EPHB6受体型酪氨酸蛋白激酶对ERK信号通路的调控效应

目的:探讨促红细胞生成素产生肝细胞B6(EPHB6)对于胞外信号调节激酶(ERK)信号转导通路的作用.方法:以非小细胞肺癌细胞系A549作为研究对象,采用Western Blot法检测ERK的磷酸化水平及通路检测(PathDe-tect)法检测ERK下游分子和Ets结构域蛋白1(Elk-1)转录因子的活性.结果:A549细胞中EPHB6的表达导致ERK的磷酸化.相反,siRNA干涉EPHB6的表达可以逆转ERK的磷酸化.并且,EPHB6导致的ERK磷酸化与Elk-1转录因子脱偶联.结论:表明EPHB6对于ERK信号通路具有调控作用.

蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型6对心脏HERG钾通道的调控作用

目的旨在阐明蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型6(tyrosine protein phosphatase non-receptor type 6,PTPN6)是否对心脏HERG钾通道电流具有调控的作用。方法聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)技术构建pcDNA3.1-PTPN6-EGFP质粒;应用脂质体Lipofectamine2000将各种质粒转染进入HEK293细胞;应用膜片钳技术分别检测对照组(pcDNA3.0-HERG单独转染HEK293细胞)、PTPN6过度表达组(pcDNA3.0-HERG和pcDNA3.1-PTPN6-EGFP共转染HEK293细胞)以及抑制剂组(pcDNA3.0-HERG和pcDNA3.1-PTPN6-EGFP共转染HEK293细胞,并加入蛋白酪氨酸磷酸酶抑制剂正钒酸钠)的HERG钾通道的脉冲电流最大电流密度、尾电流最大电流密度以及去激活时间常数Tau等。结果成功构建了pcDNA3.1-PTPN6-EGFP质粒,测序结果表明基因序列正确,荧光显微镜下可观察到HEK293细胞中绿色荧光蛋白表达;全细胞膜片钳电生理检测发现,PTPN6过度表达组的脉冲电流最大电流密度[(36.42±2.76)pA/pF]、尾电流最大电流密[(84.73±7.18)pA/pF]均较对照组[(45.92±3.18)pA/pF、(108.43±7.98)pA/pF]显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);而抑制剂组脉冲电流最大电流密度、尾电流最大电流密度[(47.10±2.96)pA/pF、(110.52±7.87)pA/pF]均较PTPN6过度表达组明显增大,差异有统计学意义(P<0.05);PTPN6过度表达组失活时间常数Tau[(785.59±90.05)ms]较对照组[(440.7±49.49)ms]明显延长,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 PTPN6过度表达能使HERG钾通道的电流密度降低,且这一作用能被酪氨酸磷酸酶抑制剂逆转,提示PTPN6能通过催化HERG钾通道去磷酸化而发挥负性调控HERG钾通道电流的作用。

针灸治疗浆细胞性乳腺炎的疗效观察及对JAK2/STAT3信号通路关键蛋白的影响

目的观察针灸治疗浆细胞性乳腺炎的临床疗效及对非受体型酪氨酸蛋白激酶2(Janus kinase 2,JAK2)/信号转导及转录激活蛋白3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)信号通路关键蛋白的影响。方法将96例浆细胞性乳腺炎患者随机分为观察组和对照组,每组48例。对照组予甲泼尼龙,观察组在对照组基础上予针刺和艾灸治疗。比较两组临床疗效、复发情况及不良反应发生情况,观察两组治疗前后乳房症状(乳房肿块直径、乳房肿块范围、乳房疼痛和乳房皮肤)评分,血清炎性因子[肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)、白介素-8(interleukin-8,IL-8)和C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)]、血清免疫指标[免疫球蛋白G(immunoglobulin G,IgG)、免疫球蛋白M(immunoglobulin M,IgM)、补体C3和C4]以及乳房组织液中JAK2/STAT3信号通路关键蛋白[JAK2、磷酸化JAK2(phospho-JAK2,p-JAK2)和STAT3、磷酸化STAT3(phospho-STAT3,p-STAT3)]的水平。结果观察组总有效率为97.9%,高于对照组的75.6%(P<0.05);治疗后3个月随访时,观察组复发率2.2%,低于对照组的26.5%(P<0.05)。治疗后,观察组乳房肿块直径、乳房肿块范围、乳房疼痛和乳房皮肤评分均低于对照组(P<0.05),观察组TNF-α、IL-6、IL-8、CRP、IgG、IgM、补体C3、补体C4、JAK2、p-JAK2、STAT3和p-STAT3水平均低于对照组(P<0.05)。对照组不良反应发生率为31.1%,高于观察组的23.4%(P<0.05)。结论针灸联合甲泼尼龙治疗浆细胞性乳腺炎的临床疗效优于单纯甲泼尼龙治疗,可更好地缓解乳房肿块、疼痛等症状,降低复发,其作用机制可能与调节JAK2/STAT3信号通路关键蛋白有关。

肺癌组织PTPN6、PAX8表达水平及其与患者预后的关系

目的:探讨蛋白质酪氨酸磷酸酶非受体型6(PTPN6)、配对盒基因8抗体(PAX8)在肺癌组织中表达水平及其与患者预后的关系。方法:选取本院2019年1月至2021年1月收治的86例肺癌患者,在术中收集癌组织和癌旁组织。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测组织中PTPN6、PAX8的mRNA表达,采用免疫组化法检测组织中PTPN6、PAX8的蛋白表达。结果:PTPN6 mRNA在肺癌组织中的表达低于癌旁组织(P<0.05);PAX8 mRNA在肺癌组织中的表达高于癌旁组织(P<0.05);肺癌组织中PTPN6蛋白阳性表达的患者3年生存率高于阴性表达者(P<0.05);PAX8蛋白阳性表达的患者3年生存率低于阴性表达者(P<0.05);淋巴结转移、肿瘤直径>3.0 cm、低分化、TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期、PTPN6阴性表达、PAX8阳性表达为影响肺癌患者预后的危险因素(P<0.05)。结论:肺癌组织PTPN6表达水平下降,PAX8表达水平上升,可作为评估患者预后的指标。

非小细胞肺癌中EPHB6基因突变的筛选和功能预测

目的筛查非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中EPHB6的体突变位点,并对突变的功能进行预测。方法提取80例NSCLC患者肿瘤标本和3种NSCLC细胞系的基因组DNA,对EPHB6基因的整个编码区测序,所得结果与Genebank数据库比对,筛查得到EPHB6的突变位点。采用SIFT与Polyphen-2软件对目前所有已知的EPHB6体突变位点进行生物信息学预测。结果在80例NSCLC患者标本中发现3种新的EPHB6体突变位点(3例),即R52C、Q498H和915-917del各1例,突变发生率为3.8%。生物信息学预测结果为包括R52C在内的多种EPHB6突变可能损害EPHB6的功能。结论 NSCLC中频发EPHB6突变,这可能与肿瘤的发生与发展密切相关,但需要进一步的功能性研究来证实。

EPHB6的缺失突变del915-917促进非小细胞肺癌细胞的迁移

目的明确非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中EPHB6的缺失突变del915-917的功能性作用。方法定点突变EPHB6的表达载体pc DNA4-EPHB6-wt获得突变载体pc DNA4-EPHB6-mut,进而转染肺腺癌细胞A549,检测细胞的迁移、划痕愈合、细胞增殖活性和细胞大小。结果 EPHB6的缺失突变del915-917增强NSCLC细胞体外迁移,加速划痕愈合。不改变细胞的增殖活性,但明显使细胞变小。结论 EPHB6的缺失突变del915-917通过改变细胞大小而增强NSCLC细胞的迁移能力。

白细胞介素-6和JAK2/STAT3信号通路在急性肺损伤中的作用

急性肺损伤(acute lung injury,ALI)是一种引起肺内皮和上皮屏障破坏的急性炎症疾病,临床表现为肺浸润、低氧血症和肺水肿,现在被重新归类为中度或轻度急性呼吸窘迫综合征(ARDS)。ALI是常见的呼吸系统疾病,更是重症患者发病和死亡的重要原因,在全球范围内病死率居高不下,其发病机制尚未完全阐明。但越来越多证据集中在炎症激活、细胞凋亡、氧化应激损伤、凝血功能异常等方面。非受体型酪氨酸蛋白激酶2(JAK2)/信号转导及转录激活蛋白3(STAT3)信号通路在调控细胞凋亡、增殖、分化和炎症反应中起重要作用。炎症细胞因子白细胞介素(IL)-6可激活JAK2/STAT3通路,介导炎症因子的进一步释放,引发级联放大的炎症反应参与ALI发生、发展等多个环节,被认为是ALI发展过程中的关键信号通路之一。本文以IL-6、JAK2/STAT3信号通路为对象,阐明其介导的信号通路在ALI发展中的作用及研究进展。

食管鳞癌中PTK6的表达水平及其临床预后价值

目的探讨食管鳞癌中酪氨酸蛋白激酶非受体型6号蛋白(protein tyrosine kinase 6,PTK6)表达水平与其临床病理学因素、预后之间的关系。方法运用免疫组织化学方法检测210例食管鳞癌及配对的160例癌旁正常食管黏膜组织石蜡切片中PTK6蛋白表达水平。结果食管鳞癌与癌旁正常食管黏膜间PTK6表达水平存在统计学差异(P<0.001)。PTK6表达水平与食管鳞癌临床病理分级密切关联(P<0.001)。对比肿瘤中PTK6低表达组,PTK6高表达组有更好的临床预后。经Cox风险回归模型分析显示N分期及PTK6蛋白表达水平均是影响食管鳞癌患者预后的独立风险因素。结论 PTK6作为1种独立的预后影响因素,对于预测食管鳞癌根治术后患者临床预后有重要意义。

非小细胞肺癌患者血浆 RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK、PTPRO 基因甲基化状态观察

目的观察非小细胞肺癌(NSCLC)患者血浆抑癌基因runt相关转录因子3(RUNX3)、ras相关结构域家族基因1A(RASSF1A)、3-0-硫基转移酶-2(3-OST-2)、死亡相关蛋白激酶(DAPK)、膜结合受体型蛋白酪氨酸磷酸酶O(PTPRO)等基因启动子区域的甲基化状态。方法采用甲基化特异PCR技术对63例NSCLC患者血浆中RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK、PTPRO基因是否甲基化进行观察,并以25例健康人作对照。结果 NSCLC患者血浆中甲基化RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK、PTPRO基因检出率分别为46.0%、50.8%、26.9%、34.9%、41.3%;健康人血浆中甲基化PTPRO基因检出率为12.0%,而甲基化RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK均未检出;两者甲基化RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK、PTPRO基因检出率相比,P均<0.05。NSCLC患者血浆中上述5种甲基化基因联合检测的敏感度为88.9%、特异度为88.0%。血浆甲基化RUNX3基因检出率与NSCLC的病理类型、临床分期以及分化程度有关(P均<0.05);甲基化RASSF1A基因检出率与NSCLC的分化程度有关(P<0.05)。结论 NSCLC患者血浆中甲基化RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK、PTPRO基因检出率明显高于健康人。联合检测血浆中甲基化RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK、PTPRO基因有可能会有助于NSCLC的早期诊断及其生物学行为的判断。

负显突变体细胞因子信号转导抑制物-1增强干扰素-γ体外抗柯萨奇病毒活性

目的病毒性心肌炎(VM)细胞模型JAK/STAT1信号通路的特异性内源抑制物细胞因子信号转导抑制物-1(SOCS1)及其负显突变体SOCS1(dnSOCS1)对IFN-γ抗CVB3活性影响。方法构建pEGFP-C1-SOCS1及pEGFP-C1-dnSOCS1的真核表达载体,以脂质体法转染至心肌细胞后,加用IFN-γ刺激细胞并感染病毒,采用荧光显微镜检测心肌细胞中SOCS1和dnSOCS1表达,同时利用Westernblot法测定不同条件下STAT1表达水平并测定病毒滴度。结果与转染dnSOCS1组比较,转染SOCS1组病毒滴度高,而心肌细胞存活率低,心肌细胞搏动时间短。另外在dnSOCS1组磷酸化STAT1的表达更明显。结论dnSOCS1可增强IFN-γ体外抗病毒活性。SOCS1可为我们治疗VM提供一个新的治疗靶点。

PTPN6基因对人食管鳞状细胞癌Eca109和Yes-2细胞恶性生物学行为的影响

目的:探讨非受体型蛋白酪氨酸磷酸酶6(non-receptor protein tyrosine phosphatase 6,PTPN6)基因在不同食管鳞状细胞癌细胞株中的表达及其对Eca109、Yes-2细胞恶性生物学行为的影响。方法:应用qPCR法检测不同食管鳞癌细胞株(TE1、Eca109、Kyse150、Kyse170、Yes-2)中PTPN6 m RNA的表达水平,以pcDNA3.1-PTPN6质粒分别瞬时转染食管鳞癌细胞株Eca109和Yes-2,应用qPCR和Wb法检测PTPN6 m RNA和蛋白的表达水平,并应用MTS、克隆形成实验、划痕实验和Transwell法检测过表达PTPN6基因对食管鳞癌细胞恶性生物学行为的影响。结果:PTPN6基因在5种食管鳞癌细胞侏中表达均明显下调(均P<0.05)。与转染空载体的对照组相比,经pcDNA3.1-PTPN6转染后,Eca109和Yes-2细胞均高水平表达PTPN6(P<0.05或P<0.01);过表达PTPN6基因后,Eca109和Yes-2细胞的增殖、迁移和侵袭能力均明显被抑制(均P<0.05)。结论:PTPN6基因高表达能抑制食管鳞癌细胞的增殖、迁移和侵袭,其可能是影响食管鳞癌细胞生物学特性的一个重要因素。

基于IL-6/JAK2/STAT3通路探讨加味三物白散对胃癌裸鼠移植瘤上皮间质转化的抑制作用

目的:研究加味三物白散对胃癌裸鼠移植瘤上皮间质转化(EMT)的抑制作用及与白细胞介素-6(IL-6)/非受体型酪氨酸蛋白激酶2(JAK2)/信号转导及转录激活蛋白3(STAT3)通路的关系。方法:40只裸鼠随机分成模型组、加味三物白散组、阳性药物组、联合组,每组10只。造模、灌胃干预后,ELISA检测裸鼠血清IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、CEA、CA199含量,HE染色观察瘤组织病理改变,RT-PCR及Western Blot检测EMT及IL-6/JAK2/STAT3通路相关mRNA、蛋白表达情况。结果:与模型组比较,各给药组第12—18天瘤体体积显著缩小(P<0.05),镜下肿瘤细胞有坏死区,血清中IL-6、TNF-α、CEA、CA199含量显著降低(P<0.05),瘤组织中JAK2、STAT3、N-cadherin、Vimentin mRNA及STAT3、N-cadherin、Vimentin蛋白表达显著降低(P<0.01,P<0.05),E-cadherin mRNA及蛋白表达显著增加(P<0.01,P<0.05);且联合组各m RNA表达效果优于两单给药组(P<0.05)。结论:加味三物白散可通过调控IL-6/JAK2/STAT3信号通路抑制胃癌裸鼠移植瘤EMT,效果以联合用药为优。

信号转导和转录激活因子3与基质金属蛋白酶9在肠屏障功能障碍小鼠肠组织的表达及其关系

目的探讨信号转导和转录激活因子3(STAT3)与基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在脂多糖诱导炎症性损伤致肠屏障功能障碍中的作用及其关系。方法 32只8~9周龄雄性BALB/c小鼠随机数字表法分为Stattic 7 d组、Stattic 14 d组、假手术组(Sham组)和空白对照组(NC组), 每组8只。Stattic 7 d组和Stattic 14 d组分别给予Stattic 15 mg/(kg·d)腹腔注射7 d和14 d, Sham组给予同等容量生理盐水腹腔注射14 d;NC组不做预处理。预处理后4组小鼠单次腹腔注射脂多糖(LPS), 12 h后观察存活情况并取材, 比较各组小鼠血清中白细胞介素-6(IL-6)及二胺氧化酶(DAO)水平、小肠Chiu’s评分、肠组织STAT3、磷酸化STAT3(p-STAT3)、MMP-9及闭合蛋白Occludin表达情况。组间比较采用χ^(2)/F检验。结果 Sham组和NC组血清DAO高于Stattic 7 d组和Stattic 14 d组[(125.71±31.10)、(125.91±40.54)、(62.86±14.79)、(58.95±22.35) ng/ml, F=18.329, P<0.01], 差异有统计学意义;Sham组和NC组Chiu’s评分高于Stattic 7 d组和Stattic 14 d组[(2.54±0.53)、(2.24±0.38)、(1.10±0.38)、(0.89±0.30)分, F=32.303, P<0.01], 差异有统计学意义;p-STAT3、MMP-9, Sham组和NC组免疫组织化学阳性面积高于Stattic 7 d组和Stattic 14 d组[(10.34±2.55)、(18.60±2.61);(17.34±2.86)、(19.84±3.50);(9.48±2.64)、(8.53±4.04);(10.34±2.55)、(9.71±3.37)%, F=29.025、23.656, P<0.01], 差异有统计学意义;p-STAT3、MMP-9, Sham组和NC组蛋白相对表达量高于Stattic 7 d组和Stattic 14 d组(0.35±0.06、0.74±0.13;0.32±0.07、0.73±0.11;0.19±0.02、0.36±0.11;0.20±0.04、0.40±0.09), 差异有统计学意义(F=21.852、27.125, P<0.01), Stattic 7 d组和Stattic 14 d组Occludin高于Sham组和NC组(0.39±0.09、0.46±0.10、0.21±0.06、0.21±0.16, F=23.504, P<0.01), 差异有统计学意义。结论 IL-6/JAK2/STAT3通路参与肠黏膜中MMP-9的表达调控, 并影响肠屏障功能。

麦粒灸对溃疡性结肠炎模型小鼠结肠组织JAK2/STAT3信号通路的影响

目的观察麦粒灸“中脘”“天枢”“上巨虚”穴对溃疡性结肠炎(UC)小鼠结肠组织的影响并探讨其可能作用机制。方法40只C57BL/6雄性小鼠随机分为空白组、模型组、麦粒灸组、美沙拉嗪组,每组10只。除空白组外,其余各组小鼠采用自由饮用3%葡聚糖硫酸钠盐溶液法制备UC小鼠模型。造模成功后麦粒灸组小鼠予麦粒灸“中脘”“天枢”“上巨虚”干预,每穴3壮,每壮时间约为30 s;美沙拉嗪组给予300 mg/kg美沙拉嗪肠溶片溶液灌胃;空白组、模型组仅抓取固定,不予任何干预。各组干预均每日1次,连续7天。观察各组小鼠一般情况并对小鼠疾病活动指数(DAI)进行评分;检测结肠长度、肠重指数及结肠黏膜损伤评分;ELISA法检测血清细胞间黏附分子1(ICAM-1)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量;HE染色法观察结肠组织病理学变化;实时荧光定量PCR法和免疫组化法分别检测小鼠结肠组织中非受体型酪氨酸蛋白激酶2(JAK2)、信号转导及转录激活蛋白3(STAT3)、细胞因子信号转导抑制因子3(SOCS3)mRNA及阳性表达;免疫荧光双标染色法检测小鼠结肠组织JAK2、SOCS3平均荧光强度表达。结果与空白组比较,模型组小鼠肛周不洁、大便不成形,结肠黏膜形态破坏;体质量降低,结肠长度缩短,DAI评分、肠重指数、结肠黏膜损伤及组织病理评分、血清ICAM-1、IL-6、TNF-α含量增加,结肠组织JAK2、STAT3 mRNA及蛋白表达升高,JAK2平均荧光强度表达升高,SOCS3 mRNA、蛋白及平均荧光强度表达降低(P<0.01)。与模型组比较,麦粒灸组、美沙拉嗪组小鼠肛周得到改善,结肠黏膜形态较为完整;体质量、结肠长度增加,DAI评分、肠重指数、结肠黏膜损伤及组织病理评分、血清ICAM-1、IL-6、TNF-α含量减少,结肠组织JAK2、STAT3 mRNA及蛋白表达降低,JAK2平均荧光强度表达降低,SOCS3mRNA、蛋白及平均荧光强度表达升高(P<0.05或P<0.01)。麦粒灸组与美沙拉嗪组各指标比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论麦粒灸“中脘”“天枢”“上巨虚”能够改善UC模型小鼠结肠黏膜的损伤,其机制可能与SOCS3调控JAK2/STAT3信号通路相关。

基于JAK2/STAT3信号通路探讨芪苓白头翁汤对弥漫大B细胞淋巴瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨芪苓白头翁汤对弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)细胞增殖、凋亡、非受体型酪氨酸蛋白激酶2/信号转导及转录激活因子3(JAK2/STAT3)信号通路及炎症因子白细胞介素^(-1)0(IL^(-1)0)的影响。方法:以人DLBCL细胞OCI-LY10、U2932细胞为研究对象,细胞增殖与活性检测法(CCK-8)检测细胞增殖情况,并计算出0、4.6、9.3、18.7、37.5、75、150 mg·L^(-1)芪苓白头翁汤处理OCI-LY10、U2932细胞24 h后的半抑制浓度(IC_(50))分别为9.33、16.13 mg·L^(-1)。后续相关实验根据芪苓白头翁汤作用于OCI-LY10、U2932细胞24 h半抑制浓度(IC_(50)),选用芪苓白头翁汤9.5、19、38 mg·L^(-1)开展实验。用胱天蛋白酶(Caspase)-3、Caspase-8、Caspase-9酶原活化检测试剂盒检测经0、9.5、19、38 mg·L^(-1)芪苓白头翁汤处理OCI-LY10、U2932细胞24 h后OCI-LY10、U2932细胞中Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9的酶原活化情况。酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测经0、9.5、19、38 mg·L^(-1)芪苓白头翁汤处理OCI-LY10、U2932细胞24 h后OCI-LY10、U2932细胞中IL^(-1)0炎症因子表达情况。流式细胞仪检测不同浓度芪苓白头翁汤作用OCI-LY10、U2932细胞24 h后细胞凋亡率及细胞周期。蛋白免疫印迹法(Western blot)检测0、9.5、19、38 mg·L^(-1)芪苓白头翁汤作用OCI-LY10、U2932细胞24 h,OCI-LY10、U2932细胞中B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活化的聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(cleaved PARP)、活化的Caspase-3(cleaved Caspase-3)凋亡蛋白表达情况及JAK2、STAT3、磷酸化(p)-JAK2、p-STAT3通路蛋白表达情况,不同浓度药物作用OCI-LY10、U2932细胞24 h,OCI-LY10、U2932细胞中癌基因(c-Myc)蛋白表达情况。结果:芪苓白头翁汤作用于OCI-LY10、U2932细胞24 h,与空白组比较,芪苓白头翁汤各组细胞增殖均受到明显抑制(P<0.05,P<0.01);9.5、19、38 mg·L^(-1)芪苓白头翁汤组Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9酶原显著活化(P<0.01),细胞凋亡增加(P<0.05,P<0.01),细胞于DNA合成前期(G1)阻滞增加(P<0.05,P<0.01);9.5、19、38 mg·L^(-1)芪苓白头翁汤组OCI-LY10、U2932细胞中Bcl-2、p-JAK2、p-STAT3蛋白表达显著降低(P<0.01),Bax、cleaved PARP、cleaved Caspase-3蛋白表达显著增加(P<0.01),JAK2、STAT3蛋白表达未见明显改变。与空白组比较,19 mg·L^(-1)芪苓白头翁汤组、19 mg·L^(-1)芪苓白头翁汤+10μg·L^(-1)IL^(-1)0组c-Myc、p-JAK2、p-STAT3蛋白表达水平下降(P<0.05,P<0.01),10μg·L^(-1)IL^(-1)0组c-Myc、p-JAK2、p-STAT3蛋白表达明显增加(P<0.05,P<0.01),通路蛋白JAK2、STAT3蛋白表达未见明显改变。结论:芪苓白头翁汤可以抑制人DLBCL细胞OCI-LY10、U2932细胞的增殖并促进其凋亡,其作用机制可能与芪苓白头翁汤调控JAK2/STAT3信号通路有关。

广西巴马小型猪JAK2基因外显子14克隆及SNP位点分析

【目的】克隆广西巴马小型猪非受体型酪氨酸蛋白激酶(JAK2)基因外显子14并进行SNP位点分析,为探讨广西巴马小型猪JAK2基因多态性与有关临床疾病治疗奠定基础。【方法】参照GenBank已发表的猪JAK2基因编码序列设计引物,克隆出猪JAK2基因外显子14,经测序鉴定后,利用PCR-SSCP技术对其进行SNP位点分析。【结果】PCR扩增获得的巴马小型猪JAK2基因外显子14序列为205bp,与猪的同源性为100.0%,与人类的同源性为94.2%;猪和人类在JAK2基因外显子14序列中有6个位点不同;PCR-SSCP分析结果表明,JAK2基因外显子14不存在多态性。【结论】广西巴马小型猪JAK2基因外显子14不存在多态性,其基因纯合度高,是进行育种研究和医学试验的理想实验动物模型。

基于miRNA-146a/JAK/STAT/SOCS-3信号通路探讨安肠汤对溃疡性结肠炎大鼠炎症免疫的影响

目的:研究安肠汤低、中、高剂量对SD大鼠溃疡性结肠炎的抗炎作用,通过研究不同给药剂量对miRNA-146a/非受体型酪氨酸蛋白激酶(JAK)/信号传导与转录激活因子(STAT)/细胞因子信号传导抑制蛋白-3(SOCS-3)信号通路及其下游蛋白的影响探讨安肠汤防治溃疡性结肠炎的可能机制。方法:实验大鼠分为正常组,模型组,美沙拉嗪组(1 g·kg^(-1)),安肠汤低、中、高剂量组(6,12,24 g·kg^(-1)),每组10只。除正常组外,其余各组均采用2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇灌肠法建立溃疡性结肠炎大鼠模型,分别给药14 d。观察大鼠神态、大便性状、毛发等一般情况的变化,并参照疾病活动指数(DAI)表进行评分,苏木素-伊红(HE)染色观察各组大鼠结肠组织病理改变,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测大鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-10(IL-10),IL-17,IL-1β,IL-6水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测结肠组织中JAK2,磷酸化STAT3(p-STAT3),STAT3,SOCS-3蛋白表达的变化,通过实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)测定大鼠结肠组织中JAK2,p-STAT3,STAT3,SOCS-3 mRNA以及血浆miRNA-146a的表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠JAK2,p-STAT3,STAT3蛋白表达及JAK2,p-STAT3,STAT3 mRNA表达明显增高(P<0.05),模型组大鼠miRNA-146a,SOCS-3 mRNA以及SOCS-3蛋白表达明显降低(P<0.05);与模型组比较,给药组大鼠精神状态,进食量,毛色等情况均明显改善,DAI评分明显降低(P<0.05),给药组大鼠结肠溃疡组织明显改善,给药组大鼠结肠组织JAK2,p-STAT3,STAT3蛋白表达及JAK2,p-STAT3,STAT3 mRNA表达明显降低(P<0.05),给药组大鼠miRNA-146a,SOCS-3 mRNA以及SOCS-3蛋白表达明显增高(P<0.05)。结论:安肠汤可能通过影响miRNA-146a/JAK/STAT/SOCS-3信号转导通路相关基因及蛋白表达,抑制溃疡性结肠炎病情的发展。

丹参多酚酸对抑郁症大鼠模型的治疗效果及机制研究

目的 基于非受体型酪氨酸蛋白激酶2/信号转导与转录激活因子3(JAK2/STAT3)信号通路探究丹参多酚酸对抑郁症模型大鼠海马神经元细胞及单胺类神经递质的影响。方法 将SD大鼠随机分为对照组、模型组、丹参多酚酸低剂量组(20 mg·kg^(-1))、丹参多酚酸高剂量组(40 mg·kg^(-1))、JAK2抑制药组(pacritinib, 10 mg·kg^(-1)),每组8只。除对照组外,其他各组采用慢性温和应激法建立抑郁症模型,再按剂量腹腔注射给药。用免疫组化法检测海马胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和成纤维细胞生长因子(FGF)表达,用酶联免疫吸附法检测海马组织白细胞介素(IL)-6、IL-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、5-羟色胺(5-HT)、多巴胺(DA)和去甲肾上腺素(NE)水平,用蛋白质印迹法检测海马组织JAK2/STAT3信号通路相关蛋白表达。结果 对照组、模型组、丹参多酚酸低、高剂量组、pacritinib组海马组织GFAP表达分别为35.68±3.28、8.32±2.25、12.36±3.54、16.52±3.13和20.57±4.12;FGF表达分别为48.55±5.22、9.24±1.07、11.29±2.28、19.46±3.83和23.49±4.65;IL-6含量分别为(12.48±2.24)、(39.35±4.32)、(36.68±6.47)、(24.17±5.81)和(21.60±5.29)ng·mL^(-1);IL-1β含量分别为(17.42±3.14)、(52.78±6.82)、(48.63±5.71)、(33.25±6.34)和(29.92±4.65)ng·mL^(-1);TNF-α含量分别为(24.67±3.51)、(65.81±9.47)、(61.25±7.38)、(41.72±5.63)和(37.79±5.46)ng·mL^(-1);5-HT含量分别为(28.75±2.54)、(19.16±3.61)、(21.72±2.98)、(24.91±3.23)和(26.37±3.74)ng·mL^(-1);DA含量分别为(269.78±22.34)、(205.41±17.66)、(212.36±19.42)和(245.52±26.73)、(251.75±29.95)ng·mL^(-1);NE含量分别为(32.47±2.36)、(22.68±3.14),(25.13±3.50)、(27.89±3.27)和(28.95±2.57)ng·mL^(-1);p-JAK2/JAK2分别为0.92±0.09、1.44±0.12、1.38±0.13、1.13±0.11和1.08±0.15;p-STAT3/STAT3分别为0.94±0.07、1.62±0.18、1.57±0.20、1.11±0.15和1.04±0.12。上述指标,对照组与模型组比较,模型组与丹参多酚酸高剂量组、pacritinib组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 丹参多酚酸能有效改善大鼠抑郁样行为,可能通过抑制JAK2/STAT3信号通路,减轻神经炎症,调节单胺类神经递质水平,改善星形胶质细胞功能途径实现。

基于JAK2/STAT3信号通路探讨白头翁皂苷A对Burkitt淋巴瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨白头翁皂苷A对人伯基特淋巴瘤(BL)细胞Raji细胞增殖、凋亡及相关通路蛋白表达的影响。方法:以人BL细胞Raji细胞为研究对象,细胞增殖与活性检测(CCK-8)法检测细胞增殖情况,并计算出24、48、72 h的半数抑制浓度(IC_(50))分别为19.77、18.31、16.70μmol·L^(-1)。后续相关实验根据白头翁皂苷A作用Raji细胞72 h IC_(50),选用白头翁皂苷A 8、16、32μmol·L^(-1)开展实验。用0、8、16、32μmol·L^(-1)白头翁皂苷A作用于Raji细胞24、48、72 h,CCK-8法检测细胞生长曲线吸光度A。检测经0、8、16、32μmol·L^(-1)白头翁皂苷A处理Raji细胞24 h后Raji细胞中胱天蛋白酶(Caspase)-3、Caspase-8、Caspase-9的酶原活性。流式细胞仪检测不同浓度白头翁皂苷A作用Raji细胞24 h后细胞凋亡率及细胞周期。蛋白免疫印迹法(Western blot)检测0、8、16、32μmol·L^(-1)白头翁皂苷A作用Raji细胞24 h,Raji细胞中B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白(Bax)、活化的聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(cleaved PARP)、活化的Caspase-3(cleaved Caspase-3)凋亡蛋白表达情况,检测非受体型酪氨酸蛋白激酶2(JAK2)、信号转导及转录激活因子3(STAT3)、磷酸化(p)-JAK2、p-STAT3通路蛋白表达情况。结果:与空白组比较,8、16、32μmol·L^(-1)白头翁皂苷A组细胞增殖受到抑制,8、16、32μmol·L^(-1)白头翁皂苷A组Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9酶原显著活化(P<0.01),细胞凋亡明显增加(P<0.05,P<0.01),细胞于有丝分裂准备期(G2)期阻滞明显增加(P<0.05,P<0.01)。与空白组比较,8、16、32μmol·L^(-1)白头翁皂苷A组Raji细胞中Bcl-2蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01),Bax、cleaved PARP、cleaved Caspase-3蛋白表达显著增加(P<0.01),JAK2、STAT3蛋白表达未见明显改变,p-JAK2、p-STAT3蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论:白头翁皂苷A可以抑制人BL细胞Raji细胞的增殖并促进其凋亡,其作用机制可能与白头翁皂苷A调控JAK2/STAT3信号通路有关。

麦芽总生物碱对产后缺乳大鼠乳汁分泌的影响及机制研究

目的:探究不同剂量麦芽总生物碱(total barley maiya alkaloids,TBMA)对产后缺乳大鼠乳汁分泌的影响及机制。方法:产后24 h内SD大鼠随机分为对照组、模型组、胃复安组、7.5 g组(成人日服7.5 g生麦芽所含TBMA,下同)、15 g组、30 g组、60 g组,灌胃溴隐亭建立产后缺乳大鼠模型,各组灌胃相应药物,持续12 d。观察母鼠泌乳量、仔鼠12 d窝重净增量;用HE染色观察各母鼠乳腺组织病理变化;ELISA测定各组大鼠血清泌乳素(prolactin,PRL)、雌二醇(sstradiol2,E2)、孕酮(progesterone,P)水平;Western Blot检测母乳腺组织PRL、泌乳素受体(prolactin receptor,PRLR)、β-酪蛋白(β-casein)蛋白表达;免疫组化检测母鼠乳腺组织PRLR、非受体型酪氨酸蛋白激酶2(janus kinase 2,JAK2)、信号传导及转录激活蛋白5(signal transducer and activator of transcription 5,Stat5)蛋白表达。结果:15 g组母鼠泌乳量和仔鼠12 d窝重净增量显著升高(P<0.05、P<0.01),大鼠乳腺小叶明显扩张、乳汁充盈,血清PRL、E2、P水平均显著升高(P<0.05、P<0.01),乳腺组织中PRL、β-casein、PRLR蛋白表达明显升高(P<0.05),JAK2、Stat5蛋白表达升高;而7.5,30,60 g组均无上述作用。结论:15 g生麦芽所含TBMA能有效促进泌乳,其作用机制可能与由PRLR介导的JAK2/Stat5信号通路有关。