酪氨酸酶、过氧化物酶和碱性磷酸酶基因在皱纹盘鲍初生壳形成中的表达分析

为研究软体动物贝壳发育区形成机制,实验通过扫描电子显微镜观察分析了皱纹盘鲍贝壳发育区的形态特征,鉴定了皱纹盘鲍的酪氨酸酶(Hdi-Tyr1和Hdi-Tyr2)、过氧化物酶(Hdi-Prx1、Hdi-Prx2)和碱性磷酸酶(Hdi-Alp)等5个贝壳形成相关的候选基因,并通过整装原位杂交技术解析了各基因在皱纹盘鲍早期幼虫发育过程中的表达模式。结果显示,皱纹盘鲍贝壳发育区由至少3种特征差异明显的细胞组成,酪氨酸酶基因(Hdi-Tyr1和HdiTyr2)在担轮幼虫的贝壳发育区呈“U”形表达,在面盘幼虫外套膜的长柱状细胞中表达,而碱性磷酸酶(Hdi-Alp)和过氧化物酶(Hdi-Prx1和Hdi-Prx2)基因仅表达在幼虫的担轮环和头部。研究表明,Hdi-Tyr1和Hdi-Tyr2基因可能参与了皱纹盘鲍担轮幼虫和面盘幼虫的贝壳形成过程,而过氧化物酶基因Hdi-Prx1和Hdi-Prx2以及碱性磷酸酶基因Hdi-Alp并不参与初生壳的发育过程,实验结果为深入解析软体动物的贝壳发育机制和贝壳相关性状的种质创新提供了基础支撑。

华泽兰根化学成分及其抑制α-葡萄糖苷酶和蛋白酪氨酸磷酸酶1B的活性研究

为研究华泽兰Eupatorium chinense根部的化学成分及其抗糖尿病活性,采用正相硅胶柱色谱、薄层色谱、凝胶柱色谱及半制备高效液相色谱等色谱方法,从华泽兰根部分离得到15个单体化合物,并通过现代波谱技术鉴定其结构分别为:8 S-9-hydroxythymol(1)、8,10-dehydro-9-hydroxythymol(2)、1-[4-hydroxy-3-methoxy-5-(3-methylbut-3-en-1-ynyl)phenyl]wethanone(3)、speciosin L(4)、(R)-8-hydroxy-9-isobutyryloxythymol(5)、1,4-[13C]-1,2,3,4-tetrahydro-5-naphthyl-amin(6)、eupatriol(7)、3β,6-hydroxytremetone(8)、泽兰酮(9)、(2 R,3 S)-5-acetyl-6-hydroxyl-2-isopropenyl-3-ethoxy-dihydrofuran(10)、(2 R,3 S)-5-乙酰基-6-羟基-2-异丙烯基-3-乙氧基-苯并二氢呋喃(11)、6-羟基-2 H-苯并呋喃-3-酮(12)、3,5-dimethyl-2,3-dihydrobenzofuran(13)、2,4-bis-(5-acetyl-6-hydroxy-benzofuran-2-yl)-4-methyl-pent-1-ene(14)、1,1′-[[(2 E)-4-methylpent-2-ene-2,4-diyl]bis(6-hydroxy-1-benzofuran-2,5-diyl)]diethanone(15)。其中化合物3为首次从泽兰属植物中分离获得,化合物14为首次从华泽兰中分离获得。采用对硝基苯基-β-吡喃半乳糖苷法与对硝基苯磷酸盐法分别测定所有化合物对诱导糖尿病发生的α-葡萄糖苷酶和蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)的抑制活性进行评价,化合物3、4、5和12具有良好的α-葡萄糖苷酶抑制活性,其IC 50值分别为3.7、10.1、21.3、22.5μg/mL,其中化合物3的抑制活性优于良性药阿卡波糖(4.6μg/mL);化合物1、3、4和12具有良好的PTP1B抑制活性,其IC 50值分别为15.2、8.6、2.2和21.2μg/mL,其中化合物3的抑制活性优于良性药齐墩果酸(12.5μg/mL),化合物4的抑制活性优于阳性药正钒酸钠(7.5μg/mL)和齐墩果酸(12.5μg/mL)。研究表明,炔类化合物3和4均具有较明显的α-葡萄糖苷酶和PTP1B抑制活性。利用分子对接技术计算化合物3和4分别与α-葡萄糖苷酶和PTP1B的相互作用,结果表明化合物3和4与α-葡萄糖苷酶和PTP1B均具有较强的结合力。本论文首次采用双靶点对华泽兰根部的化学成分进行了抗糖尿病活性及构效研究,发现化合物3和4可作为抗糖尿病的先导化合物。

蛋白酪氨酸磷酸酶自身抗体放射配体检测法的建立与临床应用

目的 建立蛋白酪氨酸磷酸酶自身抗体 (IA 2A)的放射配体测定法。 方法 经试管内转录与翻译 ,获得3 5 S标记的重组人IA 2抗原。3 5 S IA 2与血清在自制旋转孵育器上混匀过夜 ,用蛋白A 琼脂糖沉淀抗原抗体复合物。沉淀复合物经TBST缓冲液洗涤后 ,置液体闪烁计数仪计数 ,结果以IA 2A指数表示。并检测国人 111例 1型和 113例 2型糖尿病患者 ,以及 12 5名健康志愿者的IA 2A水平 ,评价其敏感性、特异性及临床应用价值。 结果 该方法的批内变异系数 (CV) 3 .2 %～ 9 .7% ,批间CV 5.6%～ 11.7% ;DASP 2 0 0 3回报结果显示其敏感性 64% ,特异性 10 0 % ;该方法检测 45份标本的IA 2A指数与国际标准化实验室结果呈显著正相关 (r =0 .690 ,P <0 .0 1) ,且阴、阳性判断完全一致 ;IA 2A指数阳性阈值 0 .0 0 65(为 12 5名健康者的 99.5%百分位点上限 ) ;该方法检测国人 1型糖尿病患者阳性率 2 3 .4% (2 6/ 111) ,其中病程 <1年的阳性率 3 3 .3 % (17/ 51) ,病程≥ 1年的阳性率 15.0 % (9/ 60 ) ,差异有显著意义 (χ2 =5.17,P <0 .0 5)。 2型糖尿病患者阳性率 1.8% (2 /113 ) ,显著低于 1型糖尿病患者 (χ2 =2 4.0 ,P <0 .0 0 1)。 结论 建立的IA 2A放射配体检测法灵敏、特异性和重复性好 。

酪氨酸蛋白磷酸酶样A结构域2在食管鳞状细胞癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨酪氨酸蛋白磷酸酶样A结构域2(PTPLAD2)基因产物表达与食管鳞状细胞癌(ESCC)临床病理特征及预后的关系。方法应用免疫组织化学染色法分析了213例ESCC标本中PTPLAD2基因产物表达情况和定位,并对其进行了术后5 a随访。结果 PTPLAD2主要定位在细胞膜,且其在正常鳞状上皮中表达较高(54.0%),而在ESCC组织中低表达(16.0%),对PTPLAD2的表达与ESCC患者临床病理特征关系分析结果显示,在有淋巴结转移和预后差的ESCC病例中低表达;PTPLAD2在ESCC中的表达与ESCC的浸润、转移及分化程度均相关(P<0.05);PTPLAD2表达可作为ESCC患者预后独立指标。结论 PTPLAD2在ESCC中的表达与食管癌的发生发展、浸润转移和预后密切相关,PTPLAD2可能是ESCC发生相关的新的潜在抑癌基因,可作为临床预测浸润转移和估计预后的一个重要参考指标。

蛋白酪氨酸磷酸酶抗体对成人隐匿性自身免疫性糖尿病的诊断研究

目的研究蛋白酪氨酸磷酸酶抗体对成人隐匿性自身免疫性糖尿病(LADA)的诊断效果及意义,对临床糖尿病的检验及诊断提供指导依据。方法选择该科室自2012年12月至2013年6月接受检验的300例患者作为研究对象,其中50例经葡萄糖耐量试验(OGTT)餐后2h血糖及空腹血糖正常,且均无任何自身免疫性疾病和糖尿病家族史;250例初诊为2型糖尿病(T2DM)。应用放射配体检验方法检测患者的谷氨酸脱羧酶抗体(GADAb)以及蛋白酪氨酸磷酸酶抗体(IA-2A)。结果 LADA患者IA-2A阳性的滴度较高者,空腹C肽低、体质量轻、年龄小、胰岛素的使用率高、GAD-Ab常为阳性;C肽水平以及体质量较轻的患者IA-2A阳性率更高,且阳性检出率与患者年龄负相关,在高龄人群中阳性率更低;联合应用IA-2A及GAD-Ab检测时可使T2DM的检出率提高。结论IA-2A对LADA的诊断有着较好的辅助效果,应在临床检验科加以推广应用。

酪氨酸磷酸酶抗体对LADA诊断意义

对 1 2 2例起病年龄≥ 2 5岁 ,起病半年内无酮症的Ⅱ型糖尿病患者及 50例正常人用放射配体法进行谷氨酸脱羧酶抗体 (GAD65 Ab)、酪氨酸磷酸酶抗体 (IA2 Ab)的检测及胰岛功能测定。二种抗体在糖尿病组的阳性率分别为 2 1 3% ( 2 6/1 2 2 )及 5 7% ( 7/1 2 2 )。IA2 Ab的阳性率在糖尿病组与正常组无显著性差异 (P >0 0 5) ,且 7例阳性中仅 1例单独存在。结论 :在LADA的诊断中 。

蛋白酪氨酸磷酸酶-2自身抗体放射配体检测法的影响因素分析

目的对蛋白酪氨酸磷酸酶-2自身抗体（IA-2A）放射配体检测法的影响因素进行分析。方法采用放射配体法检测186批IA-2A，对其检测结果进行回顾性分析和总结，并通过参加国际第4次糖尿病自身抗体检测标准化评估（DASP 2005）验证方法的灵敏度和特异度。结果该方法批内变异系数（CV）为3．1％-9．5％，批间CV为5．5％-11．7％；以信／噪比（S／N）≥50作为检测IA-2A的理想标准，186批次检测中合格161批（86．6％），失败25批（13．4％）。其中高温操作环境[（32．7±6．3）℃]检测失败率（占失败总批次的60％）显著高于低温操作环境[（11．8±5．7）℃，占失败总批次的16％]，且高温操作环境S／N（55．1±6．9）明显低于低温操作环境（68．5±6．2，P〈0．01）。在失败批次中，由三羟甲基氨基甲烷（Tris）缓冲盐溶液引起的占68％（17／25），其他原因有标记失败等。DASP 2005反馈结果显示，我室IA-2A检测灵敏度72％，特异度99％，受试者工作特征（ROC）曲线分析显示，曲线下面积0．825±0．048（0．730-0．919）。结论放射配体法检测IA-2A的影响因素，特别是Tris缓冲盐溶液应引起操作者重视并加以控制，以确保结果稳定可靠。

兔抗破骨细胞蛋白质酪氨酸磷酸酶多克隆抗体的制备和应用

目的:采用已构建的pET28a-ΔPTP-oc重组质粒纯化重组蛋白,制备兔抗破骨细胞蛋白质酪氨酸磷酸酶(PTP-oc)多克隆抗体并鉴定其性能。方法:将构建的pET28a-ΔPTP-oc重组质粒转化至BL21(DE3)中,应用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组蛋白表达。表达产物经过Q柱阴阳离子交换和Ni柱亲和层析获得纯化的PTP-oc重组蛋白,将纯化的重组蛋白作为抗原免疫家兔,获得PTP-oc多克隆抗体。采用间接ELISA法检测抗体效价,Western blotting法检测抗体的特异性。结果:成功纯化出PTP-oc重组蛋白。间接ELISA法检测,采用纯化诱导后的重组蛋白免疫家兔获得了兔抗PTP-oc多克隆抗体,多克隆抗体效价达1∶32 000以上,Western blotting法检测,所得多克隆抗体有较高的特异性。结论:成功纯化了PTP-oc重组蛋白,制备出PTP-oc多克隆抗体。

锌转运蛋白8抗体和酪氨酸磷酸酶抗体检测在不同分型糖尿病诊断中的临床价值

目的探讨锌转运蛋白8抗体(ZnT8A)和酪氨酸磷酸酶抗体(IA-2A)在不同分型糖尿病诊断与鉴别诊断中的临床价值。方法选取2020年3月至2022年1月中南大学湘雅医学院附属海口医院收治的314例糖尿病患者,根据不同分型将患者分为T1DM组(23例,1型糖尿病)、T2DM组(279例,2型糖尿病)和LADA组(12例,成人隐匿性自身免疫性糖尿病),另选取同期院内30例健康体检者作为对照组进行回顾性分析。检测各组研究对象ZnT8A和IA-2A表达水平。比较各组研究对象ZnT8A和IA-2A阳性率,分析ZnT8A和IA-2A鉴别不同糖尿病分型的价值。结果T1DM组研究对象ZnT8A阳性率显著高于其他3组,IA-2A阳性率显著高于T2DM组和对照组(P<0.05)。受试者工作曲线(ROC)分析显示,ZnT8A与IA-2A联合预测概率诊断T1DM的曲线下面积(AUC)为0.809,显著高于ZnT8A、IA-2A单项检测(P<0.05),敏感度为0.867,特异度为0.674。结论ZnT8A和IA-2A与糖尿病的病理进程相关,联合检测ZnT8A和IA-2A有助于T1DM的鉴别诊断,具有较高临床应用价值。

虾夷马粪海胆硬脂酰辅酶A去饱和酶和蛋白酪氨酸磷酸酶基因的克隆与表达

采用同源克隆方法,结合cDNA末端快速扩增(RACE)技术,成功克隆了虾夷马粪海胆Strongylocentrotus intermedius硬脂酰辅酶A去饱和酶(Stearoyl-coenzyme A desaturase,SCD)基因和蛋白酪氨酸磷酸酶(Protein tyrosine phosphatase 1B,PTP1B)基因,并对其结构进行了分析,同时采用实时定量PCR方法对这两个基因在海胆胚胎不同发育时期的表达进行了研究。结果表明:SCD基因的cDNA序列全长为1 934bp(Genbank登录号为HM208174),开放阅读框819 bp,编码273个氨基酸残基,存在跨膜结构和信号肽,为分泌性蛋白;实时定量PCR检测显示,SCD基因在虾夷马粪海胆八腕期表达量最高,在2细胞时期表达量最低。PTP1B基因的cDNA序列全长为1 249 bp(Genbank登录号为HM208173),开放阅读框657 bp,编码219个氨基酸残基,存在跨膜结构和信号肽,为分泌性蛋白;PTP1B基因在海胆2细胞时期表达量最高,在八腕期表达量最低。本研究为在分子水平上探讨海胆脂代谢过程中的基因功能提供了科学依据。

巨核细胞蛋白质酪氨酸磷酸酶2的克隆表达及其与骨质疏松症的关系

目的:探讨巨核细胞蛋白质酪氨酸磷酸酶2(PTPMEG2)的克隆表达及其对骨质疏松症发展过程的调节作用。方法:分离纯化后的PTPMEG2蛋白,应用免疫学技术制备PTPMEG2的多克隆抗体。30只雌性SD大鼠随机分为模型组(n=15)和对照组(n=15),采用维甲酸灌胃给药的方法构建大鼠骨质疏松症模型,对照组大鼠采用生理盐水灌胃,检测2组大鼠血清中酸性磷酸酶(ACP)及碱性磷酸酶(ALP)的水平。Western blotting法检测大鼠各组织中PTPMEG2的表达水平,并对比PTPMEG2在骨髓细胞(BMCs)、红细胞及骨髓基质细胞(BMSCs)中表达量的变化。结果:成功制备PTPMEG2的多克隆抗体。模型组大鼠血清中ACP和ALP表达水平均高于对照组(P<0.01),且模型组大鼠的骨脆性明显高于对照组。模型组大鼠肾脏组织中PTPMEG2的表达水平高于对照组(P<0.05),而其在肌肉组织中的表达水平却低于对照组(P<0.05)。与对照组比较,PTPMEG2在模型组大鼠BMCs中表达量显著增加,而在红细胞和BMSCs中其表达量无明显差异。结论:骨质疏松症大鼠BMCs中PTPMEG2表达水平增加,且多发生在骨髓内分化成熟的骨细胞中;PTPMEG2可能在骨质疏松症的发展过程中发挥重要的调节作用。

一种新的蛋白酪氨酸磷酸酶基因的克隆、定位和组织表达谱研究

从人胎肝cDNA文库分离出一长度为 5 2 48bp的cDNA克隆 ,该基因包含 2 6个外显子和 2 5个内含子 ,染色体定位于在某些肿瘤细胞中易缺失的 3p2 1.1- 2 1.33。其可读框编码 16 36个氨基酸 ,该蛋白属于蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP)家族 ,其C端有一个典型的PTP结构域 ,N端含有约 80 0氨基酸残基的BRO1样结构域及随后 2个可能的SH3结构域结合位点 ,在这两个结构域之间及C末端还各有一个脯氨酸富集区。Northern杂交和点杂交分析显示 ,该基因以大约 5 .4kb的单一转录物广泛表达于人体各种组织 ,而且在人部分肿瘤细胞中高表达。结果提示 ,人源PTP -TD14是一个新的蛋白酪氨酸磷酸酶。

蛋白酪氨酸磷酸酶抗体在糖尿病分型诊断中的价值

糖尿病主要依据其病因学的不同而进行分型，其中1型糖尿病是一种免疫介导的疾病，患者血清中可检测到针对胰岛B细胞的自身抗体，是存在免疫损害的有力佐证。目前临床上主要以胰岛细胞抗体（ICA）、谷氨酸脱羟酶抗体（GADA）、胰岛素自身抗体（IAA）联合检测作为糖尿病分型辅助的诊断。

两种不同方法检测蛋白酪氨酸磷酸酶抗体的结果分析

随着社会的发展和人民的生活水平的提高,糖尿病患者数不断上升,并且病死率也逐年升高,成为影响人类健康和生存的主要疾病之一.糖尿病主要依据其病因学的不同而进行分型,糖尿病可分为1 型（包括自身免疫性和特发性糖尿病）、2 型（胰岛素抵抗为主和胰岛素分泌缺陷为主的糖尿病）、其他特殊类型（T1DM,包括B 细胞功能遗传性缺陷、胰岛素作用遗传缺陷、药物或化学品所致糖尿病、不常见的免疫介导糖尿病等类型）及妊娠糖尿病4 种类型.糖尿病的发病机制非常复杂,至今尚未完全明了,而且不同类型糖尿病之间,其病因也不相同,即便同一类型也有差异.

组蛋白去乙酰化酶抑制剂联合FMS样酪氨酸激酶-3抑制剂对FLT3-ITD突变白血病细胞增殖、凋亡和周期的影响

目的 探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACi)联合FMS样酪氨酸激酶-3(FLT3)抑制剂对FLT3-ITD突变的急性髓系白血病(AML)细胞系增殖抑制作用及其相关机制。方法 将西达本胺(Chidamide)和奎扎替尼(Quizartinib,AC220)以不同浓度单药或联合作用于MV4-11、MOLM-13细胞系48 h后,CCK8检测细胞增殖能力;Compusyn 1.0软件分析两药联合作用的协同效应;流式细胞计数法测定各组细胞凋亡率、增殖周期;蛋白质印迹法测定P53、Bcl-2、Bax、FLT3、磷酸化FLT3(p-FLT3)及磷酸化AKT(p-AKT)蛋白表达水平。结果 随西达本胺及奎扎替尼单药或联合作用浓度升高,对MV4-11及MOLM-13细胞系的48h增殖抑制率均显著升高(P<0.05),并且两药具有协同抑制效应(均CI值<1)。在奎扎替尼1.0 nmol/L+西达本胺1.0μmol/L作用48 h后,细胞凋亡率MV4-11细胞株为31.697%±5.648%,MOLM-13细胞株为18.500%±1.751%,细胞周期阻滞于G0/G1期的比例MV4-11细胞株为78.493%±1.285%,MOLM-13细胞株为89.850%±1.072%,两药联合较奎扎替尼1.0 nmol/L或西达本胺1.0μmol/L单药使用可明显促进MV4-11及MOLM-13细胞系的凋亡和周期阻滞(P<0.05)。奎扎替尼1.0 nmol/L联合西达本胺1.0μmol/L治疗较单药能更明显上调P53、BAX促凋亡蛋白,下调p-FLT3、抗凋亡蛋白BCL-2及PI3K/AKT信号通路关键下游因子p-AKT。结论 西达本胺与奎扎替尼联合应用可通过下调p-FLT3、p-AKT、Bcl-2蛋白表达,上调P53、Bax蛋白表达,促进FLT3-ITD突变白血病细胞系的凋亡及周期阻滞,抑制AML细胞的增殖活性。

蛋白酪氨酸磷酸酶1B基因Pro387Leu突变与天津地区汉族不同糖耐量水平人群的相关性研究

目的:探讨天津地区汉族人蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)基因外显子9单核苷酸Pro387Leu多态性分布情况及其与不同糖耐量水平的相关性。方法:根据口服葡萄糖耐量试验(OGTT)结果将来自天津地区的汉族327例患者分成初次诊断2型糖尿病(T2DM)组、糖耐量异常(IGT)组和糖耐量正常(NGT)组,采用聚合酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性(PCR-RFLP)方法测定PTP1B(Pro387Leu)多态性分布情况,分析不同基因型别临床及生化指标。结果:本组人群中的基因突变均为杂合子突变型(PL型),未发现纯合突变型(LL型),基因型PP、PL分布情况在3组间的差别无统计学意义(P>0.05)。PP、PL型患者体质量指数(BMI)、空腹胰岛素(FINS)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)差别有统计学意义,PL型明显高于PP型(P<0.05或P<0.01)。结论:天津汉族人存在PTP1B基因外显子9Pro387Leu单核苷酸多态性,其多态性与不同糖耐量水平人群无相关性,而与肥胖有相关性。

蛋白酪氨酸磷酸酶1B的过度表达抑制GFAT的活性

为探讨蛋白酪氨酸磷酸酶 1B(PTP1B)在细胞中的过度表达对氨基己糖途径之关键酶谷氨酰胺 :6 磷酸果糖酰基转移酶 (GFAT)的作用及其可能的作用机制。通过观察PTP1B在细胞内的过度表达对GFAT的活性及其终产物二磷酸尿嘧啶N 乙酰葡萄糖胺生成的影响及PTP抑制剂正钒酸盐的对抗作用 ,并测定对细胞内GFATmRNA水平和PTP1B对GFAT的直接作用等 ,发现PTP1B在L6、HepG2、3T3 L1和HIRc等细胞中的过度表达可明显抑制GFAT的活性 。

靶向蛋白酪氨酸磷酸酶1B小分子干扰RNA对结肠癌LoVo细胞增殖和成瘤能力的影响

目的:探讨沉默蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)基因的RNA干扰对人结肠癌LoVo细胞增殖和成瘤能力的影响。方法:应用小分子干扰RNA(siRNA)技术沉默PTP1B的表达(shRNA-PTP1B),采用逆转录聚合酶链反应和Western Blot分别在mRNA和蛋白水平检测抑制效果。CCK-8被用于检测沉默PTP1B表达对肿瘤细胞增殖的影响。在体外实验的基础上建立裸鼠模型,建立稳定表达干扰RNA细胞系,观察干扰RNA稳定表达对人结肠癌裸鼠移植成瘤的影响。结果:shRNA-PTP1B有效沉默LoVo细胞PTP1B mRNA及蛋白的表达,成功筛选shRNA-PTP1B稳定表达细胞株LoVo/shRNA细胞。在体外试验中与对照组比较LoVo/shRNA细胞的增殖能力明显下降。LoVo/shRNA细胞裸鼠移植成瘤体积,明显减小(P均<0.05)。结论:shRNA-PTP1B可以沉默人结肠癌PTP1B基因的表达,显著抑制LoVo细胞的增殖,降低LoVo细胞的成瘤能力。