微核糖核酸101和可溶性fms样酪氨酸激酶1在子痫前期患者中的表达及其临床意义

目的 探讨微核糖核酸(microRNA)101(简称miR-101)与可溶性fms样酪氨酸激酶1(soluble fms-like tyrosine kinase receptor 1,sFlt-1)在子痫前期(preeclampsia,PE)患者中的表达及其临床意义。方法 选取2018年1月—2020年12月在上海市宝山区吴淞医院妇产科收治的因无宫缩行剖宫产分娩的60例孕产妇,其中PE组20例,重度子痫前期(sPE)组20例,健康孕产妇(对照)组20例。收集3组孕产妇外周血和胎盘组织样本,采用ELISA法检测3组孕产妇外周血中sFlt-1的表达水平,实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测3组孕产妇胎盘组织中miR-101的表达变化,结合双荧光素酶报告实验分析miR-101与sFlt-1表达的相关性,通过细胞学功能实验验证miR-101对胎盘滋养层细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。结果 sPE、PE组孕产妇收缩压、舒张压值和尿蛋白量均显著高于对照组,分娩孕周均显著早于对照组(P值均<0.017)。sPE组孕产妇收缩压、舒张压值和尿蛋白量均显著高于PE组(P值均<0.017),两组分娩孕周的差异无统计学意义(P>0.05)。sPE组孕产妇血小板计数减少、肝功能损伤、肾功能损伤、产后出血和新生儿窒息比例均显著高于对照组和PE组(P值均<0.05)。ELISA检测结果显示,PE和sPE组外周血中sFlt-1表达水平分别为(3 131.80±448.25)和(3 555.00±428.89) ng/L,均显著高于对照组的(500.70±72.71) ng/L(P值均<0.001)。RT-qPCR检测结果显示,PE和sPE组胎盘组织中sFlt-1 mRNA相对表达量分别为5.33±0.58、6.50±0.50,均显著高于对照组的1.00±0.11(P值均<0.001)。PE和sPE组胎盘组织中miR-101相对表达量分别为0.50±0.14、0.40±0.12,均显著低于对照组的1.00±0.26(P=0.038、0.021)。荧光素酶报告实验结果显示,sFlt-1-Luc+miR-101-5p组293T细胞的相对荧光强度为2 366.67±321.46,显著低于sFlt-1-Luc组的4 533.33±665.83(P=0.016)。对3组孕产妇胎盘组织中miR-101与sFlt-1 mRNA表达进行Spearman秩相关检验,r_(s)=-0.871,P=0.001。提示3组孕产妇胎盘组织中miR-101与sFlt-1 mRNA表达呈负相关。3组孕妇一般临床资料与sFlt-1 mRNA、miR-101表达的相关性分析结果显示,sFlt-1 mRNA表达上调与孕妇收缩压、舒张压值和尿蛋白量呈正相关,与孕妇分娩孕周呈负相关(P值均<0.001),与孕妇年龄和孕前BMI无相关性(P值均>0.05);miR-101 mRNA表达下调与孕妇收缩压、舒张压值和尿蛋白量呈负相关,与孕妇分娩孕周呈正相关(P值均<0.001),与孕妇年龄和孕前BMI无相关性(P值均>0.05)。结论 miR-101在PE患者胎盘组织中低表达,可能导致sFlt-1的表达增加,进而抑制滋养层细胞的增殖、侵袭和迁移,参与PE的发生、发展。

受体酪氨酸激酶Mer对高糖环境培养的大鼠雪旺细胞系RSC96增殖调控作用观察

目的观察受体酪氨酸激酶Mer(MER tyrosine kinase,Mertk)在高糖环境培养条件下的大鼠雪旺细胞系RSC96增殖的调控作用。方法取RSC96分为一、二、三、四、五组,分别置于含25(正常葡萄糖浓度)、50、75、100及125 mmol/L葡萄糖的培养基中培养,培养48 h时采用Western Blotting法检测各组细胞Mertk,筛选Mertk蛋白相对表达量最高浓度为后续研究的高糖浓度。取RSC96细胞先饥饿处理4 h,置入含100 mmol/L的葡萄糖培养基中,分别于培养0、24、36、48、60 h时取各组细胞,采用Western Blotting法检测各组细胞Mertk,最终筛选Mertk蛋白相对表达量高的时间为后续研究培养时间。取RSC96细胞,分为对照组、高糖组、高糖敲降组及敲降组:高糖组细胞饥饿处理4 h,置于含100 mmol/L葡萄糖的培养基中培养;高糖敲降组细胞饥饿处理4 h,置于含100 mmol/L葡萄糖的培养基中,后加入5μL的敲降Mertk基因表达siRNA溶液;敲降组细胞饥饿处理4 h,加入5μL的敲降Mertk基因表达siRNA溶液;对照组细胞用正常培养基培养。培养48 h时取各组细胞,采用Edu法测算各组细胞增殖活力,采用Western Blotting法检测各组细胞Mertk、磷酸化核转录因子κB、P65及肿瘤坏死因子α(TNF-α)。结果与一组相比,四、五组细胞Mertk蛋白相对表达量高(P均<0.05);与培养0 h相比,培养48、60 h时RSC96细胞Mertk相对表达量高(P均<0.05)。与对照组相比,高糖组细胞增殖活力低(P<0.05),敲降组细胞增殖活力高(P<0.05);与对照组相比,高糖敲降组细胞P65、TNF-α相对表达量高(P均<0.05),敲降组细胞Mertk相对表达量低、P65及TNF-α相对表达量高(P均<0.05),高糖组细胞Mertk、P65及TNF-α相对表达量高(P均<0.05)。结论敲降Mertk基因表达的高糖环境培养RSC96细胞的增殖能力高,细胞P65、TNF-α表达高。Mertk可能通过促进细胞P65、TNF-α表达,促进高糖环境培养RSC96细胞的增殖。

微小核糖核酸-155对肝癌细胞增殖、侵袭迁移和凋亡的影响

目的探究微小核糖核酸(miR)-155靶向蛋白酪氨酸磷酸酶非受体21型(PTPN21)调控磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路对肝癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响。方法体外培养Huh7人肝癌细胞并通过miR-155沉默慢病毒(sh-miR-155)转染下调miR-155。实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测Huh7细胞miR-155沉默效果,获得稳转细胞株后将细胞株随机分为:Blank组(正常Huh7细胞)、shNC组(Huh7细胞+miR-155空载体)、sh-miR-155组(Huh7细胞+miR-155沉默)、sh-miR-155+Recilisib组(Huh7细胞+miR-155沉默+PI3K-AKT激动剂)、shNC+Recilisib组(Huh7细胞+miR-155空载体+PI3K-AKT激动剂)。双荧光素酶实验检测PTPN21是否为miR-155的下游;溴化噻唑蓝四氮唑(MTT)法检测各组细胞增殖能力;流式细胞术测定各组细胞凋亡水平;Transwell实验分析各组细胞侵袭与迁移能力;蛋白质印迹检测各组PTPN21、通路相关蛋白PI3K、P-PI3K、AKT、P-AKT及凋亡相关蛋白BAX、BCL-2、Caspase-3表达变化差异。结果sh-miR-155组中miR-155的表达水平低于Blank组及shNC组(P<0.0001),miR-155在Blank组及shNC组表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。MTT结果显示,sh-miR-155组中Huh7细胞在2、3、4、5 d时A值均低于Blank组及shNC组(P<0.0001),而Blank组与shNC组差异无统计学意义(P>0.05);sh-miR-155组在2、3、4、5 d时A值低于sh-miR-155+Recilisib组及shNC+Recilisib组(P=0.0052,P<0.0001),而sh-miR-155+Recilisib组在2、3、4、5 d时A值低于shNC+Recilisib组(P<0.0001)。Blank组与shNC组迁移及侵袭细胞数差异无统计学意义(P>0.05),激活PI3K-AKT信号通路后,与Blank组相比,shNC+Recilisib组肝癌细胞的迁移、侵袭能力显著增加(P<0.0001)。相反,沉默miR-155后Huh7细胞的迁移及侵袭细胞数明显低于Blank组及shNC组(P<0.0001),而PI3K激动剂逆转了这一现象,与sh-miR-155组相比,sh-miR-155+Recilisib组肝癌细胞的迁移、侵袭能力增强(P=0.0002)。慢病毒转染Huh7人肝癌细胞以沉默miR-155,下调miR-155抑制PTPN21调控PI3K-AKT信号通路从而抑制肝癌细胞的侵袭、迁移、增殖能力,促进肝癌细胞凋亡。结论miR-155通过靶向PTPN21调控PI3K-AKT信号通路抑制肝癌细胞的迁移、侵袭、增殖。miR-155可能是未来肝癌治疗潜在靶点。

脾相关酪氨酸激酶、蛋白激酶B、真核翻译起始因子4E、细胞周期蛋白依赖性激酶4在胃癌及癌前病变中的表达及相关性

目的探讨脾相关酪氨酸激酶(SYK)、蛋白激酶B(AKT)、真核翻译起始因子4E(EIF4E)、细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)在胃癌及癌前病变中的表达及相关性。方法收集90例患者的胃黏膜组织进行蛋白质印迹实验,其中癌旁正常组织30例,萎缩性胃炎组织30例,胃癌组织30例。另收集胃癌组织、萎缩性胃炎组织、癌旁正常组织存档蜡块各30例进行免疫组化实验。分别采用蛋白质印迹法和免疫组化法检测各组织中SYK、AKT、EIF4E、CDK4表达情况。分析萎缩性胃炎组织与胃癌组织中SYK、AKT、EIF4E、CDK4的相关性。结果癌旁正常组织中SYK蛋白表达水平及阳性表达率均高于萎缩性胃炎组织,萎缩性胃炎组织中SYK蛋白表达水平及阳性表达率均高于胃癌组织;癌旁正常组织中AKT、EIF4E、CDK4蛋白表达水平及阳性表达率均低于萎缩性胃炎组织,萎缩性胃炎组织中AKT、EIF4E、CDK4蛋白表达水平及阳性表达率均低于胃癌组织,差异均有统计学意义(P<0.05)。Spearman相关分析结果显示,胃癌组织和萎缩性胃炎组织中SYK与AKT、EIF4E、CDK4表达均呈负相关(P<0.05),AKT、EIF4E、CDK4三者表达均呈正相关(P<0.01)。结论SYK、AKT、EIF4E、CDK4可能通过相互作用共同参与了胃癌的发生,其可能的机制与磷脂酰肌醇-3-羟激酶(PI3K)/AKT信号通路有关。SYK、AKT、EIF4E、CDK4有希望成为胃癌诊断和防治的靶标,检测SYK、AKT、EIF4E、CDK4对胃癌诊断、早期治疗及预防具有重要价值。

奥氮平介导环磷酸腺苷反应元件结合蛋白/脑源性神经营养因子/酪氨酸蛋白激酶受体B通路对精神分裂模型大鼠的神经修复作用

目的 探讨奥氮平通过对环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)/脑源性神经营养因子(BDNF)/酪氨酸蛋白激酶受体B(TrkB)通路的影响对精神分裂模型大鼠的神经修复作用。方法 将60只大鼠纳入对照组、模型组、奥氮平低、中、高剂量组,各组均10只。模型组、奥氮平低、中、高剂量组大鼠进行MK-801腹腔注射0.2 mg/(kg·d),对照组注射等量生理盐水。模型建立成功24 h后,奥氮平低、中、高剂量组分别以0.5、1.0、1.5 mg/(kg·d)奥氮平溶液灌胃,对照组、模型组同剂量生理盐水灌胃。按照共济失调和刻板行为标准对大鼠行为学进行评分;Morris水迷宫实验评定大鼠认知功能及学习能力;ELISA法检测大鼠血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)水平;观察海马组织病理学变化;检测海马区细胞凋亡及CREB/BDNF/TrkB通路相关蛋白表达。结果 与对照组比较,模型组大鼠共济失调、刻板行为评分、TNF-α、IL-6表达、细胞凋亡率极显著增加(P<0.01),奥氮平低、中剂量组显著增加(P<0.05)。与对照组比较,模型组大鼠跨越平台次数、目标象限停留时间、CREB、磷酸化CREB(p-CREB)、磷酸化TrkB(p-TrkB)、TrkB、BDNF蛋白相对表达极显著减少(P<0.01),奥氮平低、中剂量组显著减少(P<0.05)。与模型组比较,奥氮平低、中剂量组跨越平台次数、目标象限停留时间显著增加(P<0.05),奥氮平高剂量组极显著增加(P<0.01)。模型组以及奥氮平低剂量组中海马细胞肿大明显、细胞核破碎分裂、固缩,组织排列杂乱;奥氮平中、高剂量组大鼠海马细胞中少见破碎分裂以及核固缩现象,整体组织与对照组大鼠相似。结论 奥氮平对精神分裂症模型大鼠的神经修复作用机制涉及到改善大鼠认知功能受损、保护大鼠海马神经细胞以及激活CREB/BDNF/TrkB信号通路的表达。

舒郁宁心汤对抑郁模型大鼠海马区脑源性神经营养因子和酪氨酸激酶B表达的影响

目的观察舒郁宁心汤对慢性应激抑郁模型大鼠海马区脑源性神经营养因子(BDNF)和酪氨酸激酶B(TrkB)表达的影响,探讨其抗抑郁机理。方法 60只SD大鼠随机分为空白组、模型组、氟西汀组及中药(舒郁宁心汤)高、中、低剂量组。复制孤养加慢性轻度不可预见性的应激抑郁模型,造模成功后分组进行药物干预。21 d后采用免疫组化方法观察大鼠海马区BDNF和TrkB表达的变化。结果与空白组比较,模型组大鼠BDNF和TrkB阳性表达降低(P<0.01);与模型组相比,中药高、中剂量组及氟西汀组大鼠海马区BDNF和TrkB阳性表达提高(P<0.05)。结论舒郁宁心汤可能通过提高海马组织BDNF和TrkB的表达起到治疗抑郁症的作用。

美金刚联合丰富环境对快速衰老小鼠海马脑源性神经营养因子、酪氨酸蛋白激酶受体B表达及学习记忆能力的影响

目的探讨美金刚联合丰富环境对快速衰老小鼠（SAMP8）海马脑源性神经营养因子（BDNF）、酪氨酸蛋白激酶受体B（TrkB）表达及学习记忆能力的影响。方法24只雄性SAMP8小鼠随机分为对照组、丰富环境治疗组（丰富环境组）、美金刚治疗组（美金刚组）和美金刚联合丰富环境组（联合治疗组），每组6只小鼠。治疗8周后，采用Morris水迷宫试验检测小鼠空间学习记忆能力，免疫印记法和实时定量PCR法检测小鼠海马组织中BDNF、TrkB的表达水平。结果与对照组比较，丰富环境组、美金刚组小鼠在试验第3d起寻找到平台的潜伏期明显缩短，联合治疗组小鼠在试验第2d起的逃避潜伏期明显缩短（P〈0．05～0．01）；且联合治疗组小鼠在试验第4d时的逃避潜伏期明显短于丰富环境组和美金刚组（均P〈0．05）。与对照组比较，其余3组小鼠穿越平台次数明显增多（P〈0．05～0．01）；且联合治疗组小鼠穿越平台次数明显多于丰富环境组和美金刚组（均P〈0．01）。与对照组比较，其余3组小鼠海马BDNFmRNA、BDNF蛋白和TrkB蛋白的表达均明显升高（P〈0．05～0．01），其中联合治疗组明显高于丰富环境组与美金刚组（P〈0．05～0．01）。各组小鼠海马TrkBmRNA表达的差异无统计学意义。结论美金刚和丰富环境治疗能够有效地改善SAMP8小鼠学习记忆能力并增加海马BDNF和TrkB的表达，二者联合治疗时效果更显著。

滋阴清热法对抑郁症模型大鼠脑内单胺类神经递质、脑源性神经营养因子和酪氨酸激酶B的影响

目的:研究滋阴清热法对抑郁模型大鼠的影响,揭示知母的抗抑郁作用机理。方法:分别从分子水平及病理改变对比3组间单胺类神经递质(5-HT、NE)、脑源性神经营养因子(BDNF)和酪氨酸激酶B(TrkB)在抑郁症大鼠模型脑内表达情况。结果:光镜结果提示滋阴清热治疗可使大脑外层皮质区神经元细胞、锥体细胞数量明显增多,细胞核核仁明显未见病理性变化,锥体细胞层毛细血管未见出血;免疫组化结果提示生理盐水组及滋阴清热组大鼠5-HT、NE、BDNF、TrkB的表达较正常组差(P<0.05),但生理盐水组和滋阴清热组的5-HT表达上差异无统计学意义(P>0.05)。结论:滋阴清热中药知母具有一定的神经保护作用,但其具体机制仍需要进一步深入的探索。

滋肾益脑方对肾阴虚抑郁模型大鼠脑源性神经营养因子、酪氨酸激酶受体B基因表达的影响

目的探讨中药复方滋肾益脑方对抑郁大鼠脑源性神经营养因子(BDNF)、酪氨酸激酶受体B(TrKB)基因表达的影响。方法以采用灌胃甲状腺素合并慢性不可预见性应激制成肾阴虚抑郁动物模型后,随机分为正常组、模型组、氟西汀组、滋肾益脑方中、高剂量组,观察各组大鼠敞箱试验和液体消耗试验等行为学变化,采用RT-PCR法检测BDNF mRNA、TrKB mRNA表达。结果与正常组比较,抑郁模型大鼠在敞箱试验、体重、糖水偏好试验等指标均存在显著性差异(P<0.01),海马内BDNF mRNA、TrKB mRNA表达也显著降低。各药物组比较各指标均无统计学意义(P>0.05),但滋肾益脑方高剂量组在改善抑郁行为(除糖水偏好外)、海马内BDNF mRNA、TrKB mRNA表达方面最明显。结论滋肾益脑方具有抗抑郁作用,对海马区BDNF、TrKB基因表达调节作用是其疗效机制之一。

促红细胞生成素对发育期小鼠脑损伤后脑源性神经营养因子和酪氨酸受体激酶B表达的影响

目的探讨促红细胞生成素(EPO)对鹅膏蕈氨酸(Ibo)致不同发育期小鼠脑损伤后脑源性神经营养因子(BDNF)和酪氨酸受体激酶B(Trk B)mRNA及蛋白表达的影响。方法以120只昆明白小鼠作为实验动物,其中7日龄(P7)、21日龄(P21)和42日龄(P42)小鼠各40只;再将同日龄小鼠随机分为Ibo组(n=15)、Ibo+EPO组(n=15)和对照组(n=10)。Ibo组采用微量注射法向左侧海马注射Ibo 1μL;Ibo+EPO组注射Ibo 1μL后,腹腔注射5 000 U/(kg.d)EPO,连续5 d;对照组注射等体积生理盐水。各组小鼠在建模后第5天进行Y-电迷宫测试;Cresyl Violet染色观察海马神经元病理学变化;Real-Time PCR检测海马BDNF mRNA和TrkB mRNA的表达;ELISA法检测BDNF和TrkB蛋白的表达。结果术后Ibo组小鼠寻找安全区的正确率明显低于对照组(P<0.05),而EPO+Ibo组小鼠寻找安全区的正确率明显高于Ibo组(P<0.05)。光学显微镜观察结果显示:Ibo组小鼠海马组织神经元发生明显变性和细胞死亡。Ibo+EPO组和Ibo组海马神经元死亡率明显高于对照组(P<0.05);而Ibo+EPO组损伤较轻。Ibo组和Ibo+EPO组海马组织BDNF和TrkB的mRNA及蛋白表达量均显著高于对照组(P<0.05);其中,Ibo+EPO组BDNF和TrkB的mRNA及蛋白表达量均显著高于Ibo组(P<0.05)。结论 Ibo致脑损伤时,海马组织BDNF和TrkB mRNA及蛋白表达均明显增强,可能是一种保护性反应。EPO可减轻Ibo所致脑损伤,其机制可能与上调BDNF和TrkB的mRNA及蛋白的表达有关。

ATP敏感性钾通道、酪氨酸激酶和NF-κB参与高铁血红素诱导的大鼠心肌保护作用

通过诱导血红素氧化酶1(Hemeoxygenase1,HO1)可增强大鼠对抗心肌缺血复灌损伤。本文探讨线粒体ATP敏感性钾通道(MitochondrialATPsensitivepotassiumchannel,mitoKATP)、酪氨酸激酶(Proteintyrosinekinases,PTK)和核因子κB(NuclearfactorkappaB,NFκB)是否参与其中。SD大鼠腹腔注射HO1的诱导剂高铁血红素(hemin)50mg/kg,24h后取离体心脏给予30min缺血和120min复灌。结果发现,hemin可改善缺血-复灌(Ischemiareperfusion,IS)心脏的收缩功能,缩小心肌梗死面积;而HO1的抑制剂ZnPP可抑制hemin引起的HO1活性增加,并抵消hemin诱导的心肌保护作用。在腹腔注射hemin前给予mitoKATP通道阻断剂5HD(5mg/kg),与hemin+IS组相比,心脏的收缩功能明显下降,心肌梗死面积增大,LDH和CK释放增加。而在hemin预处理后24h,30min缺血前给予5HD灌流(100μmol/L)同样可阻断hemin诱导的心肌保护作用。hemin诱导的心肌保护作用亦可被PTK抑制剂genistein(10μmol/L)或NFκB抑制剂PDTC(100μmol/L)所取消。结果提示:hemin可诱导心肌HO1增加,保护心肌缺血-复灌性损伤,其作用可能与PTK和NFκB的激活有关,而mitoKATP通道在hemin诱导的心肌保护作用中可能扮演了启动因子和终末效应器双重角色。

酪氨酸激酶B在涎腺腺样囊性癌中的表达及与嗜神经侵袭的关系

目的 检测酪氨酸激酶B(TrkB)在涎腺腺样囊性癌 (ACC)的表达情况 ,探讨TrkB与ACC嗜神经侵袭的关系。方法 研究对象为 2 8例ACC ,3例正常腮腺 ,3例正常颌下腺 ,3例正常舌下腺及 5例涎腺腺泡细胞癌标本 ,采用免疫组织化学及图像分析法对组织切片中的TrkB进行检测。结果 以病理学表现为标准 ,2 8例ACC中的嗜神经侵袭率为 4 6 .4 % (13/2 8) ,TrkB阳性率为 92 .8% (2 6 /2 8) ,存在嗜神经现象组中TrkB表达水平明显高于未见嗜神经现象组 (P =0 .0 0 1)。TrkB的表达在正常大涎腺的导管细胞为阳性 ,而在腺泡细胞癌胞浆内均为阴性。结论 TrkB可能作为ACC嗜神经侵袭的生物学标志物。

受体酪氨酸激酶EphB6在卵巢浆液性癌中的表达及其意义

目的 探讨受体酪氨酸激酶EphB6在卵巢浆液性癌中的表达及其与临床病理特征的关系。方法 采用免疫组织化学染色检测EphB6蛋白在55例卵巢浆液性癌、24例卵巢良性肿瘤、37例卵巢交界性肿瘤和20例正常输卵管组织蜡块中的表达情况,并分析EphB6蛋白表达与卵巢癌临床病理特征及预后之间的相关性。结果 EphB6蛋白在100.0%（20/20）正常输卵管、100.0%（24/24）卵巢良性肿瘤、78.4%（29/37）卵巢交界性肿瘤和18.2%（10/55）卵巢浆液性癌组织中高表达（P〈0.001）。EphB6蛋白表达水平与肿瘤分化程度、TNM分期及Ki-67表达均有关（P〈0.05）。EphB6高表达组和EphB6中、低表达组的中位生存期（OS）分别为103个月和69个月（95%CI：26-105个月）,差异有统计学意义（P=0.046）。结论 EphB6将有可能成为一种新的鉴别卵巢肿瘤高、低级别的标志物和预测预后的新指标。

酪氨酸蛋白激酶受体B在人卵泡中的表达及意义

目的探讨酪氨酸蛋白激酶受体B(tyrosine kinase receptor B, TrkB)在人卵泡中的表达及意义。方法用免疫细胞化学方法检测TrkB在超促排卵妇女壁层颗粒细胞、卵丘颗粒细胞、未受精或未成熟卵母细胞中的表达,并用Western免疫印迹方法检测TrkB在壁层颗粒细胞、卵丘颗粒细胞中的表达水平。结果壁层颗粒细胞、卵丘颗粒细胞、卵母细胞均有TrkB表达。壁层颗粒细胞表达量高于卵丘颗粒细胞。结论脑源性神经营养因子在人卵巢可能通过与TrkB结合,参与颗粒细胞功能的完成和卵母细胞发育的调控。

脑源性神经营养因子/酪氨酸激酶受体B信号通路抑制剂K252a逆转丙戊酸引起的神经元过度生长

目的：探讨脑源性神经营养因子（BDNF）/酪氨酸激酶受体B（TrkB）信号通路抑制剂K252a是否对丙戊酸引起的神经元过度生长有逆转作用。方法：用丙戊酸及K252a分别或共处理大鼠大脑皮层原代培养神经元，定量RT-PCR及免疫印迹检测BDNF/TrkB通路蛋白BDNF及TrkB的表达变化，同时以免疫荧光技术观测神经元形态变化。结果：丙戊酸处理后，显著增加神经元BDNF- mRNA的表达，TrkB mRNA的表达则未见明显变化；丙戊酸处理也导致BDNF蛋白表达上调。而用K252a处理后，神经元BDNF及TrkB表达与对照组相比，无明显变化。形态学结果显示，丙戊酸处理后，神经元过度生长，表现为神经元突起数目及总长度显著增加；而K252a处理后，丙戊酸引起的神经元突起过度生长受到明显抑制。结论：BDNF/TrkB通路抑制剂K252a可逆转丙戊酸导致的神经元过度生长。该结果为丙戊酸及K252a应用于临床治疗某些神经发育与退行性疾病如自闭症及阿尔茨海默病等提供了实验依据。

酪氨酸激酶受体B在OVCAR-3卵巢癌细胞中的表达及意义

背景与目的:失巢凋亡抑制因子酪氨酸激酶受体B(tyrosine kinase receptor,TrkB)能诱导正常上皮细胞的恶性转化并且使该细胞具有高侵袭能力。TrkB过度表达与神经母细胞瘤和其他多种人类高侵袭性恶性肿瘤的化疗耐药和不良预后有关。本研究旨在探讨TrkB及其配体脑源性神经营养因子(brain- derived neurotrophic factor,BDNF)在卵巢上皮性癌细胞系OVCAR-3中的表达及其意义。方法:检测卵巢癌细胞系OVCAR-3细胞贴壁培养(AC)、细胞立体培养(AIC)以及细胞立体培养得到的多细胞团簇(CS)经胰酶消化成单细胞后再次贴壁培养(RAC)细胞中TrkB及BDN F的表达差异。结果:经RT-PCR检测,与贴壁培养细胞(adhesive cells)比较,TrkB mRNA高表达于OVCAR-3多细胞团簇中(multicellular-spheroids),两组数值分别(23.5±0.5)%,(35.3±0.7)%,差异有显著性(P<0.001);BDNF mRNA的表达则正相反,两组数值分别(41.4±0.6)%,(32.2±0.7)%,差异有显著性(P<0.001)。经Western blot检测,TrkB的前体蛋白(未发生糖基化的受体形式)广泛地高表达于上述3种不同培养方式的OVCAR-3细胞中;与贴壁培养细胞比较,OVCAR-3细胞立体培养全长TrkB(发生糖基化的完整受体形式,分子量145 000)明显高表达(P<0.001)。结论:卵巢癌细胞中存在TrkB及BDNF的自分泌环路,TrkB可能是介导卵巢癌失巢凋亡抑制的因子。

酪氨酸激酶受体B在卵巢上皮性癌中的表达及其意义

背景与目的:失巢凋亡抑制因子酪氨酸激酶受体B(tyrosine kinase receptor, TrkB)能诱导正常上皮细胞的恶性转化并且使该细胞具有高转移能力。TrkB在良性肿瘤中及正常卵巢上皮中不表达,在癌组织中不但表达,并且与交界性肿瘤比较表达明显增高;转移灶和低分化癌组织中明显增高,如在神经母细胞瘤和其它多种人类高侵袭性恶性肿瘤组织中过度表达,本研究旨在探讨其过度表达与肿瘤组织分化及病人预后的关系。方法:选取卵巢癌石蜡标本73例(包括与原发灶相对应的8例腹水中的癌细胞团簇),其中低分化腺癌34例,28例卵巢交界性上皮性肿瘤;16例卵巢良性上皮性肿瘤及13例正常卵巢组织作为对照,行免疫组化ABC法检测TrkB的表达;随机选取上述病例中30例(包括4例与原发灶相对应的大网膜转移灶和腹水中的癌细胞团簇)、交界性上皮性肿瘤7例;卵巢良性上皮性肿瘤4例及正常卵巢组织(包括卵巢皮质和髓质)2例作为对照,行RT-PCR检测TrkB的表达。结果:RT-PCR结果表明,TrkB mRNA在卵巢癌与卵巢交界性肿瘤中的相对转录水平分别为(16.7±3.1)%和(4.6±0.4)%,在卵巢癌组织中表达明显增加(P<0.001);TrkB mRNA在大网膜转移灶和腹水中的癌细胞团簇中的TrkB mRNA相对表达量分别为(31.4±1.4)%和(28.2±0.7)%,与相应的原发灶(18.1±1.1)%比较,差异有显著性(P<0.001)。免疫组化结果表明,卵巢良性上皮性肿瘤及正常卵巢上皮不表达TrkB;TrkB在卵巢上皮性癌及卵巢交界性上皮性肿瘤组织中的阳性表达率分别为67.12%(49/73)和14.29%(4/28),两者比较差异有显著性(P<0.001),TrkB前体蛋白(表达于胞质)广泛地高表达于卵巢上皮性癌组织中67.12%(49/73),全长TrkB蛋白(表达于胞膜)在腹水中的癌细胞团簇100%(8/8)和低分化卵巢癌组织中100%(34/34)表达增强,与原发灶49.32%(36/73)和高分化癌7.69%(3/39)比较,差异有显著性(P<0.01)。TrkB阳性表达与卵巢癌患者不良预后有关(P<0.002)。结论:卵巢上皮性癌中存在TrkB的过度表达;全长TrkB高表达于低分化卵巢癌和腹水中的癌细胞团簇中,TrkB可能是介导卵巢癌失巢凋亡抑制的因子;TrkB的过度表达预示卵巢癌的不良预后。

酪氨酸激酶受体B在鼻咽癌和颈淋巴结转移灶中的表达及其意义

目的:检测酪氨酸激酶受体B(TrkB)在鼻咽癌以及淋巴结转移灶中的表达,并探讨其临床意义。方法:采用免疫组化法检测57例鼻咽癌和20例鼻咽部慢性炎症的鼻咽部活检组织,以及27例鼻咽癌淋巴结转移灶以及27例慢性淋巴结炎组织中的TrkB的表达,并分析TrkB在鼻咽癌不同临床分期和不同病理分级中的表达和意义。结果:在鼻咽癌组织中TrkB表达的阳性率是82.5%,高于鼻咽慢性炎症对照组的表达(P<0.05)。淋巴结转移灶中TrkB的阳性率是88.9%;高于淋巴结慢性炎症组的表达(P<0.05)。也高于TrkB在鼻咽癌原发灶中的表达(P<0.05)。鼻咽癌中TrkB的表达水平与肿瘤的侵犯范围、淋巴结转移、临床分期有关,Ⅲ+Ⅳ期高于Ⅰ+Ⅱ期(P<0.05)。结论:TrkB在鼻咽癌组织及颈淋巴结转移灶均存在高表达,其高表达是鼻咽癌浸润和转移的一个重要因素。

脑胶质瘤组织中酪氨酸激酶受体B表达及其与病理分级的关系

目的观察脑胶质瘤组织中酪氨酸激酶受体B(Trk B)的表达情况,并探讨其与病理分级的关系。方法将45例份脑胶质瘤患者手术切除肿瘤组织作为观察组,其中Ⅰ+Ⅱ级18例份(低级别)、Ⅲ+Ⅳ级27例份(高级别);另取10例份正常脑组织作为对照组,采用实时荧光定量PCR检测两组Trk B mRNA表达,免疫组织化学染色、Western blot法检测两组Trk B蛋白表达,分析脑胶质瘤Trk B蛋白表达与病理分级的关系。结果观察组、对照组脑组织中Trk B mRNA的相对表达量分别为0.188 1±0.030 1、0.083 5±0.037 4,Trk B蛋白的相对表达量分别为0.955 6±0.063 7、0.448 9±0.072 4,两组相比,P均<0.05。低级别、高级别脑胶质瘤组织中Trk B mRNA的相对表达量分别为0.101 4±0.027 9、0.237 1±0.038 3,Trk B蛋白的相对表达量分别为0.765 3±0.048 1、1.082 5±0.083 5,两者相比,P均<0.05。结论脑胶质瘤组织中Trk B表达升高,高病理分级较低病理分级Trk B表达高。

Bruton酪氨酸激酶在对乙酰氨基酚诱导的小鼠肝损伤中变化及意义

目的观察对乙酰氨基酚(APAP)诱导的小鼠急性肝损伤中Bruton酪氨酸激酶(Btk)、磷酸化Btk(p-Btk)、核因子κB(NF-κB)、核苷酸结合寡聚域样受体蛋白3(NLRP3)、白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的动态变化,初步探讨Btk在APAP诱导的急性肝损伤中的作用。方法随机将54只小鼠分为9组,分别为对照组、APAP 0.5 h组、APAP 1 h组、APAP 3 h组、APAP 6 h组、APAP 12 h组、APAP 24 h组、APAP 36 h组、APAP 48 h组,每组6只。禁食12 h后,单次腹腔注射APAP(300 mg/kg)0.5、1、3、6、12、24、36、48 h后处死相应组别的小鼠。测定各组血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST);观察各组肝脏病理变化;ELSIA测定各组肝组织匀浆中IL-1β和TNF-α;Western blot测定肝组织中Btk、p-Btk、NF-κB及NLRP3表达。结果与对照组比较,APAP干预后的各组血清ALT(F=100.968,P=0.000)、AST(F=73.539,P=0.000)、肝脏坏死程度(F=29.845,P=0.000)、肝脏Btk(F=441.280,P=0.000)、p-Btk(F=1323.022,P=0.000)、NF-κB(F=133.125,P=0.000)及NLRP3水平(F=820.095,P=0.000)、IL-1β(F=8.643,P=0.000)、TNF-α(F=20.545,P=0.000)含量均有变化,其中24 h的各种指标最高。结论单次腹腔注射APAP诱导的小鼠肝损伤呈现动态变化,其病理机制可能与其激活Btk,导致NLRP3形成、NF-κB激活及炎症因子升高有关。