脾相关酪氨酸激酶、蛋白激酶B、真核翻译起始因子4E、细胞周期蛋白依赖性激酶4在胃癌及癌前病变中的表达及相关性

目的探讨脾相关酪氨酸激酶(SYK)、蛋白激酶B(AKT)、真核翻译起始因子4E(EIF4E)、细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)在胃癌及癌前病变中的表达及相关性。方法收集90例患者的胃黏膜组织进行蛋白质印迹实验,其中癌旁正常组织30例,萎缩性胃炎组织30例,胃癌组织30例。另收集胃癌组织、萎缩性胃炎组织、癌旁正常组织存档蜡块各30例进行免疫组化实验。分别采用蛋白质印迹法和免疫组化法检测各组织中SYK、AKT、EIF4E、CDK4表达情况。分析萎缩性胃炎组织与胃癌组织中SYK、AKT、EIF4E、CDK4的相关性。结果癌旁正常组织中SYK蛋白表达水平及阳性表达率均高于萎缩性胃炎组织,萎缩性胃炎组织中SYK蛋白表达水平及阳性表达率均高于胃癌组织;癌旁正常组织中AKT、EIF4E、CDK4蛋白表达水平及阳性表达率均低于萎缩性胃炎组织,萎缩性胃炎组织中AKT、EIF4E、CDK4蛋白表达水平及阳性表达率均低于胃癌组织,差异均有统计学意义(P<0.05)。Spearman相关分析结果显示,胃癌组织和萎缩性胃炎组织中SYK与AKT、EIF4E、CDK4表达均呈负相关(P<0.05),AKT、EIF4E、CDK4三者表达均呈正相关(P<0.01)。结论SYK、AKT、EIF4E、CDK4可能通过相互作用共同参与了胃癌的发生,其可能的机制与磷脂酰肌醇-3-羟激酶(PI3K)/AKT信号通路有关。SYK、AKT、EIF4E、CDK4有希望成为胃癌诊断和防治的靶标,检测SYK、AKT、EIF4E、CDK4对胃癌诊断、早期治疗及预防具有重要价值。

计算机辅助筛选酪氨酸激酶相关蛋白TRP-2 CTL模拟表位

运用多项式方案、量化基序方案等经典的CTL表位筛选方案,初步筛选了酪氨酸激酶相关蛋白TRP-2 CTL表位TRP-2_(180～188)(SVYDFFVWL)的模拟表位,以通过表位改造提高其与HLA-A2.1分子结合的能力,从而提高其免疫原性,根据打分结果,合成了4个得分较高的九肽序列,亲和力实验结果表明所筛选的4个序列较原序列均有较高的亲和力,但对2位的单突变结果较1和2位双突变结果理想,进一步运用分子模拟方法对4个序列与HLA-A2.1分子间的相互作用进行了分子模拟分析,分子模拟结果较好地解释了上述实验现象,从而为进一步的结构改造提供了理论依据,本研究提供了一个合理高效的模拟表位筛选方法。

酪氨酸激酶相关蛋白-2_(180-188)表位的修饰和初步鉴定

目的 修饰人黑色素瘤分化抗原酪氨酸激酶相关蛋白 2的HLA A2 .1限制性的优势表位( 1 80 1 88) (SVYD FFVWL) ,提高其与HLA A2 .1分子的结合能力。方法 采用MHC主要和次要锚着位的优势氨基酸替换天然表位的相应位点 ,用多项式方案、量化基序法和QSAR法初步扫描并筛选出与HLA A2 .1亲和力可能较高的多肽 ,进一步在体外鉴定多肽与HLA A2 .1分子的结合亲和力和结合稳定性。结果 与天然肽相比 ,SML多肽与HLA A2 .1分子的亲和力和结合稳定性较天然表位显著提高。结论 SML多肽可能是TRP 2 ( 1 80 1 88) 天然表位的激动剂。

环状RNA含有16A的脱水酶结构域分子-微小RNA-1237-5p-细胞凋亡相关酪氨酸激酶轴调控乳腺癌细胞密歇根癌症基金会7号细胞凋亡

目的观察环状RNA含有16A的脱水酶结构域分子(circRNA ABHD16A)-微小RNA(miRNA,miR)-1237-5p-细胞凋亡相关酪氨酸激酶(AATK)轴对乳腺癌细胞密歇根癌症基金会7号细胞(MCF-7)凋亡的影响.方法运用中国科学引文数据库(CSCD)和Target Scan在线分析分别分析ABHD16A与miR-1237-5p和miR-1237-5p与AATK的相关性.利用Luciferase assay检测circRNA ABHD16A是否靶向miR-1237-5p以及miR-1237-5p是否靶向AATK.在过表达或敲低circRNA ABHD16A的情况下,通过蛋白质印迹法(Western blot)检测AATK和乳腺癌细胞MCF-7凋亡标志蛋白表达;通过噻唑蓝(MTT)实验分析乳腺癌细胞MCF-7的细胞活力;通过磷脂酰丝氨酸外翻分析(Annexin V)染色检测乳腺癌细胞MCF-7的凋亡水平.Student's t检验分析两组单向方差分析.结果circRNA ABHD16A靶向miR-1237-5p;miR-1237-5p靶向AATK3'UTR的320-326和469-475区域.过表达ABHD16A时,AATK的表达量明显上升(t=15.295,P<0.01),细胞凋亡相关蛋白bcl-2拮抗剂(bak),bcl-2相关X凋亡调节因子(bax)和被切割的胱天蛋白酶9(cleaved-Cas9)的表达量明显上升(t=7.403、8.381、21.583,P<0.01),而bcl-2细胞凋亡调节剂(bcl-2)的表达量明显下降(t=6.301,P<0.01),MCF7细胞活力水平下降(t=17.392,P<0.01),凋亡水平上升(t=8.491,P<0.05).敲低ABHD16A时,AATK的表达量明显下降(t=9.290,P<0.01),细胞凋亡相关蛋白bak、bax和cleaved-Cas9的表达量明显下降(t=8.381、5.296、11.492,P<0.01),而bcl-2的表达量明显上升(t=5.609,P<0.01),MCF7细胞活力水平上升(t=5.694,P<0.01),凋亡水平下降(t=13.502,P<0.01).结论circRNA ABHD16A靶向miR-1237-5p后增加AATK的表达量,并促进乳腺癌细胞MCF-7凋亡.

健脾消萎汤联合西药治疗慢性萎缩性胃炎伴癌前病变患者的效果

目的探讨健脾消萎汤联合西药治疗慢性萎缩性胃炎伴癌前病变患者的效果及对蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)和脾相关酪氨酸激酶(spleen tyrosine kinase,SYK)表达的影响。方法选取2020年10月至2022年4月陕西中医药大学附属医院收治的90例慢性萎缩性胃炎伴癌前病变患者进行随机对照试验。采用随机数字表法将其分为研究组和对照组,各45例。对照组男24例,女21例,年龄(53.89±5.23)岁,病程(5.54±3.01)年。研究组男22例,女23例,年龄(54.32±5.45)岁,病程(5.67±2.88)年。对照组口服瑞巴派特片、枸橼酸莫沙比利片治疗;研究组在对照组基础上给予健脾消萎汤治疗;两组均治疗12周。比较两组中医证候评分、胃黏膜病变评分、胃功能指标[胃蛋白酶原I(gastric pepsinogen I,PG I)、胃蛋白酶原Ⅱ(gastric pepsinogenⅡ,PGⅡ)、胃泌素-17(gastrin-17,G-17)]、氧化应激水平[丙二醛(acetaldehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)]、生长因子水平[血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、表皮细胞生长因子(epidermal growth factor,EGF)、转化生长因子-α(transforming growth factor alpha,TGF-α)、转化生长因子-β1(transforming growth factor beta 1,TGF-β1)]及AKT、SYK基因表达情况。采用t、χ^(2)检验。结果治疗后,研究组各项中医证候评分(t=2.948、2.058、2.229、2.330、2.829,均P<0.05)和胃黏膜病变评分(t=3.673、4.189、5.328,均P<0.05)均低于对照组;研究组PGI、PGⅡ、G-17水平均高于对照组(t=9.399、6.757、2.056,均P<0.05);研究组MDA水平低于对照组(t=4.278,P<0.05),SOD、GSH-Px水平高于对照组(t=5.435、7.557,均P<0.05);研究组VEGF水平高于对照组(t=6.570,P<0.05),EGF、TGF-α、TGF-β1水平低于对照组(t=9.306、4.842、5.400,均P<0.05);研究组AKT水平低于对照组[(2.23±1.11)比(2.75±1.06);t=2.273,P<0.05],SYK水平高于对照组[(3.16±1.18)比(2.58±0.92);t=2.600,P<0.05]。结论健脾消萎汤联合西药治疗慢性萎缩性胃炎伴癌前病变患者可有效减轻患者临床症状,改善胃功能,增强机体抗氧化能力,其机制可能与AKT和SYK在胃黏膜上皮细胞恶性转化调控中的作用有关。

解毒消疹方外用辅助治疗EGFR-TKIs相关皮疹的效果评价

目的:探讨解毒消疹方外用辅助治疗表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKIs)相关皮疹的临床效果。方法:将梅州市第二中医医院2020年1月至2021年4月接诊的68例EGFR-TKIs相关皮疹患者作为研究对象。按随机数表法将其分为对照组(34例)和治疗组(34例)。对对照组患者进行常规的抗过敏治疗,在此基础上为治疗组患者外用解毒消疹方进行治疗。然后对比两组患者的临床疗效。结果:治疗后,治疗组患者病情分级的分布情况优于对照组患者,相关数据差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,治疗组患者的中医证候积分、皮肤病生活质量量表(DLQI)的评分均低于对照组患者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:解毒消疹方外用辅助治疗EGFR-TKIs相关皮疹的效果显著,可有效地缓解患者的临床症状,改善其生活质量。

miR-93-5p靶向PKMYT1对肺腺癌A549细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的探讨miR-93-5p靶向蛋白激酶膜相关酪氨酸/苏氨酸1(protein kinase membrane associated tyrosine/threonine 1,PKMYT1)对肺腺癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其作用机制。方法使用LipofectamineTM2000分别将质粒inhibitor NC、miR-93-5p inhibitor、pcDNA、pc-PKMYT1转染至A549细胞中,记为inhibitor NC组、miR-93-5p inhibitor组、pcDNA组和pc-PKMYT1组,同时将未转染的细胞记为control组。利用qRT-PCR检测细胞中miR-93-5p、PKMYT1 mRNA的表达水平。采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-93-5p与PKMYT1的靶向关系;CCK-8法检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞周期情况;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;Western blot法检测细胞中PKMYT1、细胞周期素D1(Cyclin D1)、细胞周期素B1(Cyclin B1)的蛋白表达水平。结果与BEAS-2B细胞相比,SPC-A-1细胞、A549细胞、LTEP-α-2细胞中miR-93-5p表达水平均升高(均P<0.01),PKMYT1 mRNA和蛋白表达水平均降低(均P<0.001)。转染24 h后,分别与control组、inhibitor NC组相比,miR-93-5p inhibitor组A549细胞增殖活性、S期细胞比例、迁移细胞数目、侵袭细胞数目、Cyclin D1和Cyclin B1蛋白水平均降低(均P<0.05),G2/M期细胞比例升高(P<0.001)。双荧光素酶报告基因实验结果显示,与miR-93-5p NC+3′UTR-WT组相比,miR-93-5p mimic+3′UTR-WT组细胞相对荧光素酶活性下降(P<0.001)。转染24 h后,与pcDNA组相比,pc-PKMYT1组A549细胞增殖活性、S期细胞比例、迁移细胞数目、侵袭细胞数目、Cyclin D1和Cyclin B1蛋白水平均降低(均P<0.001),G2/M期细胞比例升高(P<0.001)。结论沉默miR-93-5p可能通过上调PKMYT1表达水平抑制肺腺癌细胞增殖、迁移及侵袭。

神经中轴钙化性假瘤3例临床病理观察

目的分析神经中轴钙化性假瘤(CAPNON)的临床病理学特征。方法收集2019年9月至2021年9月海军军医大学(第二军医大学)第二附属医院诊断的3例CAPNON患者资料,分析其临床影像学特征、组织学形态、免疫组织化学表型和分子表型。结果3例CAPNON患者中男1例、女2例,年龄分别为15、33、56岁,临床表现分别为四肢肌肉萎缩、间歇性腰背痛、间歇性头痛,影像学均表现为占位性病变。3例均采用手术切除治疗。手术标本组织学观察可见境界清楚的结节状软骨样基质及梭形间质细胞,伴钙化、骨化及沙砾体,病灶周围组织细胞增生反应,以及异物肉芽肿形成。免疫组织化学染色显示,组织细胞CD68(+),梭形间质细胞波形蛋白及上皮膜抗原(+)。基因检测结果显示,1例患者检出体细胞Fms相关酪氨酸激酶4基因c.1924G>A错义突变。随访17~41个月,3例均未见复发。结论CAPNON是罕见的神经中轴纤维骨性病变,诊断需结合组织学形态及临床影像资料,分子病理学检测对其发病机制的研究或有帮助。

FRK通过FAK信号通路抑制脑胶质瘤细胞迁移与侵袭作用的研究

目的研究酪氨酸相关激酶(fyn-related kinase,FRK)是否通过粘着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)信号通路抑制脑胶质瘤细胞的迁移和侵袭。方法采用Western blot(WB)检测FRK质粒的转染效果,细胞划痕和Transwell侵袭实验检测过表达FRK及下调FAK对胶质瘤U251细胞迁移和侵袭能力的影响;WB检测过表达FRK对FAK、P-FAK蛋白水平的影响以及下调FAK对FRK蛋白水平的影响。结果FRK质粒转染成功。过表达FRK后胶质瘤U251细胞的迁移与侵袭能力下降。FAK siRNA干扰效率达到70%,下调FAK后胶质瘤U251细胞的迁移与侵袭能力下降。过表达FRK后P-FAK的蛋白水平明显下降,而FAK蛋白水平无明显变化,下调FAK对FRK的蛋白水平无明显影响。结论 FRK可能通过抑制FAK的磷酸化来调控胶质瘤的侵袭与迁移。

下调PKMYT1表达对宫颈癌细胞增殖、迁移与侵袭的影响

目的:探究下调膜相关酪氨酸/苏氨酸蛋白激酶(PKMYT1)表达对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:利用UALCAN数据库平台分析PKMYT1在宫颈癌组织的表达,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测PKMYT1在END1/E6E7细胞和宫颈癌细胞的表达。将c-33A细胞、SiHa细胞分为转染对照组(转染siRNA-NC)和siRNA-PKMYT1组(下调PKMYT1表达)。RT-qPCR和Western blot分析无翅型MMTV整合位点家族成员1(WNT1)、β-连环蛋白(β-catenin)和c-Myc的mRNA和蛋白的表达。利用MTT、划痕实验和Transwell实验分析细胞的增殖、迁移和侵袭情况。结果:PKMYT1在宫颈癌组织和细胞表达上调(P<0.05)。siRNA-PKMYT1组c-33A和SiHa细胞中Wnt1、β-catenin和c-Myc表达水平均低于转染对照组,c-33A和SiHa细胞的增殖、迁移和侵袭能力均低于转染对照组(均P<0.05)。结论:沉默PKMYT1可以抑制宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭过程,并降低Wnt/β-catenin信号通路活性,表明PKMYT1在宫颈癌可能发挥抑癌作用。

卵泡液中神经营养因子4及卵丘细胞TrkB受体与卵子发育潜能的关系

【目的】探索人卵泡液中神经营养因子4(NT-4)及卵丘颗粒细胞中TrkB受体的表达与卵子发育潜能的关系。【方法】收集2020年5月至2020年11月在中山大学附属第六医院生殖中心,因男方因素行卵胞浆内单精子注射(ICSI)治疗的63例患者的卵泡液和卵丘颗粒细胞,用ELISA检测卵泡液中NT-4水平,实时荧光定量PCR检测卵丘颗粒细胞中TrkB受体两种不同亚型TrkB-fl和TrkB-t1的表达水平,分析与卵子成熟、受精和胚胎发育的关系。【结果】卵泡液中NT-4水平与正常受精数(rs=0.250,P=0.048)、可利用胚胎数(rs=0.320,P=0.011)、优质胚胎数(rs=0.327,P=0.009)和优质囊胚数(rs=0.303,P=0.029)呈正相关。卵丘颗粒细胞中TrkB-t1在高囊胚形成率组(≥60%)和高优质囊胚率组(≥50%)中的表达均较低[0.86(0.60,1.85)vs.2.29(1.09,3.44),P=0.008;0.84(0.64,1.45)vs.1.73(0.96,3.14),P=0.031]。多重线性回归分析结果示优质胚胎数受获卵数(P=0.001)、卵泡液中NT-4水平(P=0.005)和卵丘颗粒细胞TrkB-t1表达水平(P=0.049)影响。【结论】人卵泡液中NT-4水平与ICSI患者卵子发育潜能正相关,其可能在卵子发育过程中发挥着重要作用。卵丘颗粒细胞中TrkB-t1的高表达与卵子发育潜能受损有关。

人脑星形细胞瘤中EphA2-ephrinA1、CD105的表达及与预后的关系

目的检测酪氨酸激酶受体EphA2及配体ephrinA1在人脑星形细胞瘤中的表达,并探讨其与脑星形细胞瘤预后的关系。方法采用免疫组织化学法检测55例手术切除人脑星形细胞瘤组织及15例正常脑组织中EphA2、ephrinA1的表达情况,并采用CD105抗体标记微血管内皮细胞,计算微血管密度(MVD)。结果 EphA2(51/55)、CD105-MVD(34.26±12.61)在星形细胞瘤中阳性表达明显高于正常脑组织,两者差异有统计学意义(P<0.01);而且随着星形细胞瘤病理级别越高,EphA2及CD105-MVD蛋白染色强度和阳性细胞数均明显升高,ephrinA1则具有相反的趋势,随星形细胞瘤级别越低ephrinA1表达越高。EphA2表达与CD105-MVD呈显著正相关(r=0.713,P<0.05),ephrinA1表达与CD105-MVD呈显著负相关(r=-0.772,P<0.05),EphA2的表达与ephrinA1的表达呈显著负相关(r=-0.912,P<0.05)。EphA2、CD105-MVD和ephrinA1均是重要的星形细胞瘤预后相关风险因子。EphA2、CD105-MVD阳性ephrinA1阴性的星形细胞瘤患者较三者均阳性或三者均阴性或EphA2、CD105-MVD阴性ephrinA1阳性的患者生存期明显缩短。结论 EphA2及CD105-MVD在星形细胞瘤中特异性高表达、ephrinA1特异性低表达与星形细胞瘤不良预后密切相关,EphA2和ephrinA1有望成为脑星形细胞瘤诊断和特异性靶向治疗及预后评估的新靶点。

单形性亲上皮性肠道T细胞淋巴瘤的病理学特征及MATK表达的诊断价值

目的:探讨单形性亲上皮性肠道T细胞淋巴瘤(MEITL)的临床病理特征及巨核细胞相关酪氨酸激酶(MATK)表达的意义。方法:分析19例MEITL患者MEITL的病理组织形态学和免疫表型特点。结果:MEITL患者的肿瘤细胞小至中等大小,瘤细胞规则,核圆形,核仁不明显,胞质淡染。肿瘤细胞具有显著的亲上皮现象,缺乏炎症和坏死背景。肿瘤细胞表达CD3、CD8、CD56和TIA1,不表达CD5,EBER原位杂交均阴性。MATK高表达,阳性率超过80%。结论:MEITL是罕见的侵袭性原发性肠道T细胞淋巴瘤,诊断和鉴别诊断依赖于组织形态学和独特的免疫表型。MATK高表达有助于MEITL与其他肠道T细胞淋巴瘤的鉴别诊断。

cid-miR-146a在LCDV-cn感染中的差异表达及其调控作用

【目的】在鱼淋巴囊肿中国病毒株(LCDV-cn)感染草鱼卵巢细胞系(GCO)过程中,分析cid-miR-146a的表达特性,探索cid-miR-146a的调控作用。【方法】采用颈环RT-PCR方法,从LCDV-cn感染的GCO细胞中获得cidmiR-146a;在LCDV-cn感染GCO过程中,用定量PCR方法获取cid-miR-146a的表达变化;用生物信息学方法预测和双荧光素酶系统验证cid-miR-146a的靶基因;转染cid-miR-146a mimic和cid-miR-146a inhibitor对cid-miR-146a进行上调和下调,用定量PCR检测cid-miR-146a、靶基因Flt1和LCDV-cn mcp基因在GCO中的表达。【结果】LCDV-cn感染GCO后3~6 d细胞聚集形成“疤痕”,之后细胞逐渐脱落、裂解,呈现空洞。cid-miR-146a的长度为23 bp,在LCDV-cn感染GCO过程中,cid-miR-146a的表达先上升(72 h前)后下降(72 h后)。用不同生物信息学方法共同预测到cid-miR-146a的靶基因为Flt1,在双荧光素酶系统验证实验中,cid-miR-146a靶向Flt1重组载体后荧光素酶活性降低(P<0.05),证实Flt1为cid-miR-146a的靶基因。对cid-miR-146a进行上调下调后,GCO中cid-miR-146a的表达差异显著(P<0.05)。在cid-miR-146a上调后,靶基因Flt1的表达显著下降(P<0.05),LCDV-cn mcp基因的表达显著上升(P<0.05);在cid-miR-146a下调后,靶基因Flt1的表达显著上升(P<0.05),LCDV-cn mcp基因的表达显著下降(P<0.05)。【结论】在LCDV-cn感染GCO过程中,CPE的变化与cid-miR-146a的表达变化时间点呈正相关。cid-miR-146a负调控其靶基因Flt1的表达,并对LCDV-cn的复制起着正调控作用。生物信息学方法预测说明cid-miR-146a参与调控的信号通路与免疫和肿瘤发生相关。

Ack1和MMP-14在涎腺腺样囊性癌组织中的表达与意义

目的:检测Ack1、MMP-14在涎腺腺样囊性癌(SACC)组织中的表达水平,分析两者与SACC发生和发展之间有无相关性。方法:以免疫组化SABC法分别检测Ack1和MMP-14在49例SACC组织、24例涎腺正常组织中的表达水平。结果:在SACC组织、涎腺正常组织中,Ack1的阳性细胞表达率分别为63.3%、33.3%(P<0.05);MMP-14的阳性细胞表达率分别为67.3%、37.5%(P<0.05);在SACC组织中,Ack1及MMP-14的表达水平与组织学类型、临床分期、肿瘤细胞是否会侵犯到颈部淋巴结以及是否转移至周围神经有关(P<0.05),但与患者性别和年龄无关(P>0.05);且两者在SACC组织中的表达呈正相关(R=0.372,P=0.009)。结论:Ack1和MMP-14与SACC的病情发展相关。

TNIK通过炎症机制参与肝脏胰岛素抵抗

2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)在全球呈明显上升趋势,但病因学和分子机制并不完全清楚。胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)是T2DM发病的核心机制,IR主要诱发因素之一是受高脂诱导产生的过多能量及其伴随的一系列促炎症反应。在肝脏IR下,脂质的增加导致巨噬细胞的浸润和肝脏组织分泌的炎性因子及抗炎因子失衡,从而促进胰岛素敏感性受损及各种代谢功能紊乱。肿瘤坏死因子受体相关因子-2与酪氨酸激酶非催化区相互作用激酶(TRAF2 and Nck-interacting kinase,TNIK)参与炎症信号通路的调节,因此,探讨参与炎症过程的TNIK分子对IR的影响将有助于更好地了解肥胖相关代谢综合征的发生过程,为预防或治疗IR及其并发症提供新的治疗途径。

弥漫大B细胞淋巴瘤并乙型肝炎病毒感染血清sIL-2r、Flt3L、cTfh水平及与预后的关系

目的探讨弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)并乙型肝炎病毒(HBV)感染患者血清可溶性白细胞介素-2受体(sIL-2r)、Fms相关酪氨酸激酶3配体(Flt3L)、循环辅助T细胞(cTfh)水平及与预后的关系.方法选取2019年3月-2022年3月在新乡医学院第一附属医院收治的60例DLBCL并HBV感染患者为合并HBV组,选取同期收治的60例DLBCL未合并HBV感染患者为未合并HBV组,均在治疗前检测血清sIL-2r、Flt3L、cTfh水平.另选取30名健康志愿者为健康对照组.比较各组间指标水平差异.比较两组患者1年生存差异.利用受试者工作特征(ROC)曲线和多因素COX分析各指标与DLBCL并HBV感染患者预后关系.结果DLBCL患者血清sIL-2r、Flt3L、cTfh水平均高于健康对照组(P<0.05);合并HBV组血清sIL-2r、cTfh、Flt3L水平均高于未合并HBV组(P<0.05).合并HBV组无进展生存率、总生存率均低于未合并HBV组(P<0.05).ROC分析结果显示,sIL-2r、Flt3L、cTfh均具有预测DLBCL并HBV患者的预后价值(P<0.05).多因素COX分析结果显示,淋巴瘤分期(AnnArbor)、非霍奇金淋巴瘤预后(IPI)评分、sIL-2r、Flt3L、cTfh是影响患者预后的危险因素(P<0.05).结论HBV感染可影响DLBCL患者预后,DLBCL并HBV感染患者血清sIL-2r、Flt3L、cTfh高表达,具有预测预后的价值,且Flt3L是影响预后的危险因素.

慢病毒构建的细胞系中过表达FRK对人脑胶质瘤细胞增殖、侵袭及迁移的影响

目的:探讨在慢病毒构建的稳定表达酪氨酸相关激酶(fyn-related kinase,FRK)的细胞系中,过表达FRK对人脑胶质瘤细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响。方法:1.将FRK慢病毒质粒与辅助质粒共转染293T细胞进行慢病毒包装,然后用包装好的慢病毒感染胶质瘤U251、U87细胞,建立稳定表达FRK的细胞系,同时运用Western blotting(WB)技术检测FRK在U251、U87细胞系中的过表达情况;2.细胞划痕实验与Transwell迁移实验检测过表达FRK对脑胶质瘤细胞迁移能力的影响;3Transwell侵袭实验检测过表达FRK对脑胶质瘤细胞侵袭能力的影响;4.Ed U实验与平板集落形成实验检测过表达FRK对脑胶质瘤细胞增殖能力的影响。结果:1.荧光显微镜下可见慢病毒感染U251、U87细胞的效率达到90%以上,WB结果显示外源性FRK蛋白在U251、U87细胞系中充分表达;2.细胞划痕实验显示:与空载体组相比,过表达FRK组U251细胞迁移的细胞数在24 h和48 h分别减少了(50.00±1.04)%和(44.14±7.05)%,差异有统计学意义(P<0.01);而过表达FRK组U87细胞迁移的细胞数在24 h和48 h分别减少了(58.50±4.12)%和(44.67±3.82)%(P<0.001);3.Transwell迁移实验显示:与空载体组相比,过表达FRK组U251、U87细胞穿过滤膜的细胞数分别减少了(67.76±4.88)%和(50.76±4.54)%(P<0.001);4.Transwell侵袭实验显示:与空载体组相比,过表达FRK组U251、U87细胞穿过Matrigel基质胶及滤膜的细胞数分别减少了(50.94±4.83)%和(57.92±6.19)%(P<0.001);5.Ed U实验显示:与空载体组相比,过表达FRK组U251、U87细胞的Ed U阳性细胞率分别下降了(28.06±4.31)%和(33.51±7.26)%(P<0.01);6.平板集落形成实验结果显示:与空载体组相比,过表达FRK组U251、U87细胞集落形成分别减少了(35.94±6.76)%与(52.33±7.42)%(P<0.01)。结论:过表达FRK可以抑制脑胶质瘤细胞的增殖,并且可以抑制胶质瘤细胞的侵袭和迁移能力。

口服减毒沙门氏菌介导黑色素瘤DNA疫苗的研究

以减毒沙门氏菌作为载体的肿瘤疫苗,可以有效地把特异性肿瘤抗原递呈给免疫细胞,激发机体对肿瘤细胞的特异性免疫反应,从而为抑制和治疗肿瘤提供了新思路.热休克蛋白Hsp70可以有效地将抗原肽递呈至抗原递呈细胞(APC)并将其激活,打破机体对肿瘤相关性抗原的免疫耐受.将携带热休克蛋白Hsp70基因和小鼠黑色素瘤特异性抗原酪氨酸激酶相关蛋白2基因(Trp2)的重组质粒(pcDNA3.1-Hsp70-Trp2)导入减毒鼠伤寒沙门氏菌SL3261菌株,以口服形式免疫小鼠C57BL/6后,有效提高了黑色素瘤细胞特异性毒性T细胞反应,并显著激活了自然杀伤细胞.CTL反应活性达到44.6%(P<0.01),是PBS对照组(8.4%)的5倍多,自然杀伤细胞占脾脏细胞比例达到4.0%(P<0.01),是PBS对照组(0.8%)的5倍.在免疫预防实验中,减毒沙门氏菌介导的口服DNA疫苗能够明显延缓C57BL/6小鼠B16F10黑色素移植肿瘤的生长(P<0.01).

重组质粒pVAX1-HER2-Flt3L构建及抗肿瘤效果

[目的]将具有免疫增效功能的Flt3L分子与HER2抗原融合表达,评价Flt3L是否能够提高抑瘤效果。[方法]将人的HER2编码区基因和小鼠Flt3L编码区基因用Furin/2A进行连接,全基因合成后,克隆至pVAX1载体,从而构建重组质粒pVAX1-HER2-Flt3L,同时构建对照质粒pVAX1-HER2和pVAX1-Flt3L。将上述质粒分别注射正常小鼠和稳定表达HER2抗原的荷瘤小鼠,评价其免疫原性和抑瘤效果。[结果]将各组重组质粒接种于Bal B/c小鼠后,抗体检测结果显示:重组融合质粒pVAX1-HER2-Flt3L组诱导产生的平均抗体滴度为2060,而单纯抗原质粒pVAX1-HER2组诱导产生的平均抗体滴度为1720;ELISPOT检测结果显示:重组融合质粒pVAX1-HER2-Flt3L组诱导产生的平均斑点数为133,而单纯抗原质粒pVAX1-HER2组诱导产生的平均抗体滴度为110;与此一致的是,在荷瘤小鼠中,该融合质粒也显示出更加显著的抑制肿瘤生长的效果,达到47%,而单纯抗原质粒仅为32%。[结论]Flt3L具有一定的免疫增效能力,能够显著提高表达HER2抗原重组质粒的抑瘤效果,深入研究其免疫保护机制具有潜在的临床意义。