡情况;用蛋白免疫印迹法检测大鼠脑组织JAK2/STAT3通路蛋白表达。结果对照组,模型组和实验组建模后72 h脑含水量分别为(76. 05±2. 04)%,(84. 91±2. 58)%,(79. 68±3. 01)%;神经细胞凋亡率分别为(7. 52±1. 86)%,(50. 23±2. 43)%,(26. 24±2. 37)%;脑组织中p-JAK2蛋白相对表达量分别为0. 07±0. 13,1. 26±0. 05,0. 33±0. 05,p-STAT3蛋白相对表达量分别为0. 20±0. 03,0. 38±0. 06,0. 26±0. 09,差异均有统计学意义(均P <0. 05)。结论硝普钠对实验性脑出血大鼠的脑损伤有一定的保护作用,可能与其调控JAK2/STAT3通路,减轻脑组织细胞凋亡有关。

蛋白酪氨酸激酶2/信号传导与转录激活因子3信号通路在大鼠肾脏移植慢性排斥反应中的作用机制

目的探讨蛋白酪氨酸激酶2/信号传导与转录激活因子3(JAK2/STAT3)信号通路在大鼠肾脏移植慢性排斥反应中的作用机制。方法将60只大鼠分为空白对照组[供鼠(10只)、受鼠(10只)均为Lewis大鼠]、阳性对照组[供鼠(10只)为F344大鼠,受鼠(10只)为Lewis大鼠]和STAT3拮抗组[供鼠(10只)为F344大鼠,受鼠(10只)为Lewis大鼠],检测其术前及术后12周血肌酐(SCr)及尿素氮(BUN)水平并进行比较。比较3组大鼠肾脏组织病理学变化和慢性移植损伤指数(CADI)评分。采用免疫组化检测转化生长因子(TGF)-β1/果蝇母性DPP同源蛋白(Smad)3、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)纤维化指标。采用蛋白质印记法(Western blot)检测TGF-β1、α-SMA、JAK2和STAT3蛋白的表达。结果空白对照组和STAT3拮抗组大鼠血清SCr及BUN水平均低于阳性对照组(P<0.05)。阳性对照组大鼠肾脏组织弥漫性炎症细胞浸润表现较明显,其他两组大鼠中炎症细胞浸润较少。阳性对照组大鼠CADI评分明显高于其他两组(P<0.05)。空白对照组和STAT3拮抗组大鼠肾脏组织中TGF-β1、α-SMA、JAK2和STAT3蛋白表达水平明显低于阳性对照组(P<0.05)。结论STAT3的特异性抑制剂可在大鼠肾脏移植慢性排斥反应中抑制JAK2/Smad3信号通路所引起的炎症反应,对肾脏移植起到一定的保护作用。

针加灸对阿尔茨海默病大鼠海马区蛋白酪氨酸激酶-2/信号转导和转录激活因子-3信号通路的影响

目的:通过观察针加灸对阿尔茨海默病(AD)大鼠海马区蛋白酪氨酸激酶-2(JAK2)、信号转导和转录激活因子-3(STAT3)、细胞因子信号转导抑制因子-3(SOCS3)的影响,探讨针加灸治疗AD的作用机制。方法:SD大鼠随机分为对照组、假手术组、模型组、治疗组,每组15只。采用双侧海马注射5!L Aβ1-42法(1!L/min)制备AD大鼠模型。治疗组予针刺加艾灸"百会"、双侧"肾俞"穴进行治疗,15min/次,每日1次,5次为1个疗程,共治疗4个疗程,每个疗程期间休息2d。治疗结束后Morris水迷宫实验检测各组大鼠记忆和空间探索能力,免疫组化法和Western blot法分别测定各组大鼠海马区JAK2、STAT3、SOCS3的阳性细胞数及蛋白表达水平。结果:与对照组和假手术组比较,模型组大鼠平均逃避潜伏期明显延长(P<0.01),跨越原平台次数和在安全象限平台停留时间明显缩短(P<0.01);与模型组比较,治疗组大鼠平均逃避潜伏期明显缩短(P<0.01),跨越原平台次数和安全象限平台停留时间明显延长(P<0.01)。与对照组和假手术组比较,模型组大鼠海马区JAK2、STAT3阳性细胞数及蛋白表达明显增多(P<0.01),SOCS3阳性细胞数及蛋白表达明显减少(P<0.01);与模型组比较,治疗组大鼠海马区JAK2、STAT3阳性细胞数及蛋白明显减少(P<0.01),SOCS3阳性细胞数及蛋白表达明显增多(P<0.01)。结论:JAK2/STAT3信号通路和负反馈因子SOCS3均参与了AD发病的病理过程,针灸可能通过上调SOCS3来抑制JAK2/STAT3信号通路,降低其活化,减少慢性炎性反应发生发展,从而提高AD大鼠学习记忆能力,达到治疗AD的作用。

肝复康对肝纤维化大鼠肝组织JAK2和STAT3表达的影响

目的观察中药肝复康对肝纤维化大鼠肝组织Janus激酶2(JAK2)及信号转导子和转录激活子3(STAT3)表达的影响,并对其在JAK2/STAT3信号通路上治疗肝纤维化的作用机制进行初步探讨。方法采用10%四氯化碳皮下注射制备肝纤维化模型,于造模第9周给予肝复康治疗12周。通过测定血清中ALT、AST活性及白蛋白和总蛋白的含量来反映肝脏功能,HE染色法观察肝组织病理学变化,RT-PCR观察JAK2和STAT3 mR-NA的表达。结果经肝复康治疗后,中剂量治疗组与模型组相比较,肝脏的组织学和血清学指标均明显改善,肝组织JAK2、STAT3 mRNA的表达显著减少(P<0.01)。结论 (1)JAK2/STAT3信号通路在肝纤维化的形成过程中起重要作用;(2)肝复康对肝纤维化有疗效,其作用机制可能与降低肝组织JAK2和STAT3的表达,阻断JAK2/STAT3信号通路有关。

基于JAK2/STAT3信号通路探讨芪苓白头翁汤对弥漫大B细胞淋巴瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨芪苓白头翁汤对弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)细胞增殖、凋亡、非受体型酪氨酸蛋白激酶2/信号转导及转录激活因子3(JAK2/STAT3)信号通路及炎症因子白细胞介素^(-1)0(IL^(-1)0)的影响。方法:以人DLBCL细胞OCI-LY10、U2932细胞为研究对象,细胞增殖与活性检测法(CCK-8)检测细胞增殖情况,并计算出0、4.6、9.3、18.7、37.5、75、150 mg·L^(-1)芪苓白头翁汤处理OCI-LY10、U2932细胞24 h后的半抑制浓度(IC_(50))分别为9.33、16.13 mg·L^(-1)。后续相关实验根据芪苓白头翁汤作用于OCI-LY10、U2932细胞24 h半抑制浓度(IC_(50)),选用芪苓白头翁汤9.5、19、38 mg·L^(-1)开展实验。用胱天蛋白酶(Caspase)-3、Caspase-8、Caspase-9酶原活化检测试剂盒检测经0、9.5、19、38 mg·L^(-1)芪苓白头翁汤处理OCI-LY10、U2932细胞24 h后OCI-LY10、U2932细胞中Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9的酶原活化情况。酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测经0、9.5、19、38 mg·L^(-1)芪苓白头翁汤处理OCI-LY10、U2932细胞24 h后OCI-LY10、U2932细胞中IL^(-1)0炎症因子表达情况。流式细胞仪检测不同浓度芪苓白头翁汤作用OCI-LY10、U2932细胞24 h后细胞凋亡率及细胞周期。蛋白免疫印迹法(Western blot)检测0、9.5、19、38 mg·L^(-1)芪苓白头翁汤作用OCI-LY10、U2932细胞24 h,OCI-LY10、U2932细胞中B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活化的聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(cleaved PARP)、活化的Caspase-3(cleaved Caspase-3)凋亡蛋白表达情况及JAK2、STAT3、磷酸化(p)-JAK2、p-STAT3通路蛋白表达情况,不同浓度药物作用OCI-LY10、U2932细胞24 h,OCI-LY10、U2932细胞中癌基因(c-Myc)蛋白表达情况。结果:芪苓白头翁汤作用于OCI-LY10、U2932细胞24 h,与空白组比较,芪苓白头翁汤各组细胞增殖均受到明显抑制(P<0.05,P<0.01);9.5、19、38 mg·L^(-1)芪苓白头翁汤组Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9酶原显著活化(P<0.01),细胞凋亡增加(P<0.05,P<0.01),细胞于DNA合成前期(G1)阻滞增加(P<0.05,P<0.01);9.5、19、38 mg·L^(-1)芪苓白头翁汤组OCI-LY10、U2932细胞中Bcl-2、p-JAK2、p-STAT3蛋白表达显著降低(P<0.01),Bax、cleaved PARP、cleaved Caspase-3蛋白表达显著增加(P<0.01),JAK2、STAT3蛋白表达未见明显改变。与空白组比较,19 mg·L^(-1)芪苓白头翁汤组、19 mg·L^(-1)芪苓白头翁汤+10μg·L^(-1)IL^(-1)0组c-Myc、p-JAK2、p-STAT3蛋白表达水平下降(P<0.05,P<0.01),10μg·L^(-1)IL^(-1)0组c-Myc、p-JAK2、p-STAT3蛋白表达明显增加(P<0.05,P<0.01),通路蛋白JAK2、STAT3蛋白表达未见明显改变。结论:芪苓白头翁汤可以抑制人DLBCL细胞OCI-LY10、U2932细胞的增殖并促进其凋亡,其作用机制可能与芪苓白头翁汤调控JAK2/STAT3信号通路有关。

基于IL-6/JAK2/STAT3通路探讨加味三物白散对胃癌裸鼠移植瘤上皮间质转化的抑制作用

目的:研究加味三物白散对胃癌裸鼠移植瘤上皮间质转化(EMT)的抑制作用及与白细胞介素-6(IL-6)/非受体型酪氨酸蛋白激酶2(JAK2)/信号转导及转录激活蛋白3(STAT3)通路的关系。方法:40只裸鼠随机分成模型组、加味三物白散组、阳性药物组、联合组,每组10只。造模、灌胃干预后,ELISA检测裸鼠血清IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、CEA、CA199含量,HE染色观察瘤组织病理改变,RT-PCR及Western Blot检测EMT及IL-6/JAK2/STAT3通路相关mRNA、蛋白表达情况。结果:与模型组比较,各给药组第12—18天瘤体体积显著缩小(P<0.05),镜下肿瘤细胞有坏死区,血清中IL-6、TNF-α、CEA、CA199含量显著降低(P<0.05),瘤组织中JAK2、STAT3、N-cadherin、Vimentin mRNA及STAT3、N-cadherin、Vimentin蛋白表达显著降低(P<0.01,P<0.05),E-cadherin mRNA及蛋白表达显著增加(P<0.01,P<0.05);且联合组各m RNA表达效果优于两单给药组(P<0.05)。结论:加味三物白散可通过调控IL-6/JAK2/STAT3信号通路抑制胃癌裸鼠移植瘤EMT,效果以联合用药为优。

基于JAK2/STAT3信号通路探讨三棱-莪术含药血清对人异位子宫内膜间质细胞增殖、凋亡和迁移的影响

基于酪氨酸蛋白激酶(Janus kinase, JAK)2/信号传导及转录激活因子(signal transducer and activator of transcription, STAT)3信号通路,研究三棱-莪术含药血清对异位的子宫内膜间质细胞(ectopic endometrial stromal cells, ESCs)增殖、凋亡、迁移和炎症因子分泌的影响。原代培养ESCs,噻唑蓝法(methyl thiazolyl tetrazolium, MTT)检测不同质量分数(5%、10%、20%)三棱、莪术、两药配伍的含药血清和AG490溶液(50μmol·L^(-1))对ESCs增殖的影响,并由此选择最优剂量用于后续实验;将细胞分为空白血清组、三棱组(10%)、莪术组(10%)、配伍组(10%)和AG490组,以流式细胞术检测ESCs凋亡水平,细胞划痕实验检测细胞迁移能力,酶联免疫吸附测定法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)检测细胞白细胞介素(interleukin, IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor, TNF)-α分泌水平,蛋白质印迹法(Western blot)检测含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(cysteinyl aspartate specific proteinase, caspase)-3、B淋巴细胞瘤(B-cell lymphoma, Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein, Bax)的蛋白表达以及JAK2、STAT3蛋白的磷酸化水平。结果显示,与空白血清组相比,各给药组均能使ESCs的活力显著降低(P<0.01),尤其10%含药血清细胞活力低于其他组,因此后续实验采用10%的含药血清进行观察。10%的三棱、莪术和两药配伍的含药血清均能使细胞凋亡率显著增加(P<0.01),细胞中caspase-3和Bax蛋白表达均显著升高(P<0.05或P<0.01),Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.01),细胞迁移率显著降低(P<0.05或P<0.01),细胞分泌的IL-1β、IL-6和TNF-α显著减少(P<0.05或P<0.01),JAK2和STAT3的磷酸化水平显著降低(P<0.05或P<0.01)。与三棱、莪术组相比,10%配伍组含药血清孵育后细胞活力更低(P<0.01),caspase-3和Bax蛋白表达较高(P<0.05或P<0.01),Bcl-2蛋白表达更低(P<0.05),JAK2蛋白磷酸化程度较低(P<0.05)。10%配伍组含药血清孵育后,细胞凋亡率明显高于莪术组(P<0.05),细胞的迁移率明显低于莪术组(P<0.01),对STAT3蛋白磷酸化的抑制作用明显强于三棱组(P<0.05)。三棱、莪术及其配伍应用改善子宫内膜异位症的作用机制可能与阻断JAK2/STAT3信号通路,抑制ESCs增殖,促进细胞凋亡,减弱其迁移能力,减少炎症因子的分泌有关,并且三棱-莪术等比配伍效果优于两药单用。

疏肝健脾方对产后缺乳肝郁脾虚证模型大鼠JAK2/STAT5A信号通路的影响

目的探讨疏肝健脾方治疗产后缺乳肝郁脾虚证的可能作用机制。方法 60只Wistar临产期孕鼠随机分为模型组、空白对照组、西药对照组和疏肝健脾方低、中、高剂量组,每组10只。除空白对照组外,其余各组大鼠产后采用甲磺酸溴隐亭溶液+慢性束缚法复制大鼠产后缺乳肝郁脾虚病证模型。造模后西药对照组予甲氧氯普胺片溶液3. 15 mg/(kg·d)灌胃,疏肝健脾方低、中、高剂量组分别给予浓度为1. 109、2. 218、4. 435 g/ml疏肝健脾方溶液每只5 ml灌胃,模型组、空白对照组予等体积蒸馏水灌胃,各组均每日早、晚各灌胃1次,连续7天。采用RT-PCR法检测乳腺组织中酪氨酸激酶2 (JAK2)、信号传导及转录激活因子5A (STAT5A)、催乳素受体(PRLR)和β-酪蛋白(β-casein) mRNA表达,采用Western blot法检测乳腺组织中JAK2、STAT5A、PRLR和β-casein蛋白表达。结果与空白对照组比较,模型组、西药组和疏肝健脾方低、高剂量组大鼠乳腺组织JAK2、STAT5A、PRLR及β-casein mRNA及蛋白水平显著降低(P <0. 05),而疏肝健脾方中剂量组差异无统计学意义(P> 0. 05)。与模型组比较,西药对照组和疏肝健脾方各剂量组大鼠乳腺组织JAK2、STAT5A、PRLR及β-casein mRNA及蛋白水平均升高,且疏肝健脾方中剂量组明显高于其余给药组(P <0. 05)。结论疏肝健脾方治疗产后缺乳肝郁脾虚证的机制可能与其促进催乳素与其受体结合,激活JAK2/STAT5A信号转导通路,并上调β-casein基因表达相关。

桂枝芍药知母汤对胶原诱导性关节炎小鼠软骨破坏及JAK2/STAT3信号通路的影响

目的:研究桂枝芍药知母汤在胶原诱导性关节炎(CIA)小鼠软骨破坏中的作用及其作用机制。方法:取SPF级DBA/1小鼠36只,随机分组为正常组、模型组、甲氨蝶呤组(MTX)、桂枝芍药知母汤低、中、高剂量组6组。除正常组外,其余5组小鼠采用二次免疫法构建CIA模型,并在小鼠开始出现后肢肿胀当天分别予生理盐水,MTX(1.5 mg·kg^(-1),每周2次)和桂枝芍药知母汤低、中、高剂量(6.3、12.6、25.2 g·kg^(-1)·d^(-1))灌胃,共给药4周。观察并记录各组小鼠足肿胀度变化,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、MMP-3、MMP-9、MMP-13含量,苏木素-伊红(HE)染色观察踝关节病理改变,番红固绿染色法观察软骨破坏,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠踝关节酪氨酸激酶2(JAK2)/转录激活因子3(STAT3)信号通路蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组足肿胀度,血清MMP-1、MMP-3、MMP-9和MMP-13含量和踝关节磷酸化(p)-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3的表达水平均显著上升(P<0.01),关节破坏加重。与模型组比较,MTX组和桂枝芍药知母汤低、中、高剂量组明显减轻小鼠足肿胀度(P<0.05,P<0.01),明显降低小鼠血清MMP-1、MMP-3、MMP-9和MMP-13含量(P<0.05,P<0.01),关节病理破坏减轻,明显降低踝关节p-JAK2/JAK2和p-STAT3/STAT3的表达水平(P<0.05,P<0.01)。结论:桂枝芍药知母汤能减轻CIA小鼠的关节肿胀程度,抑制MMP-1、MMP-3、MMP-9和MMP-13的表达,改善关节软骨破坏,其作用机制与JAK2/STAT3信号通路有关。

JAK1/STAT1/p21通路在姜黄素诱导结肠癌细胞HCT116周期阻滞中的作用

目的:探讨姜黄素对人结肠癌HCT116细胞周期阻滞的影响及其可能的分子作用机制。方法:噻唑蓝(MTT)比色法检测姜黄素(0、12.5、25、50、75、100μmol·L^(-1))和5-氟尿嘧啶(5-FU)(600μmol·L^(-1))处理不同时间(24、48、72 h)对HCT116细胞增殖的影响;流式细胞术检测姜黄素(0、25、50、75μmol·L^(-1))和5-FU对HCT116细胞周期的影响;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测HCT116细胞中Janus酪氨酸蛋白激酶1(JAK1)/信号传导及转录激活因子1(STAT1)/细胞周期依赖性激酶抑制因子1A(p21)通路相关蛋白表达的影响;染色质免疫沉淀法(ChIP)检测STAT1与p21启动子区的结合情况;采用小干扰核糖核酸(siRNA),分别通过Western blot和细胞免疫荧光检测STAT1在调控p21表达中的作用及JAK1蛋白在调控STAT1活化中的作用。结果:与空白组比较,姜黄素各组和5-FU组HCT-116细胞活性明显降低(P<0.05)。与空白组比较,姜黄素组和5-FU组DNA合成前期(G0/G1)细胞比例明显升高(P<0.05),DNA复制期(S)和DNA合成后期(G2/M)细胞比例及磷酸化p21(p-p21)蛋白水平明显降低(P<0.05),p21蛋白表达明显升高(P<0.05)。与姜黄素组比较,p21 siRNA+姜黄素组G0/G1期细胞明显降低(P<0.05)。与空白组比较,姜黄素处理后细胞中磷酸化STAT1(p-STAT1)水平明显升高(P<0.05)。与姜黄素组比较,姜黄素+STAT1 siRNA组HCT116细胞中p21蛋白表达水平升高(P<0.05)。机制研究表明,与空白组比较,姜黄素处理明显增强了STAT1蛋白在p21启动子区的富集(P<0.05)。与空白组比较,姜黄素处理后细胞中磷酸化JAK1(p-JAK1)水平明显升高(P<0.05)。与姜黄素组比较,姜黄素+STAT1 siRNA组HCT116细胞中的p-STAT1和p21蛋白水平明显升高(P<0.05)。结论:姜黄素诱导的人结肠癌HCT116细胞周期阻滞,其机制可能与激活JAK1/STAT1/p21信号通路有关。

益气养阴活血通络方抑制JAK2/STAT3信号通路减轻糖尿病肾病大鼠肾组织细胞凋亡

目的:观察益气养阴活血通络方对糖尿病肾病(DN)大鼠Janus酪氨酸蛋白激酶2(JAK2)/信号传导及转录激活因子3(STAT3)信号通路及细胞凋亡的影响,探讨其干预DN的作用机制。方法:SD大鼠100只随机分为造模组80只,正常组20只,高糖高脂饮食联合一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立糖尿病肾病大鼠模型。造模结束后每组随机处死3只大鼠,光镜和电镜下观察肾脏组织病理学变化确认造模成功。将造模成功的大鼠随机分为模型组(生理盐水,等体积)、益气养阴活血通络方低中高剂量组(益气养阴活血通络方,5.775,11.550,23.100 g·kg^(-1))和厄贝沙坦组(厄贝沙坦片,0.016 g·kg^(-1)),各组分别给予相应剂量药物灌胃,每日1次,连续干预16周。给药结束后检测大鼠24 h尿蛋白(UTP)水平,血清总胆固醇(TC),甘油三酯(TG),肌酐(SCr),尿素氮(BUN)水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测JAK2/STAT3信号通路关键蛋白的表达水平;免疫组化法(IHC)检测大鼠肾组织中B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白(Bax),B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2),紧密连接相关蛋白-1(ZO-1),肌动蛋白4(actinin-4)蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠UTP,血清中TC,TG,BUN,SCr水平均有明显升高(P<0.05);大鼠肾组织病理损伤严重;磷酸化JAK2(p-JAK2),磷酸化STAT3(p-STAT3),Bax蛋白表达水平明显上调;肾组织细胞凋亡明显增多;Bcl-2,ZO-1,actinin-4蛋白表达水平下调(P<0.05)。与模型组比较,益气养阴活血通络方和厄贝沙坦组大鼠UTP,血清中TC,TG,BUN,SCr水平均有不同程度的下降(P<0.05);大鼠肾组织病理损伤有所减轻;p-JAK2,p-STAT3,Bax蛋白表达水平不同程度的下降;肾组织细胞凋亡减轻;Bcl-2,ZO-1,actinin-4蛋白表达水平不同程度的升高(P<0.05)。结论:益气养阴活血通络方药可通过抑制JAK2/STAT3信号通路的激活,减轻肾脏细胞凋亡,改善DN的预后。

基于JAK2/STAT3信号通路探讨白头翁皂苷A对Burkitt淋巴瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨白头翁皂苷A对人伯基特淋巴瘤(BL)细胞Raji细胞增殖、凋亡及相关通路蛋白表达的影响。方法:以人BL细胞Raji细胞为研究对象,细胞增殖与活性检测(CCK-8)法检测细胞增殖情况,并计算出24、48、72 h的半数抑制浓度(IC_(50))分别为19.77、18.31、16.70μmol·L^(-1)。后续相关实验根据白头翁皂苷A作用Raji细胞72 h IC_(50),选用白头翁皂苷A 8、16、32μmol·L^(-1)开展实验。用0、8、16、32μmol·L^(-1)白头翁皂苷A作用于Raji细胞24、48、72 h,CCK-8法检测细胞生长曲线吸光度A。检测经0、8、16、32μmol·L^(-1)白头翁皂苷A处理Raji细胞24 h后Raji细胞中胱天蛋白酶(Caspase)-3、Caspase-8、Caspase-9的酶原活性。流式细胞仪检测不同浓度白头翁皂苷A作用Raji细胞24 h后细胞凋亡率及细胞周期。蛋白免疫印迹法(Western blot)检测0、8、16、32μmol·L^(-1)白头翁皂苷A作用Raji细胞24 h,Raji细胞中B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白(Bax)、活化的聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(cleaved PARP)、活化的Caspase-3(cleaved Caspase-3)凋亡蛋白表达情况,检测非受体型酪氨酸蛋白激酶2(JAK2)、信号转导及转录激活因子3(STAT3)、磷酸化(p)-JAK2、p-STAT3通路蛋白表达情况。结果:与空白组比较,8、16、32μmol·L^(-1)白头翁皂苷A组细胞增殖受到抑制,8、16、32μmol·L^(-1)白头翁皂苷A组Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9酶原显著活化(P<0.01),细胞凋亡明显增加(P<0.05,P<0.01),细胞于有丝分裂准备期(G2)期阻滞明显增加(P<0.05,P<0.01)。与空白组比较,8、16、32μmol·L^(-1)白头翁皂苷A组Raji细胞中Bcl-2蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01),Bax、cleaved PARP、cleaved Caspase-3蛋白表达显著增加(P<0.01),JAK2、STAT3蛋白表达未见明显改变,p-JAK2、p-STAT3蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论:白头翁皂苷A可以抑制人BL细胞Raji细胞的增殖并促进其凋亡,其作用机制可能与白头翁皂苷A调控JAK2/STAT3信号通路有关。

黄芪建中汤对脾胃虚寒型胃溃疡模型大鼠JAK2/STAT3信号通路的影响

目的:探讨黄芪建中汤对脾胃虚寒型胃溃疡(GU)模型大鼠Janus蛋白酪氨酸激酶2(JAK2)/信号转导和转录活化因子3(STAT3)信号通路的影响。方法:将60只SPF级Wistar大鼠随机分为正常组和模型组,模型组大鼠采用综合造模法复建脾胃虚寒型GU模型,将模型大鼠按随机数字表法分为模型组、安胃疡组和黄芪建中汤高、中、低剂量组,每组10只。正常组和模型组大鼠给予10 mL·kg^-1·d^-1蒸馏水灌胃,黄芪建中汤高、中、低剂量组分别给予16,8,4 g·kg^-1·d^-1黄芪建中汤灌胃,阳性药组给予0.14 g·kg^-1·d^-1安胃疡灌胃,持续治疗21 d。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测各组大鼠胃组织中白细胞介素-10(IL-10),白细胞介素-17(IL-17)含量,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测胃组织JAK2,STAT3 mRNA表达水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测胃组织JAK2,STAT3蛋白表达以及磷酸化水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠一般生存状况相对较差,胃组织匀浆液中IL-10含量明显降低,IL-17含量明显升高(P<0.05),胃组织JAK2,STAT3蛋白表达水平升高不明显,而JAK2,STAT3 mRNA表达及蛋白磷酸化水平明显升高(P<0.05);与模型组比较,治疗组大鼠IL-10含量升高,IL-17含量降低,JAK2,STAT3 mRNA表达及蛋白磷酸化水平均降低,其中尤以黄芪建中汤高剂量组明显(P<0.05)。结论:黄芪建中汤具有改善脾胃虚寒型胃溃疡模型大鼠的生存状况的作用,其机制可能与干预JAK2/STAT3通路激活所介导的胃黏膜免疫屏障功能障碍有关。