奥氮平介导环磷酸腺苷反应元件结合蛋白/脑源性神经营养因子/酪氨酸蛋白激酶受体B通路对精神分裂模型大鼠的神经修复作用

目的 探讨奥氮平通过对环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)/脑源性神经营养因子(BDNF)/酪氨酸蛋白激酶受体B(TrkB)通路的影响对精神分裂模型大鼠的神经修复作用。方法 将60只大鼠纳入对照组、模型组、奥氮平低、中、高剂量组,各组均10只。模型组、奥氮平低、中、高剂量组大鼠进行MK-801腹腔注射0.2 mg/(kg·d),对照组注射等量生理盐水。模型建立成功24 h后,奥氮平低、中、高剂量组分别以0.5、1.0、1.5 mg/(kg·d)奥氮平溶液灌胃,对照组、模型组同剂量生理盐水灌胃。按照共济失调和刻板行为标准对大鼠行为学进行评分;Morris水迷宫实验评定大鼠认知功能及学习能力;ELISA法检测大鼠血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)水平;观察海马组织病理学变化;检测海马区细胞凋亡及CREB/BDNF/TrkB通路相关蛋白表达。结果 与对照组比较,模型组大鼠共济失调、刻板行为评分、TNF-α、IL-6表达、细胞凋亡率极显著增加(P<0.01),奥氮平低、中剂量组显著增加(P<0.05)。与对照组比较,模型组大鼠跨越平台次数、目标象限停留时间、CREB、磷酸化CREB(p-CREB)、磷酸化TrkB(p-TrkB)、TrkB、BDNF蛋白相对表达极显著减少(P<0.01),奥氮平低、中剂量组显著减少(P<0.05)。与模型组比较,奥氮平低、中剂量组跨越平台次数、目标象限停留时间显著增加(P<0.05),奥氮平高剂量组极显著增加(P<0.01)。模型组以及奥氮平低剂量组中海马细胞肿大明显、细胞核破碎分裂、固缩,组织排列杂乱;奥氮平中、高剂量组大鼠海马细胞中少见破碎分裂以及核固缩现象,整体组织与对照组大鼠相似。结论 奥氮平对精神分裂症模型大鼠的神经修复作用机制涉及到改善大鼠认知功能受损、保护大鼠海马神经细胞以及激活CREB/BDNF/TrkB信号通路的表达。

两种真菌多糖对HL-60细胞酪氨酸蛋白磷酸化作用的影响

目的 :研究猪苓多糖和茯苓多糖对人早幼粒白血病细胞 (HL 6 0 )酪氨酸蛋白磷酸化作用的影响。方法 :用一定浓度的药物处理体外培养的HL 6 0细胞。用放射免疫法测定经过培养 12 ,2 4,48,72和 12 0h对照组和药物处理组细胞浆和膜部分的酪氨酸蛋白激酶 (TPK)和磷酸酪氨酸蛋白磷酸酶 (PTPP)的活力 ,比较酶活力变化情况。结果 :两种多糖对胞浆和膜部分TPK活力均有不同程度的抑制作用。而对两部分PTPP的活力均有不同程度的激活作用。结论 :两种真菌多糖均可使HL 6 0细胞酪氨酸蛋白磷酸化水平下降 ,提示两种多糖抗肿瘤作用的机制可能与酪氨酸蛋白磷酸化作用有关。

饮食脂肪含量和耐力运动对肥胖鼠胰岛素受体酪氨酸蛋白激酶的影响

研究利用含 2 0 %猪油的高脂饲料诱发大鼠肥胖模型 ,对胰岛素在肥胖发生中的作用 ,及胰岛素受体酪氨酸蛋白激酶活性的变化进行研究 ,并探讨耐力运动的减体脂机制 ,及饮食脂肪含量对胰岛素受体酶活性的影响。得出以下结论 :1.高脂饲料诱发肥胖鼠存在高胰岛素血症 ,胰岛素敏感性下降 ,及胰岛素抵抗。其肝细胞膜、脂肪细胞膜、肌细胞膜胰岛素受体结合容量下降 ,同时 ,肝细胞膜与肌细胞膜胰岛素受体酪氨酸激酶活性 (受体激酶自动磷酸化 )也下降 ,加重了胰岛素抵抗程度。 2 .耐力运动可减少高脂饲料诱发肥胖鼠体脂含量 ,通过增加肥胖鼠细胞膜胰岛素受体结合力 ,减轻其胰岛素抵抗。减少饮食中脂肪含量同时结合耐力运动 ,可降低肥胖鼠的体脂含量至对照水平 ,既可提高细胞膜胰岛素受体结合力 ,也可提高受体后 TPK活性 。

一种鰑鱼诺卡氏菌酪氨酸蛋白磷酸酶基因的克隆及功能初步研究

這鱼诺卡氏菌是鱼类诺卡氏菌病的主要病原,可导致鱼类慢性系统性肉芽肿疾病。這鱼诺卡氏菌全基因组序列分析发现了一个酪氨酸蛋白磷酸酶(protein tyrosine phosphtase,PTP)基因,生物信息学分析显示该基因很可能编码一个靶向定位于宿主细胞线粒体的分泌蛋白。本实验对這鱼诺卡氏菌PTP进行了基因克隆、分泌蛋白鉴定、亚细胞定位、过表达和线粒体膜电位检测,结果显示,在這鱼诺卡氏菌胞外产物中质谱鉴定到了PTP肽段,证实其为分泌蛋白。亚细胞定位研究观察到PTP-GFP融合蛋白均匀地分布在FHM细胞中,与线粒体分布不重合,说明這鱼诺卡氏菌PTP蛋白并未靶向定位于线粒体。亚细胞定位和过表达研究都显示PTP蛋白在FHM细胞中表达后,细胞核出现固缩浓染、凋亡小体等明显的细胞凋亡特征。通过线粒体膜电位检测表明,在pcDNA-PTP转染后48 h,线粒体跨膜电位被明显破坏,说明這鱼诺卡氏菌PTP很可能是一种可诱导细胞凋亡的细菌蛋白。通过对這鱼诺卡氏菌PTP开展基因克隆和功能初步研究,为进一步揭示该基因的功能和深入了解這鱼诺卡氏菌的分子致病机理奠定了基础。

酪氨酸蛋白激酶-2基因多态性与河南农村汉族人群2型糖尿病的关系

目的：探讨酪氨酸蛋白激酶-2（JAK2）基因rs2230724位点多态性与河南农村汉族人群2型糖尿病易感性的关系。方法：采用随机抽样的方法选择河南省某农村地区汉族2型糖尿病患者235人（病例组）和对照278人（对照组）,采用Taq Man荧光探针Real-Time PCR检测JAK2基因rs2230724位点多态性;采用logistic回归模型分析基因多态性与2型糖尿病的关联强度;采用MDR模型及叉生分析探讨基因-环境的交互作用。结果：病例组和对照组JAK2基因rs2230724位点AA、AG和GG基因型分布频率差异具有统计学意义（P=0.008）。调整年龄、性别等因素后,JAK2基因rs2230724位点突变基因型AG＋GG与2型糖尿病易感性下降存在统计学关联（OR调整=0.425,95%CI：0.245~0.736）。进一步分析显示,JAK2基因rs2230724位点与体力活动对2型糖尿病易感性的影响存在相乘交互作用（OR调整=0.583,95%CI：0.405~0.839）。结论：JAK2基因位点rs2230724多态性与2型糖尿病易感性存在关联,且该位点基因多态性和体力活动对2型糖尿病的发生具有交互作用。

美金刚联合丰富环境对快速衰老小鼠海马脑源性神经营养因子、酪氨酸蛋白激酶受体B表达及学习记忆能力的影响

目的探讨美金刚联合丰富环境对快速衰老小鼠（SAMP8）海马脑源性神经营养因子（BDNF）、酪氨酸蛋白激酶受体B（TrkB）表达及学习记忆能力的影响。方法24只雄性SAMP8小鼠随机分为对照组、丰富环境治疗组（丰富环境组）、美金刚治疗组（美金刚组）和美金刚联合丰富环境组（联合治疗组），每组6只小鼠。治疗8周后，采用Morris水迷宫试验检测小鼠空间学习记忆能力，免疫印记法和实时定量PCR法检测小鼠海马组织中BDNF、TrkB的表达水平。结果与对照组比较，丰富环境组、美金刚组小鼠在试验第3d起寻找到平台的潜伏期明显缩短，联合治疗组小鼠在试验第2d起的逃避潜伏期明显缩短（P〈0．05～0．01）；且联合治疗组小鼠在试验第4d时的逃避潜伏期明显短于丰富环境组和美金刚组（均P〈0．05）。与对照组比较，其余3组小鼠穿越平台次数明显增多（P〈0．05～0．01）；且联合治疗组小鼠穿越平台次数明显多于丰富环境组和美金刚组（均P〈0．01）。与对照组比较，其余3组小鼠海马BDNFmRNA、BDNF蛋白和TrkB蛋白的表达均明显升高（P〈0．05～0．01），其中联合治疗组明显高于丰富环境组与美金刚组（P〈0．05～0．01）。各组小鼠海马TrkBmRNA表达的差异无统计学意义。结论美金刚和丰富环境治疗能够有效地改善SAMP8小鼠学习记忆能力并增加海马BDNF和TrkB的表达，二者联合治疗时效果更显著。

酪氨酸蛋白激酶在不同α_1肾上腺素受体亚型Ca^(2+)调控中的作用

目的 了解酪氨酸蛋白激酶信号途径在不同α1肾上腺素受体亚型Ca2 +调控中的作用。方法 用Fura 2荧光探针双波长测定细胞胞浆游Ca2 +浓度 ([Ca2 +]i)的方法 ,在分别转染了α1A、α1B和α1D肾上腺素受体cDNA的HEK2 93细胞 ,观察酪氨酸蛋白激酶抑制剂Genistein和磷脂酶C抑制剂U7312 2 对激动不同α1肾上腺素受体亚型引起的 [Ca2 +]i 变化的影响。结果 预先用U7312 2 (0 1,10 ,5 0 μmol·L-1)与细胞共同孵育 10min ;用Genistein(10 ,10 0 ,2 0 0 μmol·L-1)与细胞共同孵育 1h。在分别转染了α1A、α1B和α1DcDNA的HEK2 93细胞 ,U73 12 2 和Genistein均能浓度依赖性地抑制肾上腺 (10 μmol·L-1)引起的双相 [Ca2 +]i 的升高。在上述细胞 ,U7312 2 (5 0 μmol·L-1)能完全抑制肾上腺素引起的[Ca2 +]i 升高 ;而用最大有效浓度 10 0 μmol·L-1的Genistein只能部分抑制肾上腺素升高 [Ca2 +]i 的作用。结论 在HEK 2 93细胞 ,不同α1肾上腺素受体亚型 (α1A α1B和α1D)激动均能部分通过酪氨酸蛋白激酶信号途径引起Ca2 +释放和Ca2 +内流。

酪氨酸蛋白激酶抑制剂联合放疗抑制乳腺癌细胞增殖以及荷瘤裸鼠肿瘤生长

目的研究酪氨酸蛋白激酶抑制剂(TKI)联合放疗对乳腺癌细胞增殖及肿瘤生长的影响。方法利用噻唑蓝(MTT)实验检测不同浓度的TKI对乳腺癌细胞MCF-7的抑制作用。将乳腺癌细胞分为生理盐水组,TKI干预组(TKI处理后无X射线照射),X射线干预组(X射线照射,无TKI处理)和TKI联合放疗干预组。利用克隆形成实验比较各组细胞存活率。构建乳腺癌裸鼠异位瘤模型,考察不同干预组对肿瘤生长的抑制能力。结果克隆形成实验显示,单独利用X射线照射或者单独利用任何浓度的TKI抑制剂处理乳腺癌细胞,细胞的存活率均较处理前出现降低;但TKI联合放疗乳腺癌细胞存活率较前面两组(TKI干预组,X射线干预组)差异有统计学意义(P<0.05)。与TKI预处理组或X射线干预组比较,TKI联合放疗干预组能够明显抑制荷瘤裸鼠肿瘤体积的增长,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 TKI抑制剂联合放疗可有效抑制乳腺癌细胞的生长。

MAPK和JAK-STAT途径中酪氨酸蛋白激酶在肝癌组织中的表达及意义

目的观察MAPK途径和JAK-STAT途径中重要酪氨酸蛋白激酶ERK、P38、C-Jun、JAK、STAT3、STAT5在肝癌组织中的表达及其相互关系,探讨蛋白激酶表达与肝癌患者临床病理特征之间的关系。方法收集原发性肝癌手术切除标本30例,制作组织芯片,酪氨酸蛋白激酶在不同组织中的表达检测采用免疫组化SP法。结果ERK、P38、C-Jun、JAK、STAT3、STAT5在肝癌组织中的表达平均光密度值显著高于肝硬化组(P<0.01)。ERK与C-Jun、JAK、STAT3、STAT5在肝癌组织中的表达呈显著正相关,与P38呈显著负相关。JAK的过度表达与肝癌组织的分化程度有关,在低分化肝癌组织中表达率显著高于高中分化肝癌组织。结论MAPK和JAK-STAT通路的过度活化在肝癌发生发展过程中起重要作用,细胞信号转导系统失去正常的协调平衡可能是导致肿瘤发生的重要原因。

肝癌患者血清磷酸酪氨酸蛋白含量

目的研究测定血清PTPr对肝癌诊断的意义。方法用ELISA法测定健康成人和患者血清PTPr,然后分组统计分析。结果 77例健康成人血清PTPr全部低于30μg·L^(-1),其中74例未能测出(即<8);72例非癌症患者中44例未测出,仅5例超过30;肝癌组66例中56例超过30(283.4±535.7),显著高于前两组。测定PTPr对肝癌诊断敏感度达78.8％,特异度达93％,准确度达86.2％,诊断效率达73.3％。文中将PTPr与AFP测定的结果进行了对比,并研究了两项联合检测的意义。结论测定血清PTPr对肝癌诊断具有显著临床价值;其意义可与AFP相当,且与AFP联合应用更有意义。

酪氨酸蛋白磷酸酶样A结构域2在食管鳞状细胞癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨酪氨酸蛋白磷酸酶样A结构域2(PTPLAD2)基因产物表达与食管鳞状细胞癌(ESCC)临床病理特征及预后的关系。方法应用免疫组织化学染色法分析了213例ESCC标本中PTPLAD2基因产物表达情况和定位,并对其进行了术后5 a随访。结果 PTPLAD2主要定位在细胞膜,且其在正常鳞状上皮中表达较高(54.0%),而在ESCC组织中低表达(16.0%),对PTPLAD2的表达与ESCC患者临床病理特征关系分析结果显示,在有淋巴结转移和预后差的ESCC病例中低表达;PTPLAD2在ESCC中的表达与ESCC的浸润、转移及分化程度均相关(P<0.05);PTPLAD2表达可作为ESCC患者预后独立指标。结论 PTPLAD2在ESCC中的表达与食管癌的发生发展、浸润转移和预后密切相关,PTPLAD2可能是ESCC发生相关的新的潜在抑癌基因,可作为临床预测浸润转移和估计预后的一个重要参考指标。

酪氨酸蛋白激酶与突触可塑性及学习记忆的关系

近年来酪氨酸磷酸化在成年哺乳动物神经系统中的重要作用逐渐受到重视,酪氨酸蛋白激酶在调控与细胞增殖、分化、迁移及代谢相关的信号转导通路中起关键作用。本文主要对三种不同的酪氨酸蛋白激酶信号级联过程,即Trk受体酪氨酸激酶级联,Src家族非受体酪氨酸激酶级联及Eph受体酪氨酸激酶级联,以及它们在成年动物神经元突触可塑性及学习记忆形成过程中的重要作用及可能机制作一综述。

Src酪氨酸蛋白激酶及其在高血压中的作用

高血压会导致一系列心脑血管结构和功能的变化,包括内皮功能的紊乱、血管张力的改变以及心脑血管重构等。最近有研究提示,Src酪氨酸蛋白激酶在高血压和脑卒中过程中发挥重要作用,其可能的机制包括通过影响氧化还原信号、偶联因子6、缓激肽、血管内皮生长因子和转化生长因子-β1等。该文将重点综述Src酪氨酸蛋白激酶通过不同作用机制调节血压的最新研究。

Genistein抑制兔晶体上皮细胞膜酪氨酸蛋白激酶及蛋白激酶C磷酸化的研究

目的 :研究 genistein对兔晶体上皮细胞增殖及胞膜酪氨酸蛋白激酶 (TPK)、蛋白激酶C(PKC)活性的影响 ,探索使用 genistein防治后发性白内障。 方法 :兔晶体上皮细胞培养 ,应用Casnetllie改良法检测不同浓度genistein及bFGF作用后 ,兔晶体上皮细胞膜TPK活性的变化 ;同位素掺入法检测 genistein及bFGF作用后 ,兔晶体上皮细胞胞膜及胞浆PKC活性的变化。结果 :不同浓度 genistein作用后兔晶体上皮细胞TPK活性均较对照组明显下降 ,genistein可抑制bFGF诱导的TPK活性升高 ,genistein对PKC活性无明显抑制作用 ,但可抑制bFGF诱导的PKC活性升高。结论

脑缺血/再灌对海马磷酸酪氨酸蛋白含量的影响及其机制的研究

目的和方法 :采用蒙古沙土鼠双侧颈总动脉结扎 (BCAO)前脑缺血模型 ,研究N 甲基D 门冬氨酸 (NMDA)受体 (NR)非竞争性拮抗剂氯胺酮 (ketamine,KT)、L 型电压门控钙离于通道 (L typevoltagegatedcalciumchannel,L型VGCC)拮抗剂硝苯吡啶 (NifedipineND)及非NR拮抗剂 6 ,7 二硝基喹恶啉上卫四 (6 ,7 dinitroquinoxaline 2 ,3dioneDNQX)对沙土鼠脑缺血及缺血 /再灌海马可溶性 (S3)、突触体 (P2 )和颗粒性 (P3)部分中磷酸酪氨酸蛋白 (p tyr pr)含量变化的影响。 结果 :①缺血 15min ,三部分 (P2 ,P3,S3) p tyr pr含量均下降 ,而S3 部分 p tyr pr含量下降更明显 ;随着脑缺血再灌时间的延长 ,三部分P tyr Pr含量均逐渐升高。S3 部分恢复快 ,P2 与P3 部分相比 ,升高的速度较慢 ,但升高的幅度较大 ,且再灌后期变化不大 ;②脑缺血前腹腔注射KT或ND ,均可部分地拮抗缺血再灌引起的p tyr pr含量的升高 ,而DNQX对此无影响。 结论 :缺血 /再灌引起的p tyr pr变化与NR通道及L型VGCC有关 。

受体酪氨酸蛋白激酶的研究

酪氨酸蛋白激酶是细胞信号转导的主要信号酶之一,对细胞的生长、发育与功能调控起着重要的作用。受体型酪氨酸蛋白激酶是细胞内段具有酪氨酸激酶活性跨膜结构的酶蛋白受体,其胞外区与生长因子配体结合,然后激活胞内段的酶活性区启动信号转导,参与细胞的生长、增殖、转化及胚胎发育和肿瘤形成。主要介绍受体型酪氨酸蛋白激酶的结构、分类及其信号转导途径。

二甲双胍对慢性暴露于高糖及高游离脂肪酸的HIT-T15细胞胰岛素受体酪氨酸蛋白激酶活性的影响

目的观察二甲双胍(MF)对慢性高糖和高脂处理后的HIT-T15细胞(β细胞系)胰岛素受体(IRc)酪氨酸蛋白激酶(TPK)活性的影响,探讨MF对β细胞糖脂毒性,即β细胞胰岛素抵抗的改善作用机制。方法实验分为对照组、对照+MF组、高糖组、高糖+MF组、高脂组、高脂+MF组。将HIT-T15细胞分别接种于含有5.5mmol/L、16.7 mmol/L葡萄糖(G)及0.5 mmol/L软脂酸的培养液中,培养48 h后,加入2.5μg/mL MF干预24h。用放射性酶分析法测定β细胞IRc TPK活性。结果高糖〔(52.5±18.6)pmol/(min.μg)〕和高脂组〔(54.6±14.0)pmol/(min.μg)〕HIT-T15细胞IRc TPK活性分别较对照组〔(119.4±29.1)pmol/(min.μg)〕降低(P<0.01);予2.5μg/mL MF干预24 h后,高糖和高脂组IRc TPK活性较干预前增高〔(113.0±29.8)vs(52.5±18.6)pmol/(min.μg),P<0.01;(98.6±26.1)vs(54.6±14.0)pmol/(min.μg),P<0.01〕,且与对照组相比差异无统计学意义。MF对对照组HIT-T15细胞IRc TPK活性无明显影响。结论高糖和高脂可抑制β细胞IRcTPK活性。MF能明显改善受高糖及高脂所抑制的HIT-T15细胞IRc TPK活性,且恢复到接近正常水平。提示MF对糖脂毒性所致β细胞胰岛素抵抗的改善作用可能与增加IRc TPK活性有关。

新型二氟甲基磷酸类酪氨酸蛋白磷酸酯酶1B抑制剂的分子动力学模拟和结合自由能计算(英文)

通过分子对接建立了一系列含二氟甲基磷酸基团(DFMP)或二氟甲基硫酸基团(DFMS)的抑制剂与酪氨酸蛋白磷酸酯酶1B(PTP1B)的相互作用模式,并通过1ns的分子动力学模拟和molecular mechanics/generalized Born surface area(MM/GBSA)方法计算了其结合自由能.计算获得的结合自由能排序和抑制剂与靶酶间结合能力排序一致;通过基于主方程的自由能计算方法,获得了抑制剂与靶酶残基间相互作用的信息,这些信息显示DFMP/DFMS基团的负电荷中心与PTP1B的221位精氨酸正电荷中心之间的静电相互作用强弱决定了此类抑制剂的活性,进一步的分析还显示位于DFMP/DFMS基团中的氟原子或其他具有适当原子半径的氢键供体原子会增进此类抑制剂与PTP1B活性位点的结合能力.

血清可溶性酪氨酸蛋白激酶对乳腺癌的诊断及预后评估价值

目的探讨血清可溶性酪氨酸蛋白激酶(sAxl)表达水平与乳腺癌患者临床资料及诊断、预后的关系。方法分析2016年3月至2019年3月该院甲状腺乳腺外科收治的103例乳腺疾病患者的临床资料,采用酶联免疫吸附试验检测血清sAxl水平,利用受试者工作特征曲线(ROC曲线)评价血清sAxl水平对乳腺癌的诊断效能,并分析5年生存率;采用Cox比例风险模型分析影响乳腺癌患者生存率和预后的危险因素。结果乳腺癌组血清sAxl水平[(60.19±23.05)ng/mL]明显高于乳腺纤维腺瘤组[(48.85±17.02)ng/mL],差异有统计学意义(t=10.270,P<0.001)。血清sAxl水平与肿瘤大小、淋巴结转移有关(P<0.05),与患者年龄、肿瘤分期、雄激素受体、孕激素受体、绝经状态、Ki-67标记指数无关(P>0.05)。血清sAxl鉴别乳腺癌和乳腺纤维瘤的ROC曲线下面积为0.874,根据最大约登指数(0.6421)确定截断值为46.09 ng/mL,灵敏度为80.5%,特异度为86.0%。生存分析显示,血清sAxl高水平组5年生存率明显低于低水平组,差异有统计学意义(χ^2=8.139,P<0.01)。Cox多因素分析显示,血清sAxl是影响乳腺癌生存率预后的危险因素(P<0.05)。结论乳腺癌患者血清sAxl水平明显升高,高水平sAxl与患者肿瘤大小、淋巴结转移有关;血清sAxl可作为乳腺癌诊断及生存预后评估的指标。

从天然产物中寻找酪氨酸蛋白激酶(PTKs)抑制剂的研究进展

概述了近年来从天然产物中寻找酪氨酸蛋白激酶抑制剂的研究现状和前景。具有抑制酪氨酸蛋白激酶活性的天然产物主要包括黄酮类、蒽醌类、苯乙烯类、芪类、甾醇类、生物碱、苯醌及倍半萜醌类等。