L-精氨酸和α-酮戊二酸对热应激肉鸡肝脏功能的影响

试验旨在研究L-精氨酸(Arg)和α-酮戊二酸(AKG)对热应激肉鸡肝脏功能的影响。选用200只1日龄科宝肉鸡,随机分为4个处理组:对照组(基础日粮)、热应激组(基础日粮)、Arg组(基础日粮+0.5%Arg)、AKG组(基础日粮+0.5%AKG),每组5个重复,每个重复10只鸡。试验期5周。结果表明:1与对照组相比,热应激处理降低了肉鸡肝脏相对重量、血液三碘甲状腺原氨酸(T3)和四碘甲状腺原氨酸(T4)含量、肝脏三磷酸腺苷(ATP)、腺苷酸池(TAN)含量及能荷(EC)值(P<0.05),同时也降低了肝脏过氧化物酶体增殖活化受体γ辅助活化因子1α(PGC-1α)、血红素加氧酶-1(HMOX-1)和黄嘌呤氧化还原酶(XOR)的m RNA水平(P<0.05),但提高了血液肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)活性、皮质酮含量、肝脏丙二醛(MDA)和过氧化氢(H2O2)含量(P<0.05);2与热应激组相比,日粮中添加0.5%Arg可提高热应激肉鸡血液T3和T4含量、肝脏ATP含量、肝脏PGC-1α、HMOX-1和XOR的m RNA水平(P<0.05),但降低了血液CK活性、皮质酮含量、肝脏H2O2含量及低氧诱导因子1α(HIF-1α)的m RNA水平(P<0.05);3与热应激组相比,日粮中添加0.5%的AKG可提高血液T3含量,肝脏相对重量、二磷酸腺苷(ADP)和TAN含量及EC值(P<0.05),但降低了血液皮质酮含量、肝脏H2O2含量、一磷酸腺苷(AMP)依赖的蛋白激酶α1(AMPK-α1)和PGC-1α的m RNA水平(P<0.05)。因此,日粮中添加0.5%Arg可改善热应激肉鸡肝脏能量代谢状况和抗氧化能力,提高肉鸡抗热应激能力,而0.5%AKG能改善热应激肉鸡肝脏的能量代谢状况和提高肝脏相对重量。

2-茚酮基姜黄素类似物对酪氨酸酶的抑制作用

酪氨酸酶抑制剂可作为食品添加剂用作果蔬保鲜和防腐,芳香醛在适宜的条件下与2-茚酮进行缩合反应,合成5种含2-茚酮基的对称姜黄素类似物(A1～A5)。利用紫外分光光度法测定其对酪氨酸酶的抑制作用。结果表明:合成的对称性姜黄素类似物均对酪氨酸酶有较强的抑制作用,其中A2～A4的半数抑制浓度(IC50)分别为25.42、13.51、10.71μmol/L,比广泛使用的食品添加剂曲酸(IC50为28.59μmol/L)的抑制作用强。

葡萄孢菌代谢产物α-吡喃酮酪氨酸酶抑制活性的研究

利用酪氨酸酶抑制活性追踪法对海洋真菌葡萄孢菌的代谢产物进行研究,分离得3个含有α-吡喃酮结构的化合物,并通过波谱方法进行了解析。通过测试α-吡喃酮不同衍生物对酪氨酸酶的活性抑制能力,初步确定了α-吡喃酮联接戊烷基时显示最强的酪氨酸酶活性抑制能力。

3-苯基-4-氨基-5-硫酮-1,2,4-三唑对牛蒡中酪氨酸酶的抑制作用

以3-苯基-4-氨基-5-硫酮-1,2,4-三唑(APTT)为效应物,通过SPSS设计正交试验,研究不同APTT浓度、时间以及温度对牛蒡酪氨酸酶提取液的护色效果的影响,并探讨pH值对抑制剂及反应体系作用效果的影响,数据用SPSS软件处理,在25℃条件下,牛蒡与APTT比为0.5:3(g/mL)时,500μmol/L抑制剂对底物作用420s为最佳抑制反应条件,其ΔA为0.0082:pH7.0时,抑制效果最佳。APTT对牛蒡中酪氨酸酶有良好的抑制作用。

5-(4-(2-甲氧二氧)苯烯)-2-硫代噻唑-4-酮对雪莲果中酪氨酸酶的抑制作用

通过分光光度法探究5-(4-(2-甲氧二氧)苯烯)-2-硫代噻唑-4-酮(MBTO)对雪莲果中酪氨酸酶的抑制作用。结果表明:MBTO对雪莲果中酪氨酸酶有良好的抑制作用。单因素试验最佳抑制剂浓度为30.0μmol/L、最佳作用时间为210s、最佳作用温度为30℃。通过三因素三水平正交试验,分析得最佳反应条件为:pH7.5、抑制剂MBTO浓度30.0μmol/L、作用时间330s、作用温度30℃,可达到最佳抑制效果,在此条件下MBTO对雪莲果中酪氨酸酶的抑制率达84.24%。

L-精氨酸和α-酮戊二酸对热应激肉鸡肠道吸收功能、抗氧化能力、能量代谢的影响

本试验旨在研究L-精氨酸（Arg）和α-酮戊二酸（AKG）对热应激肉鸡肠道功能的影响。选用200只1日龄Cobb肉鸡，随机分为4个处理组：对照组（基础日粮）、热应激组（基础日粮）、Argg（基础日粮＋0．5％Arg）、AKG组（基础日粮＋0．5％AKG），每个组5个重复，每个重复10只鸡。试验为期5周，第1周各组室温控制在32-34℃，第2～5周热应激组、Arg组和AKG组控制在（36±2）℃，而对照组第2周开始慢慢降至（22±2）℃，并从第3周开始维持在（22±2）℃，湿度为50％-60％。结果表明：与对照组相比，热应激处理降低了肉鸡生长性能和血液三碘甲腺原氨酸（T1）含量（P〈O．05），同时也显著降低了空肠和回肠脂肪酶、回肠胰蛋白酶、空肠过氧化氢酶（CAT）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH—Px）、回肠超氧化物歧化酶（SOD）和CAT的活力、十二指肠和回肠三磷酸腺苷（ATP）含量、空肠小肽转运载体（PepTl）、紧密连接蛋白（Claudin-5）mRNA表达量（P〈0．05），显著提高了死亡率、血液皮质酮、十二指肠和回肠丙二醛（MDA）含量、空肠低氧诱导因子-1α（HIF-1α）、AMP依赖的蛋白激酶d1（AMPK-α1）mRNA表达量（P〈O．05）；与热应激组相比，日粮中添加0．5％Arg可显著提高热应激肉鸡饲料转化率、十二指肠脂肪酶和回肠胰蛋白酶活力、十二指肠和空肠DNA含量、空肠CAT活力和HMOX—lmRNA表达量（P〈0．05），降低死亡率、十二指肠和空肠RNA／DNA比值、空肠TP／DNA比值、HIF-1α和AMPK—α1 mRNA表达量（P〈0．05），而日粮中添加0．5％AKG可显著提高热应激肉鸡血液L、十二指肠和空肠DNA含量、十二指肠CAT和GSH—Px的活力、十二指肠和空肠及回肠ATP含量（P〈0．05），并显著降低死亡率、血液皮质酮含量、空肠RNA／DNA及TP／DNA比值、十二指肠MDA和回肠过氧化氢（H202）含量（P〈0．05）。因此，日粮中添加0．5％Arg可提高热应激肉鸡肠道消化能力和抗氧化功能，而添加0．5％AKG可促进热应激肉鸡肠道黏膜细胞生长，提高肠道抗氧化能力，并改善肠道能量代谢状况。

α-酮戊二酸对金针菇菌丝生长及赖氨酸合成的影响

使用不同浓度的α-酮戊二酸处理金针菇(Flammulina filiformis)Dan3菌丝,结果显示低浓度α-酮戊二酸(1~5mmol/L)促进菌丝生长,高浓度α-酮戊二酸(10~20mmol/L)抑制其生长。金针菇赖氨酸合成途径中有3个基因(HCS、HIDH以及SDH)的表达模式呈α-酮戊二酸低浓度促进表达,而高浓度抑制表达;另有4个基因(HAH、AAR、AAT2和SDR)在添加α-酮戊二酸后表达量下降。金针菇菌丝中赖氨酸含量也显示出被低浓度α-酮戊二酸促进而被高浓度抑制的现象,2.5mmol/L是诱导赖氨酸合成的最佳浓度。

亮氨酸和α-酮戊二酸对小鼠体重、血清及脏器的影响

选取40只4周龄C57BL/6雄性小鼠,随机分为4组。对照组正常饮水,其他组小鼠分别在水瓶中加入1.0%的α-酮戊二酸(Ⅰ组)、1.8%的亮氨酸(Ⅱ组)、1.8%的亮氨酸和1.0%的α-酮戊二酸(Ⅲ组)。试验期为35d。结果表明:①Ⅲ组的体重比对照组、Ⅰ组和Ⅱ组分别降低了8.7%,10.1%,10.4%;②Ⅲ组的血清白蛋白含量比对照组、Ⅰ组和Ⅱ组显著提高(P<0.05);③Ⅲ组的心脏指数比对照组、Ⅰ组和Ⅱ组分别提高了19.3%,13.6%,15.2%;④Ⅲ组的腹部脂肪指数比对照组、Ⅰ组和Ⅱ组分别降低了24.1%,10.0%,6.7%,Ⅲ组的腓肠肌横截面积比对照组、Ⅰ组和Ⅱ组分别提高了46.9%,20.2%,27.9%。说明亮氨酸和α-酮戊二酸两者联合能减轻小鼠体重,加强器官对脂肪的利用,增加腓肠肌纤维横截面积。

4:1含血停搏液与组氨酸-色氨酸-酮戊二酸液在心脏瓣膜置换术中的应用效果

目的探讨4∶1含血停搏液与国产组氨酸-色氨酸-酮戊二酸(HTK)液在心脏瓣膜置换术中的应用效果。方法回顾性分析2018年2月至2020年12月于清远市人民医院行体外循环下心脏瓣膜置换术的64例患者的临床资料,根据体外循环主动脉阻断使用心肌保护液的不同将其分为H组和G组,每组各32例。H组患者采用单次灌注国产HTK液作为心肌保护液诱导心脏停搏,G组患者采用多次灌注4∶1含血停搏液。比较两组患者麻醉诱导后转机前(T_(1))、转机10 min(T_(2))、主动脉阻断灌注停跳液后10 min(T_(3))、体外循环开始复温5 min后(T_(4))、主动脉开放后10 min(T_(5))、停机后(T_(6))的血气指标、电解质浓度、平均动脉压(MAP)及围手术期指标。结果两组患者不同时刻的血气pH值比较,差异无统计学意义(P>0.05)。H组患者T_(3)、T_(4)、T_(5)时刻的|BE|值高于G组,差异有统计学意义(P<0.05);H组患者T_(3)时刻的Lac低于G组,T_(4)、T_(5)时刻的Lac高于G组,差异有统计学意义(P<0.05);H组患者T_(5)时刻的动脉血二氧化碳分压(PaCO_(2))高于G组,差异有统计学意义(P<0.05);H组患者T_(4)时刻的电解质K+浓度低于G组,差异有统计学意义(P<0.05);H组患者T_(3)、T_(4)时刻的HCT值低于G组,差异有统计学意义(P<0.05);H组患者T_(5)时刻的MAP低于G组,差异有统计学意义(P<0.05);H组患者T_(2)、T_(3)、T_(4)、T_(5)、T_(6)时刻的PaCO_(2)、HCT、MAP值低于本组T_(1)时刻,T_(4)、T_(5)、T_(6)时刻的Lac值高于本组T_(1)时刻,T_(3)、T_(4)、T_(5)、T_(6)时刻的K+浓度高于本组T_(1)时刻,差异有统计学意义(P<0.05);G组患者T_(2)、T_(3)、T_(4)、T_(5)、T_(6)时刻的PaCO_(2)、HCT值低于本组T_(1)时刻,T_(3)、T_(4)、T_(5)、T_(6)时刻的K+浓度高于本组T_(1)时刻,T_(2)、T_(3)、T_(5)、T_(6)时刻的MAP值低于本组T_(1)时刻,T_(4)、T_(5)、T_(6)时刻的Lac值高于本组T_(1)时刻,差异有统计学意义(P<0.05)。两组患者的手术时间、ICU停留时间及术后并发症发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05);H组患者的体外循环转流时间短于G组,停搏液用量低于G组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论体外循环下瓣膜置换术中使用4∶1含血停搏液与国产HTK液相比,对患者的内环境影响较小。

VEGFR-2酪氨酸激酶抑制剂3-取代吲哚-2-酮的合成及抑制活性

目的:合成一系列结构新颖的3-取代吲哚-2-酮类化合物,并测试其对血管内皮生长因子受体-2(VEGFR-2)的抑制活性。方法:以2-(羟甲基)-5-氰基-1H-吲哚为起始原料,经水解、氧化、缩合和胺化反应得到目标产物(6-14);以舒尼替尼为阳性对照,用MTT法测试目标产物对VEGFR-2高表达的人乳腺上皮细胞(HMEC)的抑制活性。结果:合成9个未见报道的目标产物,其结构均经1H NMS,ESI-MS确证;样品浓度为10μmol/L时,化合物14对VEGFR-2的抑制率为68.56%,舒尼替尼为62.53%。结论:化合物14对VEGFR-2的抑制活性优于阳性对照舒尼替尼。

琯溪蜜柚疏果黄酮酶法辅助提取工艺优化及其抑制酪氨酸酶活性

本论文旨在探讨β-葡萄糖苷酶法辅助提取琯溪蜜柚疏果黄酮的工艺及提取得到的黄酮对酪氨酸酶抑制作用。以总黄酮提取量为指标,采用单因素实验及响应面试验对β-葡萄糖苷酶酶活力、酶解pH、温度及时间进行优化,并研究总黄酮提取物对酪氨酸酶的抑制作用。结果表明,通过单因素实验和响应面试验优化得到琯溪蜜柚疏果黄酮提取的最优条件是:β-葡萄糖苷酶酶活力0.0128 U/mL、酶解pH4.4、酶解温度35℃、酶解时间4.8 h,在该工艺条件下疏果总黄酮提取量为34.0 mg/g;该黄酮提取物对酪氨酸酶的半抑制浓度(IC50)为0.31 mg/mL。本研究结果说明酶法工艺可显著提高琯溪蜜柚疏果黄酮的提取量,且琯溪蜜柚疏果黄酮具有较强的酪氨酸酶抑制作用,研究结果为琯溪蜜柚疏果黄酮提取及应用提供了参考依据,有利于促进琯溪蜜柚的高值化利用。

2,4-噻唑烷二酮衍生物抑制酪氨酸酶活性研究

以2,4-噻唑烷二酮和取代芳香醛为起始原料,反应得到一系列2,4-噻唑烷二酮衍生物,并对所合成化合物进行了抑制酪氨酸酶活性测试,结果表明化合物均有一定的抑制酪氨酸酶活性,化合物1((E)-5-(3-氯苯亚甲基)噻唑烷-2,4-二酮)和化合物2((E)-5-(2,4-二氯苯亚甲基)噻唑烷-2,4-二酮)活性强于阳性对照曲酸,其中化合物1表现出最好的抑制酪氨酸酶活性,其IC_(50)值为18. 43μmol/L。优选化合物1进行了抑制机理探讨,结果表明其为不可逆抑制剂,同时对化合物1进行了分子对接研究。

苯基噻吩-2-基甲酮类氯酚的合成及对蛋白酪氨酸激酶的抑制作用

目的设计合成新型苯基噻吩-2-基甲酮类氯酚,获得潜在蛋白酪氨酸激酶(protein tyrosine kinase,PTK)抑制剂。方法采用傅克酰基化及脱甲基反应,制备目标化合物,并采用酶联免疫吸附法考察其对PTK的抑制作用。结果合成了12个目标化合物,其中9个未见文献报道。化合物7c的PTK抑制活性最强,其IC 50值为2.39μmol/L,与先导化合物(5-溴呋喃-2-基)(3,4-二羟基苯基)甲酮(LFZ1)相当(IC 50=2.72μmol/L),高于阳性对照金雀异黄素(Genistein)(IC 50为13.6μmol/L)。结论设计合成了12个新型目标化合物,获得了潜在的PTK抑制剂7c。

强脉冲光及5-氨基酮戊酸对小鼠B16黑素瘤细胞的作用

目的研究强脉冲光(IPL)及5-氨基酮戊酸(5-ALA)对小鼠B16黑素瘤细胞的影响。方法以小鼠B16黑素瘤细胞为实验对象,分为阴性对照组(不加5-ALA,未辐射)、UVA阳性对照组(3、4、5 J/cm2UVA辐射)、5-ALA组(含5 mmol/L 5-ALA的细胞培养液孵育)、IPL组(20、30、40 J/cm2IPL辐射)及5-ALA+IPL组(含5mmol/L 5-ALA的细胞培养液孵育细胞4 h后予20、30、40 J/cm2IPL辐射)。辐射后1 d、2 d、3 d、4 d、5 d以噻唑蓝比色法(MTT)测定细胞增殖情况、NaOH溶解法测定黑素含量、氧化多巴反应法测定酪氨酸酶活性的变化。结果5 mmol/L 5-ALA不影响B16黑素瘤细胞增殖、细胞黑素含量及酪氨酸酶活性。3～4 J/cm2UVA可促进B16黑素瘤细胞增殖,5 J/cm2时细胞增殖受到抑制。3～5 J/cm2UVA可提高酪氨酸酶活性、促进黑素合成,其作用呈剂量依赖性。IPL及5-ALA+IPL可降低黑素含量,5-ALA+IPL的作用较IPL更明显。IPL及5-ALA+IPL对细胞增殖及酪氨酸酶活性无明显影响。结论UVA可提高酪氨酸酶活性,促进B16黑素瘤细胞的黑素合成。IPL及5-ALA+IPL可使B16黑素瘤细胞黑素合成减少,对细胞增殖、酪氨酸酶活性无影响。

由L-精氨酸发酵液制备结晶型精酮合剂

精酮合剂(L-精氨酸-α-酮戊二酸盐,AAKG)是目前国际市场上销量日益增长的一种氨基酸盐类功能制品,通常的产品形式是混合型而非结晶型。实验直接以L-精氨酸(L-Arg)发酵液为原料,通过加入α-酮戊二酸(α-KG)进行络合,制备出结晶型精酮合剂,其主要工艺步骤和控制参数如下:首先对发酵液进行絮凝和过滤,并减压浓缩至L-Arg浓度为1.0 mol/L,再等摩尔加入α-KG进行络合,进一步减压浓缩使AAKG浓度达到1.5mol/L;浓缩液以2℃/h的速率缓慢降温至10℃,恒温结晶24 h,获得粗晶体,并再在同样的条件下进行重结晶。其精酮合剂纯度为99.2%,分子中L-Arg∶α-KG的摩尔比为1∶1.02,产品总收率为62.9%。

斯里兰卡瓦拉沉香中2个新的5,6,7-三羟基-2-(2-苯乙基)-5,6,7,8-四氢色酮

为了解斯里兰卡来源瓦拉(Aquilaria walla)沉香中的化学成分,采用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱及半制备高效液相色谱法从其乙醇提取物中分离得到2个2-(2-苯乙基)色酮类化合物,通过质谱、核磁共振等现代波谱学方法分别鉴定为(5R,6S,7S)-5,6,7-三羟基-2-(2-苯乙基)-5,6,7,8-四氢色酮(1)和(5R,6S,7S)-5,6,7-三羟基-2-[2-(4-甲氧基)苯乙基]-5,6,7,8-四氢色酮(2),均为新化合物。化合物1和2对脂多糖诱导小鼠单核巨噬细胞RAW264.7产生NO无抑制作用,MTT法表明对5株人肿瘤细胞不具有体外生长抑制作用,200μg/m L的化合物2对酪氨酸酶具有弱抑制作用,抑制率为(21.67±1.67)%。

吐温-80对钝齿棒杆菌产L-赖氨酸的影响

对吐温-80提高L-赖氨酸产量的分子机制进行探究。以钝齿棒杆菌MT-M4Δpro B为出发菌株,在菌株生长至对数初期36 h时,添加5 mg/m L吐温-80进行摇瓶发酵,通过反转录实时荧光定量聚合酶链式反应(reverse translate?real-time?fluorescence?quantitative?polymerase?chain?reaction,RT-q PCR)监控相关基因的转录水平、胞内的还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate reduced form,NADPH)水平及α-酮戊二酸脱氢酶复合物(α-oxoglutarate dehydrogenase complex,ODHC)的活力。摇瓶发酵结果表明,添加吐温-80使L-赖氨酸产量提高了215%;RT-q PCR结果表明,编码ODHC的基因odh A、suc B和lpd A、参与ODHC调控的基因pkn G、dts R和ppp以及合成NADPH的磷酸戊糖途径基因zwf的转录水平均发生了变化,其中odh A、suc B、lpd A、pkn G及dts R1基因分别发生了上调,ppp基因下调,相应ODHC活力提高了32.9%;zwf基因上调了17.6倍,相应胞内NADPH水平提高了137%。因此,在对数生长初期36 h添加吐温-80具有双重功效,既提高了ODHC的表达又使NADPH积累,从而诱导L-赖氨酸的高产。

亚砷酸诱导肝癌Bel-7402细胞分化的研究

目的:探讨亚砷酸诱导肝癌Bel-7402细胞的分化作用。方法:通过体外细胞培养,观察肿瘤的生长特点;用Giemsa染色法观察细胞的分化形态特点,比色法测定酪氨酸-α-酮戊二酸转氨酶(TAT)活性的改变。结果:在亚砷酸(0 25、0 5、1 0mol/L)作用下,肝癌Bel-7402细胞连续培养4d,细胞生长抑制作用较明显,并呈剂量依赖关系(P<0 05);培养到第5d,细胞形态和结构向成熟阶段分化;在连续培养4d以后,酪氨酸-α-酮戊二酸转氨酶的比活性升高并呈时间依赖关系(P<0 05)。结论:亚砷酸具有明显的诱导肝癌Bel-7402细胞分化作用。