酪氨酸激酶C与涎腺腺样囊性癌嗜颅神经侵袭的关系

目的 观察酪氨酸激酶C(TrkC)在涎腺腺样囊性癌 (ACC)的表达情况 ,探讨TrkC与ACC嗜颅神经侵袭的关系。方法 采用免疫组化方法对 32例ACC、7例正常腮腺及 3例腺泡细胞癌标本中的TrkC进行检测。结果 TrkC在ACC肿瘤细胞中的阳性率为 90 .6 % (2 9/ 32 ) ,且存在嗜神经现象组的TrkC表达水平明显高于未见嗜神经现象组 (P <0 .0 5 )。TrkC的表达在正常腮腺导管细胞为阳性 ,而在腺泡细胞癌均为阴性。结论 TrkC在ACC中的过表达可能是ACC嗜神经侵袭的机制之一 。

肿瘤坏死因子α拮抗剂联合酪氨酸激酶C基因修饰神经干细胞移植治疗脊髓损伤

背景:脊髓损伤在控制损伤后炎症反应的同时联合神经干细胞移植,是否能够提高脊髓损伤的治疗效果,目前尚不明确。目的:实验旨在检测早期应用肿瘤坏死因子α拮抗剂Etanercept联合酪氨酸激酶C基因修饰移植治疗后大鼠脊髓组织修复,髓鞘再生和神经轴突再生,运动功能恢复情况及其可能机制。方法:利用慢病毒转染技术构建酪氨酸激酶C过表达的神经干细胞,制备大鼠脊髓横断损伤模型,采用肿瘤坏死因子α拮抗剂Etanercept联合酪氨酸激酶C基因修饰神经干细胞移植。利用尼氏染色、免疫荧光及免疫印迹等方法测定损伤后神经元数目和神经再生情况;利用BBB功能学评分和诱发电位来检测大鼠运动功能;利用电镜检测和甲苯胺蓝染色来检测治疗后各组髓鞘再生情况。结果与结论:损伤后28 d,与其他组相比,Etanercept联合酪氨酸激酶C-神经干细胞移植组损伤脊髓尾端处有更多前角运动神经元存活(P<0.05),具备髓鞘包绕的轴突数量增高(P<0.05),损伤后运动功能评分相对更高(P<0.05),运动诱发电位的振幅恢复更大(P<0.05),潜伏期相对更短(P<0.05)。结果证实,大鼠脊髓损伤后早期应用肿瘤坏死因子α拮抗剂联合酪氨酸激酶C-神经干细胞移植,可有效促进大鼠神经元轴突及髓鞘再生,进而促进运动功能恢复。

推拿影响坐骨神经损伤大鼠行为学及神经营养素3、酪氨酸激酶受体C表达的研究

目的观察推拿对坐骨神经损伤大鼠行为学、神经营养素3(neurotrophin-3,NT-3)、酪氨酸激酶受体C(tyrosine receptor kinase C,TrkC)表达的影响,研究推拿修复坐骨神经损伤的机理。方法将大鼠分为正常组、假手术组、模型组、模型对照组、推拿组,采用大鼠坐骨神经夹持损伤法于右侧股骨中段下方夹持神经进行造模,7天后进行推拿干预,共20次。干预10次、20次后,分别通过坐骨神经功能指数(sciatic functional index,SFI)、斜板试验观察各组大鼠的行为学变化;再通过免疫组化法检测各组大鼠脊髓腹角NT-3、TrkC的表达情况,最后对各组数据进行统计分析。结果模型组和模型对照组大鼠行为学检测提示坐骨神经损伤大鼠的运动功能明显降低,在推拿干预后,斜板试验明显升高,神经功能恢复情况优于模型组和模型对照组(P<0.05);SFI有一定程度恢复,负值较模型组、模型对照组高,但差异无统计学意义(P>0.05)。模型组、模型对照组及推拿组脊髓NT-3、TrkC表达与正常组相比差异均有统计学意义(P<0.05),推拿组NT-3表达与模型组相比差异也有统计学意义(P<0.05),推拿组更高。结论中医推拿可以改善神经损伤大鼠的行为学表现,可能是通过促进NT-3及其受体TrkC的表达,发挥抑制细胞凋亡,促神经元存活的作用,最终实现促进神经功能恢复,改善其运动功能。

2型猪链球菌酪氨酸激酶Cps2C基因过表达株的构建

目的构建2型猪链球菌酪氨酸激酶Cps2C基因过表达株,为cps2C基因功能研究提供实验材料。方法使用重叠延伸PCR技术将延伸因子TufA(又名EF-Tu,编码基因为SSU05_0530)的启动子(命名为P0530)与cps2C基因连接为P0530cps2C片段,将P0530cps2C酶切后连接至猪链球菌-大肠埃希菌穿梭质粒pSET2,构建过表达质粒pSET2::P0530cps2C。将pSET2::P0530cps2C电转化导入S.suis 2野生毒株05ZYH33感受态细胞,抗性及组合PCR筛选得到cps2C过表达株。qRT-PCR检测过表达株cps2C基因的转录水平。结果重叠延伸PCR成功将P0530启动子片段(300 bp)和cps2C基因片段(696 bp)拼接为P0530cps2C(996 bp),片段及载体经BamH I和EcoR I酶切后连接,成功构建出过表达质粒pSET2::P0530cps2C;将pSET2::P0530cps2C电转化导入S.suis 205ZYH33感受态细胞,抗性筛选及组合PCR检测结果显示cps2C过表达株构建成功。提取野生株05ZYH33和cps2C过表达株总RNA后进行qRT-PCR实验,结果显示过表达株cps2C基因的相对表达水平较05ZYH33株上调2.4倍。结论本研究选用S.suis 205ZYH33的延伸因子TufA强启动子P0530作为启动子,成功构建过表达质粒pSET2::P0530cps2C并导入S.suis 2感受态细胞,成功获得cps2C过表达株,为进一步研究酪氨酸激酶Cps2C功能提供实验材料。

SCF/c-Kit信号通路通过抑制肥大细胞增殖调控影响病理性瘢痕形成的研究

目的探讨配体干细胞因子/c-KIT原癌基因(SCF/c-kit)对肥大细胞增殖的影响,并进一步探讨其在病理性瘢痕形成中的作用。方法收集病理性瘢痕组织和正常组织,通过甲苯胺蓝染色法检测组织中肥大细胞数目,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测患者血清中干细胞因子SCF的表达,蛋白质印迹法(Western blotting)检测组织中SCF和其受体c-Kit的表达。建立病理性瘢痕裸鼠模型,16 d后将造模成功的裸鼠随机分为模型+沉默阴性对照(si-NC)组和模型+si-SCF组,分别于裸鼠瘢痕内注射si-NC、si-SCF质粒和脂质体混合液0.25 mL,另设对照组,注射等体积磷酸盐缓冲液(PBS)。7 d后收集标本,游标卡尺测量裸鼠瘢痕体积大小,V.G染色检测瘢痕组织Ⅰ型胶原含量,甲苯胺蓝染色评估瘢痕组织肥大细胞数目,Western blotting检测组织中SCF和c-Kit的表达。结果病理性瘢痕患者的瘢痕组织出现大量肥大细胞,同时在病理性瘢痕患者血清中发现SCF高表达,而且在其瘢痕组织中SCF和c-Kit蛋白表达也增多;在病理性瘢痕模型裸鼠体内沉默SCF,抑制了c-Kit的表达,减小了模型裸鼠的瘢痕体积,降低了瘢痕组织中Ⅰ型胶原含量,还抑制了肥大细胞增殖。结论SCF/c-Kit信号通路可能是通过抑制肥大细胞增殖,来调控病理性瘢痕的形成。SCF/c-Kit的表达失控可能也是病理性瘢痕形成的一个重要诱因。

成年大鼠脊髓全横断损伤后酪氨酸激酶受体C在脊髓和大脑皮层的表达(英文)

目的研究神经营养因子3(neurotrophin-3, NT-3)的受体—酪氨酸激酶受体C(tyrosine kinase receptor C, TrkC)在脊髓损伤(spinal cord injury, SCI)后神经重塑中的作用。方法研究脊髓全横断损伤大鼠手术后第1、3、7和14 d时,低位胸髓节段和大脑中央前回TrkC的表达。结果损伤节段(T10-T11)双侧和临近节段(T9和T12)的TrkC蛋白水平在术后1-7 d显著下调,而在术后14 d快速增强。此外,TrkC mRNA表达水平的暂时性变化与TrkC蛋白的变化模式相似。TrkC蛋白和mRNA在损伤节段(T10-T11)的水平显著高于在临近节段(T9和T12)的水平。此外,TrkC蛋白和mRNA在吻侧节段的水平高于在尾侧节段的水平。与脊髓不同的是,运动皮层中并未检测到TrkC蛋白,并且TrkC mRNA的表达水平也很低。结论 TrkC可能与脊髓损伤后的神经功能重塑有关。

下调酪氨酸激酶受体体C蛋白表达对膀胱癌细胞SCaBER的增殖抑制作用

【目的】通过检测膀胱癌细胞系中酪氨酸激酶受体C(tyrosine kinase receptor C,TrkC)中的表达水平及小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)干涉膀胱癌细胞中TrkC的表达,分析TrkC在膀胱癌中的作用。【方法】采用RT-PCR和Western blotting的方法检测人膀胱癌细胞株5 637、T24、SCaBER中TrkC的表达,根据TrkC基因序列设计并合成siRNA,构建质粒。用脂质体将p Silencer/TrkC和对照空载体p Silencer转染人膀胱癌细胞株SCaBER,通过Western blotting检测转染细胞的TrkC表达情况,绘制细胞生长曲线,克隆形成实验检测TrkC对SCaBER细胞增殖的影响的影响。【结果】RT-PCR和Western blotting结果均表明人膀胱癌细胞株5 637、T24、SCaBER中TrkC的表达水平明显高于人正常膀胱移行上皮细胞SV-HUC-1;成功利用siRNA下调SCaBER细胞中TrkC的表达后,细胞生长曲线及克隆形成实验结果显示SCaBER细胞出现生长抑制。【结论】TrkC在膀胱癌细胞中的表达高于正常膀胱上皮细胞,下调TrkC表达可以抑制膀胱癌细胞SCaBER增殖,TrkC可能成为膀胱癌基因治疗的新靶点。

TRKC基因体外转染大鼠神经干细胞的方法

目的探讨体外转染TRKC基因的神经干细胞的制备方法。方法利用自行合成的引物进行PCR反应,定向克隆构建TRKC-cDNA质粒并进行DNA测序分析,将pEGFP-C1质粒和TRKC-cDNA质粒进行酶切、重组,构建出pEGFP-C1-TRKC质粒。用脂质体将重组质粒转染到体外培养的大鼠神经干细胞中。用W estern b lot、免疫荧光和MTT法观察转染基因的表达和转基因后神经干细胞的增殖活性。结果成功构建了TRKC-cDNA质粒,DNA测序证明所获得的目的基因与公布序列的一致性为99%,所获得的重组子符合研究要求。pEGFP-C1-TRKC质粒转染到神经干细胞后,宿主细胞能高效、稳定地表达目的基因产物GFP和TRKC。在NT-3作用下转TRKC基因神经干细胞的增殖活性有明显增强。结论以质粒为载体、脂质体为介导可成功地把TRKC基因转染到神经干细胞内,转染基因表达好且具有功能。

神经营养因子3与酪氨酸激酶受体C在卒中后抑郁模型大鼠额前皮质的表达

目的 探讨神经营养因子3（neurotrophic factor-3,NT-3）及其受体酪氨酸激酶受体C （tyrosine kinase receptors,TrkC）mRNA及蛋白在脑卒中后抑郁（post stroke depression,PSD）模型大鼠额前皮质的表达变化.方法 将实验大鼠进行行为学评分（Open-field法）,评分相近的大鼠被分为4组：正常组、抑郁组、卒中组及PSD组,每组13只.抑郁组：采用孤养法结合慢性不可预见的中等应激刺激（chronic unpredictable mild stress,CUMS）建立;卒中组：利用线栓法建立局灶性脑缺血大鼠模型;PSD组：动物建成脑缺血模型后孤养再加以CUMS方法建立PSD模型,并与正常对照组、卒中组及抑郁组作比较.于造模后第29天应用免疫组化及RT-PCR检测各组大鼠额前皮质NT-3及其高亲和力受体TrkC的免疫阳性细胞及mRNA的表达情况.结果 免疫组化实验结果发现,PSD组额前皮质NT-3免疫阳性细胞数[（10.11±2.89）个/视野]较正常对照组明显减少[（19.00±12.41）个/视野] （P〈0.05）,其余各组相比差异无统计学意义（P〉0.05）;PSD组大鼠额前皮质TrkC免疫阳性细胞数[（19.56±5.66）个/视野]较正常对照组[（25.11±3.95）个/视野]及脑卒中组[（29.67±7.38）个/视野]明显减少（P〈0.05）;抑郁组免疫阳性细胞数[（19.00±5.61）个/视野]也较正常对照组[（25.11±3.95）个/视野]及脑卒中组（29.67±7.38个/视野）明显减少（P〈0.05）;其余各组相比差异无统计学意义（P〉0.05）.RT-PCR检查结果显示各组大鼠额前皮质组织中均有 GAPDH、NT3和 TrkCmRNA的表达, PSD组大鼠额前皮质NT-3的表达明显低于正常对照组（P〈0.05）;其余各组比较差异无统计学意义（P〉0.05）;各组TrkCmRNA表达差异无统计学意义（P〉0.05）.结论 PSD大鼠额前皮质NT-3及其受体TrkC的表达减少可能与PSD发病有关.

转TrkC基因神经干细胞移植联合NT-3治疗脊髓缺血再灌注损伤中MAP-2表达的变化

目的 研究转酪氨酸激酶C（tyrosine kinase C,Trk C）基因神经干细胞（neural stem cells,NSCs）移植联合神经营养素（neurotrophin,NT）-3局部应用对大鼠脊髓缺血再灌注损伤的治疗作用及微管相关蛋白-2（microtubule associated protein-2,MAP-2）表达的变化。方法 90只Wistar大鼠,雌雄不拘,清洁级,300~350 g,随机分为6组（每组15只）,分别为正常对照组（A组）、缺血再灌注损伤模型组（B组）、NSCs移植组（C组）、NSCs移植＋NT-3局部使用组（D组）、转Trk C基因NSCs移植组（E组）和转Trk C基因NSCs移植＋NT-3局部使用组（F组）。于左锁骨下动脉末梢处予降主动脉缠胶带法建立脊髓缺血损伤模型,50 min后,阻断的降主动脉被解除。术后第1天进行细胞移植。各组大鼠分别于细胞移植后6 h、24 h及48 h进行脊髓运动功能评分。术后24 h、1周,分别处死7和8只大鼠,迅速取出脊髓标本,苏木素-伊红、NISSLE染色观察神经元形态学变化,免疫组织化学法观察MAP-2的表达变化,实时定量聚合酶链反应法检测MAP-2 m RNA的表达变化。结果 与缺血模型组（B、C、D、E组）和其他移植处理组相比,F组大鼠脊髓运动功能恢复情况最佳,脊髓神经元核溶解程度较轻,神经元结构相对完整,数量也较多,MAP-2表达增加;与对照组（A组）和缺血模型组（B组）相比,各移植处理组MAP-2 m RNA表达均有不同程度的增加,并且,F组MAP-2 m RNA表达增加最为明显,与其他各组相比,差异具有统计学意义（P〈0.01）。结论 在局部给予的NT-3作用下,转Trk C基因NSCs对脊髓缺血再灌注损伤具有较好的治疗作用,其可能的机制是通过上调MAP-2的表达实现的。

推拿影响坐骨神经损伤大鼠NT-3及其受体TrkC表达的研究

目的:观察推拿对坐骨神经损伤大鼠行为学、NT-3、TrkC的影响,探讨推拿促进坐骨神经损伤修复的机制。方法:采用大鼠坐骨神经夹持损伤模型,通过斜板实验、BBB评分观察正常组、假手术组、模型组、模型对照组、推拿组大鼠的行为学变化;通过免疫组化染色观察各组大鼠脊髓腹角NT-3、TrkC的表达情况,最后统计比较各组差异。结果:模型组和模型对照组大鼠行为学检测提示坐骨神经损伤大鼠的运动功能明显降低,在推拿干预后,斜板试验、BBB评分明显升高,神经功能恢复情况优于模型组和模型对照组;模型组、模型对照组及推拿组NT-3、TrkC表达与正常组相比均有统计学差异,推拿组NT-3表达与模型组相比也有显著差异,推拿组更高。结论:中医推拿可以通过促进NT-3及其高亲和力受体TrkC的表达,发挥抑制细胞凋亡,促神经元存活的作用,最终改善坐骨神经损伤大鼠的运动功能,促进神经功能恢复。

食物硬度对离乳后大鼠咬肌神经营养因子3及其受体TrkC mRNA表达的影响

目的:检测不同硬度食物喂养下,大鼠在离乳后不同发育阶段咬肌神经营养因子3(Neurotrophin-3,NT-3)及其受体酪氨酸蛋白激酶C(Tyrosine kinase C,TrkC)的表达变化。方法:对出生后18d刚离乳的大鼠分别喂养固体、粉状鼠粮,于大鼠3w、4w、6w、9w龄时取表层咬肌,利用RT-PCR方法检测NT-3及其受体TrkC mRNA的表达变化情况。结果:在出生后3-9w内,粉、固体组大鼠咬肌NT-3 mRNA表达均明显下降(P<0.05),粉食组NT-3 mRNA在6w时表达低于固体组(P<0.05);TrkC mRNA在3-9w内持续下降,但粉、固体组间没有差异(P>0.05)。结论:粉食喂养能够降低离乳后大鼠咬肌NT-3 mRNA的表达,但对TrkC mRNA影响不大。

c-Kit和n-NOS2双重染色在豚鼠膀胱Cajal样间质细胞的表达

提要:目的研究c-Kit与n-NOS2在豚鼠膀胱Cajal样间质细胞的共表达情况。方法采用培养成年豚鼠膀胱Cajal样间质细胞,c-Kit免疫荧光和n-NOS2免疫荧光双重染色。结果豚鼠膀胱内Cajal样间质细胞体为梭形或卵圆形,常见2～3个细长的突起。c-Kit和n-NOS2免疫荧光双重染色发现两种抗体在Cajal样间质细胞共表达。结论本研究结果提示在豚鼠膀胱Cajal样间质细胞内c-Kit和n-NOS2共存,Cajal样间质细胞具备产生NO的功能,Cajal样间质细胞存在调节膀胱自律活动的结构基础。

子宫肉瘤c-kit表达意义的探讨

目的:探讨胃肠道外间质肿瘤—子宫肉瘤32例(平滑肌肉瘤20例、子宫内膜间质肉瘤10例及子宫腺肉瘤2例),测定酪氨酸激酶(c-kitCD117)的阳性表达率,是否亦具备类同胃肠道间质肿瘤细胞中的所含有c-kit促使CD117呈阳性,以便寻找治疗子宫肉瘤的新途径。方法:对32例子宫肉瘤,均以免疫组化测定CD117,并选用经病理确诊及阳性表达CD117的胃肠道间质肿瘤5例为对照。结果:子宫肉瘤测定CD117阳性率依次为:子宫平滑肌肉瘤11/20例(55%)、子宫内膜间质肉瘤3/10例(30%)及子宫腺肉瘤0/2例。结论:对阳性表达CD117不可切除或转移性子宫肉瘤患者选择分子靶向治疗,提供理论依据。

pSilencer4.1-cmv-TrkC质粒对前列腺癌细胞株PC3增殖的影响

【目的】通过pSilencer4.1-cmv-TrkC siRNA干涉质粒转染下调人前列腺癌细胞系PC3中酪氨酸激酶受体C(tyrosinelcinase C,TrkC)的表达,观察TrkC在前列腺癌细胞中的作用。【方法】根据TrkC基因序列设计并合成siRNA,构建质粒。用脂质体将pSilencer/TrkC和对照空载体pSilencer转染人前列腺癌细胞系PC3,通过Western blotting检测转染细胞的TrkC表达情况,绘制细胞生长曲线,流式细胞仪检测TrkC对细胞周期及凋亡的影响。【结果】成功利用脂质体转染PC3细胞后,Western blotting鉴定结果显示:TrkC的表达水平显著降低,细胞生长曲线及流式细胞仪检测结果显示pSilencer4.1-cmv-TrkC脂质体转染的PC3细胞出现生长抑制及凋亡增加。【结论】下调TrkC表达可以抑制前列腺癌细胞PC3增殖,TrkC可能参与了前列腺癌的发生发展过程。

DCs和NSPCs共培养促进NSPCs增殖及其机制的初步研究

目的观察体外Transwell共培养系统中树突状细胞(dendritic cells,DCs)对神经干/前体细胞(neural stem/progenitor cells,NSPCs)增殖的影响,初步探讨神经营养因子-3(neurotrophin-3,NT-3)在DCs调控NSPCs中的作用机制。方法根据是否采用Transwell小室将DCs和NSPCs共培养分为分隔培养(DCs/NSPCs组)和混合培养(DCs+NSPCs组),ELISA法测定DCs组、NSPCs组、DCs+NSPCs组、DCs/NSPCs组共培养48 h上清中的NT-3的含量。为观察NT-3在DCs调控NSPCs中的作用及可能的机制,成球法检测NSPCs组、NSPCs/DCs+K252a组、NSPCs+DCs组、NSPCs+NT-3组的NSPCs增殖,免疫细胞荧光法和Western blot法检测各组NSPCs表面酪氨酸激酶受体C(TrkC)的表达。结果 ELISA实验结果显示,Transwell共培养48 h上清NT-3的含量,NSPCs/DCs组较DCs组和NSPCs组明显升高(P<0.05)。镜下观察、测量结果显示NSPCs/DCs组和NSPCs+NT-3组神经球数量增多,平均直径明显增大(P<0.05)。免疫细胞荧光和Western blot检测结果表明,NSPCs+DCs组和NSPCs+NT-3组中NSPCs的TrkC表达较NSPCs组和NSPCs/DCs+K252a组高(P<0.05)。结论体外DCs与NSPCs共培养,促进NSPCs增殖、NT-3的分泌及TrkC的表达,NT-3可能是通过TrkC受体参与NSPCs增殖的调控。

神经营养因子-3 mRNA及其受体TrkC mRNA在大鼠变应性鼻炎鼻黏膜中的表达

目的探讨神经营养因子-3 mRNA（neurotrophin-3 mRNA,NT-3 mRNA）及其受体酪氨酸蛋白激酶受体CmRNA（tyosine kinase C mRNA,TrkC mRNA）在变应性鼻炎鼻黏膜中的表达情况。方法将出生6~8周健康SD大鼠30只随机分成实验组20只和对照组10只,实验组以卵清蛋白致敏激发制成大鼠变应性鼻炎模型,采用逆转录-多聚酶链反应（reverse transcriptive polymerase chain reaction,RT-PCR）对20例实验组大鼠鼻黏膜中NT-3 mRNA和TrkC mRNA的表达情况进行检测,并与对照组大鼠进行比较。结果实验组NT-3/β-Actin（内参照）为2.968±0.828,对照组为0.267±0.127,两组比较差异有统计学意义（P〈0.01）;实验组的TrkC/β-Actin（内参照）为9.708±2.717,对照组为1.146±0.424,两组比较差异有统计学意义（P〈0.01）。NT-3 mRNA与TrkC mRNA的表达呈正相关（r=0.67,P〈0.01）。结论神经营养因子-3及其受体TrkC与大鼠变应性鼻炎的发生有着密切关系。

脑卒中后抑郁大鼠小脑NT-3及其受体Trk-C表达变化

目的探讨脑卒中后抑郁(Post stroke depression,PSD)大鼠小脑神经营养因子3(Neurotrophic factor-3,NT-3)及其受体Trk-C的表达变化,了解神经营养因子在脑卒中后抑郁大鼠小脑中的作用。方法根据行为学评分分数,将得分相近的52只健康成年SD大鼠随机分为四组:正常组、卒中组、抑郁组、PSD组,每组13只。脑卒中组:采用线栓法[1]建立局灶性脑缺血大鼠模型;抑郁组:采用孤养法并给予慢性不可预见的中等应激刺激(Chronic unpredictable mild stress,CUMS)造模;PSD组:采用线栓法建立局灶性脑缺血大鼠模型后再加以CUMS和孤养法造模。于造模后29 d各组取0.5 cm厚,约100 mg的小脑。采用免疫组化及RT-PCR法检测各组大鼠小脑组织中NT-3及Trk-C的免疫阳性细胞及mRNA的表达。结果免疫组化结果显示PSD组小脑组织中NT-3免疫阳性细胞数(15.67±6.70个/视野)较正常对照组(24.11±9.17个/视野)明显减少(P<0.05),其余各组相比差异无统计学意义。RT-PCR检测结果显示各组大鼠小脑组织中均有NT-3、Trk-C mRNA的表达。PSD组NT-3表达最少,与各组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 PSD大鼠小脑NT-3表达减少可能与PSD发病有关。

神经营养素3及其受体在哮喘大鼠肺组织中的表达

目的研究神经营养素3(NT-3)及其受体酪氨酸激酶C(TrkC)和p75神经营养素受体(p75NTR)在哮喘大鼠肺组织中的表达情况。方法将28只4～6周龄的SD大鼠随机分为分为哮喘组(n=16)(以卵蛋白致敏和激发建立大鼠哮喘模型)和正常对照组(n=12)。取两组大鼠的肺组织制作病理切片,HE染色后光学显微镜下观察支气管和肺组织的病理学特征。采用Real-Time PCR技术检测两组大鼠肺组织中NT-3、TrkC和p75NTR mRNA的表达,并分析三者之间的相关性。结果光学显微镜观察发现:哮喘组大鼠支气管壁周围有较多淋巴细胞和嗜酸性粒细胞浸润,可见支气管气道上皮脱落、杯状细胞增生及黏液栓增多等变化;正常对照组大鼠支气管及肺泡结构未见明显异常。哮喘组大鼠肺组织中NT-3、TrkC和p75NTR mRNA的相对表达量均显著高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。相关性分析结果显示:NT-3 mRNA与TrkC mRNA的表达、NT-3mRNA与p75NTR mRNA的表达以及TrkC mRNA与p75NTR mRNA的表达均呈正相关(r分别为0.89、0.90和0.82,均P<0.01)。结论致敏哮喘大鼠肺组织内NT-3 mRNA表达水平升高。NT-3通过上调TrkC和p75NTR mRNA的表达,增强NT-3的功能效应,三者共同参与了哮喘气道神经源性炎症的发生。

人神经营养素-3受体基因的扩增及其重组腺病毒载体的构建

【目的】构建人神经营养素-3(neurotrophin-3,NT-3)受体(即酪氨酸蛋白激酶受体C,tyrosineproteinkinaseC,TrkC)基因重组的腺病毒表达载体。【方法】从人脑组织mRNA中扩增TrkC基因全长cDNA,定向克隆于穿梭质粒pShuttle中,获得一个带有CMV启动子的表达盒。再将表达盒与腺病毒骨架DNA(Adeno-XviralDNA)体外连接,形成重组腺病毒质粒(pAd-TrkC)。用pAd-TrkC转染人胚肾293细胞后包装成有感染能力的重组腺病毒颗粒(Adeno-TrkC)。【结果】TrkC基因RT-PCR扩增产物为2478bp。Adeno-TrkC经PCR鉴定为正确重组子。【结论】应用体外连接法已构建了人TrkC重组腺病毒表达载体,这为进一步应用NT-3进行基因治疗中枢神经损伤奠定了基础。