酪氨酸激酶Syk在胰腺癌中的表达检测及其临床意义

目的:探索酪氨酸激酶Syk(spleen tyrosine kinase,Syk)基因的表达与胰腺癌生长、转移的影响,以及与病理特点的关系。方法:用RT-PCR检测25例胰腺癌瘤体标本、癌旁正常胰腺组织中Syk mRNA的表达,并同时作免疫组化检测上述P53蛋白的表达。结果:癌旁正常胰腺组织都有Syk基因的表达,而25例胰腺癌组织中只有7例表达,正常胰腺组织与胰腺癌组织中Syk基因表达差异有显著性(P<0.05)。有淋巴结转移的14例胰腺癌标本中,2例有Syk基因表达,无淋巴结转移的11例胰腺癌患者中有5例检测到Syk mRNA的表达,有淋巴结转移的胰腺癌Syk mRNA的表达率低(P<0.05),Syk mRNA表达与P53蛋白的表达呈正相关。结论:Syk基因的表达缺失与胰腺癌的生长及转移相关。

香鱼(Plecoglossus altivelis)脾脏酪氨酸激酶SYK的鉴定及其介导的MAPK信号通路研究

脾脏酪氨酸激酶(SYK)是一种非受体型酪氨酸激酶(non-receptor tyrosine kinase,NRTK)。在哺乳动物中,SYK是重要的细胞信号通路接头分子,其在免疫细胞活化,胞外刺激的信号转导和病原体识别等多种生命过程中扮演重要角色,然而在鱼类中却鲜有报道。本研究以香鱼(Plecoglossus altivelis)为研究对象,探讨了其SYK(PaSYK)在应对病原微生物感染及在活化免疫信号通路中的作用。我们克隆获得了香鱼SYK的cDNA序列,并利用多重序列比对、构建进化树等生物信息学方法分析PaSYK的进化地位;采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法分析PaSYK在健康组织及鳗弧菌(Vibrio anguillarum)感染后的表达变化;亚细胞定位检测PaSYK在HEK293T细胞的分布情况;在香鱼头肾单核/巨噬细胞(Monocyte/macrophage,MO/MΦ)中过表达PaSYK,研究其对炎症细胞因子表达的调控作用并在HEK293T细胞及香鱼头肾MO/MΦ中研究PaSYK对MAPK信号通路的活化作用。多重序列比对结果显示,SYK的蛋白质序列和结构域在进化过程中是高度保守的。系统进化树结果表明,PaSYK与河鳟的亲缘关系密切。RT-qPCR结果表明,SYK基因mRNA在检测的所有组织中均有表达,鳗弧菌感染后免疫相关组织中PaSYK表达量均上调。此外,PaSYK能显著诱导香鱼头肾MO/MΦ中促炎因子TNF-α和IL-1β的表达,但对抑炎因子TGF-β和IL-10的表达起到略微的抑制作用。Western blot结果证明PaSYK可以激活MAPK信号通路。综上所述,SYK分子在进化上高度保守,香鱼SYK与其哺乳动物中的同源物具有保守的功能,均能活化MAPK信号通路并在炎症反应中发挥作用。

酪氨酸激酶Syk在肝癌中的表达及与血管生成的关系

目的探讨酪氨酸激酶Syk在肝细胞性肝癌中的表达及对肿瘤微血管生成的影响。方法采用RT-PCR检测Syk mRNA在肝细胞性肝癌及癌旁正常组织中的表达，免疫组化SABC法检测标本中CD34的表达反映肿瘤的微血管密度（MVD）。结果24例癌旁正常组织中Syk mRNA均表达阳性，32例肝细胞性肝癌中Syk mRNA表达率为46.9％（15／32），其中低分化组阳性表达率23．1％（3／13），明显低于高分化组阳性表达率63．2％（12／19）（P〈0．05）。肿瘤微血管密度（MVD）检测：低分化组（Ⅲ级Ⅳ级为49．2±3.6，54±4.3），明显高于高分化组（Ⅰ级Ⅱ级为13．6±4．5，32.3±3．2）与正常组织（5．9±1．7），有显著统计学意义（P〈0．05）。Syk mRNA的表达与CD34的表达明显负相关（r=-0.97）。结论肝细胞性肝癌中Syk基因的缺失对癌组织血管的生成起重要的作用。

脾源性酪氨酸激酶基因启动子甲基化与髓母细胞瘤细胞侵袭转移的关系

目的:探讨甲基化转移酶抑制剂5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-aza-CdR)抑制脾源性酪氨酸激酶(Syk)基因启动子的甲基化后对髓母细胞瘤Daoy细胞侵袭转移能力的影响。方法:用甲基化转移酶抑制剂5-aza-CdR处理体外培养的髓母细胞瘤Daoy细胞,通过甲基化特异性PCR(MSP)、Real time-PCR、Western blot及Transwell实验方法分别检测不同浓度5-aza-CdR处理后髓母细胞瘤Daoy细胞中脾源性酪氨酸激酶(Syk)基因启动子区甲基化、mRNA表达、蛋白表达及细胞穿膜数的变化。结果:髓母细胞瘤Daoy细胞中Syk基因启动子存在过甲基化,与对照组比较,经不同浓度5-aza-CdR处理后,其Syk基因启动子区甲基化受到不同程度抑制,Syk mRNA的表达量最高上调(3.40±0.24)倍(P<0.01);Syk蛋白的表达量最高上调(3.23±0.19)倍(P<0.01);细胞侵袭及转移能力降低(P<0.05),差异有统计学意义。结论:髓母细胞瘤Daoy细胞中Syk基因启动子甲基化导致其表达下调,可能是髓母细胞瘤发生转移的机制之一;而甲基化转移酶抑制剂5-aza-CdR可抑制其启动子区的甲基化,使Syk的表达水平上调,抑制肿瘤细胞侵袭及转移能力。

芍药苷联合SYK抑制剂干预NAFLD细胞脂肪沉积和炎症

目的:探究芍药苷和SYK抑制剂干预对油酸(OA)诱导的非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)细胞模型增殖、凋亡、脂质沉积和炎症水平的影响。方法:基于OA诱导构建NAFLD细胞模型,将细胞分为正常对照组、模型组、芍药苷组、R406(SYK抑制剂)组、芍药苷+R406组。CCK-8检测各组细胞增殖活力,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,油红O染色观察细胞脂质积聚程度,生化试剂盒检测细胞中TC、TG含量,ELISA检测细胞中TNF-α、IL-6含量,Western Blot检测细胞中SYK蛋白表达。结果:采用1.5 mmol/L的OA诱导构建NAFLD细胞模型,以40μmol/L芍药苷进行干预。与正常对照组比较,模型组细胞增殖活力显著降低,凋亡率显著升高(P<0.05),脂质液滴明显增多,TC、TG、TNF-α、IL-6含量及SYK蛋白表达显著升高(P<0.05)。与模型组比较,各给药组细胞增殖活力显著升高,凋亡率显著降低(P<0.05),脂质液滴减少,TC、TG、TNF-α、IL-6含量及SYK蛋白表达显著降低(P<0.05)。与R406组比较,芍药苷+R406组细胞增殖活力显著升高,凋亡率显著降低(P<0.05),脂质液滴减少,TC、TG、TNF-α、IL-6含量及SYK蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论:芍药苷联合SYK抑制剂可更好地抑制NAFLD细胞脂质沉积和炎症,减少细胞凋亡。

脾酪氨酸激酶基因研究进展

1991年Taniguchi等从猪脾cDNA首先发现脾酪氨酸激酶（spleen tyrosine kinase,Syk）基因,其编码产物Syk是一种非受体型蛋白酪氨酸激酶,故称之为Syk。

乳腺癌中脾酪氨酸激酶蛋白表达对血管内皮生长因子-C、血管内皮生长因子-D及淋巴管生成的影响

目的 探讨乳腺癌中脾酪氨酸激酶（Syk）蛋白表达对血管内皮生长因子（VEGF）-C、VEGF-D表达的影响及对淋巴管生成的影响.方法 随机选取30例无淋巴结转移、30例有淋巴结转移的乳腺癌组织及10例乳腺腺病组织标本,采用免疫组织化学染色法检测Syk、VEGF-C、VEGF-D的表达,并检测计数淋巴管密度（LVD）.结果 Syk在乳腺癌中的阳性表达率明显低于乳腺腺病组织（P＜0.01）,VEGF-C和VEGF-D在乳腺癌中的阳性表达率明显高于乳腺腺病组织（P＜0.01）,Sky阳性表达与VEGF-C和VEGF-D的阳性表达呈负相关（rs=-0.352,rs=-0.355;P＜0.01）,与LVD水平呈负相关（rs=-0.297,P＜0.05）.结论 Syk阳性表达与VEGF-C、VEGF-D阳性表达、D2-40标记的LVD水平呈负相关,提示乳腺癌中Syk的下调可能使VEGF-C、VEGF-D的表达增高,从而使淋巴管的生成增多,导致淋巴结转移.

脾酪氨酸激酶抑制剂的研究进展

脾酪氨酸激酶(Spleen tyrosine kinase,SYK)是蛋白酪氨酸激酶(PTK)家族中的一员。SYK是一种非受体型酪氨酸激酶是治疗自身免疫性疾病与炎症的有效靶点,目前临床试验上SYK抑制剂主要用于治疗过敏性炎症、自身免疫型疾病、癌症。本文简介了SYK的结构和SYK抑制剂阻断IgE-FcRI受体、Antigen-FcγR受体、PAMP/DAMP-SYK,B细胞受体的信号传导机制;同时,综述了第一代SYK抑制剂白皮杉醇、ER-27319、黄酮类化合物和第2代SYK抑制剂羟基吲哚类衍生物、1,6-二氮萘类化合物、5-酰胺嘧啶类化合物、N-苯基-4-(噻唑-2-基)嘧啶-2-胺类化合物、1,2,4-三唑并[4,3-c]嘧啶类化合物、氨基吡啶类化合物、2-氨基吡嗪类化合物的构效关系及研究进展。

Syk在不同乳腺病变组织中的表达及临床意义

目的:探讨不同乳腺病变组织中脾酪氨酸激酶(Syk)表达差异,并分析Syk表达与乳腺癌临床及其他病理学指标的关系。方法:用免疫组化法检测20例纤维囊性乳腺病组织、16例乳腺DIN2组织(导管原位癌,中级别)、168例乳腺浸润性导管癌组织及95例癌旁组织中Syk蛋白的表达,并检测乳腺癌组织中ER、PR、p53、HER2/neu表达。结果:纤维囊性乳腺病组织、乳腺DIN2组织、乳腺癌组织及其癌旁组织中Syk阳性表达率分别为90.00%(18/20例)、50.00%(8/16例)、34.52%(58/168例)及78.95%(75/95例)。乳腺癌组织中Syk阳性表达率较纤维囊性乳腺病组织(P<0.05)及乳腺癌旁组织(P<0.05)明显降低。乳腺DIN2组织中Syk阳性表达率较纤维囊性乳腺病组织(P<0.05)及乳腺癌旁组织(P<0.05)明显降低。Syk表达与肿瘤大小、组织学分级、淋巴结转移、肿瘤分期及ER、PR、p53、HER2/neu表达结果均无相关性。结论:Syk在纤维囊性乳腺病、癌旁组织、癌前期病变和乳腺癌组织中的阳性表达率依次降低。

针刺预处理对荨麻疹大鼠血清IgE及皮肤组织中磷酸化酪氨酸蛋白激酶表达的影响

目的:观察针刺预处理对荨麻疹大鼠血清IgE水平及背部待测区域皮肤组织肥大细胞脱颗粒,组胺和5-羟色胺含量,磷酸化酪氨酸蛋白激酶Lyn、Syk(p-Lyn、p-Syk)表达的影响,探讨针刺预防和治疗荨麻疹的作用机制。方法:SD大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、阳性药物组、针刺组,每组10只。采用抗卵蛋白血清致敏建立大鼠荨麻疹模型。造模前14 d,阳性药物组大鼠予以氯雷他定灌胃(0.1 mg/100 g),针刺组给予针刺双侧"曲池""血海",留针30 min,每日1次,两组均连续干预14 d。用HE染色法观察大鼠皮肤组织形态变化;ELISA法检测血清总IgE水平;甲苯胺蓝染色法观察皮肤组织肥大细胞脱颗粒情况;免疫组织化学法检测皮肤组织组胺和5-羟色胺表达及p-Lyn和p-Syk的表达。结果:与正常对照组比较,模型对照组大鼠的表皮明显增厚,真皮肿胀,小血管炎性浸润严重,肥大细胞肿胀变形,边缘轮廓模糊,有颗粒脱出,血清IgE水平明显升高(P<0.05),皮肤组织组胺、5-羟色胺表达及p-Lyn、p-Syk表达明显增加(P<0.05)。与模型对照组比较,针刺组和阳性药物组大鼠的表皮略有增厚,真皮轻度水肿,偶有炎性细胞,肥大细胞脱颗粒现象减少,血清IgE水平明显降低(P<0.05),皮肤组织组胺、5-羟色胺及p-Lyn和p-Syk表达明显降低(P<0.05)。针刺组和阳性药物组各指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论:针刺"曲池""血海"穴可以防治荨麻疹,抑制Ⅰ型超敏反应及肥大细胞脱颗粒,其机制可能与针刺对皮肤组织p-Lyn、p-Syk表达的调控有关。

电针对荨麻疹大鼠皮下疏松结缔组织中肥大细胞Lyn、Syk表达的影响

目的:观察电针预处理对荨麻疹大鼠皮下疏松结缔组织中肥大细胞脱颗粒及其过程中酪氨酸激酶Lyn、脾酪氨酸激酶(Syk)表达的影响,探讨电针干预荨麻疹的潜在生物学机制。方法:32只SD大鼠随机分为空白组、模型组、电针组、阳性药物组,每组8只。除空白组外,其余3组大鼠均采用皮肤被动过敏反应(PCA)制备荨麻疹大鼠模型。电针组电针双侧"曲池""血海""足三里",疏密波,频率2 Hz/15 Hz,电流强度1 mA,每日1次,每次20 min,连续7 d;阳性药物组给予氯雷他定(1 mg×kg-1×d-1)灌胃,每日1次,连续7 d。各组大鼠完成PCA抗原攻击30min后取材进行指标检测。比色法检测大鼠致敏部位皮肤伊文斯蓝染料渗出量;HE染色法观察致敏部位皮肤组织形态改变;甲苯胺蓝染色法观察致敏部位皮下疏松结缔组织中肥大细胞脱颗粒情况;免疫组织化学法检测肥大细胞脱颗粒过程中Lyn、Syk蛋白的表达。结果:模型组大鼠致敏部位表皮层增厚,细胞排列层次紊乱,真皮层内可见大量炎性细胞浸润;阳性药物组、电针组致敏部位表皮层薄,细胞排列层次较清晰,炎性细胞浸润情况较模型组明显减轻。与空白组比较,模型组皮肤染料渗出量吸光度(OD)值、肥大细胞脱颗粒率、Lyn与Syk阳性表达均升高(P<0.01);与模型组比较,电针组和阳性药物组皮肤染料渗出量吸光度(OD)值、肥大细胞脱颗粒率、Lyn与Syk阳性表达均降低(P<0.01);与阳性药物组比较,电针组肥大细胞脱颗粒率显著升高(P<0.01)。结论:电针"曲池""血海""足三里"可通过调控荨麻疹大鼠肥大细胞脱颗粒,降低血管渗透性,发挥抗过敏作用,其机制可能与抑制肥大细胞Lyn、Syk蛋白表达有关。

昆参颗粒对S180荷瘤小鼠Ki67、Syk表达的影响

目的:研究昆参颗粒对S180荷瘤小鼠Ki67、Syk表达的影响。方法:小鼠40只以数字表法随机分为模型对照组、参莲胶囊组、昆参大、小剂量组,每组10只。全部小鼠右侧腋窝下接种S180瘤株,每鼠0.2ml。各组在接种瘤株后第3天进行灌胃给药,每日1次。参莲胶囊组(参莲胶囊600mg/kg)、昆参小剂量组(昆参颗粒400mg/kg)、昆参大剂量组(昆参颗粒800mg/kg)、模型对照组以等量生理盐水灌胃。第12天处死所有小鼠,对肿瘤组织进行剥离,免疫组化(S-P法)测定肿瘤组织中Ki67、Syk的表达。结果:与模型对照组比较,昆参颗粒可显著降低Ki67表达(P<0.01);昆参颗粒对Ki67表达的抑制作用优于参莲胶囊,且随剂量增加而加大。昆参颗粒组Syk表达水平显著高于模型对照组,昆参颗粒对Syk表达的影响随剂量增加而加大,并优于参莲胶囊。以上结果显示:昆参颗粒可抑制Ki67表达同时提高Syk表达水平存在一定量效关系,起效剂量为400mg/kg。小鼠胃组织中Ki67与Syk表达呈负相关(P<0.05)。结论:昆参颗粒可抑制胃癌组织Ki67表达同时提高Syk表达水平,可能是其发挥抗肿瘤功效的重要机制之一。