核酸免疫识别的机制和功能及酪氨酸磷酸化修饰调控

核酸天然免疫识别是一种普遍存在且高度保守的免疫应答机制,负责监测和响应病原体入侵或组织损伤,进而在宿主防御、自身免疫反应、细胞命运决定以及肿瘤发生发展中发挥关键作用。酪氨酸磷酸化作为一类主要的蛋白质翻译后修饰机制,在核酸识别通路中发挥重要调控功能。其中,介导核酸免疫识别通路的核心成员环鸟苷酸-腺苷酸合成酶(cGAS)、干扰素基因刺激因子(STING)以及TANK结合激酶1(TBK1)等蛋白均受到酪氨酸磷酸化修饰引发的活性调控,进而影响生理或病理条件下宿主的抗病毒防御和抗肿瘤免疫能力。本文综述了酪氨酸激酶和酪氨酸磷酸化修饰在核酸免疫识别中的调控作用及研究现状,讨论了靶向酪氨酸磷酸化在抗肿瘤免疫中的功能和潜在应用,以期为理解并拓展全新的抗肿瘤手段提供思路。

修复性牙本质形成过程中一氧化氮合成酶和硝化酪氨酸的表达

目的观察大白鼠磨牙窝洞制备后,修复性牙本质形成过程中诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)和硝化酪氨酸(NT)的表达。方法大白鼠磨牙窝洞制备后制作连续冰冻切片,免疫组织化学染色和免疫荧光双染色法观察成牙本质细胞等牙髓细胞中iNOS和NT的表达。结果正常大白鼠牙髓组织中,iNOS和NT呈阴性表达。窝洞制备1 d后,牙髓牙本质界处嗜中性粒细胞中iNOS和NT呈强阳性表达;窝洞制备3 d后,全部牙髓细胞中iNOS和NT呈强阳性表达。窝洞制备7 d后,修复性牙本质深部成牙本质细胞中iNOS和NT呈阴性表达。免疫荧光双染色法表明iNOS和NT的变化呈同步性。结论修复性牙本质形成过程中iNOS和NT的表达具有同步性,提示iNOS被激发并产生一氧化氮。

家兔酪氨酸合成酶基因5'端侧翼序列的克隆及序列分析

家兔的毛色具有多样性，主要有黑色、蓝色、红色、喜马拉雅色、海狸色、青紫蓝色、巧克力色等20余种，家兔毛色的多样性是育种者对毛色选种选育的基础。研究表明，哺乳动物的毛发、皮肤及眼睛的颜色主要是由黑色素的数量、性质与分布决定的。

氨基酰-tRNA合成酶与神经退行性疾病

氨基酰-tRNA合成酶催化tRNA的氨基酰化反应为生物体内的蛋白质合成提供原料.这类古老且保守的蛋白质分子在高等生物复杂的细胞分子网络中分化出的新功能是目前人们关注的焦点.近期在对一些患有神经退行性疾病的病人和小鼠模型的研究中发现,位于酪氨酰-tRNA合成酶、甘氨酰-tRNA合成酶和丙氨酰-tRNA合成酶上的突变,可分别导致DI腓骨肌萎缩症(Charcot-Marie-Toothdisease,CMT)C型,腓骨肌萎缩症2D型及小脑浦肯雅(Purkinje)细胞丢失.初步的致病机理研究表明,致病突变对这3种酶的影响各不相同:酪氨酰-tRNA合成酶的氨基酰化催化能力受到影响,甘氨酰-tRNA合成酶受影响的可能是一种未知的新功能,而丙氨酰-tRNA合成酶受影响的则是它的编校功能.这些研究结果揭示了氨基酰-tRNA合成酶涉及神经退行性疾病的广泛性和其机制的复杂性,并将促进对神经退行性疾病这一类常见疾病的病理和治疗方法的研究.

吡咯赖氨酸:第22种参与蛋白质生物合成的氨基酸

吡咯赖氨酸在产甲烷菌的甲胺甲基转移酶中发现,是目前已知的第22种参与蛋白质生物合成的氨基酸,与标准氨基酸不同的是,它由终止密码子UAG的有义编码形成.与之对应的在产甲烷菌中也含有特异的吡咯赖氨酰-tRNA合成酶(PylRS)和吡咯赖氨酸tRNA(tRNAPyl).tRNAPyl具有不同于经典tRNA的特殊结构.产甲烷菌通过直接途径和间接途径这两种途径生成吡咯赖氨酰-tRNAPyl(Pyl-tRNAPyl),它还可能通过mRNA上的特殊结构以及其他还未发现的机制,控制UAG编码成为终止密码子或者吡咯赖氨酸.比较了吡咯赖氨酸与另一种非标准氨基酸,第21种氨基酸——硒代半胱氨酸的相似点与不同点.

滋补肝肾方激活小鼠B-16黑色素瘤细胞线粒体ATP合成酶-6的基因表达

目的研究滋补肝肾方复方及单方对小鼠 B-16黑色素瘤细胞酪氨酸酶 mRNA 表达的影响及滋补肝肾方的分子作用机制。方法定量逆转录 PCR 法(quantitative reverse transcriptional polymerase chain reac-tion,QRT-PCR)研究滋补肝肾方复方及单方对小鼠黑色素瘤酪氨酸酶 mRNA 表达的作用;mRNA 差别显示(mRNA differential display reverse transcriptional polymerase chain reaction,DDRT-PCR)法研究用滋补肝肾方复方及单方处理 B-16黑色素瘤细胞前后基因的差别表达。结果滋补肝肾方复方及各个单方并非都能够增加酪氨酸酶 mRNA 的表达量;但是滋补肝肾方复方和某些单方却能够激活小鼠黑色素瘤 B-16细胞线粒体 ATP合成酶-6(ATPase-6)基因的特异性表达。结论 QRT-PCR 结果表明不能将滋补肝肾方的治疗作用单纯解释为是酪氨酸酶表达提高的结果,而可能存在其他的作用机制,DDRT-PCR 结果表明 ATPase-6基因表达的激活可能是滋补肝肾方作用的关键环节。

亮氨酰-tRNA合成酶通过细胞内的亮氨酸调节雷帕霉素受体复合物(TORC1)活性的新功能

TORC1(target of rapamycin complex 1)可整合营养、能量、生长因子及氨基酸等多种细胞外信号,调控基因转录、蛋白质翻译、核糖体合成等生物过程,在细胞生长和凋亡中发挥极为重要的作用。亮氨酰-tRNA合成酶(LeuRS)的经典功能是催化合成亮氨酰-tRNA直接参与遗传信息的解码合成蛋白质。最新研究结果表明人细胞质LeuRS除了经典功能外,还参与调控TORC1途径。综述了LeuRS的非经典功能,它是如何通过感受细胞内的亮氨酸浓度来调节TORC1活性的。这些结果表明了古老的氨基酰-tRNA合成酶家族在进化的过程中被赋予了新的功能。

一氧化氮合成酶、环氧化酶-2、硝基酪氨酸及血管生成与软骨肉瘤预后的相关性研究

背景：免疫组织化学标记物有助于肿瘤诊断及预后评估。通过对硝基酪氨酸分析及采用一氧化氮合成酶1（NOS1）、一氧化氮合成酶2（NOS2）、一氧化氮合成酶3（NOS3）检测分析可了解一氧化氮（NO）与肿瘤的相关性。NO与超氧阴离子反应产生的过氧亚硝酸对基因有毒性作用，过氧亚硝酸传递一个硝基基团到酪氨酸的苯环上形成硝基酪氨酸。细胞内硝基酪氨酸的积累说明过氧亚硝酸持续生成。NO刺激所生成的环氧化酶-2（COX-2）与肿瘤内新生血管水平相关，研究表明新生血管影响肿瘤预后，免疫组化标记CD34可表示微血管生成，从而被用于预测肿瘤预后。本研究检测上述标记物在软骨肉瘤中的表达并分析与软骨肉瘤分级和预后的相关性。方法：101例软骨肉瘤患者肿瘤组织样本采用甲醛固定，组织样本采用免疫组织化学染色，指标为：NOS1、NOS2、NOS3、COX-2、硝基酪氨酸和CD34。5例正常软骨样本作为对照。研究分析患者特征、手术变量、肿瘤分级与这些指标的相关性。使用Kaplan—Meier多变量统计学方法分析生存曲线及生存率。结果：硝基酪氨酸、COX-2和CD34与组织学分级有明显相关性（p=0．022，p=0．014，p=0．028），但与总体预后无相关性（p=0．064，p=0．143，p=0．581）。NOS2阳性表达常预示较高的局部复发率（p=0．038）。NOS1、NOS2阳性表达预示较低的生存率（p=0．007，p〈0．001）。通过多变量分析处理，NOS2的表达被证实可作为局部复发率的独立预后判断因素；NOS1、NOS2的表达作为因变量，它们单独或复合阳性表达常与较低的总生存率有关（p=0．046，p=0．004）[危险率，3．17（95％置信区间，1．0-9．8）和5．58（95％置信区间，1．7-18．0）]。

姜黄素对缺血再灌注H9c2心肌细胞凋亡和GSK-3表达及其磷酸化的影响

目的观察姜黄素对缺血再灌注(ischemia-reperfusion,I/R)H9c2心肌细胞凋亡和糖原合成酶激酶3(GSK-3)表达及其磷酸化的影响。方法利用缺血台氏液对体外培养的H9c2心肌细胞模拟I/R处理,同时随机分为模型组(模拟缺血90min,再灌注30min)、姜黄素组(再灌注同时加入7.5μmol/L姜黄素)和对照组(正常台氏液培养120min代替模拟I/R),采用流式细胞术检测细胞凋亡情况,采用Western blot检测GSK-3、酪氨酸磷酸化GSK-3(pTyr-GSK-3)和丝氨酸磷酸化GSK-3(pSer-GSK-3)蛋白的表达。结果与对照组比较,模型组H9c2细胞凋亡率明显提高(t=10.439,P=0.000),模型组pTyr-GSK-3和pSer-GSK-3表达均显著增加(t=5.208,P=0.006;t=5.854,P=0.004)。与模型组比较,姜黄素组凋亡率及pTyr-GSK-3表达水平显著降低(t=-8.325,P=0.001;t=-3.607,P=0.023),存活率及pSer-GSK-3表达水平显著升高(t=9.165,P=0.001;t=3.747,P=0.02)。结论 GSK-3的酪氨酸和丝氨酸磷酸化可能参与心肌细胞I/R损伤,姜黄素减少I/R心肌细胞凋亡可能与其通过减少酪氨酸磷酸化、增加丝氨酸磷酸化抑制GSK-3活性有关。

EGFR-TKI通过cGAS-STING信号通路对肺癌小鼠放疗远隔效应的影响

目的探讨表皮生长因子受体酪氨酸激活抑制剂(EGFR-TKI)通过环鸟苷酸-腺苷酸合成酶-干扰素基因刺激因子(cGAS-STING)信号通路对肺癌小鼠放疗远隔效应的影响。方法取部分对数生长期肺癌细胞(LLC1细胞)随机分为对照组和辐照组,对照组正常培养不干预,辐照组给予4 Gy的辐照量,2 Gy/min,每次辐照2 min,24 h后用实时聚合酶链反应检测细胞中cGAS-STING信号通路相关基因MB21D1、TMEM173、TBK1、IRF3、IRF5、IRF7、IFNAR1、IFNAR2、MX1、MX2、IFIT1、IFIT mRNA。将100μL对数生长期LLC1细胞悬液注射至小鼠腹股沟处皮下,制备双侧皮下荷瘤模型,将成瘤小鼠随机分为对照组、8 Gy组、EGFR-TKI组、8 Gy+EGFR-TKI组,每组3只。对照组不干预;8 Gy组给予8 Gy辐照3次,定位辐照小鼠左边瘤体;EGFR-TKI组给予EGFR-TKI灌胃1 mg/g,给药3次;8 Gy+EGFR-TKI组既进行辐照又给药干预。干预17 d后取小鼠右侧瘤体。用Western blotting法检测肿瘤组织中cGAS、STING、p-STING、Ⅰ型干扰素(IFN-1)蛋白,用免疫组化法检测肿瘤细胞增殖核抗原(ki67)及肿瘤微环境相关蛋白CD4、CD8、表皮生长因子受体(EGFR)、叉头状转录因子p3(Foxp3)、钙网蛋白(CRT)及主要组织相容性复合体(MHC)。结果与对照组比较,辐照组LLC1细胞MB21D1、TMEM173、TBK1、IRF3、IRF5、IFNAR1、IFNAR2、MX1、MX2、IFIT1、IFIT mRNA相对表达量高(P均<0.05),IRF7 mRNA相对表达量低(P<0.05)。干预17 d后,与对照组比较,各干预组肿瘤体积小、肿瘤重量低、ki67蛋白相对表达量低(P均<0.05),且8 Gy+EGFR-TKI组肿瘤体积、肿瘤重量、ki67蛋白相对表达量最低(P均<0.05)。与对照组比较,EGFR-TKI组cGAS、STING、p-STING、IFN-1蛋白相对表达量差异无统计学意义(P均>0.05);8 Gy组STING、IFN-1蛋白相对表达量差异无统计学意义(P均>0.05),cGAS、p-STING蛋白相对表达量高(P均<0.05);8 Gy+EGFR-TKI组cGAS、STING、p-STING、IFN-1蛋白相对表达量高(P均<0.05)。与8 Gy+EGFR-TKI组比较,8 Gy组和EGFR-TKI组cGAS、IFN-1、STING蛋白相对表达量低(P均<0.05)。与对照组比较,各干预组CD4、CD8、MHC蛋白相对表达量高(P均<0.05),EGFR、Foxp3、CRT蛋白相对表达量低(P均<0.05)。与8 Gy组比较,8 Gy+EGFR-TKI组CD4、CD8、MHC蛋白相对表达量高(P均<0.05),EGFR、CRT蛋白相对表达量低(P均<0.05)。与EGFR-TKI组比较,8 Gy+EGFR-TKI组CD4、CD8、MHC蛋白相对表达量高,EGFR、Foxp3、CRT蛋白相对表达量低(P均<0.05)。结论EGFR-TKI通过激活cGAS-STING信号通路改善肿瘤微环境的免疫功能,从而增强肺癌小鼠放疗远隔效应。

缺血预处理通过抑制精氨酰-tRNA合成酶和Caspase-3表达减少脑梗死大鼠脑细胞的凋亡

目的探讨缺血预处理对脑梗死大鼠脑细胞的保护作用及其机制。方法120只SD大鼠按随机数字表法分为缺血预处理组(50只)、脑梗死组(50只)、假手术组(10只)、正常组(10只),前2组大鼠采用改良Longa线栓法制备大脑中动脉闭塞(MCAO)致脑梗死模型(缺血预处理组大鼠在造模前将线栓置入大脑中动脉阻断血流15 min),假手术组大鼠行假缺血预处理和假阻断大脑中动脉血流,正常组大鼠不做任何处理。分别于正常组和假手术组造模后24 h,缺血预处理组和脑梗死组造模后2 h、6 h、12 h、24 h、48 h,每组取10只大鼠,采用TUNEL染色检测小鼠缺血半暗带区细胞凋亡率,免疫组化染色检测小鼠缺血半暗带区含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)的表达,RT-PCR和Western blotting法分别检测小鼠缺血半暗带区精氨酰-tRNA合成酶(ArgRs)基因和ArgRs蛋白的表达。结果与正常组和假手术组比较,脑梗死组大鼠造模后不同时间点缺血半暗带区细胞凋亡率、Caspase-3阳性表达率、ArgRs基因和ArgRs蛋白的表达均明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与脑梗死组比较,缺血预处理组大鼠造模后不同时间点缺血半暗带区细胞凋亡率、Caspase-3阳性表达率、ArgRs基因和ArgRs蛋白的表达均明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论脑缺血预处理可以抑制脑梗死大鼠脑缺血半暗带区ArgRS基因及ArgRS蛋白、Caspase-3的表达,减少脑细胞的凋亡,从而起到脑保护作用。

脑源性神经营养因子临床研究进展

脑源性神经营养因子（brain derived neurotrophic factors,BDNF）是一种小分子二聚体蛋白质,在结构上与神经生长因子相关,对中枢神经系统的多种类型神经元的生长、发育、分化、维护和再生都具有重要作用,对于治疗运动神经元病变及神经系统进行性疾病有显著疗效。

龟板促进帕金森病大鼠黑质神经生长因子信号分子的表达

目的：进一步探讨神经生长因子（NGF）／酪氨酸受体激酶A（TrkA）通路是否为龟板抗帕金森病（PD）大鼠多巴胺能神经元凋亡中的机制。方法：采用大鼠左侧黑质致密带注射6-羟基多巴胺（6-OHDA，0．2％）μl造成PD模型，同时设立龟板组、模型组和正常对照组，用免疫组织化学显色方法观察PD大鼠中脑黑质NGF、TrkA和磷酸化的糖原合成酶激酶-3p（p-GSK-3p）阳性神经元数目。免疫印迹法检测NGF、TrkA、p-GSK-3β蛋白表达水平的变化。结果：免疫组织化学显色显示龟板组PD大鼠中脑黑质致密部NGF、TrkA的阳性细胞数明显多于模型组。免疫印迹法结果显示龟板组PD大鼠中脑黑质致密部NGF、TrkA的蛋白表达水平高于模型组。结论：龟板能上调6-OHDA诱导的PD大鼠中脑黑质NGF、TrkA和p-GSK-3β的表达，这可能是其抗PD大鼠多巴胺能神经元凋亡的分子机制。

紫癜灵对慢性免疫性血小板减少症患者Trp代谢的影响

目的:观察紫癜灵对慢性免疫性血小板减少症(ITP)阴虚血热证患者吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)/色氨酰-t RNA合成酶(TTS)介导的色氨酸(Trp)代谢途径的影响。方法:选取健康志愿者(正常对照组)与慢性ITP阴虚血热证患者(患者组)各20例。正常对照组不做任何处理,慢性ITP阴虚血热证患者采用紫癜灵治疗。治疗前后分别采集患者的肝素抗凝血标本,检测CD4+及CD8+T淋巴细胞中IDO、TTS表达及血浆Trp、Kyn浓度。结果:完全反应10例,有效7例,无效3例,有效率85.0%。患者组治疗前CD4+、CD8+T淋巴细胞IDO的平均荧光强度低于正常对照组(P<0.05),TTS的平均荧光强度高于正常对照组(P<0.05)。治疗后,患者组CD4+、CD8+T淋巴细胞中IDO的平均荧光强度较治疗前上升(P<0.05),TTS的平均荧光强度较治疗前下降(P<0.05)。患者组治疗前血浆Trp及Kyn浓度均高于正常对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗后,患者组Trp浓度较治疗前降低,差异有统计学意义(P<0.05);Kyn浓度较治疗前升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:紫癜灵可能通过影响慢性ITP阴虚血热证患者体内IDO/TTS介导的Trp代谢途径发挥其治疗作用。

系统性红斑狼疮外周血单个核细胞蛋白组学的初步研究

目的探讨系统性红斑狼疮(SLE)外周血单个核细胞(PBMC)蛋白质组的变化。方法分别提取14例SLE患者及9例健康献血者的PBMC,采用双向电泳技术分离全蛋白质组,对部分差异的蛋白质点进行离子阱高效液相色谱/质谱分析,测定其肽质量指纹图谱,与互联网蛋白质数据库的数据进行比对。结果获得了较好的双向电泳图像,图像分析显示:1例SLE患者、4例健康献血者PBMC蛋白匹配点为1084个,其中SLE患者高表达及特异表达蛋白点为71个及17个,健康献血者高表达及特异表达蛋白点为45个及20个,与所有实验2-DE图谱逐个比对后,对表达差异重复性高的30个蛋白质点进行肽质量指纹图谱分析,经数据库检索后,鉴定出2个胞浆蛋白质酪氨酸转运核糖核酸合成酶(tyrosyl-tRNA synthetase)和斑联蛋白(zyxin)在SLE患者的PBMC中低表达。结论SLE患者PBMC蛋白组学研究可能为深入研究其发病机制、建立新的诊断指标提供一个良好的平台。

尾静脉注射不同剂量羟基红花黄色素A的缺血再灌注大鼠脑组织3-NT、iNOS、NO表达观察

目的观察尾静脉注射不同剂量羟基红花黄色素A(HSYA)的缺血再灌注大鼠脑组织3-硝基酪氨酸(3-NT)、诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)、NO表达变化。方法将健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、低剂量HSYA组、中剂量HSYA组、高剂量HSYA组。假手术组仅手术暴露和分离颈总、颈内及颈外动脉,然后缝合;其余大鼠采用线栓法制备大脑中动脉闭塞再灌注(MCAO/R)模型。低、中、高剂量HSYA组大鼠缺血后60 min尾静脉注射2.5、5、10 mg/kg的HSYA;假手术组和模型组大鼠同时尾静脉注射相同体积Tris缓冲液。继续饲养24 h。采用Western blotting法检测各组大鼠缺血再灌注脑组织3-NT、iNOS相对表达量;采用Griess法检测各组大鼠缺血再灌注脑组织NO相对表达量。结果假手术组、模型组、低剂量HSYA组、中剂量HSYA组、高剂量HSYA组大鼠缺血再灌注脑组织3-NT条带灰度值分别为(2.81±1.37)×10~3、(46.86±4.75)×10~3、(44.51±4.13)×10~3、(13.88±2.98)×10~3、(6.38±2.66)×10~3;iNOS条带灰度值分别为(2.25±0.32)×10~3、(79.67±4.73)×10~3、(75.29±4.08)×10~3、(27.31±2.77)×10~3、(19.19±1.86)×10~3,模型组和低、中、高剂量HSYA组大鼠缺血再灌注脑组织NO表达量分别为(16.50±2.20)、(15.40±1.44)、(10.33±1.30)、(6.80±0.73)nmol/mg。模型组、低剂量HSYA组、中剂量HSYA组、高剂量HSYA组大鼠缺血再灌注脑组织3-NT、iNOS水平高于假手术组(P均<0.05)。低剂量HSYA组大鼠缺血再灌注脑组织3-NT、iNOS、NO水平和模型组相比,P>0.05。中、高剂量HSYA组大鼠缺血再灌注脑组织3-NT、iNOS、NO水平低于模型组和低剂量HSYA组(P均<0.05),且高剂量HSYA组缺血再灌注脑组织3-NT、iNOS、NO水平低于中剂量HSYA组(P均<0.05)。结论尾静脉注射不同剂量的HSYA可以抑制缺血再灌注大鼠脑组织3-NT、iNOS、NO表达,HSYA剂量越高此效果越明显。

组织中EphA2、GSK-3β水平在非小细胞肺癌患者中的表达分析

目的探讨组织中Eph受体酪氨酸激酶A2(EphA2)、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)在非小细胞肺癌(NSCLC)患者中的表达及临床意义。方法选择2018年4月~2020年6月于河南省许昌市中心医院接受治疗的94例NSCLC患者,所有患者均接受手术治疗,术中留取病理组织行病理检查,检测EphA2、GSK-3β水平,分析组织中EphA2、GSK-3β在NSCLC患者中的表达及临床意义。结果 94例NSCLC患者中,EphA2阳性率为73.40%,GSK-3β阳性率为46.81%;经单因素分析显示,EphA2、GSK-3β表达与患者年龄、性别、吸烟史无相关性(P>0.05),但EphA2阳性表达可能与NSCLC淋巴结转移、中低分化、Ⅲ/Ⅳ期有关,GSK-3β阳性表达可能与NSCLC未发生淋巴结转移、高分化、Ⅰ/Ⅱ期有相关性(P<0.05)。结论 NSCLC患者组织中Eph A2阳性率较高,GSK-3β阳性率相对较低,EphA2阳性表达可能促使NSCLC发生淋巴结转移、呈中低分化、进展至Ⅲ/Ⅳ期,有助于临床判断NSCLC高侵袭性,检测EphA2、GSK-3β表达有助于预测疾病预后。

草甘膦和草胺膦的区别

草甘膦为内吸传导型广谱灭生性除草剂。主要通过抑制杂草体内烯醇丙酮基莽草素磷酸合成酶，抑制莽草素向苯丙氮酸、酪氨酸和色氨酸的转化，使蛋白质的合成受到干扰，最终导致植物死亡。草甘膦内吸传导性强，